Gamboa Contreras Alain

Pérez Navarro Gabriel

Grupo: 4QM2 Sección 4
Razo Vázquez Dalia Lupita

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Laboratorio de Bioquímica

“EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE

ENZIMA Y DEL pH SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

INTRODUCCIÓN vez, manteniendo los demás parámetros

constantes
ENZIMAS Y CINÉTICA ENZIMÁTICA
EFECTO DEL pH
Las enzimas son moléculas de naturaleza
proteica, que catalizan una gama amplia de Todas las enzimas poseen un valor de pH
reacciones biológicas. Estas moléculas óptimo en el cual la actividad es máxima;
aumentan considerablemente la velocidad por encima o por debajo de este pH la
de reacción, disminuyendo la energía de actividad disminuye bruscamente. Los
activación y facilitando la transformación de efectos son: desnaturalización proteica,
sustrato en uno o varios productos. cambio en la ionización de grupos de
Blan residuos de aminoácidos
Las enzimas Tubo No. PROBLEMAS
co implicados en la
poseen una T 1 2 3 4 5 6 catálisis, cambio en la
selectividad a un Sacarosa
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 ionización de grupos del
sustrato 0.2 M (ml) sustrato, modificación
específico y la Regulador en la afinidad de la
de pH pH pH pH pH
actividad de pH= pH enzima y el sustrato.
citratos = = = = =
éstas se puede 0.2 M (0.5 5 =5
3.5 4.5 5.5 6.5 7.5
modificar con ml) CONCENTRACIÓN DE
diversos factores Agua (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 ENZIMA
como la Preincuba
5 minutos a temperatura ambiente La velocidad de una
temperatura, el ción
pH, la Enzima reacción enzimática es
concentración de (100 directamente
0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
microgra proporcional a la
la enzima y del
mos / ml) concentración de la
sustrato, Incubació
utilizando 5 minutos a temperatura ambiente enzima a cualquier
n
inhibidores, etc. concentración de
0.5
ml sustrato. Cuando
La cinética 3,5- aumenta la cantidad de
enzimática DNS enzima, las moléculas
Inactivaci
abarca el estudio + 0.5 ml 3,5- DNS actuarán
ón
de la velocidad 0.5 independientemente en
ml solución para
de las reacciones
enzi
enzimáticas, transformar más
ma
considerando los Desarrollo sustrato en un intervalo
5 minutos a 92 ° C de tiempo.
factores que la de color
afectan y Colocar en baño de hielo y diluir con
Dilución
requiere que se 2 ml de agua destilada OBJETIVOS
realice el estudio Leer en un espectrofotómetro a 540 nm
de un factor a la Absorben 0.25 0.2 0.4 0.4 0.9 1.0 0.7 *Someter una reacción
cia 2 31 2 58 21 13 17 enzimática a diferentes
Azúcar 5.2 5.7 11. 12. 8.9
3.1 2.9
reductor 5 5 5 6 5
(µM)
0.2 0.5 0.5 1.1 1.2 0.8
Velocidad 0.31
9 25 75 5 6 95
(UI)
pH 5 3.5 4.5 5 5.5 6.5 7.5
 Gamboa Contreras Alain
Pérez Navarro Gabriel
Grupo: 4QM2 Sección 4
Razo Vázquez Dalia Lupita

valores de pH, para así observar el cambio VELOCIDAD de reacción, se requiere

sobre la ionización de la enzima y del
sustrato, manifestándolo de una forma
gráfica.
*Demostrar de forma experimental y
mediante una gráfica que una reacción
enzimática está condicionada directamente
por la concentración de enzima
RESULTADOS (pH)
transformar nuevamente esos datos de
concentración, en unidades internacionales
o unidades de invertasa. Esto se obtiene
dividiendo los µmoles de azúcar reductor
entre el número de productos de la hidrólisis
por el tiempo de incubación de la reacción.
Para este caso en particular, la fórmula es la
siguiente:

Unidades de invertasa = µmoles de azúcar

Resultados (concentración de
reductor / (2
enzima) productos) (5 minutos de incubación)

DISCUSIÓN

La curva tipo nos permite interpolar los

pH
datos de absorbencia que obtenemos de los
problemas y transformarlos en µmoles de Las enzimas, al ser moléculas de naturaleza
azúcar reductor, pero, como se está proteica, están susceptibles a los cambios
realizando el estudio de la influencia del pH de pH, el cuál puede influir en las
y de la concentración de la enzima sobre la interacciones iónicas de la proteína. Las
Blanc enzimas poseen un sitio activo, el cual es
Tubo No. PROBLEMAS
o
específico para un sustrato, y en él actúan
T 1 2 3 4 5
una serie de residuos de aminoácidos que,
Sacarosa
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 al sufrir una protonación o una
0.2 M (ml)
Regulador desprotonación pueden cambiar su arreglo
de acetatos espacial y ya no tener la afinidad por el
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.05 M pH sustrato o no permitir la unión entre la
4.7 (ml) enzima y el sustrato.
Agua (ml) 0.5 0.9 0.8 0.7 0.6 0
Preincubaci Todas las enzimas tienen un valor de pH
5 minutos a temperatura ambiente
ón óptimo en el cuál su actividad es máxima.
Enzima
Gráficamente, se observa un ascenso en la
(100
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 velocidad de la reacción al aumentar el pH,
microgram
os / ml) hasta alcanzar el pH óptimo, después de
Incubación 5 minutos a temperatura ambiente este valor la velocidad desciende.
0.5
ml Dentro de la gráfica se observa una zona en
3,5- forma de campana que muestra un rango
Inactivació DNS óptimo y la zona máxima de la actividad de
0.5 ml 3,5- DNS
n + 0.5 la invertasa. El punto máximo de la
ml
campana, representa el pH óptimo de la
enzi
ma enzima, en el lado izquierdo de la campana,
Desarrollo de forma ascendente se encuentra el pH
5 minutos a 92 ° C subóptimo y en el lado derecho se observa
de color
Colocar en baño de hielo y diluir un declive, que indica que la actividad de la
Dilución
con 2 ml de agua destilada invertasa disminuye después del valor
Leer en un espectrofotómetro a 540 nm óptimo, debido a la ionización y a cambios
Absorbenci 0.39 0.42 0.5 0.56 0.66 estructurales en la enzima y el sustrato.
0.086
a 5 6 6 5 8
Azúcar
Concentración de enzima
reductor 1.1 4.95 5.3 7 7.05 8.4
(µM)
Velocidad 0.49 0.70
0.11 0.53 0.7 0.84
(UI) 5 5
Concentrac
ión de
0 5 10 15 20 25
enzima
(µg( 2 ml)

Grupo: 4QM2
La velocidad de la reacción enzimática va a
estar condicionada por la concentración de
la enzima, debido a que cuando se
presentan más moléculas de este
catalizador biológico en solución que
contiene sustrato, cada molécula va a
actuar independientemente y van a
transformar una mayor cantidad de sustrato
en productos, en una menor cantidad de
tiempo. Si la concentración de enzima se
eleva al doble, la velocidad lo hará también,
así respectivamente.
Gráficamente se observa un
comportamiento ascendente, con tendencia
lineal, que muestra claramente que, al
aumentar la concentración de enzima,
aumenta la velocidad de reacción. Por lo
tanto: La concentración de enzima es
directamente proporcional a la velocidad de
la reacción. Este comportamiento
ascendente va a estar condicionado
igualmente por la concentración del
sustrato, debido a que mientras exista
sustrato en solución la velocidad aumentará
(por la concentración de enzima), en tanto
que, si ya no hay sustrato para la reacción,
la velocidad va a descender de una manera
brusca.
CONCLUSIÓN
 A través de la curva tipo de
azúcares reductores podemos
interpolar y transformar lecturas de
absorbencia de los problemas en
micromoles de azúcar reductor.
 Para realizar un estudio de cinética
enzimática se debe variar el factor a
estudiar y mantener todos los
parámetros que restan constantes.
Gamboa Contreras Alain
Pérez Navarro Gabriel
Sección 4
Razo Vázquez Dalia Lupita
 Cada enzima tiene un valor de pH
en el cuál su actividad es máxima y
después de este valor, la velocidad
decaerá de manera brusca.
 El pH puede modificar y ionizar
tanto a la enzima como al sustrato,
afectando la afinidad, el arreglo
espacial y la unión entre ellos.
 Para realizar estudios
representativos se deberá trabajar
con un valor de pH menor al óptimo,
evitando así el descenso brusco.
 La velocidad de reacción es
directamente proporcional a la
concentración de enzima.
 La tendencia de la velocidad con
respecto a la concentración de
enzima será ascendente hasta que
se agote el sustrato, posteriormente
la velocidad decaerá
REFERENCIAS
*http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/sh
o/Tema_5b_pH.pdf
*Nelson, David L “Lehninger, PRINCIPIOS DE
BIOQUIMICA” , 6ª ed, editorial Omega,
España. Pp 204 – 207
*http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/
0403/velocidad%20reaccion
%20enzimatica4.html
*http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/32%20INVERTASA%20CIN
%C3%89TICA.pdf
*http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero
/1.4.ENZIMAS_24470.pdf