UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERORES
ZARAGOZA

MICROBIOLOGÍA GENERAL 1

MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA
(TINCIONES)

Contreras Hernández Giovanni

Corona Martínez Diego Armando
Lobato Palestina José Angel
Navarro Robles Gabriela
Rubin González David

Semestre 2008-1
 Introducción
Las tinciones sirven para demostrar la estructura
(colorear) y morfología de las bacterias.

La célula bacteriana tiene pared externa, gruesa, y que

tiene muy poca afinidad por las tinciones.

Durante la elaboración de los frotis , esta barrera se

altera de tal manera que la tinción pueda difundirse a
través de la pared celular.
 La fijación de los frotis tiene como propósito matar a
los microorganismos y unirlo al portaobjetos,
preservando el estado natural del microorganismo.

Hay colorantes que pueden ser:

Básicos (Catiónicos): El ion colorido (Cromóforo) es
positivo (catión colorido y anión incoloro). Tiñen
componentes ácidos. Ej: Safranina, Fucsina Básica,
Cristal Violeta.
Ácidos (Aniónicos): El ion colorido (Cromóforo) es
negativo (anión colorido y catión incoloro). Tiñen
componentes básicos. Ej: Eosina, Fucsina Acida, Rojo
congo.

Neutros: Sal compuesta de un colorante acido y un

colorante básico. Ej: Romanosky.
 Clasificación

Simples Se emplea un colorante

Gram (+) (-)

Diferenciales
BAAR (+)

Negativa
Esporas
Especiales Flagelos
Gránulos Metacromáticos
Colorante Primario: Es aquel que se le adiciona en un
inicio de la tinción.

Colorante secundario o de contraste: Es aquel

adicionado después de una decoloración en una
tinción.

Mordente: Sustancia que se emplea para fijar los colores.

El mordiente se combina con un constituyente celular
y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el
colorante.

Decolorante: Solución que elimina el colorante primario

a algunas células o estructuras.
Tinción de Gram
 Técnica de coloración desarrollada por Cristian Gram

 Prueba diferencial

 Se basa en la permeabilidad de la pared de las

bacterias.
Características
 Teñir las bacterias con un colorante básico,

 Fijar el colorante con una mezcla de I2 –KI,

 Lavados en acetona o alcohol, y

 Aplicar una coloración de contraste

Método
 Preparar los frotis bacterianos
 Teñir con cristal violeta
 Cubrir con lugol
 Decolorar con alcohol-acetona
 Teñir con safranina
 Secar
 Examinar
Fundamento.
 Cristal violeta es el colorante básico y
difunde al interior de la bacteria
 El lugol es el mordente o fijador.
 Alcohol-acetona es el decolorante, actúa
como deshidratante, cierra poros.
 Safranina es el colorante de contraste.
 Gram (+) retiene el colorante básico.
 Gram (-) toma el color del contraste.
Características
G (+)
 Peptidoglicanos
(50%)
 Ácidos teicoicos
 Ácidos teicurionicos
 Proteínas
 Moradas Fig. 1 Pared Celular Gram positiva
Características
G (–)
 Peptidoglicanos (5-
10%)
 Lipoproteínas
 Lipopolisacaridos
 Proteínas
 Rojas, rosadas
Fig. 2 Pared celular Gram negativa
Ejemplos
G (+)
 Streptococcus sp
 Bacillus sp
 Staphilococcus sp
 Clostridium sp
 Micrococcus sp
Fig. 3 Bacteria Gram positiva
Ejemplos
G (–)
 Salmonella sp
 Shigella sp
 Vibrio sp
 Pseudomona sp
 Proteus sp
Fig. 4 Bacteria Gram negativa
 TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN

Sinónimos: Ácido-resistente, BAAR (Bacilos ácido-

alcohol resistentes).

 Tinción diferencial
 Se basa en que las paredes de ciertos parásitos y
bacterias contienen una gruesa capa de material
céreo que les confieren la propiedad de resistir la
decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción
con colorantes básicos.
 Descubierto por Ziehl Neelsen 1882
 Método alternativo: Tinción de Kinyoun
Reactivos
Carbolfucsina Azul de metileno
 Cristales de fenol 2.5 g  Azul de metileno 0.5 g
 Alcohol 95% 5 mL  Acético glacial 0.5 mL
 Fucsina básica 0.5 g  Agua destilada 100 mL
 Agua destilada 100 mL

Alcohol ácido
 HCL 3 mL
 Alcohol 70% 100 mL
Método
1. Preparar una extensión y fijar suavemente al calor
2. Cubrir la preparación con carbolfucsina, calentar
sobre una llama a emisión de vapores por 5 min
3. Lavar con agua
4. Decolorar con alcohol ácido (aproximadamente 1 min)
5. Lavar con agua
6. Teñir con azul de metileno (10 a 30 seg)
7. Lavar con agua, secar con papel y examinar con el
objetivo de inmersión
Fig. 5 Emisión de vapores
Interpretación

Las bacterias acidorresistentes

conservan el colorante primario y se observan
de color rosa o rojo; los demás
microorganismos son decolorados por el
alcohol-ácido y se observan de color azul.
La tinción es positiva en: Micobacterias y
parásitos coccídeos como Cryptosporidium,
además de algunas especies del género
Nocardia
• Mycobacterium tuberculosis
• M. Marinum
• M. phlei
• Nocardia asteroides
• N. brasiliensis
• N. caviae
Pared bacteriana alcohol-ácido
resistentes
• Abundancia de lípidos. Ácidos micólicos de
cadena larga (50 a 90 átomos de carbono).
• Poco peptidoglucano
• Glucolípidos
• Ceras: mezcla de esteroles
Impiden que sean teñidos por Gram
Fig. 6 Pared celular de una bacteria BAAR
Mycobacterium phlei

Fig. 7 Mycobacterium phlei

Mycobacterium tuberculosis

Fig. 8 Mycobacterium tuberculosis

Tinción de esporas
Método de Schaffer-Fulton

Célula vegetativa- forma metabólicamente

activa = bacterias

Esporas- forma metabólicamente inactiva y

altamente resistente

Los miembros del género anaerobio Clostridium,

Desulfotomaculum y Bacillus pueden existir
metabólicamente activos o inactivos.
 Tinción de esporas

Tinte primario-Verde
Malaquita- Requiere calor
para la penetración de este
tinte.

Agente decolorante- Agua-

remueve el exceso de tinte,
decolora la célula vegetativa

Tinte de Contraste -
Fig. 9 Espora de Cladosporium sp
Safranina- Tiñe las células
vegetativas
Preparación de la tinción de esporas

 Preparar el frotis

 Verde Malaquita (2-3 minutos) en calor

 Dejar enfriar la laminilla y enjuagar con agua

 Safranina (30 segundos)

 Lavar con agua

 Secar
Tinción de cápsula

 Cápsula-estructura gelatinosa secretada por

algunas bacterias

 Las células que tienen cápsula son virulentas y

causan enfermedades ya que protegen a la
célula de la acción fagocítica del hospedero.
 Método

1. Coloque una gota de rojo

congo y K. pneumoniae
en un porta objeto.
2. Hacer una suspensión de
la cepa
3. Fijar
4. Adicionar mordente de
capsula
5. Lavar con agua
6. Secar Fig. 10 Cápsula del neumococo
(Streptococcus pneumoniae)
7. Observar a inmersión
Tinción de flagelos

 Medios líquidos y semisólido

 Para Shigella, E. coli

 Se utiliza la técnica denominada

 tinción de flagelos de Leifson.

Fig. 11 Estructura flagelar

 Se utiliza acido tamico.

 Se agrega un colorante de naturaleza básica.

La tinción de Leifson para flagelos, identificando al
Spirillum volutans y se realiza de la siguiente manera:

1. Se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante

formol, y se hace la extensión en un portaobjetos.

2. Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno.

3. Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el

colorante rosanilina

4. Se retira el exceso de colorante con agua.

5. Por último, se deja secar al aire, antes de su observación al

microscopio.
 Ejemplos

Fig. 12 Estructura flagelar de Fig. 13 Estructura flagelar

Pseudomona aeruginosa peritrica de alcaligenes
Tinción de gránulos meta cromáticos
 Son gránulos de polifosfatos.

 Son reserva de energía.

 Para Corynebacterium principalmente.

 Se utiliza colorante de Albert o azul de

metileno (Tinción de Loefter).
Método

 La tinción se lleva efectúa así:

1. Se agrega al frotis colorante de Albert y se deja por 5

minutos.
2. se lava con agua y se deja secar.

Posteriormente se agrega lugol por 1 minuto.

Se lava con agua, se seca y se observa.

Bibliografía
Carpenter Philip L. Microbiología, 2ª Edición, 1969 Ed.
Interamericana, págs: 49-54
Forbes Betty A. PhD, Sahm Daniel F. Bailey and Scott
Diagnostico Microbiologico 11ª Edicion, 2004 Editorial
Panamericana págs: 124-135.
Kelly Cowan M. Microbiology, Editorial McGraw Hill 2006.
NY.págs: 79-85
Koneman, Elmer W, M.D, Diagnostico Microbiológico, 5 ª
Edición, 1999 Editorial Panamericana págs: Capitulo 2-6.