Determinación de la glucosa en suero

Cristina Forja Barbosa

18/01/12
MATERIAL

 1 vaso de precipitado de plástico

 1 gradilla
 7 tubos de plástico
 1 cubeta de espectrometría
 Pipetas automáticas graduables de 1mL y de 0,2 mL
 Puntas de plástico

REACTIVOS

 Solución estándar de glucosa 100 mg/dL

 Reactivo 1: tampón tris pH 7,5, peroxidasa, glucosa oxidasa, 4-aminofenazona
(cromógeno)

PROCEDIMIENTO

Se preparan 7 tubos, uno para el blanco y dos para estándar y para cada uno de
los sueros problema.

Se pipetea de acuerdo con el siguiente protocolo:

Blanco Estándar Suero A Suero B

Agua destilada 0,2 mL - - 0,1 mL
Estándar de - 0,2 mL - -
glucosa
Suero - - 0,2 mL 0,1 mL
problema
Reactivo 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL

Se agitan bien todos los tubos, se incuban a 37 °C durante 15 minutos y se miden

las absorbancias, a una longitud de onda de 505 nm, frente al blanco.

Para hacer los cálculos, se hace primero la medida de las absorbancias de los
correspondientes duplicados.

Blanco Estándar Estándar Suero A Suero A Suero Suero B

1 2 1 2 B 2
1
Absorbancia 0 0,133 0,136 0,115 0,091 0,218 0,204
 (𝐸1+𝐸2 )
Media del estándar = = 0,1345
2

(𝐴1+𝐴2 )
Media del suero A = = 0,103
2

(𝐵1+𝐵2 )
Media del suero B = = 0,211
2

Luego, teniendo en cuenta la concentración del estándar, se calcula las

concentraciones de los plasmas A y B.
𝑚𝑔 1𝑔 1 𝑚𝑜𝑙 10 𝑑𝐿
𝐶𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 = 100 ∙ 1000 𝑚𝑔 ∙ 180,1 𝑔 ∙ = 5,55 ∙ 10−3 M
𝑑𝐿 1𝐿

Sabiendo que la concentración del estándar, y que se cumple la ley de Lambert-

Beer, podemos sustituir los datos obtenidos en la ecuación para saber las
concentraciones de los plasmas.
𝐴𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎
𝐶𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 = ∙ 𝐶𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝐴𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟

0,103
Concentración del suero A = 0,1345 ∙ 5,55 ∙ 10−3 = 4,25 ∙ 10−3 M = 0,77 g/L

0,211
Concentración del suero B = 0,1345 ∙ 5,55 ∙ 10−3 = 8,71 ∙ 10−3 M = 1,57 g/L

La concentración obtenida del suero B esta diluida con agua destilada, por lo
que primero calculamos los gramos que tenemos en 0,0012 L a densidad 1,57 g/L y lo
dividimos por el volumen del tubo sin contar el agua destilada.

1, 57 g/L ∙ 0, 0012 L = 1,884 ∙ 10−3g

1,884 ∙ 10−3 g
𝐶𝐵 = = 1,713 g/L = 9, 51 ∙ 10−3 M
0,0011 𝐿

CONCLUSIÓN

Obtenidas las concentraciones de ambos sujetos, podemos saber si su nivel de

glucosa en sangre es adecuado o patológico. Como los niveles normales de glucosa en
sangre oscilan entre 0,70 g/L y 1,10 g/L, tenemos un primer sujeto sano (0,77 g/L) y
un segundo hiperglucémico (1,713 g/L).

Al sujeto hiperglucémico se le recomienda que sea responsable con su dieta y

que evite el tabaco y el estrés. Que asista periódicamente al médico y si le receta
alguna medicación, la consuma según las indicaciones. Además, debería realizar
ejercicio suave de forma regular y con un horario fijo.
 El sujeto normal está cercano a la hipoglucemia, de modo que se le recomienda
la ingesta moderada de azúcares.