CAPITULO I

PLANTEAMIENTO DE PROBLEMA

1.1 DESCRIPCIÓN DE LA SITUACIÓN PROBLEMÁTICA

La medicina moderna, a través de los análisis clínicos, ha conseguido

precisar la validez de aquellas plantas que la tradición había utilizado a

base del método de ensayo y error. Han sido precisamente los análisis los

que han podido determinar cuáles son los componentes principales de las

plantas medicinales. Los llamados principios activos.

El presente trabajo de investigación tiene la finalidad de determinar la

actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico estandarizado de las

hojas de nogal peruano debido a su variedad de beneficios para la salud.

1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

 ¿Es posible encontrar actividad antioxidante en el extracto

hodroalcoholico de las hojas de nogal peruano (Junglans neotropica

diels)?

1.3 OBJETIVOS DE INVESTIGACIÓN

1.3.1 Objetivos Generales

 Determinación de la actividad antioxidante del extracto

hidroalcohólico estandarizado de las hojas de nogal

peruano (Juglans neotropica diels)

1
1.3.2 Objetivos Específicos

 Elaborar el extracto hidroalcohólico de las hojas de nogal

(Junglans neotropica diels) en los laboratorios de la

Universidad Alas Peruanas Filial Arequipa 2018.

 Determinar el análisis de parámetros de estandarización

del extracto hidroalcohólico de las hojas de nogal peruano

(Junglas neotropica diels).

 Determinar la presencia de metabolitos secundarios

(flavonoides, saponinas, taninos) en el extracto

hidroalcohólico estandarizado de las hojas de nogal

peruano (Junglas neotropica diels).

2
1.4 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN

1.4.1 importación de la investigación

El presente trabajo de investigación tiene la finalidad de determinar la

actividad antioxidante y los metabolitos secundarios del extracto

hidroalcohólico estandarizado de las hojas de nogal peruano (Junglans

neotropica diels) debido a que las hojas son consideradas fuentes de

compuestos saludables y han sido usadas ampliamente en la medicina

tradicional para el tratamiento de dermatitis, insuficiencia venosa y posee

propiedades antidiarreica antidiarreica, antihelmíntica, antiséptica,

antibacteriana, astringente, antioxidante, antifúngico, hipoglicémica y

antiproliferativa.

Es de suma importancia ya que la determinación de la actividad antioxidante

de las hojas de nogal peruano (Juglans neotropica diels) es considerable, ya

que los antioxidantes son capaces de impedir la oxidación celular causada

por los temidos radicales libres; algo ciertamente fundamental, dado que esa

oxidación acelera el envejecimiento, pudiendo provocar mutaciones en las

células que podrían a su vez causar cáncer u otras enfermedades

degenerativas.

3
1.4.2 Viabilidad de la investigación

 Listado de equipos, materiales, insumos y reactivos

MUESTRA Nogal peruano (Junglas neotropica

diels)

 Listado de equipos materiales insumos y reactivos

EQUIPOS

 Balanza analítica
 Estufa
 pH-metro
 Refractómetro

MATERIALES

 Tubos de ensayo
 Gradillas
 Pinza para tubo
 Vasos de precipitado
 Trípode
 Embudo
 Papel filtro
 Varilla de agitación
 Pipetas
 Probetas
 Picnómetro
 Espátula
 Envases estériles de vidrio

4
INSUMOS Y REACTIVOS

EQUIPOS

Balanza 01

INSUMOS Y REACTIVOS

Hojas de Pupusa 1 kg

Cloruro férrico 10 mL

Agua destilada 2L

Alcohol 96° 2L

Tricloruro férrico 10 mL

Ácido clorhídrico 10 mL

Grenetina 10 g

Cintas de magnesio 10 g

Acidogalico 10 mL

Persulfato de potasio 10 mL

Trolox 10 mL

Reactivo DPPH 10 mL

Fuente: Elaboración propia.

5
PRESUPUESTO

REACTIVO CANTIDAD COSTO COSTO TOTAL

(ml) UNITARIO
Alcohol etílico 100 S/. 8.00 S/.8.00

Ácido clorhídrico 1 S/.10.00 S/.10.00

Tricloruro férrico 1 S/.10.00 S/.10.00

Sulfato férrico 1% 1 S/.15.00 S/.15.00

Reactivo DPPH 1 S/.15.00 S/.15.00

Anillado 1 S/.4.00 S/.4.00

Impresiones 40 S/.2.00 S/.40.00

TOTAL s/ 102.00

Fuente propia

1.5 LIMITES DEL ESTUDIO

El presente trabajo de tiene como objetivo evaluar la actividad antioxidante en

el extracto hidroalcohólico estandarizado de las hojas de nogal peruano

(Junglans neotropica diels) para así apoyar a futuras investigaciones y asi

elaborar fitofármacos con las propiedades medicinales que tenga las hojas de

este árbol.

Es una investigación nueva ya que aún no se han realizado estudios

profundizados sobre arboles que aun no han sido investigadas y estudiadas

para así conocer que hay muchas plantas con excelentes efectos terapéuticos

que pueden ser usados a futuro en la elaboración de medicamentos que

pueden ser muy beneficiosas para el bienestar de la salud.

6
 CAPITULO II

2.1 ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACION

ANTECEDENTES NACIONALES

2.1.1 TITULO: Avances en la caracterización e identificación anatómica de los

anillos de crecimiento de la especie nogal (Junglans neotropica diels) para

estudios dentro cronológicos en el fundo La Génova, Junín (Perú)

AUTOR: Andrea Vera Arabe, Daigard Ricardo Ortega Rodríguez, Pablo Pérez

Chaves, Jedi Rosero Alvarado, Manuel Chavesta Custodio.

UNIVERSIDAD: Universidad Agraria la Molina

AÑO: 2015

RESUMEN: La zona de estudio se encuentra ubicada en el departamento

de Junín, provincia de Chanchamayo, distrito de San Ramón – Fundo La

Génova; el cual comprende una extensión de 577 hectáreas.(DANCE, 1984).

Dicho fundo se encuentra entre las coordenadas UTM: 18L 459500-463500

Oeste y 8’7714,500 Norte (REYNEL; ANTÓN, 2004). Selección del área de

muestreo la colección se realizó en la parte alta del Fundo La Génova, con

dirección al suroeste, en el área que corresponde al bosque de protección.

Los árboles se ubican en una zona de pendiente alta; situados a pocos

metros del borde del camino, distanciados entre ellos aproxímate ellos

aproximadamente de 60 a 100 metros, ubicándose en el estrato medio del

dosel.

7
Colección y extracción de muestras de Juglans neotropica Se seleccionaron al

azar 7 árboles de Juglans neotropica, con DAP entre 40–50 cm. Recolectaron

de 2 a 3 muestras radiales obtenidas con barreno Pressler de 5,1mm de

diámetro por 400mm de largo las cuales fueron extraídas teniendo en cuenta

un ángulo de separación de 90º una de otra. Una vez obtenidas fueron

acondicionadas en tubos de plástico (sorbetes), selladas con cinta adhesiva y

codificadas de la forma NG1R1 (Nogal 1, Radio 1) y así sucesivamente; las

cuales se trasportaron en un recipiente hermético para su posterior análisis en

el Laboratorio de Anatomía e Identificación de Maderas de la Universidad

Nacional Agraria La Molina. Preparación de las muestras barrenadas para

caracterización de anillos de crecimiento Las muestras obtenidas de los 7

árboles fueron fijadas en soportes de madera y su sección transversal

pulida con lijas de diferentes granos (80, 120, 320, 400 y 600 grano.pulgada-

2) para resaltar y visualizar los anillos de crecimiento. Como proceso final

se realizó una limpieza con una pistola de aire comprimido para abrir los poros

obstruidos por residuos del proceso de lijado. Las muestras fijadas fueron

analizadas y fotografiadas con ayuda del estereoscopio Olympus VMT 1x,

4x con acoplamiento de cámara fotográfica digital Canon Powershot S50.

Caracterización e identificación anatómica de la estructura de los anillos de

crecimiento de Juglans neotropica Se realizó la identificación y

caracterización de elementos anatómicos a través de un análisis

macroscópico en el estereoscopio, elaborándose un bosquejo con lo

observado en las diferentes muestras, analizando albura, duramen y área de

transición. Finalmente se realizó visual entre las muestras de un mismo

árbol.

8
2.1.2 TITULO: Evaluación de la actividad gastroprotectora del extracto

hidroalcohólico de las hojas de (Juglans neotropica diels) "Nogal peruano"

AUTOR: Hurtado Manrique, Paola Estefania

UNIVERSIDAD: Universidad Nacional Mayor de San Marcos Lima- Perú

AÑO: 2016

RESEUMEN: Determinar la actividad gastroprotectora del extracto

hidroalcohólico de las hojas de Juglans neotropica Diels “nogal peruano”.

Diseño: estudio prospectivo experimental. Materiales biológicos: extracto de

hojas de Juglans neotropica Diels y ratas albinas macho raza Sprague Dawley.

Métodos: se determinó los metabolitos secundarios con los reactivos

específicos. La cuantificación del compuesto fenólico mayoritario se determinó

por el método de FolinCiocalteu. Para la evaluación de la actividad

gastroprotectora, se empleó el modelo de inducción de úlceras gástricas por

etanol 96°, se administró el extracto a dosis de 50, 250 y 500 mg/kg. Fármacos

patrones utilizados: omeprazol 20 mg/kg y sucralfato 3 ml/kg. La evaluación

macroscópica fue mediante la escala de Alada et al modificada y la de

Marhuenda. Para el estudio histopatológico, los tejidos se conservaron en

formol al 10% y la tinción fue con hematoxilina-eosina. Resultados: el extracto

hidroalcohólico de las hojas de JuglansneotropicaDiels posee carbohidratos,

compuestos fenólicos, flavonoides, taninos, antraquinonas, triterpenos,

esteroides, saponinas y alcaloides. La cuantificación del compuesto fenólico

mayoritario fue de 16.909 ± 0.382 mg EAG/g del extracto seco. El tratamiento

con el extracto produjo una inhibición de las úlceras gástricas de 84,61 % y

94,77 % a dosis de 250 y 500 mg/kg respectivamente con un p<0,05. En el

9
estudio histopatológico se observó descamación y aumento de macrófagos en

el grupo control, mientras que el grupo G (nogal 500 mg/kg) presentó mayor

protección que en los grupos de 50 y 250 mg/kg, donde se observó solo

descamación e hipertrofia. Conclusión: El extracto hidroalcohólico de las hojas

de Juglans neotropica Diels “nogal peruano” fue efectivo como agente

gastroprotector en un modelo de inducción de úlceras gástricas por etanol 96°.

10
ANTECEDENTES INTERNACIONALES

2.2.1 TITULO: EVALUACIÓN DEL EFECTO DE LOS TRATAMIENTOS

PREGERMINATIVOS EN SEMILLAS DE NOGAL (Juglans neotrópica Diels)

EN EL RECINTO PUMIN PROVINCIA DE BOLIVAR”

AUTOR: AZAS AZOGUE ROMULO DIEGO

UNIVERSIDAD: UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS (ESPE)

SANTO DOMINGO

AÑO: 2016

RESUMEN: Esta investigación se desarrolló en una zona alta de la Provincia

de Bolívar, en la parroquia Salinas recinto Pumin ubicado a 3500 msnm, cuyas

coordenadas X 0717936 Y 9840947 respectivamente, donde predomina una

temperatura entre 10 - 18 °C y una precipitación promedio anual de 500

mm/año, con un suelo de origen volcánico con textura franco arcilloso y un alto

contenido de materia orgánica. Durante esta investigación se realizó el estudio

de diferentes tratamientos pre-germinativos, utilizando algunas técnicas y

procedimientos donde permitan que las semillas de nogal germinen en el

menor tiempo posible. En el transcurso de esta investigación que duro ciento

cincuenta días se encontró con diversos problemas agrometeorológicos en

especial con la presencia de lluvias y las bajas temperaturas, pese a ello se

pudo obtener resultados favorables en la investigación donde se pudo

comprobar que el mejor tratamiento resulto ser Solarización 48 horas con un

porcentaje del 81,25%, seguido por el tratamientos agua corriente donde se

obtuvo un porcentaje de germinación de un 73,44% resultado que permitirá

hacer uso a los diversos lugares en nuestro país sobre todo a quienes se
11
dedican a la producción masiva de la especie Juglan neotropicas Diels, para el

uso en reforestación de estos ecosistemas forestales en la región andina del

ecuador.

12
2.2. TITULO: ESTADO DEL ARTE, PROPAGACIÓN Y CONSERVACIÓN DE

(Juglans neotropica diels) EN ZONAS ANDINAS.

AUTOR: Esaú Toro Vanegas e Isabel Cristina Roldán Rojas

UNIVERSIDAD: Universidad Distrital Francisco José de Caldas Colombia.

AÑO: 2015

RESUUMEN: Con el fin de ahondar en el conocimiento de la flora colombiana,

particularmente aquella presente en la región de los llanos orientales, se eligió

la especie Strychnoss chultesiana Krukoff para profundizar en su composición

química y así establecer una potencial utilidad medicinal o industrial. Para ello

se realizó un análisis fitoquímico preliminar de tres de sus órganos –tallos,

hojas y semillas–, en el que se evaluó la presencia de los principales grupos de

metabolitos secundarios asociados con actividadbiológica, a saber: alcaloides,

flavonoides,taninos,saponinas, derivados antracénicos, esteroides

y/otriterpenoides, cumarinas, glicósidos cardiotónicos y lactonasterpénicas. Se

detectó la presencia de alcaloides en gran concentración, lo cual era de

esperarse al tratarse de una especie del género Strychnos, ampliamente

conocida por su contenido de alcaloides. Es notable también la presencia de

flavonoides en los tres órganos. Estos compuestos son ampliamente conocidos

por sus propiedades antioxidantes, útiles en la prevención de múltiples

enfermedades asociadas a los procesos oxidativos. Los resultados de este

trabajo son realmente útiles como primera aproximación a la ampliación del

conocimiento químico y a la posible utilidad de las especies presentes en esta

zona de Colombia con características agronómicas óptimas para el

establecimiento de cultivos, que permitan una

13
Utilización racional de los recursos naturales de nuestro país, como fuente de

desarrollo regional y nacional.

14
2.2 BASES TEÓRICAS

2.2.1 MEDICINA TRADICIONAL

La medicina natural es un término que se emplea directamente para relacionar

cualquier practica con intenciones curativas que se basen en métodos

naturales, es decir, por fuera del desarrollo de la medicina y la farmacología

.incluso, dentro de la consideración de la organización mundial de la salud

medicina natural es aquella que se basa en los sistemas de la medicina

tradicional y también métodos curativos.

2.2.2 DROGA VEGETAL

Parte de la planta que contiene los principios activos con actuación

farmacológica para su uso terapéutico. Principios activos contenidos en los

distintos órganos de los vegetales, raíces, hojas, flores, frutos, etc. como por

ejemplo: reserpina, estricnina, atropina, digitoxina, morfina, vimblastina,

galantamina.

2.2.3. PRINCIPIO ACTIVO

Los principios activos son elementos que “actúan”, es decir, sustancias con

actividad biológica que tienen la capacidad de interactuar con nuestro

organismo y sus distintos sistemas. Casi todos los principios activos conocidos

han sido ampliamente estudiados y utilizados por la industria farmacéutica. Sin

embargo, la principal diferencia entre los fármacos y las plantas medicinales (al

margen de la procedencia biológica o sintética de ciertos componentes) es

precisamente la sinergia entre esa multitud de sustancias que componen una

planta medicinal, muchas de ellas aún desconocidas.

15
Aunque de momento nos parezca que lo más esencial es el principio activo de

una planta, no hemos de olvidar la importancia de esos otros componentes que

potencian y regulan la actividad de aquellos o reducen sus riesgos. La

naturaleza es sabia y resulta verdaderamente fascinante descubrir cómo todos

y cada uno de sus componentes realizan una función sinérgica. Por ejemplo,

los flavonoides ayudan a la absorción de la vitamina C, por lo que casi todos

los alimentos o plantas que contienen vitamina C, también contienen

flavonoides. Y como este ejemplo, millones de ellos. Teniendo en cuenta que

no podemos olvidar esas otras sustancias “complementarias”, revisamos ahora

algunos de los principios activos presentes en las plantas medicinales.

Puesto que su clasificación es bastante compleja y pueden aparecer de

manera aislada o asociada a otras sustancias con cuyas nomenclaturas

podrías enloquecer, vamos a revisar de manera general aquellos cuyos

nombres nos resultan más familiares para que puedas reconocerlos. Te

contamos cuál es su efecto en el organismo y las plantas donde podemos

encontrarlos.

2.2.4. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

Los niveles bajos de antioxidantes o la inhibición de las enzimas antioxidantes

causan estrés oxidativo y pueden dañar o matar las células.

Un antioxidante es una molécula capaz de retardar o prevenir la oxidación de

otras moléculas. La oxidación es una reacción química de transferencia

de electrones de una sustancia a un agente oxidante. Las reacciones de

oxidación pueden producir radicales libres que comienzan reacciones en

cadena que dañan las células. Los antioxidantes terminan estas reacciones

16
 quitando intermedios del radical libre e inhiben otras reacciones

de oxidación oxidándose ellos mismos. Debido a esto es que los antioxidantes

son a menudo agentes reductores tales como tioles o polifenoles. Los

antioxidantes se encuentran contenidos en

el olivo, ajo, arroz integral, café, coliflor, brócoli, berenjena, jengibre, perejil, ce

bolla, cítricos, semolina, tomates, aceite de semilla de la vid, té, romero, entre

otros muchos alimentos. La capacidad antioxidante de algunos frutos, como

es el caso del sancayo , es mayor durante sus estadios iníciales.

Aunque las reacciones de oxidación son cruciales para la vida, también

pueden ser perjudiciales; por lo tanto las plantas y los animales mantienen

complejos sistemas de múltiples tipos de antioxidantes, tales

como glutatión, vitamina C, y vitamina E, así como enzimas tales como

la catalasa, super óxidodismutasa y varias peroxidasas.

2.2.4. COMPUESTOS FENOLICOS

Los compuestos fenólicos son compuestos orgánicos que en su estructura

contienen al menos un grupo fenol (un anillo aromático unido al menos a un

grupo funcional), Estos compuestos son resultantes del metabolismo

secundario de las plantas, cruciales para los aspectos funcionales en la vida de

las mismas, con diferentes funciones como protector en contra de plagas,

estrés del medio y patógenos, así como generador de colores atractivos para

su polinización y dispersión.

Estos compuestos fenólicos o metabolitos secundarios de las plantas

están agrupados en cuatro clases principales:

17
 Los terpenos: clase de fenoles en la que se encuentran

pigmentos, aceites esenciales y hormonas

 Los polifenoles: taninos, cumarinas, flavonoides, lignina y taninos

 Los glicósicos: glicósidos y glucosinolatos y saponinas

 Los alcaloides

Los llamados compuestos fenólicos tradicionalmente han sido

considerados como antinutrientes debido al efecto adverso de uno

de sus componentes mayoritarios: los taninos, los cuales son una

subdivisión de los polifenoles (uno de los subgrupos de los

compuestos fenólicos).

Los taninos y los flavonoides son los fenoles o compuestos fenólicos

que más abundan.

 Taninos

Los taninos originalmente fueron utilizados para curtir pieles crudas

de los animales. De hecho “curtido” en inglés se dice tanning. estos

compuestos fenólicos se utilizan en el curtido porque tienen la

capacidad de reaccionar con las proteínas de colágeno que que

abundan en las pieles de los animales uniéndolas entre ellas,

aumentando así su resistencia al calor, a la putrefacción natural de

lo orgánico y al ataque de microorganismos. Ese efecto sobre las

proteínas hacía que no se consideraran como producto beneficioso

para el cuerpo.(4)

 Flavonoides

18
Los flavonoides son una “familia muy diversa” de 6 clases principales

de compuestos fenólicos constituidos por pigmentos responsables

de dar coloración a la planta, hojas, flores, o frutas. Participan

activamente en al vida de la planta y el metabolismo de esta.

Además, ejerce papeles protectores de insectos y de los rayos UV a

la par que ejercen un papel importante como antioxidantes.

19
2.3 DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BÁSICOS

 Flavonoides: Los flavonoides son metabolitos secundarios polifenólicos

comúnmente con un grupo cetona y normalmente pigmentos de

́ flavus,
coloración amarilla de donde viene su nombre (del latin

"amarillo"). Dentro de los flavonoides podemos distinguir cuatro grupos

principales: los flavonoides, los isoflavonoides, los neoflavonoides y los

antocianos, pero para no complicar las cosas nos referiremos a ellos con

el término común de flavonoides

 Taninos: Los taninos son metabolitos secundarios de algunos

vegetales, que resultan solubles en el agua y son astringentes. Pueden

tener una tonalidad entre amarilla y marrón y disponen de un sabor

amargo.

 Extracto: Un extracto en forma general significa una pequeña sección o

cantidad que posea gran relevancia de una redacción, planta, o

cualquier cosa que se esté estudiando, si hablamos del ámbito de

redacción un extracto significaría un resumen del texto evaluado en el

cual se abarquen las ideas principales y las secciones más específicas e

importantes.

 DDHP: DPPH es una abreviación común para el compuesto químico

orgánico 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo. Es un polvo cristalino de color

oscuro compuesto de moléculas estables de radicales libres

 Metabólitos: Es cualquier sustancia producida durante el metabolismo

(digestión u otros procesos químicos corporales). El término metabolitos

también se puede referir al producto que queda después de la

descomposición (metabolismo) de un fármaco por parte del cuerpo.

20
 pH: Es una medida de acidez o alcalinidad de una disolución. El pH

indica la concentración de iones de hidrógeno presentes en

determinadas disoluciones. La sigla significa potencial de hidrógeno o

potencial de hidrogeniones.

 Solubilidad: la cualidad de soluble (que se puede disolver). Se trata de

una medida de la capacidad de una cierta sustancia para disolverse en

otra. La sustancia que se disuelve se conoce como soluto, mientras que

aquella en la cual este se disuelve recibe el nombre de solvente o

disolvente.

21
 III CAPITULO

3.1 FORMULACIÓN DE HIPÓTESIS PRINCIPAL Y DERIVADAS

 Dado que las hojas de nogal peruano (Juglans neotropica

diels) se le atribuye innumerables efectos antidiarreico,

antihelmíntico, antisépticos, antibacteriano, es posible que

en el extracto hidroalcohólico estandarizado de las hojas de

nogal (Junglans neotropica diels) tenga actividad

antioxidante.

22
3.2 VARIABLES Y DEFINICIÓN OPERACIONAL

VARIABLES

Variables Definición Indicador Unidad/cat Escala

conceptual egoría

Variable Si Nominal

dependiente Alcaloides No

Si Nominal

Determinación de Sobre el extracto Terpenos No

hidroalcohólico la
la actividad Si Nominal
las hojas de nogal
antioxidante Flavonoides No
peruano (Junglas
neotropica diels) Si Nominal

Taninos No

Si Nominal

Saponinas No

Variable Si Nominal

independiente Extracto PH No

hidroalcohólico
Si
Extracto estandarizado de Temperatura Nominal
hidroalcohólicoes las hojas de nogal No

tandarizado de peruano (Junglas

las hojas de neotropica diels) Tiempo

Si
nogal peruano ( Nominal
No
Junglas

neotropica diels)

FUENTE: PROPIA
23
 CAPÍTULO IV

METODOLOGÍA

4.1 DISEÑO METODOLÓGICO

4.1.1 TIPO Y NIVEL DE INVESTIGACIÓN

El tipo de investigación es nivel exploratorio y tipo experimental con

el propósito de identificar la actividad antioxidante en el extracto

hidroalcohólico estandarizado de las hojas de nogal (Junglas

neotropica diels)

4.2.2 MÉTODO DE LA INVESTIGACIÓN:

4.2.1. Recolección del material vegetal

A. Recolección de las muestras vegetales:

La materia prima se recolectara en el distrito de Hunter con una

temperatura de 22°c solo se recolecto hojas.

Luego de la recolección se procedió a desechar las hojas

dañadas del árbol, posteriormente se lavó con abundante agua

y se desinfecto con agua destilada para ponerla a secar.

B. Selección

 Luego de la recolección se procedió a desechar las hojas

dañadas del árbol. Posteriormente.

C.LIMPIEZA

 Posteriormente se lavó con abundante agua.

24
D. DESINFECCION

 Se desinfecto con agua destilada para ponerla a secar.

E. SECADO

 El secado de la materia prima se realizó a una

temperatura ambiente fuera del alcance de los rayos

solares pues esta puede dañar algún metabolito

segundario. Una vez secado la materia prima se procede

a trocearlo y se guarda en un frasco de vidrio para que

no le alcance la humedad y fuera de los rayos UV del sol.

F. GUARDADO Y PESADO

 Una vez secado la materia prima se procede a trocearlo

y se guarda en un frasco de vidrio para que no le alcance

la humedad y fuera de los rayos UV del sol.

25
 PREPARACIÓN DE LA
MATERIA PRIMA

Hojas
1. RECOLECCIÓN

Hojas servibles
2. SELECCIÓN

3. LIMPIEZA Se realizara la
(MANUALMENTE) limpieza con agua a
chorros

Se desinfectara con
4. DESINFECCIÓN
agua destilada

A la sombra y en un
5. SECADO
ambiente cerrado

6. PESADO

Hojas secas listas para la

preparación del extracto
hidroalcohólico

FUENTE: PROPIA

26
D.MACERACIÓN DE LA MATERIA PRIMA

Para realiza el extracto se procedió a pesar 230 g de las hojas fueron

maceradas en 1000 mL de solución hidroalcohólica de etanol: agua durante 14

días en un frasco de color ámbar a temperatura ambiente con agitación

constante durante los primeros siete días. La solución se filtró con papel filtro;

el extracto se colocó en estufa MEMMERT a 40°C para eliminar el etanol. El

extracto seco se conservó en un frasco de color ámbar en refrigeración, hasta

el momento de su utilización

4.2.3 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN

A.IDENTIFICACIÓN DE SAPONINAS

Método: Ensayo de poder tensio activo

Fundamento: Se disuelve en agua caliente y disminuye la tensión

superficial de ésta, por lo tanto al agitar sus soluciones, se formará una

espuma abundante y relativamente estable.

Procedimiento: En un vaso precipitado de 50mL se procederá a

depositar 10g de extracto de nogal peruano (Junglas neotropica diels),

luego añadir agua destilada hasta cubrirlas totalmente dejara de reposar

15 min, luego agitar durante 30 segundos y posteriormente filtrarlo.

Tomaremos 3mL de filtrado en un tubo de ensayo agitar de nuevo por

tiempo de 20 segundos y dejar de reposar por un periodo de 10 min e

identificaremos saponina acuerdo a la altura de la espuma

sobrenadante:

o Altura menor de 5 a 9 mm --------- contenido bajo.

27
 o Altura de 10 a 14 mm --------- contenido moderado.

o Altura mayor de 15 mm --------- contenido alto.

B.IDENTIFICACIÓN DE FLAVONOIDES

Método: Ensayo de shinoda

Fundamento: Este ensayo se fundamenta a que reconoce la presencia

de Flavonoides, al poner en contacto con ácido clorhídrico con

magnesio metálico.

Procedimiento: Para la identificación de flavonoides se tomará 2mL

filtrado del extracto macerado en un tubo de ensayo luego, añadir

limaduras de magnesio sujetar con pinzas luego cuidadosamente se

añadirá por la pared del tubo unas gotas de HCl concentrado. La

aparición de coloración naranja, amarilla, rojizo esto nos indicara prueba

positiva

C. IDENTIFICACIÓN DE TANINOS

Estos polifenoles tienen la propiedad de unirse a las proteínas y

precipitarlas. Por esta razón, la prueba más empleada para la detección

de este grupo de metabolitos secundarios emplea el reactivo de gelatina-

sal, el cual produce un precipitado blanco en presencia de taninos, luego

de haber extraído el extracto etanólico total con una solución acuosa de

etanol . Estos precipitados formados como consecuencia de la presencia

de taninos deben ser solubles en urea 10 M y producir coloraciones

verdes, azules o negras tras la adición de cloruro férrico al 10% en agua-

28
D.IDENTIFICACIÓN DE FENOLES

Método: Ensayo del FeCl3 al 1%

Fundamento: Los fenoles forman un complejo con Fe (III), que es

intensamente coloreado.

Procedimiento: Para la identificación de fenol tomaremos 2mL del

filtrado en un tubo de ensayo y adicionar unas gotas de tricloruro

férrico (FeCl3 al 1%) si la muestra ya adicionando reactivo toma de color

verde, azul o negro nos indicara que es positiva.

a) Identificación de taninos

Método: Ensayo de k2Cr2O7

Fundamento: Los taninos precipitan las proteínas en solución. Originan

desde opalescencia blanca hasta precipitado.

Procedimiento: Para la identificación de taninos tomaremos 2mL de

filtrado en un tubo de ensayo limpio, añadiremos gotas de Dicromato de

potasio y si la precipitación es pardo amarillo será positiva la prueba.

Se calculara la curva de ácido gálico, con concentraciones de 20, 40,

60, 80 y 100 µl de solución de ácido gálico, obteniéndose una recta .

Con la ecuación de la recta (y=0.0858x+0.0013) se realizaran los

cálculos de fenoles presentes en las 15 muestras, que estáran

expresados en mg de ácido gálico presente en un 1 ml de muestra (mg

A.Gal/ml Muestra

29
E. ANÁLISIS DE PARÁMETROS DE ESTANDARIZACIÓN:

Se determinara la humedad por el método gravimétrico y los siguientes

parámetros:

 Olor.

 Color.

 Aspecto.

 pH.

 Densidad relativa.

 Índice de refracción.

Luego se realizó la marcha de solubilidad, tamizaje fitoquímico y

cromatografía en capa fina. La determinación de la humedad se hizo

pesando la muestra de hojas frescas en balanza analítica y secándola

hasta peso constante en estufa MEMMERT a 105°C hasta que la

diferencia de peso entre las 2 últimas pesadas se encuentren dentro de

la exactitud requerida (≤ 0,2 mg) lo que indica que se alcanzó el peso

constante. El tamizaje fitoquímico se realizó mediante pruebas

fisicoquímicas de caracterización, mediante cambios de coloración o

formación de precipitados. Se usó la cromatografía en capa fina, para

identificar las concentraciones de taninos y flavonoides, usando como

fase estacionaria sílica gel 60 F254 y como fase móvil 1-butanol: ácido

acético: agua (BAW); los reveladores usados fueron: tricloruro férrico 1%

para taninos y tricloruro de aluminio para flavonoides. Los estándares

usados para taninos fueron: ácido tánico y ácido gálico; para

flavonoides, querecetina y rutina. En el caso de los flavonoides, se

30
observó la placa cromatográfica a luz UV de 365 nm antes y después del

revelado.

F. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD

La actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico se evaluó mediante

la capacidad captadora del radical DPPH11. Un volumen de 1,6 mL de

una solución metanólica de DPPH 2 mg % se mezcló con 0,8 mL del

extracto seco disuelto en etanol 70°; la mezcla se dejó en reposo y en

ausencia de luz durante 30 minutos. Transcurrido este tiempo se leyó la

absorbancia a 517 nm en un espectrofotómetro SPECTROQUANT

Pharo 300 de Merck. El extracto seco se analizó por triplicado. El

extracto fue evaluado a diferentes concentraciones de 5, 15, 25 y 35

µg/mL preparados a partir de una solución de 300 µg de extracto

seco/mL de etanol 70°. Se utilizó Trolox (ácido 6-hidroxi-2,5,7,8-

tetrametilcromo-2-carboxílico) como estándar de referencia. Los

resultados fueron convertidos a porcentaje de captación de radicales

libres y expresados como capacidad antioxidante en mg equivalentes

Trolox/g de extracto seco. (TEAC).

 Se contara con el apoyo de un docente especializado en el

manejo de DPPH

 Del extracto hidroalcohólico se medirá 0.1ml (100ul) se colocara

en tubos de ensayo respectivamente y rotulados que contenían

3.9ml de reactivo de DPPH se hará por triplicado este proceso por

cada muestra de puro.

 Finalmente se homogenizara la mezcla de cada reacción, se

medirá la absorbancia inicial de cada una de las muestra. Luego

31
 se llevo a la oscuridad por 10 minutos. 20 minutos después 30

minutos

 Transcurrido el tiempo las muestras de reacción del radicañ y el

diluido de cada muestra de puro puro

 Finalmente se homogenizara la muestra de cada reacción, se

medirá la absorbancia inicial de cada una de las muestras. Luego

se llevo a la oscuridad por 10 minutos , 20 minutos y despues30

minutos

 Transcurrido el tiempo las muestras de reacción del radical y el

diluido de cada muestra de puro puro , fueron llevadas al

espectrofotometro a 515nm para ser medidas las absorbancias a

los 10,20,30 minutos, se observara que habrá una disminución

del color de la dilución

 La actividad antioxidante para cada una de las muestreas se

determinara utilizando la siguiente formulas

Absorbancia inicial –absorbancia DPPH final

X100
% actividad antioxidante =
Absorbancia inical

32
4.2 DISEÑO MUESTRAL

A. POBLACIÓN VEGETAL

 Constituido por las hojas de nogal peruano (Junglas neotropica diels)

que se recolectara en el distrito de Hunter.

B. MUESTRA VEGETAL:

1. CRITERIO DE INCLUSIÓN

 La muestra está constituida por las hojas de nogal peruano

(Junglas neotropica diels).

2. CRITERIO DE EXCLUSIÓN

 Las hojas fueron excluidas por un proceso de selección donde

solo fueron seleccionadas las hojas servibles.

3. TIPO DE MUESTREO

 El tipo de muestreo es: Muestreo probabilístico (aleatorio): En

este tipo de muestreo, todos los individuos de la población

vegetal pueden formar parte de la muestra, tienen probabilidad

positiva de formar parte de la muestra.

33
4.3 TÉCNICAS DE RECOLECCIÓN

 Se utilizo la observación experimental

 Constituido por las hojas de nogal peruano (Junglas neotropica diels)que

se recolectara en el distrito de Hunter.la técnica de recolección será de

forma aleatoria

Muestreo aleatorio

Este tipo de muestreo, todos los individuos de la población pueden

formar parte de la muestra, tienen probabilidad positiva de formar parte

de la muestra. Por lo tanto es el tipo de muestreo que deberemos utilizar

en nuestras investigaciones, por ser el riguroso y científico.

Actividad antioxidante

La actividad antioxidante de evaluara mediante el método de Dpph,

desarrollado por Brand Willams , considero en que el DPPH posee un electrón

desapareado y es de color violeta, decolorándose hacia amarillo pálido cuando

entra en contacto con una sustancia reductora o antioxidante ; la absorbancia

será monitoreada espectrofotométricamente a una longitud de 515nm . la

diferencia de absorbancia sirvió para obtener el porcentaje de captación e

radicales libres

TECNICA INSTRUMENTO

Observación experimental Ficha de observación

34
4.4 TÉCNICAS ESTADÍSTICAS PARA LA PROCESAMIENTO DE LA

INFORMACIÓN

Instrumentos de recolección de datos

Se va a elaborar una ficha de observación donde está indicando las

muestras utilizadas. La absorbancia del radical DPPH (2.2 difenil-

1pricrihidrazilo) a 515NMen tiempos de 0 min, 10min, 20 min y30 min el

porcentaje de actividad antioxidante de las muestras.

4.5 APECTOS ÉTICOS

 En esta investigación se tomara en cuenta aspectos de veracidad y

autenticidad de los datos obtenidos y reflejados en la investigación

priorizando la protección de medio ambiente, propiedad intelectual, se

consideró que los resultados sean reales, no alterados o plagiados.

35
 5. CRONOGRAMA

MES AGOSTO OCTUBRE NOVIEMNRE

semana Semana semana semana Semana semana semana
Semanas
4 1 2 3 1 2 3
selección del
X
tema

Revisión
de X
antecedentes

Revisión de
x
hipótesis

Revisión de
X
metodología

Revisión de
corrección de X
metodología.

Revisión de
X
calendario

Revisión
de corrección X
de calendario
Revisión de
presupuesto y X
bibliografía
Revisión de X
introducción
Revisión de
planteamiento
de problema

Revisión de
fundamento
teórico de la
investigación

x
Revisión de
objetivos de
la
investigación.

Revison de
formulación
de hipótesis

Revisión de

36
variables

Revisión de de
diseño
operacional

Revisión de
x
cronograma y
presupuesto

Revisión de
bibliografía

Tabla 1: Fuente propia

37
6. FUENTES DE INFORMACIÓN

 Alarcon, Paul.Las plantas medicinales y sus Flavonoides. 3ª ed.

Lima-Perú. Revisat. 2009, Pp. 86

 Puelles, María.Plantas Medicinales del Perú. 3a ed. Mérida-

México. Arán. 2010, Pp. 45-89
 Hernández M, Prieto E. Plantas que contienen Polifenoles.

Antioxidantes dentro del estilo de vida. Rev Cubana InvestBiomed

1999;18(1):12-4 16.

 Muñoz A, Ramos-Escudero D, Alvarado-Ortiz C, Castañeda B.

Evaluación de la Capacidad Antioxidante y Contenido de

Compuestos Fenólicos en recursos vegetales promisorios.

RevSocQuím Perú. 2007

 . Kuklinski C. Farmacognosia. Ed. Omega S.A. España, 2014. pp.

Lock de Ugaz O. Análisis Fitoquímico y Metabolitos Secundarios.

Pontificia Universidad Católica del Perú. [serie en Internet]. [citado

15 mayo 2009]. Disponible en:

http://www.macaperuana.com/analisis.htm 19.

 Bustamante S. Noni (Morindacitrifolia): ¿Dónde termina la ficción y

comienza el conocimiento científico? Programa de Farmacología

Molecular y Clínica – ICBM. Facultad de Medicina, Universidad de

Chile. [serie en Internet]. [citado 15 mayo 2009]. serie en Internet].

[citado 15 mayo 2015].

38
 Miranda M, Cuéllar A. Manual de Prácticas de Laboratorio.

Farmacognosia y Productos Naturales. Universidad de La Habana.

Instituto de Farmacia y Alimentos. Ciudad Habana, 2010.

 Gutiérrez Y, Miranda M, Varona N, Rodríguez A. Validación de dos

métodos espectrofotométricos para la cuantificación de taninos y

flavonoides (quercetina) en Psidiumguajaba L. Rev Cubana Farm

2012

 Ruiz S. Determinación de la técnica de extracción de flavonoides

totales de las hojas de Mangifera indica L. Facultad de Farmacia y

Bioquímica, Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo, 2013

39