BIOQUIMICA

PRACTICA N° 12
BILIRRUBINA
Para la determinación de bilirrubina directa y total

1. INTRODUCCION:
La bilirrubina, compuesto de degradación de la hemoglobina, es captada por el
hígado para su conjugación y excreción en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares
u obstrucciones biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias. La eritroblastosis fetal
o anemia hemolítica del recién nacido es una patología provocada por
incompatibilidad maternofetal en la que se produce una destrucción excesiva de
glóbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina sérica con el
consecuente riesgo de difusión del pigmento al sistema nervioso central, por lo que
la determinación de la bilirrubina en estos niños recién nacidos resulta sumamente
importante.

2. OBJETIVOS:
 Demostrar el manejo adecuado de la técnica para la determinación de
bilirrubina en una muestra biológica.
 Establecer los valores de referencia de la bilirrubina total y directa y comparar
con el valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuáles son las principales patologías que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de bilirrubina en una muestra biológica.

3. FUNDAMENTOS DEL METODO

La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado
produciendo un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide
fotocolorimétricamente a 530 nm. Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona
directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la
presencia de un desarrollador acuoso (Reactivo A) que posibilite su reacción. De
forma tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada)
presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de reacción.

4. REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: Soluciónacuosadebenzoatodecafeína0,13mol/l,
B. Reactivo B: Solución de ácido sulfanílico 29 mmol/l y ácido clorhídrico 0,17
mol/l.
C. Reactivo C: Solución de nitrito de sodio 0,07 mol/l.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivo A: listo para usar.
Reactivo B: listo para usar.
Diazorreactivo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar 1 parte de Reactivo C
con 21 partes de Reactivo B. Rotular y fechar

5. MATERIAL REQUERIDO
 Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
 Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados
 Tubos.
 Reloj o timer.
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6. CONDICIONES DE REACCION
 Longitud de onda: 530 nm en espectrofotómetro o 520- 550 nm en
fotocolorímetro con filtro verde.
 Temperatura de reacción: temperatura ambiente
 Tiempo de reacción: 5 minutos
 Volumen de muestra: 200 ul
 Volumen final de reacción: 2,9 ml

7. PROCEDIMIENTO:

8. CALCULO:
 Bilirrubina total (mg/l) = (T - B) x f
 Bilirrubina directa (mg/l) = (D - B) x f
 Bilirrubina libre (indirecta) = BRB total - BRB directa
 El factor colorimétrico (f) debe calcularse con Bilirrubina Standard de Wiener lab.

9. VALORES DE REFERENCIA
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PRACTICA N° 13
ACIDO URICO
Método enzimático – colorimétrico
1. INTRODUCCION:
El ácido úrico en los mamíferos es el metabolito final del catabolismo de las bases
púricas y su elevación está asociada a la gota, es decir, los reumatismos
hiperuricémicos. En los pacientes con tal disfunción, aparecen cristales de ácido
úrico en las articulaciones y en los tendones, lo que origina las manifestaciones
reumáticas características. Niveles altos de ácido úrico están también asociados a
patología renal por retención de productos nitrogenados, asociándose en estos
casos a valores también altos de urea y de creatinina.

2. OBJETIVOS:
 Aplicar el manejo adecuado de la técnica para la determinación de ácido úrico
en una muestra biológica.
 Establecer los valores de referencia de ácido úrico y comparar con el valor de
nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuáles son las principales patologías que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de ácido úrico en una muestra biológica.

3. FUNDAMENTOS DEL METODO

La Uricasa actúa sobre el ácido úrico para formar peróxido de hidrógeno y alantoina.
El H2 O2 se mide cuantitativamente por su reacción con el ácido 3.5-dicloro-2-
hidroxibencensulfónico (DCHB), en presencia de peroxidasa y 4-amino fenazona,
para formar un complejo quinonaimina de color rojo violeta.

El Factor Aclarador Lipemico (LCF) es una mezcla de aditivos especialmente

disenaods por Stanbio integrados dentro del reactivo de colesterol para ayudar a
minimizar las interferencias debidas a la Lipemia.

4. REACTIVOS PROVISTOS
Reactivos Acido Urico Enzimático (liquido)
Composición: Buffer de fosfatos, pH 7.0 50 mmol/L Acido 3.5-dicloro-2
hidroxibencensulfónico 4 mmol/L 4-aminofenazona 0.3 mmol/L Peroxidasa >1000
U/L Uricasa >200 U/L Estabilizadores y activadores
Estandar de Acido Urico, (8 mg/dL).
Solución acuosa de ácido úrico, con estabilizadores y solubilizadores.
5. MATERIAL REQUERIDO
 Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
 Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados
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 Tubos.
 Reloj o timer.
6. CONDICIONES DE REACCION
 Longitud de onda: 520 nm en espectrofotómetro
 Temperatura de reacción: 37° Grados
 Tiempo de reacción: 5 minutos

7. PROCEDIMIENTO:

8. CALCULO:

9. VALORES DE REFERENCIA: