Un sensor químico es un dispositivo pequeño que se puede usar para la medición directa del

analito en la matriz de la muestra. Idealmente, dicho dispositivo es capaz de responder de manera

continua y reversible y no perturba la muestra. Al combinar los pasos de medición y manejo de
muestras, los sensores eliminan la necesidad de recolección y preparación de muestras. Los
sensores químicos consisten en un elemento de transducción cubierto por una capa de
reconocimiento químico o biológico. Esta capa interactúa con el analito objetivo, y los cambios
químicos que resultan de esta interacción son traducidos por el elemento de transducción en
señales eléctricas. El desarrollo de sensores químicos es actualmente (a partir de 2005) una de las
áreas más activas de investigación analítica. Los sensores electroquímicos representan una
subclase importante de sensores químicos en los que se utiliza un electrodo como elemento de
transducción. Tales dispositivos ocupan una posición de liderazgo entre los sensores actualmente
disponibles, han alcanzado el nivel comercial y han encontrado una amplia gama de aplicaciones
importantes en los campos de análisis clínicos, industriales, ambientales y agrícolas. El campo de
los sensores es interdisciplinario, y es probable que se produzcan avances futuros a partir del
progreso en varias disciplinas. La investigación en sensores electroquímicos está avanzando en
varias direcciones, como se describe en las siguientes secciones. El primer grupo de sensores
electroquímicos, los electrodos potenciométricos selectivos de iones (basados en "receptores
iónicos"), se ha descrito en el Capítulo 5.

Los biosensores electroquímicos combinan el poder analítico de las técnicas electroquímicas con la
especificidad de los procesos de reconocimiento biológico. El objetivo es producir biológicamente
una señal eléctrica que se relaciona con la concentración de un analito. Para este propósito, un
reactivo bioespecífico es inmovilizado o retenido en un electrodo adecuado, que convierte el
evento de reconocimiento biológico en una respuesta amperométrica o potenciométrica
cuantitativa. Estas combinaciones de electrodos de biocomponentes ofrecen nuevas y poderosas
herramientas analíticas que son aplicables a muchos problemas desafiantes. Un nivel de
sofisticación y tecnología de vanguardia se emplean comúnmente para producir dispositivos
fáciles de usar, compactos y de bajo costo. Los avances en biosensores electroquímicos avanzan
en diferentes direcciones. Se pueden distinguir dos categorías generales de biosensores
electroquímicos, dependiendo de la naturaleza del proceso de reconocimiento biológico:
dispositivos biocatalíticos (que utilizan enzimas, células o tejidos como biocomponentes
inmovilizados) y sensores de afinidad (basados en anticuerpos, receptores de membrana o ácidos
nucleicos).

Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en sistemas vivos. Tales catalizadores
no solo son eficientes sino también extremadamente selectivos. Por lo tanto, las enzimas
combinan los pasos de reconocimiento y amplificación, según sea necesario, para muchas
aplicaciones de detección. Los electrodos de enzima se basan en el acoplamiento de una capa de
una enzima con un electrodo apropiado. Tales electrodos combinan la especificidad de la enzima
para su sustrato con el poder analítico de los dispositivos electroquímicos. Como resultado de
dicho acoplamiento, los electrodos enzimáticos han demostrado ser extremadamente útiles para
monitorear una amplia variedad de sustratos de importancia analítica en muestras clínicas,
ambientales y de alimentos.

La operación de un electrodo de enzima se ilustra en la Figura 6.1. La capa de enzima inmovilizada

se elige para catalizar una reacción, que genera o consume una especie detectable:
donde S y C son el sustrato y el coreactante (cofactor), y P y C 'son los productos correspondientes.
La elección del electrodo sensor depende principalmente del sistema enzimático empleado. Por
ejemplo, las sondas amperométricas son muy adecuadas cuando se emplean enzimas oxidasa o
deshidrogenasa (que generan peróxido de hidrógeno electrooxidizable o especies NADH),
electrodos de pH-vidrio para vías enzimáticas que producen un cambio en el pH, mientras que los
dispositivos potenciométricos de gas (dióxido de carbono) serán La elección cuando se utilizan las
enzimas descarboxilasas.

El éxito del electrodo de enzima depende, en parte, de la inmovilización de la capa de enzima. El

objetivo es proporcionar un contacto íntimo entre la enzima y la superficie de detección mientras
se mantiene (e incluso mejora) la estabilidad de la enzima. Se pueden utilizar varios esquemas
físicos y químicos para inmovilizar la enzima en el electrodo (Fig. 6.2). El enfoque más simple es
atrapar una solución de la enzima entre el electrodo y una membrana de diálisis.
Alternativamente, se pueden usar películas poliméricas (p. Ej., Polipirrol, Nafion) para atrapar la
enzima (mediante fundición o electropolimerización). Se pueden lograr mejoras adicionales
combinando varias membranas y / o recubrimientos. La Figura 6.3 muestra una inmovilización útil,
pero simple, basada en atrapar la enzima entre una película de acetato de celulosa interna y una
membrana de colágeno o policarbonato, moldeada en la punta de un transductor amperométrico.
Dicha cobertura con una membrana / recubrimiento sirve también para extender el rango lineal (a
través de la reducción de la concentración del sustrato local)

y rechazar posibles interferencias (por ejemplo, especies electroactivas coexistentes o

proteínas). En los métodos de inmovilización química, la enzima está unida a la
superficie mediante un acoplamiento covalente a través de un agente de reticulación (por
ejemplo,
glutaraldehído, amida). El acoplamiento covalente se puede combinar con el uso.
de monocapas tioladas funcionalizadas para ensamblar enzimas multicapa
Redes sobre superficies de electrodos (2). Las interacciones biotina-avidina también pueden ser
empleadas utilizando superficies recubiertas con estreptavidina y enzimas biotiniladas (por
ejemplo,
ver fig. 6.2). Otros esquemas útiles de inmovilización de enzimas incluyen atrapamiento
dentro de una capa gruesa de gel, encapsulación a baja temperatura en películas sol-gel,
adsorción sobre una superficie de grafito, incorporación (mediante mezcla) dentro del volumen
de matrices tridimensionales de pasta de carbono o grafito-epoxi (3,4), o electroquímicas
La codeposición de la enzima y las partículas metálicas catalíticas (por ejemplo, Pt,
Rh). Dicha codeposición, así como los procesos de electropolimerización, son particularmente
adecuado para localizar la enzima en superficies sensoriales miniaturizadas
(5,6). La ruta de electropolimerización se puede lograr atrapando el
enzima dentro de la película en crecimiento o anclarla covalentemente al monómero
Antes de la deposición de la película. Tal avenida también puede reducir las interferencias y
ensuciamiento de los biosensores resultantes. La inmovilización de enzimas mixtas / pasta de
carbono.
La estrategia es atractiva para muchas aplicaciones de rutina, ya que combina
las ventajas de la versatilidad (dopaje controlado de varios modificadores, por ejemplo,
enzima, mediador del cofactor), velocidad (debido a la proximidad de productos biocatalíticos y
sitios de detección, y ausencia de barreras de membrana), facilidad de fabricación, y
renovabilidad.

Aplicaciones

Entre 12 y 15 mil millones de dólares anuales se gastan en todo el mundo con fines analíticos; La
porción utilizada para las enzimas asciende a alrededor de $ 50 millones. Las enzimas se están
empleando en la química clínica, las industrias de alimentos y cosméticos y la biotecnología para el
análisis de rutina de aproximadamente 80 sustancias diferentes, principalmente metabolitos de
bajo peso molecular, pero también efectores, inhibidores y la actividad de las enzimas en sí
mismas. Un amplio espectro de inmunoensayos para haptens, macromoléculas y microorganismos
de bajo peso molecular se han hecho disponibles en los últimos años a través del enorme progreso
en la investigación inmunológica, especialmente en la preparación de anticuerpos monoclonales.
Se venden alrededor de mil millones de inmunoensayos por año.

El desarrollo de métodos de inmovilización ha dado un impulso al uso rutinario de enzimas y

anticuerpos en química analítica. Las principales ventajas de estos reactivos inmovilizados son su
capacidad de reutilización, su manejo sencillo y seguro y la posibilidad de restringir espacialmente
la reacción bioanalítica para lograr una simplificación significativa del aparato analítico. Se puede
esperar un avance de los biosensores en áreas donde las inversiones para su desarrollo se
amortizan rápidamente y se garantizan altos beneficios económicos. Uno de los campos más
prometedores de la aplicación de biosensores es la biotecnología.