350 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima edicior.
g) Medicior 0 registrador. EI espectrofluorometro difiere
de un fluor6metro en que los filtros son remplazados por
monocromadores, de cualquiera de los dos tipos: prismas
o rejillas. EI espectrofluor6metro es superior aJ fluor6me-
tro en la selectividad de la longitud de onda, f1exibilidad
y conveniencia. En lU1 espectrofluor6metro, los monocro-
madores estan equipados con ranuras. Una ranura angos-
ta, provee alta resoluci6n y pureza espectral, mientras
que una ranura ancha, sacrifica esto por la sensibilidad
alta. La selecci6n del tamano de la ranura se determina
por la separaci6n que existe entre las longitudes de onda
de excitaci6n y emisi6n, as} como el grado de sensi-
bilidad necesario.
CALlBRACION. La calibracion y ajuste del aparato se
lleva a cabo como 10 indica el manual de manejo, propor-
cionado por el fabricante.
METODO. Preparar las preparaciones de referencia, de la
muestra y el blanco como se indica en la monografia del
producto correspondiente.
PROCFDIMIFNTO. Seleccionar en el aparato la longitud
de onda de excitaci6n y de ernisi6n, indicada en la
rnonografia del producto correspondiente y aj ustar a cero
con el blanco. Ajustar la sensibilidad del instrumento con la
solud6n de referencia, de tal forma que la lectura sea ligo-
ramente mayor de 50; si el ajuste de sensibilidad se logr6
variando el ancho de la ranura, volver a ajustar a cera con el
blanco y determinar finalmente la intensidad de fluorescen-
cia de la preparaci6n de referenda. Posteriormente y tan
rapido como sea posible, usar la misma celda y las misrnas
condiciones de prueba, determinar la intensidad de fluores-
cencia de la preparaci6n de la muestra. Si la concentraci6n
de la muestra no os directamente proporcional a la de
la preparaci6n de referencia, determinar su concentracion,
preparando una curva tipo e interpolando en ella el dato
obtenido para la muestra.
CA.LCULOS. Para determinar la concentraci6n de la
muestra, emplear la formula indicada en la monogra'fia del
producto correspondiente.
INTERPRETACION. EI resultado obtenido debe estar
comprendido dentro de los limites establecidos en la
monografia del producto correspondiente.
MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA
INFRARROJA
Se basa en la medici6n de la absorci6n de la radiaci6n in-
frarroja debida a Ia interacci6n con los enlaces que forman
los grupos fundonales presentes en las moleculas organicas.
MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA INFRARROJA
EI espectro se presenta en unidades de numero de onda (cm- 1)
o longitud de onda (flm) en la abscisa y unidades de trans-
mitanda 0 absorbanda (analisis cuantitativo) en la ordenada.
INFRARROJO MEDIO
Recomendaciones especiales. EI material a emplear debe
estar libre de humedad. Las celdas selladas, se conservan
Henas con disolvente en desecador. Las celdas de absorci6n
al infrarrajo no deben ponerse en contacto con disolventes
que contengan agua. Emplear disolventes del mismo 10te en la
preparaci6n de la solucion de la rnuestra, soluci6n de referen-
cia y blanco. Cuando la monografla especifica del producto
10 indique, los disolventes y las muestras en soluci6n
deberan pasarse a traves de sulfato de sodio anhidro.
INSTRUMENTO. EI espectrofotometro utilizado para regis-
trar el espectro en la region del infrarrojo debera contar con un
sistema optico 0 un interfer6metro capaz de suministrar
radiacion rnonocromatica en la region de 12 800
a 4000 cm- 1 (0.8 a 2.5 flm) para el anitlisis en el infrarrojo
cercano y de 4000 a 200 cm- 1 (2.5 a 50 flm) para el infiarrojo
medio, y de medir y efectuar la adquisici6n de los espectros en
transmitancia 0 absorbancia de la luz incidente.
INSTRUMENTOS DISPERSIVOS. Los componentes
basicos del espectrofotometTo de un solo haz y de doble
haz son los que sc indican tanto en lafigura 0351.1 como en
la 0351.2.
Fuente de radiaci6n infrarroja (l), porta eelda (2), sistema
monocromador (3), generalmente consiste dc: a) rejilla de
entrada, b) colimador, e) prisma 0 rejilla de difraccion, d)
rejilla de salida, e) segundo sistema de Ientes 0 espejos.
Sistema de deteccion (4), amplificador (5), atenuador (6) y
registrador (7).
INSTRUMENTOS NO mSPERSTVOS (FTIR)
La Espectroscopia en el Infrarrojo con Transformadas de
Fourier (FTIR) es hoy la tecnica moderna no dispersiva
de preferencia sobre la Espectroscopia IR dispersiva, se
apEca en el amllisis cualitativo y cuantitativo de especies
moleculares de todo tipo. So manejan muestras cada vez mas
pequenas (1 a 2 mg) y complejas (polvas, acuosas, opacas).
La sensibilidad, resoluci6n y exactitud de longitud de onda
absoluta, superan a los instmmentos dispersivos.
Tabla 0351.1. Componentes principales.
Sistema Componentes
Fuente de radiaci6n Filamcnto de Nernst, Fuente
Globar, Tira de NicrolllO
Interfer6mctro De Michelson 0 de Pendulo
Detector Sulfato de triglicina deuterada,
lllcrcurio-cadmio-telurio 0
tantalato de litio
Procesamiento de datos COlllputadora
 Metodos Generales de Analisis 351

3
r----------------------------,
I
I
,
I

,
I

o~
a

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I=====~""lrr-----f,--{ 7

2
I~ ,
, I
d
1_________
I I
I
liliiiiII1IIl1li- _______ ;'

4
5

Figura 0351.1. Diagrama de un espectroiotometro de un solo haz.

Figura 0351.2. Diagrama general de un espectrofotometro IR de doble haz.

MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA INFRARROJA

352 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima edici6n.

BOBINA
DE LA
FUENTE

VENTANA

ESPEJO PLANO DE INTERFER6METRO \ •••• ~E VIDRIO

,~"""' _000. '_"-800 '''''\

~_.'V_.'_~~_.:~...~~~E~~__________~\_\_,__________~__,r;
ESPEJO PLANO DE
VENTANA
TOROIDAL FIJA
INTERFER6METRO

DETECTORIR
VENTANA DE KBr

~~~====tl~=i~~~~====::::::::::ij~======~~~~~~VENTANA
\ FOCO DEL
HAZIR
TOROIDAL FIJ

VENTANA TOROIDAL
AJUSTABLE

ZONA DE LA MUESTRA

Figura 0351.3. Diagrama general de un espectrofotometro IR con Transformadas de Fourier (FTIR).

E1 Espeetrofotometro de Infrarrojo con Transformadas de
Fourier tiene una fuente Iuminosa que emite radiaci6n
infrarroja que llega a un divisor de haz heeho normalmente
de bromuro de potasio (KBr) 0 yoduro de cesio (CsI).
coloeado en una posicion de 45° y con un pequeno recubri-
miento de germanio en Ia parte posterior. La fundon de este,
es dividir el haz procedente de Ia fuente en dos partes
iguales: ia primera de elIas que rc£leja hacia un espejo fijo,
colocado en Ia parte superior y euya funcion es Ia de volver a
re£lejar este haz lurninoso hacia el divisor de haz. El segundo
haz no se refleja, sino que pasa a traves del divisor de haz
hacia un espejo que tiene un movirniento lineal el cual
servini para introducir una variable Hamada diferencia de
paso optico.
Los dos haces se combinan de nuevo en el divisor de haz
interfiriendose constructiva y destructivamente, dependiendo
de Ia diferencia de paso optico entre el divisor de haz y los
espejos. La radiaci6n recombinada pasa a traves de Ia
muestra hacia el detector.
El trayecto del haz infrarrojo es el rnismo y a igual tiempo que
el rayo laser de helio-neon 10 cual permite obtener exactitud
en la frecuencia. La serral que se obtiene al final de este proceso
es un inter:/erograma, que por uso de las ecuaciones de
transformadas de Fourier y por medio de una computadora
se convierte al final en un espectrograma (figura 0351.3).
CALIBRAClON
La calibraci6n del instrumento se lleva a cabo como
10 indica el manual de operacion proporcionado por el
fabricante. Generalmente 10 que se hace es registrar
el espectro de una pelicula de poliestireno de 0.05 mm de
espesor, que muestra un conjunto considerable de senales
caracteristicas bien definidas (jigura 0351.4), con las que
puede comprobarse 0 calibrarse la escala de longitudes de
onda del espectrofotometro. EI aj uste de Ia ganancia
(sensibilidad), tambien se realiza de acuerdo al manual de
operacion del instrumento, optimizando In energia necesaria
para efectuar la deteccion y evitando Ia produccion de ruido.

MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA INFRARROJA

 Metodos Generales de Amllisis 353

Para Uquidos 0 solidos

En solucion. Preparar una soluci6n en un disolvente
adecuado. Generalmente se obtiencn buenos resultados con
concentraciones de 1 a 10 % (m/v) para un espesor de 0.05 a
0.1 mm . Llenar una celda adecuada con la solucion evitando
que qucden burbujas y empiear para cl blanco el mlsmo
disolvente usado en la preparacion de las soluciones .

~
111

1583 i .I 11551 Para muestras solid as

a) Paratin. liquida 0 nnjol. Moler de 5 a 10 mg de la
1029 1! muestra con la cantidad minima de parafina liquida
16021 11495 907 (nujol), en un mortero de agata durante unos minutos,
hasta obtener una dispersion tina y homogenea en forma
Figura 0351.4. Espectro infrarrojo de la pelicula de una pasta suave. Comprimir la pasta obtenida entre
de poliestireno. dos placas de cloruro de sodio U otro material transpa-
rente a la radiacion infrarroja.
Tabla 0351.2. Caraeteristieas de las eeldas de absorci6n. b) P.stilla de bromuro de potasio. Pulverizar en un
m01iero de agata de 1.0 a 3.0 mg de la muestra. Agregar
Intcrvalo de Solubilidad 100 mg de bromuro de potasio (previamente seco a
Material
utilidad cm- 1 g/lOO g de agua a 20°C 105°C durante 5 h), grade espectroscopia JR, moler y
mezclar. Colocar correctamente el polvo homogeneo en
NaCI 40000 - 625 36.0 una matriz ciHndrica de acero inoxidable y comprimir
KBr 40000 - 385 65.2 con la prensa hidriulica haciendo vado de 3 a 4 min. La
AgBr* 20000 - 285 0.000012 presion requerida normalmente para Ia preparacion de
2
0.00151 la pastilla es de 1 400 a 1 762 kg/em
CaF2 50000 - 1 10O
c) Disolucion y evaporacion del disolvente. Disolver unos
CsI 33 000 - 200 160.0a61°C miligramos de la muestra, en la cantidad minima de un
ZnSc: Irtran-4 * 10000-515 insoluble disolventc adecuado. Aplicar Ia soluci6n sobre una placa
Sulfuro de zinc. de cloruro de sodio u otro material transparente a
ZnS Irtran-2 10000-715 Insoluble la radiacion infrarroja, calentar fa placa suavemente para
evaporar completamente el disolvente dejando una
KRS-5 * 16600 - 250 < 0.0476
peticula muy tina de la muestra. Cubrir con una segunda
Polietileno alta Insoluble, especial para placa de clorura de sodio.
densidad 625 - 30 inorganicos d) Tecnica de fusion. Si el solido es pastoso, 0 son cristales de
*Util para el trabajo de reflexi6n interna. bajo punto de fusion, colocar unos miligrarnos de Ia
muestra, sobre una placa de cloruro de sodio U otro
material transparente a la radiacion infrarroja. Calentar
La supcrficie debe ser opticamente plana. Para analisis cuan- suave y directamente la plaea sabre una parrilla de tal forma
titativo se cmplean celdas de 0.1 a 1.0 mm de espesor. que Ia sustancia se funda, para hacer una pelicula fiUY
fina sobre la plaea de cloruro de sodio y dejar cnfriaL
METODOS e) Solucion. Para obtener el espectro de una muestra en
solucion se requiere tener el disolvente adecuado, (libre
ENSAYOS DE IDENTlDAD de humedad y no higroscopico), usualmente se emplea
Preparaci6n de la SRef y de la ffinestra. Emplear de los c1oroformo 0 tetracloruro de carbono. Las soluciones can
metodos siguientes el indicado en la monografia especifica una concentracion entre 0.05 a 10 % se colocan en celdas
del producto correspondiente. selladas de paso variable que van de 0.1 a LO mm de
espesor, 0 celdas selladas de paso fijo que van de 0.1 a
Para muestras en forma liquida 0.5 mm de espesor. Este manejo de la rnuestra es el
Pelicula. Colocar una gota del liquido entre 2 placas de adecuado para el analisis cuantitativo.
cloruro de sodio u otro material transparente a la radiacion f) Gases. Es po sible obtener cl espectro de un Jiquido de
infrarroja, formando una peHcula deigada 0 llenar direc- bajo punta de cbullicion 0 de un gas, permiticndo la
tamente una celda adecuada can la muestra, evitando que expansion de la muestra en una celda evacuada para
queden burbujas. gases, despues de 10 eual se procede a obtener e1 espectro

MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA INFRARROJA

354 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima edici6n.
de la manera usuaL Las celdas para gases miden 10 cm de
longitud, cuando se requiere mayor longitud se dispone
de celdas compactas que proporcionan superficies
internas reflectoras, de tal manera que e1 haz recorre
varias veces una determinada 10ngitud hasta hacer
mayor el paso de la radiaci6n.
Procedimiento. Registrar en el instrumento la absorci6n de
fonda seleccionando el nlimcro de barridos adecuado, para
muestras en pastilla de KBr, nujol 0 pelicula la absorci6n de
fonda corresponde al aire, para muestras en soluci6n
registrar la absorci6n de fondo correspondiente al aire mas la
celda que contiene el disolvente. A menos que se indique
otra cosa en la monografia del producto cOlTespondiente,
colocar la pastilla 0 celda que contiene la SRef en el soporte
para la celda y dentro del instrumento en la zona para
muestra, proceder a registrar et espectro de absorci6n entre
4000 Y 400 cnf 1 (2.5 a 15 ~m). Posteriormente, registrar e1
espectro de absorci6n de la muestra, en las mismas
condiciones que Ja SRef.
Nota: registrar el espeetro en transmitancia para analisis
cualitativo y en absorbancia para analisis cuantitativo. La sefial
mas intensa debera estar preferentemente entre 5.0 y 80 %
para transmitancia, para absorbancia entre 0.2000 y 0.8000.
Interpretacion. El espectro de la preparaci6n de la muestra
corresponde con el obtenido con la preparaci6n de la SRef
bajo las mismas condiciones.
ENSAYOS DE CUANTIFICACION. Para mucstras en
soluci6n. Preparar la SRef, muestra y blanco como se indica
en la monografla espedfica de! producto correspondiente
empleando el mismo lote de disolvente.
Procedimiento. Ajustar el instrumento como se indica en el
procedimiento de ensayos de identidad, registrando en la
absorci6n de fondo la absorci6n debida al aire mas el disol-
vente. Llenar una celda de absorci6n en el infrarrojo, con la
soluci6n de la SRef, evitando que queden burbujas y registrar
su espectro de absorci6n en absorbancia, en el intervalo de
longitud de onda 0 nlimero de onda indicado en la monografia
correspondiente. Tan rapidamente como sea posible usando la
misma celda y las mismas condiciones de prueba, regi:':'"j'ar
eJ espectro de absorci6n de la soluci6n de la muestra. Para
muestras s6lidas: preparar la SRef y la muestra como se indica
en la monografia especifica del producto correspondiente.
Emplear una muestra seca de acuerdo con las condiciones
especificadas en el MGA 0671 Perdido por secado.
Nota: la transmitancia de la sefial mas intensa debera estar
en eJ intervalo entre 5.0 y 80.0 %, para absorbancia entre
0.2000 y 0.8000.
Calculos. Marcar la linea base a traves de la base de la
sefial de interes en el espectro obtenido con la SRef
y restar el valor resultante de absorbancia obtenido con la
linea base al valor de absorbancia total observada para
MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA INFRARROJA
Ia senal seleccionada, (vease figura IJ351.5). Proceder de
igual forma con el espectro de la muestra. Cuando las
lecturas se obtengan en % de transmitancia, realizar
la transformaci6n a absorbancia, con la siguientc f6rmula:
A = log liT
Dande:
A = Absorbancia.
T= Transmitancia.
Posterionnente, relacionar las absorbancias corregidas en la
siguiente fOrmula:
Dondc:
Cm = Concentraci6n de la muestra en miligramos por
mililitro 0 miligramos por miligramos.
Am = Absorbancia de la muestra a la 10ngitud de onda
indicada en la monografla especifica.
Are/' = Absorbancia de 1a SRef a la longitud de onda
indicada en la monogratla especifica.
Cre/' = Concentraci6n de la SRef en miligramos por mililitro
o miligramos por miligramos.
POLIMORFOS Y POSICION DE LAS SENALES
Muchos s6lidos farmaceuticos con diferentes estructuras
cristalinas, los poiimorfos tienen diferentes propiedades
fisicas y quimicas.
~r-----------------------------,
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
1.0
A corregida = A sefial - A linea base
Ac = 0.74 - 0.05 = 0.69
Figura IJ351.5. Medici6n de Ia absorbancia.
Las senales caracteristicas para cada grupo funcional estfm
sujetas a desplazamientos en su posici6n, como factor interno
se tiene la estructura molecular y como factor externo, las
condiciones experimentales de obtenci6n de los compuestos
como son el polimorfismo 0 solvataci6n principalmente. Se
debe de tener cuidado a1 emplear la regi6n de las hue lIas
digitales para establecer la identidad de un compuesto, es
conocido que diferentes compuestos presentan senales muy
simi lares y un mismo compuesto presenta senales diferentes
debidas en muchos casos al polimorfismo de la molecula.
---------------------------------
La caracterizaci6n fisica de las diferentes forma.>; polirn6rficas
se efcctua por tecllicas en el estado solido, como es la
espectroscopia de transmisi6n en el infTarrojo con transforma~
das de Fourier (FT-IR) a par cspectroscopia de reflectancia
total atenuada en el infrarrojo media y cercano con
transformadas de Fourier (ATR-FTIR), 0 par reflectancia
difusa en el infrarrojo cercano.
Preparacion de Ia muestra para amilisis pOT espectros-
copia de transrnision
Mezclar de 5 a [0 mg de la muestra con la minima cantidad
de parafina Hquida hasta tener una suspension homogenea,
colocarla entre dos ventanas de material transparente en el
infrarrojo.
El polimorfismo arigina usualmente variaciones en cl cspectro
IR de muchos compuestos en el estado solido, cuando se
presentan diferencias para un mismo compuesto entre el
espectro de la muestra y la SRef, disolver una pOl-cion de cada
una de las sustancias en volumenes iguales del diso1ventc
adecuado, evaporar la solucion a sequedad en condiciones
similarcs y repetir la prueba empleando el residuo.
ESPECTROFOTOMETRIA DE REFLEXION
La espectroscopia de reflexion en el infrarrojo ha tenido su
principal aplicacion en el lR para e1 estudio de muestras
altamente absorbente, muestras opacas, fibras, solidos,
pastas, polvos, suspensiones, soluciones acuosas, solidos de
solubilidad Iimitada principalmente.
Las medidas de reflectancia optica proveen informacion
espectral similar a las medidas obtenidas por transmision, son
frecuentemente mas simples de realizar en materiales opacos
o muestras altamente absorbente, materiales donde la
transmision de 1a radiacion no sea po sible.
Un metodo muy usado en medidas de reflectancia en lR en
principios activos es Ia Reflectancia Total Atenuada (ATR),
tambien conocida como Reflectancia Interna Multiple
(MIR), los espectros obtenidos son simi lares pero no
identicos a los obtenidos en transmitancia para un mismo
principio activo. Las absorbancias son independientes del
espesor de la muestra, dependen solo de! angulo de inciden-
cia de la radiacion sobre el cristal de reflectanda.
En el metoda de ATR, el haz de radiacion IR pasa a traves
de un cristal apropiado que tiene un alto indice de refracci6n
(bromuro de talio-ioduro de talio, 0 placas de seleniuro de ger-
manio y zinc), el cual es co10cado de tal manera que al ajustar
e1 anguJo incidente la radiacion experimenta multiples
reflexiones internas antes de Uegar al detector. En cada una
de esas reflexiones tiene lugar la absorci6n de radiacion por
parte de la muestra que esta colocada sobre e1 cristal y la
atenuaci6n de la radiaci6n reflejada. En los inslrumentos
modernos de Infrarrojo con Transformadas de Fourier se
coloca en la zona de la muestra un adaptador con el crista1 de
reflectancia 0 cubetas apropiadas para muestras liquidas.
Metodos Generales de Analisis 355
Prcparacion de la muestra para amilisis de refledancia
multiple
Soluciones. Diso1ver la muestra en un disolvente adecuado
de acuerdo a las condiciones descritas en la monografia.
Evaporar la solucion sobre el cristal de reflectancia.
Solidos. Colocar Ia muestra sobre el cristal de reflectancia,
de tal manera que el contacto entre la muestra y el crista! sea
homogeneo.
INFRARROJO CERCANO
La espectroscopia de infrarrojo cercano (NIR) es una rama
de Ia espectroscopia vibracional que comparte muchos de los
principlos que se aptican a oU'as mediciones espectrosc6picas.
Esta region espectral comprendc desde los 780 a los
2500 nm (12 821 a 4 000 cm~l), Ia region mas cmpleada se
encuen!ra en el intervalo espectral de I 700 a 2 500 run (5882 a
4000 em- 1). Los espectros infrarrojos estan constituidos por
la representacion grafica de la energia absorb ida en funci6n
de Ia longitud de onda (nm) 0 delnllmero de onda (cm~l), las
sena1es que presentan provicnen de sobretonos y senales
de combinacion de vibraciones moleculares fundamentales,
son mas d6biles que las originadas en el infrarrojo medio
y son producto de 1a aplicacion de algoritmos quimometricos.
Los m6todos analiticos basados en la cspectroscopia NIR
son Miles para el control de procesos industriales. E! analisis
quimico por infrarrojo cercano en la industria puede agruparse
en dos categorias generales: Analisis fuera de linea (ofj:line)
que implica Ia recolecci6n manual de las rnuestras de
produccion para ser llevadas al area donde se encuentra el
espectrofot6metro y realizar las determinaciones necesarias
y analisis en linea (on-line): 1a radiaci6n infrarroja se lleva a
la l11uestra mediante sondas de fibra 6ptica que pueden
insertarse en la linea de proceso 0 a una celda de t1ujo donde
se hace pasar parte de Ia muestra de la linea de produccion.
Otra sonda recoge la radiacion transmitida 0 reflejada para
realizar e1 analisis en tiempo real.
Medidas de registro
En el intervalo espectral del infi-arrojo cercano se rcalizan
medidas de reflectancia, transmitancia 0 trans'flectancia.
Transmisi6n y reflexion. Las medidas mas comunes que se
realizan en e1 intervalo espectral infrarrojo cercan'o son 1a
transmisi6n y 1a espectroscopia de reflexi6n. La radiaci6n
incidentes es absorbida 0 dispersada por la l11uestra y se
mide 1a transmitancia 0 rel1ectancia, respectivamente.
Reflectancia. La espectroscopia de reflectancia estudia la
radiacion ret1ejada por 1a muestra, 1a cual puede ser
especular 0 difusa. La radiaeion que !lega a Ia superficie
externa penetra la muestra, cuando llega a un enlace quimico
la radiaci6n es diseminada y reflejada en todas direcciones.
Estos haces dispersos pueden entonces ser absorbidos 0
ret1ejados por otras uniones quirnicas, hasta que una porci6n
MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA INFRARROJA
356 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima edicion.
de los rayos eventualmente salga de la muestra en todas
direcciones. La profundidad de penetracion deJ haz dentro de
la muestra esta determinada por la potencia de la fuente
de luz. La mayoria de la reflexi6n medicioncs en cl NIR son de
ejemplos de dispersi6n en muestras de polvos y semis6lidos.
Reflectancia especular. Prcdomina cuando eJ material sobre
el que se produce la reflexi6n tiene valores altos de los
coeficientes de absorci6n para la longitud de onda incidente;
cuando la penetraci6n de ta radiaci6n es muy pequena en
comparaci6n con la longitud de onda y cuando las
dimensiones de la superficie reflectante son mucho mayores
que la longitud de onda.
Reflectancia difusa. Se trata de una medida empteada para
el anaJisis cuantitativo de s6lidos. La dispersi6n sufrida por
las ondas se encuentra sujeta a la.-; propiedades fisicas de la
supertkie sometida, es decir, la composici6n fisica de
la muestra. Las mas importantes son: el tamai'io de las
particulas, contenido de humedad y temperatura de la misma.
Transflexi6n. Es una lTIczcla entre transmisi6n y reflexi6n
en el que se coloca un reflector detras de la muestra de modo
que el paso 6ptico a traves de la muestra y de vuelta al
detector se dup!1ca en comparacion con una medici6n de
transmisi6n de una muestra de! mismo espesor, Transflexi6n
se utiliza para describir cualquier tecnica de transmision de
doble paso.
Principales facto res que afectan los espectros en el
infrarrojo cercano
Temperatura de Ia muestra. Intluye en el espectro
obtenido desde soluciones acuosas y otros Uquidos que
formen enlaces de hidrogeno, la diferencia minima de
temperatura puede resultar en cambios espectrales
importanles. La temperatura puede tambien afectar los
espectros obtenidos de liquidos poco polares, as] como
s6lidos que contienen disolvente y/o agua.
Humedad y el disolvente. El disolvente y Ia humedad
presente en el material de 1a muestra y del sistema analilico
pueden cambiar el espectro de la muestra. Tanto 1a absorci6n
por la humedad y disolvente y su influencia en el enlace de
hidrogeno pueden cambiar el espectro.
Grosor de la muestra. Este es un factor conocido de la
variabilidad espectral y debe ser eonoeido y controlado. El
espesor de la muestra en el modo de transmision es
tipicamente controlado mediante el usa de una longitud fija
del paso 6ptico fijo para la muestra. En el modo de reflexion
difusa, el espesor de la muestra es tipicamente controlado
mediante el uso de muestras que son tlinfinitamente gruesas"
con relaci6n a 1a profundidad de penetracion detectable de la
radiacion IR en un material s6lido. El concepto !Ide espesor
infinito!1 implica que el espectro de reflexion no cambia con
el incremento de este.
Propiedades opticas de las muestras. En s6lidos, tanto las
propiedades de superfieie y las propiedades de dispersion
MGA 0351. ESPECTROFOTOMETRiA INFRARROJA
masiva en las muestras de referencia de calibracion y las
muestras analiticas se deben tener en cuenta. La morfologia
de la superfieie y las propiedades de indice de refraceion
afectan a la dispersion en los materiales solidos. Para los
materiales en poIvo, el tamafio de la particula y la densidad
son propiedades que influyen en la dispersion de 1a radiacion
y por 10 tanto el espectro.
Polimortismo. La variacion en 1a estructura cristalina de
materiales con 1a misma composicion quimica puede influir
en la respuesta espectral. Diferentes formas polimorfas y
amorfas de material s6lido pueden distinguirse sobre la base
de sus propiedades espectrales. Los diferentes estados de
hidrataci6n 0 solvataci6n cristalina de un mismo material
pueden mostrar diferentes espectros.
Edad de moestras. Con el paso del tiempo las muestras y
sustancias de referencia pueden presentar cambios en sus
propiedades 6pticas, quimicas y flsicas.
Aplicaciones
Las aplicaciones mas recientes de la tecnologia en el infrarrojo
cercano han tenido lugar en la industria farmaceutica ademas
de otros sectores (medio ambiente, cosmetica, biologia,
medic ina, industria quimica, petroquimica, texti! y agroalimen-
taria entre otras). La espectroscopia NIR esta practicamente
orientada a la determinacion y cuantificaci6n de compuestos
organicos los cuales se caracterizan por la presencia de
grupo. funcionales eomo O-H, N-H, C~O y C-H en las
muestras que se analizan. De estas aplicaciones destacan:
Identificaci6n. Identificacion de materias primas, productos
intermedios y acabados en un proceso farmaceutico sin
pretratamiento de la muestra. Existen bibliotecas espectraies
o se compara con una sustancia de referencia.
Determinacion de humedad. El agua muestra en el
espectro NIR dos senales importantes que hacen posible su
cuantificacion en diversas etapas del proceso farmaceutico.
Se han desarrollado metodo. para eJ analisis de humedad en
tiempo real on-line, en procesos de granulacion y de secado.
Tamano de particula. El distinto tamafia de partieula de
una muestra s6lida inHuye directamente sobre cl efecto
de dispersion de 1a radiacion (scattering) en medidas por
reflectancia difusa. Este efecto produce desplazamientos de
la linea base que permite la detenninacion del tamafio medio
de particula de muestras s6lidas. Se han desarrollado metodos
cuantitativos mediante la utilizaci6n de modelos de calibracion
que tan solo utilizan dos longitudes de onda para determinar
el tamano medio de particula en muestras farmaceuticas en
un intervalo de tamafio de partieula de 24 a 400 ftm.
Homogeneidad de mezclas. Durante 1a fabricacion de
preparados farmaceuticos en forma s6lida, la determinaci6n
del estado de homogeneidad de las mezclas constituye uno de
los controles mas importantes. Asegurar que las lll1idades
individuales del farmaco presenten una correcta uniformidad,
linicamente es posible consiguiendo 1ll1a con'ecta distribuci6n

de todos los componentes del preparado. Es posible realizar
esta medici6n mediante sondas de fibra optica, 10 que
permite tener un control en tiempo real (on-line), del grade
de homogencidad que presenta la mezcla en fabricaci6n. El
control de la homogeneidad de mezclas puede ser llevado a
cabo tanto por un metodo cuaHtativo como cuantitativo. Se
han desarrol1ado metodos basados en el concepto de seRal
neta del analito (NAS, Net Analyte Signal). Diehos metodos
han sido validados y constituyen una alternativa a los
metodos CLAR actualmente utilizados.
Granulaci6n humeda. Los procesos de granulacion
humeda pueden inducir trans formaciones polimorfas, las
cuaies se puoden determinar mediante espectroscopia NIR.
La transformaci6n de un principio activo durante un proceso
de granulaci6n humeda se ha realizado mediante un metodo
cuantitativos que permite determinar la el porcentaje de
trans formaci on.
Polimorfismo. Dado que el espectro NIR es sensible a los
cambios en los enlaces de hidrogeno y al empaquetamiento
de las celdas cristalinas, la espectroscopia NIR se puede
aplicar a la identificacion y cuantificacion de las fmmas
polimorfas.
Compa.ctacion. La composicion de una mezcia, las
propiedades de cada componente y 1a presion aplicada
durante la compactacion, entre otras variables, influye
directamente sobre la dureza tinal del comprimido y sus
propiedades mecimicas. La espectroscopia NIR permite
obtener informacion relacionada con estas propiedades. La
presion de compactacion apJicada durante la obtencion de
comprimidos farmaceuticos tiene una relacion directa con
sus espectros NIR
Ensayo de contenido. La adaptabilidad de la teeniea
permite el amilisis de multiples analitos (principios activos y
excipientes) en diversos tipos de muestras (granulado, poivo,
comprimidos, capsulas, Hquidos, geles, etc.), para establecer
su grado de pureza 0 bien para determinar el contenido de
uno 0 mas componentes en la muestra por espectroscopia en
el infrarrojo cercano comprueba sl los valores obtenidos
corresponden con las especificaciones del producto.
Ventajas. Es una tecnica analitica no destructiva. Es posible
analizar un gran numero de muestras rapidamente y con un
ahorro de costos, ausencia de reactivos adicionales. Pennite
la cuantificacion de multiples analitos en una sola medici6n
y con un solo espectro. La resistencia de los materiales
utilizados y la ausencia de partes moviles en el sistema
de detecci6n hacen que sea una tecnica id6nea para procesos de
control en planta. Esta aplicacion se ve favorecida por Ia
gran tendencia a la miniaturizacion y compactacion que
esta sufriendo esta instrumentacion. En muchos campos de
aplicacion, la exactitud de la tecnica NIR es comparable a
otras tecnicas anaHticas y, generalmente, su precision es
mayor debido a la falta de tratamiento de la muestra.
Desventajas. La eomplejidad de las sefiales que se presentan
en esta region obliga a aplicar tecnicas quimiometricas que
Metodos Generales de Analisis 357
permitan modelar los datos para identificar y cuantificar
muestras problema. No es posible analizar muestras que
presenten una variabilidad fisica 0 quimica no contemplada en
Ia calibracion. La tccnica es poco sensible, especialmente
en medidas de reflectancia difusa, haciendo dificil, el
analisis de componentes minoritarios.
Instrumento
Los espectrofotometros en el infrarrojo cercano son
instrurnentos que registran el espectro en la region de 780 a
2 500 nm, consisten de una fuente de radiacion, que puede
ser la lampara halogena de filarnento de tungsteno con
ventana de cuarzo las cuaies se est.abiIizan facilmente y
proporcionan un espectro continuo en la region de 320 a
2 500 nm, tambien se pueden emplear liimparas LED (1(ght
emiting diodes). Un monocromador, los mas comunes son
los no dispersivos farmados por filtros sincronizados
aellstico-opticos (AOFT: acousto-optical tunable jilter),
o los dispersivos constitllidos por rejillas de difraccion. Para
los inst.rumentos con Transformadas de Fourier se emplea un
interferometro. Los detectores empleados en espectroscopia
NIR son construidos con materiales semiconductores como
InGaAs, InAs, InSb, Si y PbS (este material presenta adeeuada
sensibilidad y intervalo de aplicaeion, 900 a 2 600 nm). Para
medidas por transmision en solidos se utiliza el detector de
arseniuro de indio y galio (600 a 1 900 nm). Se requiere una
sonda de fibra optica para realizar mediciones a distancia. En
los porta muestras, se colocan las celdas 0 cubetas que
contienen la muestra correspondiente.
MGA 0361. ESPECTROFOTOMETRiA
VISIBLE Y ULTRAVIOLETA
Este metodo establece las tecnicas para la identificacion y
cuantificacion de sustancias por espectrofotometria de
absorcion ultravioleta y visible, ademis describe las
condiciones generales para su aplicacion.
La espectrofotometria se basa en la medida de la absorci6n,
por las diferentes sustancias, de una radiaci6n electro mag-
netica de longitudes de onda situadas en una banda definida
y estrecha, esencialmente monocromatica. La banda"espectral
empleada en las mediciones se extiende desde las longitudes
de onda corta de la zona ultravioleta hasta la visible del
cspectro. Por cuestiones pract.icas, este intervalo espectral
puede considerarse como si estuviera constituido par dos
zonas, la ultravioleta de 190 a 380 nm y la visible de 380 a
780 nm. La espectrofotometria en la zona visible (que antes
solia llamarse colorimetria), es la medida de la absorcion de
1uz visible, que generalmente no es monocromatica pero que
se selecciona mediante e1 empleo de filtros pigmentados 0 de
interferencia. En general, los espectros ultravioleta y visible
de una sust.ancia, no tienen un alto grado de especificidad,
sin embargo son muy adecuados para las valoraciones
MGA 0361. ESPECTROFOTOMETRiA VISIBLE Y ULTRAVIOLETA