Mblgo: Wilberto Effio Q.

21-04-2014
INTRODUCCIÓN

¿Qué utilidad tiene conocer las condiciones que un microorganismos

requiere para crecer?

 Obtenerlo en el laboratorio Cultivo

 Combatirlo o
evitar su proliferación
INTRODUCCIÓN

La nutrición microbiana consiste en aportar a las células los ingredientes

químicos que necesitan para la síntesis de monómeros, que son los
componentes de las macromoléculas, que a su vez construyen las estructuras
celulares.

Monómeros Macromoléculas Estructuras

celulares
Monosacáridos Polisacáridos Pared celular
Glicocàlix

Aminoácidos Proteínas Membrana

Ribosomas
Flagelo
Pelos y fimbrias
Enzimas

Ácidos grasos Lípidos Membranas

Bases nitrogenadas Ácidos nucleicos Cromosoma

Ribosomas
Plásmidos
COMPOSICIÓN CELULAR

 80 % de agua

 20 % de peso seco:
 Proteínas
 Ácidos Nucleicos
 Polisacáridos
 Lípidos
 Peptidoglucano
 Otros compuestos de
peso molecular mas bajo
COMPOSICIÓN CELULAR

Las células están compuestas de:

 Macromoléculas: polisacáridos, lípidos, ácidos nucleicos y

proteínas (Las proteínas son las mas abundantes).

 Agua. El agua es el solvente ideal para los organismos vivos

debido a su polaridad y a su cohesión
 AGUA

 Es el principal componente del protoplasma bacteriano; el medio

donde suceden las reacciones químicas y sus productos.
 Es un reactante en exceso ( es decir, un producto resultante de
algunas reacciones bioquímicas).
 La disponibilidad se mide por un parámetro denominado: actividad
de agua (aw) o potencial de agua. Valores normales entre 0.90-
0.99.

Fuentes de agua:

 endógena (procedente de oxido-reducciones)

 exógena (la mayoría) procedente del medio, y que difunde a
través de las membranas.
NUTRIENTES

 Substancias necesarias para

asegurar supervivencia.
 Proveen energía y elementos
necesarios para síntesis de
estructuras celulares.
 Ingreso por absorción.
 Viabilidad: capacidad de
reproducción.
CARBONO
 Elemento más abundante en las macromoléculas.

 Constituye el 50% del peso seco de las células.

 Muchos procariotas son heterótrofos, que necesitan algún tipo

de compuesto orgánico como fuente de carbono para hacer
nuevo material celular.

 Los aminoácidos, los ácidos grasos, los ácidos orgánicos, los

azúcares, las bases nitrogenadas, los compuestos aromáticos y
un sinfín de compuestos orgánicos de otro tipo pueden ser
utilizados por las bacterias.

 Algunos procariotas son autótrofos, capaces de construir todas

sus estructuras orgánicas a partir del CO2 con la energía
obtenida de la luz o de compuestos inorgánicos.
El origen del CO2 puede ser:

 Endógeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al

degradar la fuente orgánica de carbono

 Exógeno: el CO2 de la atmósfera o disuelto en las soluciones

acuosas

Normalmente, las bacterias crecen a la concentración de CO2 atmosférico (0.03%),

pero algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se aíslan por primera vez,
requieren atmósferas enriquecidas, con 5-10% de CO2. (microaerofilia)
NITROGENO

 En una bacteria típica, alrededor del 12% de su peso seco es N.

 Forma parte de las proteínas, ácidos nucleicos y otros constituyentes

celulares.

 En la naturaleza, se encuentra en forma orgánica e inorgánica. Pero la

mayor parte del N natural se encuentra en forma inorgánica ( NH3, NO3-
o N2 ).

 La mayoría de las bacterias son capaces de utilizar NH3 como única

fuente de N, y otras muchas pueden utilizar NO3- .

 El N2 puede ser usado como fuente de nitrógeno por algunas bacterias,

las bacterias fijadoras de nitrógeno.
FIERRO

 El Fe es fundamental en la respiración celular.

 Forma parte de los citocromos y de proteínas que contienen Fe y S
implicados en el transporte de electrones.
 En condiciones anaeróbicas, el Fe se encuentra en el estado de
oxidación +2 (Fe+2) y es soluble.
 En condiciones aeróbicas suele estar en el estado de oxidación +3 (
Fe+3) y forma varios minerales insolubles.
 Para obtener el Fe de tales minerales, las células producen agentes
quelantes llamados sideróforos que solubilizan el Fe y lo introducen en
la célula.
 Es necesario en mayores cantidades que otros metales y no se
considera un elemento traza.
 OTROS MACRONUTRIENTES

 El P se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos orgánicos e

inorgánicos. La célula necesita P para la síntesis de ácidos nucleicos y
fosfolípidos.

 El S es un componente de los aminoácidos cis y met y se encuentra en

algunas vitaminas, como tiamina, biotina, ácido lipóico y Coenzima A. La
mayoría del S celular procede de fuentes inorgánicas, ya sean sulfatos o
sulfuros.
 OTROS MACRONUTRIENTES

 El K es necesario para todos los organismos. Es cofactor de muchas

enzimas.

 El Mg funciona como estabilizador de los ribosomas, las membranas

celulares y los ácidos nucleicos. También se necesita para la actividad de
muchas enzimas.

 El Ca ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una función

importante en la termoresistencia de las endoesporas.

 El Na es requerido por algunos microorganismos (halófilos).

MICRONUTRIENTES

Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn

 Se requieren en muy pequeñas cantidades.

 Son tan importantes para el funcionamiento celular como los
macronutrientes.
 Muchos son metales que actúan como cofactores de enzimas.
 A menudo no es necesario añadirlos a los medios de cultivo.
 Si el agua utilizada para elaborar el medio es ultra-pura se añade al
medio una pequeña cantidad de una solución de metales traza.
FACTORES DE CRECIMIENTO

Los factores de crecimiento son compuestos orgánicos que se necesitan en

muy pequeñas cantidades y sólo por algunas células.
 Los factores de crecimiento son vitaminas, aminoácidos, purinas y
pirimidinas.
 La mayoría de los microorganismos son capaces de sintetizar estos
compuestos, pero en algunos casos es necesario añadirlos al medio.
 Las vitaminas son los factores de crecimiento que se necesitan con mayor
frecuencia, funcionan formando parte de coenzimas.
 Las principales vitaminas requeridas por los microorganismos son:
- tiamina (vitamina B1)
- biotina
- piridoxina (vitamina B6)
- covalamina (vitamina B12)
TIPOS DE NUTRICIÓN BACTERIANA

Tipo Fuente de Fuente de Ejemplos

energía carbono
Fotoautotrofas Luz CO2 Algas y
cianobacterias
Fotoheterotrofas Luz Compuestos
orgánicos Algas y bacterias

Quimioautotrofas o Química Compuesto Pocas bacterias

Litotrofas inorgánicos: H2,
NH3, NO2, H2S,
CO2
Quimioheterotrofas o Química Compuesto La mayoría de
Heterotrofas orgánicos: glucosa bacterias
 CAPTACIÓN CELULAR DE LOS NUTRIENTES

Los microorganismos utilizan varios sistemas de transporte diferentes.

Los más importantes son:

• Difusión simple

• Difusión facilitada

• Transporte activo

• Translocación de

grupo
DIFUSIÓN SIMPLE

• Depende de la diferencia de gradiente de concentración entre el

exterior y el interior de la célula, y de la permeabilidad de la
membrana

• La concentración externa del nutriente debe ser alta

• Solo moléculas pequeñas pueden atravesar la membrana: H2O,

O2, CO2, glicerol.
DIFUSIÓN FACILITADA

• Intervienen proteínas
transportadoras, integradas a la
membrana: Permeasas

• Las Permeasas tienen afinidad

específica por la sustancia que
transportan.

• El movimiento depende del

gradiente de concentración sin
gasto de energía

• El proceso es reversible
TRANSPORTE ACTIVO

• Permite el transporte de moléculas en contra de un gradiente de

concentración, con gasto de energía

• El complejo proteico de membrana tiene varias subunidades: poro

• La fuente de energía puede ser: ATP, compuestos de fosfato de

alta energía, fuerza protón motriz.
TRANSPORTE POR GRADIENTE DE H+

SIMPORTE: transporte combinado de dos sustancias en la misma

dirección

Ej. Simporte de H+: La energía almacenada en el protón facilita el transporte del

soluto. Se utiliza para captar aminoácidos y ácidos orgánicos

ANTIPORTE: Sistema combinado de transporte por el que las

sustancias se desplazan en direcciones opuestas.

Ej. Como respuesta al ingreso de H+ se bombean iones Na+ al exterior. El gradiente

de sodio generado dirige la captación de azúcares y aminoácidos
 TRANSLOCACIÓN DEL GRUPO

• Una molécula es
transportada al interior
celular después de
alterarse químicamente

Ej. Sistema
Fosfoenolpiruvato-
Fosfotransferasa de
azúcares
PEP + azúcar (exterior) /
piruvato + azúcar-P
(interior)
CRECIMIENTO
MICROBIANO
 CRECIMIENTO MICROBIANO

 Aumento de número (no de

tamaño)
 Multiplicación bacteriana: fisión
simple o binaria:
1. Elongación
2. Auto duplicación de ADN
cromosómico
3. Tabicado central
4. Invaginación membrana
celular
5. Síntesis de pared
TIEMPO DE GENERACIÓN

• Tiempo necesario para la duplicación celular

• Distintiva de cada especie

• Puede influirse por factores estimulantes

• Varían de 20 minutos (Escherichia coli) hasta 24 horas

CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO

 Bacteria en medio
adecuado

 Gráfico de coordenadas:
número de bacterias
(logaritmo) versus lapso
de tiempo.

 Distinta para cada

bacteria

 En todas se identifican
cuatro etapas
FASE LATENCIA

El crecimiento de la población no inicia inmediatamente, sino después

de cierto periodo de tiempo, el cual puede ser breve o largo,
dependiendo de varios factores.

• El número de microorganismos no
varía
• Adaptación al medio, producción de
enzimas
• Tiempo variable: entre una hora a
días.
• Tamaño relativo aumentado por
división
FASE EXPONENCIAL

Es la consecuencia del hecho de que cada célula se divide en dos. Las

bacterias se encuentran en un estado optimo

• Relación casi lineal entre el tiempo y el

número de elementos.
• Actividad metabólica incrementada
• Depende del tiempo de generación de
cada bacteria
• Los antimicrobianos son mas activos
• Puede haber variaciones entre el
crecimiento in vitro e in vivo.
FASE ESTACIONARIA

El medio de cultivo no se renueva, comienzan a acumularse

metabolitos tóxicos, se modifica el pH, los nutrientes se agotan, la
velocidad de multiplicación se retrasa y hay un equilibrio entre
bacterias vivas y muertas.

 En determinado punto el crecimiento disminuye

 La población no aumenta
 Células nuevas reemplazan a las células muertas
 Actividad metabólica mas lenta
 Células en animación suspendida
 Producción de metabolitos secundarios: Antibióticos y
Toxinas
 Fase de Esporogenesis para las especies
productoras de esporas
 FASE MUERTE

Cuando continua el crecimiento en el medio de cultivo viejo se produce una

inversión numérica con respecto a la fase exponencial. En este periodo son
mas las bacterias muertas que las vivas, hasta que se termina con la
muerte de todas. Si son bacterias con capacidad de esporular, se produce
la esporulación en esta fase.

 Recuento de células disminuye sensiblemente

 El numero de células muertas supera al número
de células vivas
 Acumulación de productos tóxicos
 Disminución de nutrientes
 Aparición rápida : autolimitar diseminación
infecciones
MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

MEDICIÓN DIRECTA

 Recuento de células totales.

- Microscopia.
 Recuento de células viables.
- Recuento de colonias.

MEDICIÓN INDIRECTA

 Turbidez. Es un método muy rápido y

útil de medir el crecimiento bacteriano.
- fotómetro.
- espectrofotómetro.
FACTORES MEDIOAMBIENTALES QUE AFECTAN
EL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS

 TEMPERATURA

 ACTIVIDAD DEL AGUA

 pH

 OXIGENO
TEMPERATURA

• La temperatura es un factor ambiental importante en el control de

crecimiento microbiano.

• Los M.O pueden agruparse según los márgenes de temperatura

que requieren.

• Se distinguen 4 grupos:

1. Psicrofilos 2. Mesófilos

3. Termofilos 4. Hipertermofilos.
CLASIFICACION DE LOS MO. SEGÚN LA
TEMPERATURA

Tipo Rango de Temperatura M.O

Temperatura Optima

Psicrofilo 0 - 20 15 Algas

Mesofilo 20 - 40 38 E. coli

Termofilo 40 - 70 60 Bacillus
stearothermophi
llus
Hipertermo 90 - 115 106 Thermus
acuaticus
filos
ACTIVIDAD DEL AGUA

Es el principal componente del protoplasma bacteriano; el medio

donde suceden las reacciones químicas y sus productos

En la siguiente tabla se presentan como ejemplo algunos microorganismos y

el valor de aw en el que se produce su crecimiento
PH

La acidez o alcalinidad de un medio tiene una gran importancia sobre

el crecimiento microbiano. La mayoría de MO. Crecen a un pH entre 6
y 8.

El pH intracelular debe permanecer próximo a la neutralidad.

• pH : Potencial Hidrógeno. Va desde 0 a 14.

• pH < 6,5 ácido

• pH > 7,5 básico o alcalino

• pH 6,5 – 7,5 neutro Mas adecuado para crecimiento bacteriano

• Bacterias que crecen hasta pH 4 Acidófilas (Por ejemplo: Lactobacillus)

• Vibrio cholerae : medio alcalino

OXIGENO

Los microorganismos son muy variables en cuanto a la necesidad del

oxigeno.

Se dividen dependiendo del efecto del oxigeno:

1.Aerobios estrictos: los que requieren oxigeno como aceptor terminal

de electrones, no proliferan en ausencia de O2. ej. S. aureus.

2.Microaerofilos: utilizan O2 a niveles muy bajos. Un 12%. No proliferen

en la superficie de un medio sólido. Ej. Haemophillus suis
OXIGENO

3. Anaerobios estrictos: las que no emplean oxigeno para su

metabolismo, sino que obtienen su energía de reacciones
fermentativas. Ej. Clostridium tetani

4. Anaerobios aerotolerantes: pueden crecer en presencia o

ausencia de oxigeno, pero la energía la obtienen por
fermentación. Ej. Bacterias acidolacticas.

5. Anaerobios facultativos: son bacterias que proliferan mediante

procesos oxidativos, utilizando oxigeno como aceptor terminal de
electrones, o en anaerobiosis, empleando reacciones de
fermentación para obtener energía. Ej. Streptococcus, E. coli
Nuestra recompensa se halla en el esfuerzo y no en los resultados. Un
esfuerzo total es una victoria absoluta.
(Mahatma Gandhi)

GRACIAS…