ELEMENTOS DE MICROBIOLOGIAELEMENTOS DE MICROBIOLOGIA Michael J. Pelczar, Jr. Professor Emeritus University of Maryland E.C.S. Chan Associate Professor McGill University with the assistance of Merna Foss Pelczar TRADUCCION Julio Rodriguez Villanueva Director Dpt. Microbiologia Facultad de Biologia Universidad de Salamanca Isabel Garcia Acha Investigador Cientifico Consejo Superior de Investigaciones Cientificas César Nombela Cano Director Dpt. Microbiologia Facultad de Farmacia Universidad Complutense de Madrid REVISION TECNICA Carlos Hardisson Romeu Director Dpt. Microbiologia Facultad de Medicina Universidad de Oviedo McGRAW-HILL MEXICO © BOGOTA © BUENOS AIRES © GUATEMALA © LISBOA ® MADRID NUEVA YORK © PANAMA @ SAN JUAN @ SANTIAGO © S&O PAULO AUCKLAND © HAMBURGO © JOHANNESBURGO @ LONDRES @ MONTREAL NUEVA DELHI @ PARIS @ SAN FRANCISCO © SINGAPUR, ST.LOUIS @ SIDNEY @ TOKIO © TORONTOELEMENTOS DE MICROBIOLOGIA Prohibida la reproduccién total o parcial de esta obra, por cualquier medio, sin autorizacion escrita del editor. DERECHOS RESERVADOS © 1984, respecto a la primera edicion en espafiol por LIBROS McGRAW-HILL DE MEXICO, S. A. de C. V. Atlacomulco 499-501, Fracc. Industrial Sn. Andrés Atoto 53500 Naucalpan de Juarez, Edo. de México Miembro de la Cara Nacional de la Industria Editorial, Reg. Nim. 465 ISBN 968-451-540-5 Traducido de la primera edicin en inglés de ELEMENTS OF MICROBIOLOGY Copyright © 1981, by McGraw-Hill Inc., U. S. A ISBN 0.07-049240.9 1234567890 PE-84 ©—8012356794 Impreso en México Printed in Mexico Este obra 0 termind de imprimir ol die 16 de junio de 1988 fn los talleres de Prensa Técnica, S.A. de C.\ Colzade de Chabscano nim, 65A, México 8, D.F. La edicién consta de 1,000 ojemploresPARTE UNO ~ PARTE DOS PARTE TRES PARTE CUATRO PARTE CINCO PARTE SEIS CONTENIDO PREFACIO INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA 1. Historia de la microbiologia 2. Una visién general del mundo microbiano 3. Clasificacién y denominacién de los microorganismos 4. Métodos en microbiologia PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS 5. Morfologia y estructura fina de las bacterias 6. Cultivo, reptoduccion y crecimiento de las bacterias 7. Los principales grupos de bacterias PROTISTAS EUCARIOTICOS: HONGOS, PROTOZOOS, ALGAS 8, Los hongos 9. Los protozoos 10. Las algas viRUS 11. Virus bacterianos 12. Virus animales y vegetales METABOLISMO DE LOS MICROORGANISMOS 13. Los enzimas y su regulacién 14. Reacciones de desasimilacion y liberacién de energia 15, Reacciones de asimilacién y uiilizacion de energia GENETICA MICROBIANA 16. Naturaleza del material genético 17. Genética de las bacterias vu 24 4 50 15 M7 143 164 178 199 212 235 253 273 289 303PARTE SIETE PARTE OCHO PARTE NUEVE PARTE DIEZ APENDICE A APENDICE B VI CONTENIDO CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS 18. Fundamentos del control 19. Control de los microorganismos por agentes fisicos 20. Control de los microorganismos por agentes quimicos 21, Antibioticos y otros agentes quimioterapéuticos MICROORGANISMOS Y ENFERMEDAD. RESISTENCIA A LA INFECCION 22. Microflora normal del cuerpo humano 23. Interacciones hospedador-parasito 24. Antigenos y anticuerpos 25. Resistencia del hospedador e inmunidad 26. Aplicaciones diagnésticas de las reacciones antigeno-anticuerpo MICROORGANISMOS Y ENFERMEDAD. TRANSMISION DE PATOGENOS 27. Infecciones transmitidas por el aire 28, Enfermedades transmitidas por alimentos 29. Infecciones transmitidas por el agua 30, Infecciones hospitalarias (nosocomiales) 31, Infecciones transmitidas por artrépodos 32. Enfermedades transmitidas sexualmente 33. Otras enfermedades transmisibles MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y APLICADA 34, Microbiologia ambiental 35. Microbiologia del agua doméstica y de desecho (alcantarillado) 36. Microbiologia de los alimentos 37. Microbiologia industrial CARACTERISTICAS DE GENEROS SELECCIONADOS DE MICROORGANISMOS GLOSARIO INDICE 331 342 360 377 405 416 a7 438 456 477 513 331 567 586 603 627 665 690 708 17PREFACIO Durante las tltimas décadas, las células microbianas han proporcionado un modelo itil para el estudio de los procesos de la vida, a causa de su diversidad, versatilidad y facil manejo. Los estudios con microorganismos han contribuido en gran medida a lo que hoy se sabe de genética y metabo lismo. Los microorganismos han sido, ademas, foco de creciente interés a causa de que pueden contribuir con soluciones a los mas acuciantes proble- ‘mas de la humanidad, la mayoria de los cuales pueden resumirse como una competencia por las cantidades finitas de recursos naturales y por un espacio limitado. Algunos de estos problemas, tales como adecuados aportes de energia, polucionantes ambientales y prevencion de las enfermedades y man- tenimiento de a salud, han sido ya abordados por la tecnologia microbiol6- gica. Ciertos microorganismos han sido sometidos a manipulaciones de wgenieria genética, es decir, se han hecho «a medida», para que produzcan alcohol en gran cantidad como fuente alternativa de energia para los coches, el gasohol. Otros microorganismos se han hecho por ingenieria genética capaces de descomponer polucionantes especificos. Algunos microorganis- mos se han considerado como fuentes de proteinas unicelulares para piensos, que los animales de granja pueden convertir en huevos, leche y carne y que, si se someten a ciertos tratamientos para que se asemejen a alimentos que nos son familiares, pueden ser utilizados como sustitutos para el consumo humano. La prevencién de la enfermedad fue uno de los primeros puntos hacia los que se enfocé la microbiologia, y testigos de ello son su utilizacién en el control de Ja viruela y la rabia. Hoy dia, éste continita siendo uno de sus principales objetivos. La creciente importancia de la microbiologia, tanto como ciencia basica como aplicada, ha contribuido a aumentar el interés por la microbiologia de un gran numero de estudiantes dedicados a la economia doméstica, a la silvicultura, a la agricultura, a las ciencias de la alimentacién animal, nutri- cién, ciencias aliadas a la salud, estudios de enfermeria, artes liberales y negocios. El libro ELEMENTOS DE MICROBIOLOGIA ha sido escrito para este diverso grupo de estudiantes. Los temas que aborda este libro —lo que son los microorganismos y lo que hacen— reflejan los dos aspectos de la microbiologia. Dentro de estos temas hemos tratado de presentar el material de manera clara y concisa para que puedan ser comprendidos por estos estudiantes, la mayor parte de los cuales han tenido un limitado contacto con esta ciencia. Hemos puesto especial cuidado al seleccionar las ilustraciones y las tablas, para transmitir a través de ellas importantes conceptos y princi- pios. El Cap. 7 es un excelente ejemplo de esto. Las primeras paginas de este capitulo dan al estudiante informacién basica sobre la clasificacién de lasVili PREFACIO bacterias. La lista de las tablas y de ilustraciones representativas de cada uno de los grupos bacterianos que vienen a continuacién actian de ayuda y punto de referencia para estudios posteriores. La claridad y precision de las ilustraciones de células bacterianas de este capitulo y a iravés de todo el libro, realizadas por el Dr. Erwin F. Lessel (un microbidlogo por derecho propio), serviran de gran ayuda para el estudiante. Hemos ordenado el ‘material en una sucesion légica de forma que pueda ser facilmente entendido or los estudiantes, pero somos conscientes de que este ordenamiento no sera aceptado por todos. El instructor no debe verse obligado a seguir el orden que nosotros hemos utilizado, ya que el material puede presentarse con igual eficacia, siguiendo el orden que se ajuste a las preferencias personales. Por ejemplo, la Parte Ocho sobre «Microorganismos y enfermedad. Resistencia a la infecciém y la Parte Nueve sobre «Microorganismos y enfermedad. TransmisiOn de patgenos» pueden intercambiarse facilmente o reemplazarse por la Parte Diez sobre «Microbiologia ambiental y aplicada». O bien la Parte Cinco sobre «Metabolismo» y la Parte Seis sobre «Genética pueden estudiarse como un todo o en partes, dependiendo de lo que interese al profesor. Se dispone de un Manual del profesor para utilizarlo junto con este texto. Contiene sugerencias de lecturas y planes de laboratorio, resiimenes de las partes y de los capitulos, preguntas de examen y fuentes para ayudas audio- visuales, cultivos, medios de cultivo, reactivos y equipo de laboratorio Nuestro Manual de Laboratorio, «LABORATORY EXERCISES IN MI- CROBIOLOGY», cuarta edicién, escrito originalmente para acompaiiar a nuestra «MICROBIOLOGY», cuarta edicién, es también un buen comple- mento para esta otra Figura 1-5, Louis Pasteuren su laboratotio. (De! Instituto Pasteur, Paris.) de caldo de care hervido (Fig. 1-4A y B). En ninguno de los dos casos apa- recian microbios. El acido en un experimento y el calor extremo en et otro, los habian matado. Pero los tenaces abogados de la generacién espontanea no estaban ain convencidos. Decian que el acido y el calor alteraban el aire de tal manera que no podian soportar el crecimiento. Hacia 1850 Schroder y Von Dusch realizaron un experimento mas convincente pasando aire a través de tubos rellenos de algodén y haciéndole llegar a matraces que con- tenian el caldo previamente calentado (Fig. 1-4C). Los microbios eran elimi- nados del aire por filtracion a través de las fibras del algodén y de esta manera se impedia que entrasen en el matraz y no crecian microorganismos en el caldo. Algunas de las pruebas experimentales mas importantes en contra de la generacién espontinea las proporcioné el trabajo de John Tyndall, a prin- Cipios de la década 1870, Construyé una caja exenta de polvo (ver Fig. 1-4D) y colocd dentro de ella tubos Ilenos de caldo estéril. El caldo permanecia estéril tanto tiempo como la caja permanecia libre de polvo. Las particulas de polvo se sedimentaban y quedaban atrapadas en tubos en forma de cuello de cisne que conducian a la caja, Esta era una prueba de que los microbios eran transportados sobre las particulas de polvo. Durante la misma época en que se estaban realizando estos experimentos, emergia una nueva figura en la ciencia, Louis Pasteur (1822-1895) (Fig. 1-5) Pasteur habia sido edueado como quimico y adquirié fama nacional, a co- mienzos de su carrera, al descubrir la estructura quimica del dcido tartarico, Encontré que este compuesto existia en dos formas: una era la imagen en el espejo de la otra, como lo es la mano izquietda respecto a la derecha. La composicién quimica de los dos compuestos era la misma en cuanto a mimero y tipos de atomos que cada uno contenia, pero su configuracin era diferente. Pasteur se interesé luego por la industria vinicola y los cambios que se pro- ducian durante el proceso de fermentacién. Este interés por la fermentacion le forzé a debatir acerca de la generacién espontinea. La fermentacién es llevada a cabo por enzimas, sustancias producidas 7Figura 1-6. Matraz con cue- llo de cisne de Pasteur, que utiiz6 en sus experimentos para refutar a generacion ‘esponténea. Se ha observado fen el Museo Pasteur. (De! Instituto Pasteur, Paris.) 8 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA por células vivas, que promueven ciertos tipos de reacciones quimicas. Por ejemplo, el zumo de uva, cuando se le deja en reposo, fermenta produciendo alcohol y acidos. Las cuestiones que se desprendian de este hecho eran: {Estos productos de la fermentacién —alcohol y acidos— eran producidos por los microorganismos presentes en el zumo de uva? O bien, glos microorga- nismos que habia en el zumo de uva surgian del proceso de fermentacion, tal como proclamaban los defensores de la generacién espontanea? Pasteur se opuso vigorosamente al concepto de generacién espontnea y se dio cuenta de que podria avanzar muy poco en sus estudios sobre la fermentacién hasta que refutase este concepto. De acuerdo con esto, empezé a revisar cuidadosa- mente todo el trabajo realizado anteriormente sobre este tema y luego pasd a disefiar y realizar numerosos experimentos para documentar el hecho de que los microorganismos s6lo pueden surgir de otros microorganismos (biogénesis). Se vio envuelto en muchos debates con sus oponentes sobre esta cuestién, una vez que hubo presentado los resultados de sus experimentos. Uno de los mas firmes defensores de la generacién espontinea, en la época de Pasteur, fue el naturalista francés Félix-Archimede Pouchet. En 1859, Pouchet publicd un amplio informe «probando» su existencia. Pero chocd con el ingenioso, incansable y tenaz Louis Pasteur. Irritado por la logica y los datos de Pouchet, Pasteur realizé experimentos para acabar con sus ar- gumentos para siempre. Prepard solucin nutritiva en matraces de cuello largo y estrecho —«de cuello de cisne» (Fig. 1-6). Calenté luego las soluciones nutritivas y dejé entrar y salir aire sin tratar ni filtrar. En la solucion no apa- recid ningun microorganismo. La razén de esto era que las particulas de polvo que llevaban los microorganismos no habian podido llegar hasta la solucién nutritiva; se habian sedimentado en la parte en forma de U del tubo de cuelio de cisne y las corrientes de aire eran tan reducidas que las particulas de aire no habian sido arrastradas hasta el interior de los matraces Pasteur expuso sus resultados con lenguaje florido en la Sorbona, en Paris, el dia 7 de abril de 1864. Sus fracasos no mostrarian ningun signo de vida, dijo:La teoria del germen en la fermentacion HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 9 «Yo los he resguardado y sigo alin resguardandolos de la tinica cosa que esta por enci- ma de las posibilidades del hombre hacer; los he resguardado de los gérmenes que flotan en el aire, los he resguardado de la vida.» En su exuberancia, Pasteur lanz6 una serie de dardos contra los que disentian de él «No hay ninguna condicién en la que se pueda afirmar que los seres microscépicos vienen al mundo sin gérmenes, sin padres semejantes a ellos mismos. Los que alegan esto, han sido victimas de sus ilusiones, de experimentos defectuosos, viciados por los errores que ellos no han sido capaces de percibir y que no han sabido cémo evitar» Con la aceptacién del concepto de biogénesis, se facilito el camino para el futuro trabajo de Pasteur. Pasteur pudo ya seguir adelante con sus estudios sobre la fermentacion y luego sus esiudios sobre los microorganismos como causa de enfermedad. Muchas culturas antiguas habian desarrollado bebidas y alimentos que eran productos de fermentaciones microbianas, En Grecia, la produccién de vino por fermentacidn de fruta se habia practicado desde tanto tiempo atras que Jos griegos crefan que el vino habia sido inventado por Dionisio. Una tabla de arcilia de Mesopotamia, escrita en sumerio y acadio unos 500 afios antes de Cristo, revela que la profesién de cervecero estaba ya bien establecida en esta cultura a lo largo de varios miles de afios. El ‘iu, una bebida china a base de arroz y una especie de cerveza, se remonta a mas de 2.300 afios antes de Cristo, Las salsas de soja de China y Japén, obtenidas de unas legumbres fermentadas, se han fabricado durante siglos. Durante muchos miles de afios, las gentes de los paises balcdnicos han consumido productos a base de leche fermentada. Los hombres de las tribus de Asia Central han disfrutado, desde hace mucho, del kumis, una bebida alcohdlica hecha con leche de mula o de camello fermentada. Ciertamente, los antropélogos y los historiadores no conocen ninguna sociedad en la que la fermentacién no se haya utilizado para preparar alimentos, bebidas 0 ambas cosas. Durante los tiempos antiguos la gente iba mejorando la calidad de sus pro- ductos de fermentacién a base de prueba y error, sin darse cuenta de que la calidad depende de que se mejoren las condiciones para el crecimiento de los microorganismos para que lleven a cabo la fermentacién. Hasta que Pasteur realizé sus estudios sobre el papel de los microorganismos en los procesos de fermentacién en la fabricacién del vino, no se entendid que los microorga- nismos fuesen los responsables de la fermentacién, En los afios 1850, Pasteur enfocd su atencién hacia la fabricacién del vino, una industria muy importante en Francia. Después de haber refutado la ge- neracion espontanea, estableciendo asi que los microorganismos son res- ponsables de la fermentacidn, estaba en disposicién de ayudar a los vina- teros y cerveceros franceses, quienes con frecuencia encontraban problemas para obtener un producto de buena calidad. Examinando muchos lotes de vino, encontré microbios de diferentes clases. En los lotes buenos predomi- naban ciertas clases, en los lotes malos 0 peores, estaban presentes otras,La teoria del germen en la enfermedad 10 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Pasteur determiné que. mediante la adecuada seleccién del microbio. el fa- bricante podria asegurar la obtencién de un producto consistentemente bueno y uniforme. Para hacer esto, habia que eliminar los microbios que ya estaban en los mostos y empezar la nueva fermentacién con un cultivo, una masa de microorganismos en crecimiento, procedentes de una cuba de vino que habia sido satisfactorio. Pasteur sugitid que los tipos indeseables de microbios podrian climinarse calentando —no tanto como para estropear el aroma del zumo de frutas, pero lo suficiente para matar a los microbios—. Encontro que manteniendo los mostos a la temperatura de 62,8 °C (145 °F) durante media hora se lograba este objetivo. Hoy dia este proceso, la pasteurizacién, es ampliamente utilizado en industrias de fermentacién, Pero estamos mas familiarizados con él en la industria lactea, en donde se utiliza para destruir Jos microorganismos causantes de enfermedades presentes en la leche y pro- ductos Licteos. Antes incluso de que Pasteur probase mediante experimentos que las bacte- rias son la causa de algunas enfermedades, muchos observadores cuidadosos habian expresado fuertes argumentos en favor de la teoria del germen en la enfermedad. En 1546, Fracastoro de Verona (1483-1553) sugirié que las enfermedades podrian ser debidas a microorganismos demasiado pequetios para ser vistos, que se transmitian de una persona a otra. En 1762, Von Plenciz, de Viena no sélo aseguraba que estos agentes vivos eran la causa de la enfer- medad, sino que sugeria que diferentes microorganismos eran los responsables de diferentes enfermedades. El concepto de parasitismo, es decir, de que un organismo vive dentro o sobre otro organismo del cual obtiene nutrientes, estaba siendo muy extendido en los afios 1700. Esto queda reflejado en el siguiente fragmento de unas coplas escritas por el gran satirico inglés Jonathan Swift (1667-1745) a principios del siglo dieciocho: Asi los naturalistas observan, una pulga ‘empolla pulgas mas pequefias que en ella hacen presa y éstas tienen pulgas mas pequeitas que las muerden y ast hasta el infinito. Oliver Wendell Holmes (1809-1894), un médico con éxito y ademas hombre de letras, insistia en 1843 en que la fiebre puerperal, una grave y con frecuencia fatal enfermedad de la madre después del parto, era contagiosa ¥ que probablemente estaba causada por microorganismos transportados de una madre a otra por comadronas y médicos. Aproximadamente en la misma época (los afios 1840), el médico hangaro Ignaz Phillip Semmelweis (1818- 1865) fue el pionero en el uso de procedimientos obstétricos que reducian las posibilidades de infecciones causadas por microorganismos. El éxito de Pasteur al resolver el problema de la fermentacién hizo que el gobierno francés le pidiese que investigase sobre la pebrina, una enfermedad del gusano de seda, que estaba arruinando a la importante industria sedera de Francia. El problema resulté ser dificil y durante varios afios luché por conseguir una solucién. Eventualmente, sin embargo, aisié el microorga-El desarrollo de técnicas y procedimientos de laboratorio El concepto de cultivo puro HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 11 nismo (un protozoo) que causaba la enfermedad. Pasteur siguié entonces avanzando y demostré que los cultivadores de gusanos de seda podian eli- minar la enfermedad seleccionando s6lo los gusanos sanos, libres de la en fermedad, para obtener nuevas generaciones de gusanos. A continuacién (en 1877), Pasteur se enfrent6 al problema del carbunco, una enfermedad del ganado vacuno y de las ovejas y, a veces, de las personas Después de observar los microbios causantes del carbunco, procedentes de sangre de animales que habian muerto de la enfermedad, los cultivé en ma- traces en el laboratorio. En los aiios 1870 Robert Koch (1843-1910) estaba también ocupado con el problema del carbunco en Alemania. Koch, un médico tranquilo y meticu- Joso, a veces descuidaba su prictica médica para ir en pos de la fascinante ciencia nueva de la bacteriologia. Fue él quien aislé las tipicas bacterias en forma alargada con extremos rectos (bacilos), a partir de sangre de ovejas que habian muerto de carbunco. Cultivo estas bacterias en su laboratorio, las examind al microscopio para estar seguro de que alli habia s6lo una clase y luego las inyectd a ratones para ver si se infectaban y desarrollaban los sintomas del carbunco. A partir de estos ratones aisl6 bacterias iguales a las que él habia encontrado originalmente en las ovejas que habian muerto de carbunco. Esta fue la primera vez en que se demostraba que una bacteria causaba una enfermedad en un animal, Luego Koch descubrié las bacterias que causaban la tuberculosis y el célera. En su biisqueda de microorganismos que pudiesen ser responsables de dife- rentes enfermedades, Koch y sus colegas desarrollaron varios procedimientos de laboratorio que tuvieron un tremendo impacto sobre el desarrollo de la microbiologia. Entre ellos figuraban procedimientos para tefiir las bacterias y asi hacerlas mis facilmente visibles, y técnicas para cultivar (hacer crecer) os microbios en el laboratorio. Una importante técnica de cultivo que ellos desarrollaron fue el uso de un medio, un sustrato para que erezcan las bacte- rias, que se solidifica y permanece transparente a las temperaturas de incu- bacién (temperaturas adecuadas para el crecimiento). La gelatina, que habia sido ensayada para este fin, no result satisfactoria porque se convertia en liquido a la temperatura del cuerpo. Otras superficies solidas, tales como rodajas de patata o de zanahoria, tenian miltiples desventajas, incluida la falta de nutrientes para muchos microorganismos, particularmente los aso- ciados al cuerpo humano, Ei problema quedo resuelto al utilizar un extracto de ciertas algas marinas. Este extracto, llamado agar-agar (al cual se suele denominar simplemente agar), podia disolverse en una solucion nutritiva y cuando se gelificaba permanecia sélido a lo largo de una amplia gama de temperaturas. Describiremos los medios microbiolégicos y su utilizacién en el Cap. 6, Los medios con agar proporcionaron un método excelente para separar las diferentes clases de microorganismos presentes en una mezcla. La técni usada para crecer microorganismos sobre medios de agar permite que una céluta se desarrolle a cierta distancia de otra (microorganismos), acumulindosede I Postulados de Koch Prevencion y tratamiento las enfermedades microbianas 12 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Figura 1-7. Colonias de micro- organismos sobre agar nutrtivo contenido en una placa pet Obsérvense dos tipos diferentes de colonias; indican dos tipos diferentes de bacterias. en una colonia, una masa compacta de células, visibles a simple vista (Fig. 1-7) Todas las células de una colonia son iguales; se asume que son la descendencia de un tinico microorganismo y que, por tanto, representan Io que el micro- bidlogo denomina un cultivo puro. El uso de agar en los medios microbiol6y cos, propuesto inicialmente por el laboratorio de Koch, a principios de los afios 1840, sigue teniendo hoy una amplia utilizacién. Los experimentos de Koch y de otros en su laboratorio demostraron que un determinado microorganismo produce una enfermedad especifica y levaron a establecer unos criterios en los que se basa esta conclusidn. Estos criterios, conocidos como postulados de Koch, se convirtieron y siguen siendo la norma- tiva para tener evidencia de que una enfermedad esti causada por un mi- croorganismo especifico. Los postulados de Koch son 1. Un microorganismo especifico puede encontrarse siempre asociado a una enfermedad determinada. 2. El microorganismo puede ser aislado y cultivado en cultivo puro en el laboratorio. 3. El cultivo puro del microorganismo producira la enfermedad al ser in- yectado a un animal susceptible. 's posible, por procedimientos de laboratorio, recuperar el microorga- nismo inyectado, a partir del animal infectado experimentalmente. Una vez establecido que los microorganismos son la causa de ciertas enfer- medades, se presto gran atencién al desarrollo de métodos para la prevencién y el tratamiento de estas enfermedades. Los agentes etioldgicos (causantes) de la mayor parte de las enfermedades que conocemos hoy —enfermedades que han sido plagas para la humanidad durante siglos— fueron descubiertos en una ripida sucesion, entre los afios 1876 y 1898 (ver Tabla 1-1)Tabla 1-1, Descubrimiento de los agentes etiolégicos de enfermedades microbianas, 1876-1898 Inmunizacin HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 13, FECHA EN QUE SE DESCUBRIO ENED EL AGENTE CAUSAL Carbunco 1876 Gonorrea 1879 Fiebre tifoidea y malaria 1880 Infeccién de las heridas 1881 Tuberculosis y muermo 1882 Difteria y célera 1883 Fiebre tifoidea 1884 Tétanos y efisipela porcina 1885 Pneumonia bacteriana 1886 Meningitis y fiebre de mala 1887 Estrangol equino 1888 Gangrena gaseosa 1892 Peste 1894 Tifus aviar 1895 Botulismo (intoxicaci6n alimentaria) 1896 Enfermedad de Bang (aborto de los bovidos) 1897 Disenteria y pleuroneumonia del ganado vacuno 1898 * Todas las enfermedades de esta lista estén causadas por bacterias, excepto la malaria, {que esté producida por un protazoo. La magnitud de la miseria humana y de la devastacion causada por las enfermedades infecciosas antes del final del siglo veinte es dificil de valorar. Enfermedades tales como la peste, la difteria, la viruela y el célera, devastaban, literalmente amplias regiones del mundo. Grandes ejércitos cayeron postra- dos por epidemias causadas por microorganismos. Escritos historicos su- gieren que el resultado final de la mayoria de las guerras quedaba determinado por las epicemias de enfermedades, mas que por los brillantes generales. Los métodos de prevencién y tratamiento que han sido introducidos para controlar las enfermedades infecciosas comprenden la innunizaci (por ejemplo, vacunacién), la antisepsia (procedimientos para eliminar o reducir la posibilidad de infeccién) y medidas de sanidad publica (por ejem- plo, la purificacién del agua, eliminacin de aguas residuales y conservacion de los alimentos). Pasteur continué haciendo descubrimientos relativos a la causa y prevencién de las enfermedades infecciosas. Hacia 1880 aislé la bacteria responsable del célera aviar y la crecié en cultivo puro. Para demostrar que habia aistado realmente la bacteria responsable de esta enfermedad, Pasteur hizo uso de las técnicas fundamentales disefiadas por Koch, Organiz6 una demostracién publica en la que repitié un experimento (Fig. 1-8) que habia tenido éxito en muchos ensayos previos realizados en su laboratorio: inoculé (inyect6) a pollos sanos sus cultivos puros y esperé a que se desarrollase el c6lera aviar y muriesen, jPero ante su espanto, los pollos no enfermaron ni se murieron! ‘Al revisar cada uno de los pasos dados en su experimento, Pasteur observd que accidentalmente habia usado cultivos que tenian varias semanas, en lugar14 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA EI pollo inoculado en Aes reinoculado ——-Permanece sano aa i XY S 3 8 ws GoD ee TO na» deni Sen smeneecsoe me No | — fo aviar de ocho semanas. ! ‘ree SS ur Figura 1-8, El principio de inmunizacion, tal como lo demostré Pasteur. Pasteur inoculé primero pollos con cultivos de bacterias del célera aviar que tenian varias semanas y estos pollos permanecieron sanos. Varias semanas més tarde, 10s inaculé con un cultivo fresco de bacterias del célera aviar. Este cultivo reciente, virulento, no los hizo enfermar, pero mato los pollos que no habian sido inoculados con el anterior cultvo atenuado. Este experimento demosté que el cultivo «viejon de bacterias del cOlera aviar, aunque incapaz de producit la enfermedad, era capaz de hacer que los pollos produjeran en su sangre sustancias protectoras denominadas anticuerpos. de los recién obtenidos especialmente preparados para la demostracién, Unas semanas mas tarde, repitié el experimento utilizando dos grupos de pollos. El primer grupo habia sido inoculado en la primera demostracién con los cultivos viejos que habian resultado ser ineficaces; los pollos del segundo grupo no habian sido previamente expuestos a estos cultivos. Ambos grupos fueron inoculados con bacterias de cultivos frescos jévenes. Esta vez, los pollos del segundo grupo enfermaron y murieron, pero en seguida encontrd Pasteur una explicacion. Descubrié que las bacterias podian perder de alguna manera tirulencia, 0 capacidad para producir la enfermedad, después de permanecer en reposo y hacerse vigjas. Sin embargo, estas bacterias arenuadas, © menos virulentas, podian todavia estimular al hospedador (en este caso el pollo) a producir anticuerpos, sustancias que protegen al hospedador contra la infeccién debida a una subsiguiente exposicién al organismo virulento. Pasteur aplic6 a continuacion este principio de inoculacién con cultivos atenuados a la prevencién del célera y de nuevo funcioné bien. Denomind a los cultivos atenuados de bacterias vacunas (término derivado del latin vacca) ya la inmunizacién con cultivos atenuados de bacterias la llamé vacunacién: Pasteur honraba de este modo a Edwar Jenner (1749-1823), quien habia vacunado con éxito a un nifio contra la viruela en 1796 (Fig. 1-9). Jenner habia odo que los vaqueros que contraian la enfermedad llamada «cowpox», vacuna a través de las vacas que ordefiaban, no contraian nunca la enferme- dad mucho mas grave llamada viruela, A partir de esta informacion, JennerFigura 1-9. Edward Jenner vacunando (inoculando) a James Phipps con material dela vacuna, que daba como resultado la resistencia a la infeceién por Ia virucla. (De Culver Pictures, Nueva York.) HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 15 planted la hipotesis de que una costra de vacuna inmunizaba de alguna manera contra la virucla. De acuerdo con esto, ensayd su hipétesis inoculando al joven James Phipps primero con material causante de la viruela. El nifio no contrajo la viruela. Por aquel entonces, la fama de Pasteur estaba ya bien consolidada en toda Francia y muchos creian que podia hacer milagros con las bacterias y el control de las enfermedades infecciosas. No sorprendi6, por tanto, que se le pidiese que hiciera una vacuna contra la hidrofobia, o rabia, una enfer- medad transmitida a las personas por mordedura de perros, gatos y otros animales rabiosos. Como era un quimico y no un médico, hizo una pausa antes de aceptar el reto. Una vez que hubo aceptado, empezé a preparar una vacuna. A pesar de que el agente etiologico de la rabia no se conocia, Pasteur fue hacia adelante guiado por su intuicion de que se trataba de un microorga- nismo el productor de la enfermedad. Pasteur logr6 producir la enfermedad en conejos, inoculindolos con saliva procedente de perros enfermos. Cuando murid uno de los conejos inoculados, Pasteur le quité el cerebro y la médula espinal, los puso a secar durante varios dias y luego los pulveria6 y suspendid el polvo en un liquido (Fig. I-10A). Al inocular perros con esta mezcla, que- daban protegidos contra la rabia. Pero vacunar a perros era muy distinto a tratar a personas enfermas (Fig. 1-10B). Dado que la rabia era casi invaria- blemente fatal, fue sdlo después de que un nifio llamado Joseph Meister hubiese sido mordido por un perro rabioso, cuando su familia acept6 gozosa que Pasteur inoculase al nifio con la vacuna, con la esperanza de salvar su vida, Pasteur, que estaba muy preocupado, quedé tan sorprendido como otro cualquiera cuando después de la prueba crucial, que duré varias semanas, Joseph Meister no murié.Figura 1-10. (A) La vacuna de la rabia se hacia inocu- Jando a un conejo con saliva de un perro rabioso. Los virus presentes en el extracto de la médula espinal de! conejo se atenuaban antes de ser inyectados al paciente, (8) Pasteur (a la izquierda) supervisa la inoculacion de la vvacuna de la rabia,realizada por un ayudante, a pacientes mordidos por animales rabiosos. (Cortesia de le Notional Library of Medicine.) Fagocitosis Antisepsia 16 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Salva de pero ‘oboe at pacers de rabia Conta rabia y muere oor ae a Seinyecta Eact de carota a Y médul epi! El pacente croade se rocupera 8 Aproximadamente en esta época, Elie Metchnikoff (1845-1916) (Fig. 1-11), que estaba trabajando en el laboratorio de Pasteur, observ que los leucocitos, un tipo de células de la sangre humana, podian ingerir (comer) bacterias productoras de enfermedades encontradas en el cuerpo. Llamé fagocitos 0 «eélulas comedoras> a estos defensores contra la infeccion y fagocitosis al proceso de ingestién (Fig. 1-12). A partir de estas observaciones, Metchnikoff propuso la hipétesis de que los fagocitos eran la primera linea de defensa del paciente frente a los microorganismos que invaden el cuerpo. La palabra sepsia, en sentido general, implica infeccién; la antisepsia hace referencia a medidas para combatir o prevenir la infeccion. Ya hemos men- cionado la introduecién por Semmelweis, de métodos asépticos durante la prictica obstétrica para reducir la incidencia de fiebre puerperal causada por microbios. En los aflos 1860, un cirujano inglés, Joseph Lister (1827- 1912), estaba buscando un camino para mantener a los microorganismosFigura 1-11. Elie Metchni- kof fue la primera persona fen reconocer el papel de fos fagocitos para combatir las infecciones bacterianas. (Cortesia de René-Dubos.) Figura 1-12. Fagocitosis, La fagocitosis es un meca- ‘nismo natural de defensa contra la enfermedad. El proceso de fagocitosis, la ingestion de material particulado por ciertas célu- Jas, se muestra en tres pasos. (Enwin F. Lessel, ilustrador.) HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 17 3] apartados de las heridas y de las incisiones hechas por los cirujanos, porque las muertes producidas por estas causas eran aparentemente elevadas. Los datos de Lister muestran, por ejemplo, que en 1864 el 45 por ciento de sus pro- pios pacientes morian después de la operacién. Los desinfectantes como tales, eran desconocidos, pero se sabia que el acido fénico (el fenol) mataba a las bacterias, por lo cual Lister utilizaba una solucién diluida de este dcido para sumergir en ella los vendajes y para pulverizarla en la habitacién donde operaba (Fig. 1-13). Las heridas ¢ incisiones protegidas de este modo, rara- mente se infectaban y cicatrizaban en seguida. Fue tan notable este éxito, que la técnica fue aceptada répidamente por otros cirujanos y esta practica antiséptica establecié la base de las téenicas asépticas actuales y utilizadas para excluir a los microbios de las heridas e incisiones. Hoy dia se utiliza una gran variedad de sustancias quimicas, tales como alcohol y soluciones de yodo y técnicas fisicas como filtros de aire y limparas germicidas (ultra- violeta), para reducir el nimero de microbios en zonas tales como quir6fanos y salas de nifios prematuros, etc.Figura 1-13. Operaci6n realizada con precauciones asépticas usando el pulveri zador de acido fénico de Lister (1882). El aparato que se ve sobre el taburete produce una pulverizacién de dcido fénico con el fin de reducirinfecciones. (Comtesia de fe National Library of Medicine.) Quimioterapia 18 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Durante cientos de afios se han utilizado sustancias quimicas para tratar enfermedades; el mercurio fue usado para tratar la sifilis, ya en 1495, y la corteza de quina (que contiene quinina) fue usada en Sudamérica, en el siglo diecisicte, para el tratamiento de la malaria, Pero no fue hasta después de la brillante labor investigadora y los escritos det médico aleman Paul Ehrlich (1845-1915) cuando despegé la moderna quimioterapia. El objetivo de Ehrlich era desarrollar productos quimicos que matasen a los microbios especificos sin daar al paciente. Con este fin sintetiz6 sistemticamente cientos de compuestos, en su biisqueda de agentes quimioterapéuticos potenciales. En 1909 se descubri6 que el compuesto de arsénico Salvarsan, el compuesto 606 de una serie sintetizada por Ehrlich, mata a la bacteria causante de la sifiis. Finalmente, en los aiios 1930, los suefios que Ehrlich habia acariciado acerca del desarrollo de agentes quimioterapéuticos, se cumplieron. Gerhard Domagk, un cientifico aleman, descubrié que un grupo de compuestos quimi- cos, conocidos como sulfonamidas (popularmente conocides como sulfami- das 0 drogas suifa), eran muy eficientes para el tratamiento de varias enfer- medades bacterianas. Como explicaremos mas ampliamente luego, cuando tratemos de los agentes quimioterapéuticos en el Cap. 21, estos compuestos inflingen su dafio sobre las células bacterianas de una manera muy especifica y sin daitar al paciente, justo como Ehrlich lo habia deseado, Otro agente terapéutico dramaticamente efectivo, la penicilina, fue ob- servado por primera vez alrededor de esta época. En 1929, afios antes de que Jas sulfamidas se hicieran populares, Alexander Fleming (1881-1955), un bac- teridlogo escocés que trabajaba en el St. Mary’s Hospital de Londres, pro- clamé haber hallado una sustancia producida por el hongo Penicillium no-Se amplian los horizontes. Aplicaciones de la microbiologia en campos no médicos HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 19 tatum que evitaba el crecimiento de bacterias sobre medios de laboratorio. La informacién hecha por Fleming qued6 virtualmente inadvertida hasta diez afios mis tarde cuando los cientificos empezaron a buscar drogas efectivas, para tratar las heridas y las infecciones del personal militar. Esta sustancia que Fleming habia llamado penicilina por estar producida por Penicillin notatum despert6 un gran interés cuando se vio claramente que podia curar algunas infecciones que no eran afectadas por las sulfamidas y sin los efectos secundarios dafiinos que producen algunas sulfonamidas, Pero hasta 1940 la penicilina no estuvo disponible en cantidades suficientes para realizar pruebas clinicas. Poco después, adquirid répidamente el titulo de «droga milagrosa», debido a que resulté ser la cura mas efectiva para un cierto na- mero de enfermedades comunes y la tinica para varias enfermedades; las respuestas al tratamiento con penicilina eran espectaculares. La penicilina es un anibidtico, una sustancia producida por un microorga- nismo que en muy pequefias cantidades es inhibidora del crecimiento de otros microorganismos. El descubrimiento de la penicilina abrié el camino al des- cubrimiento y produccién comercial de varios otros antibidticos. Ahora, desde luego, ios antibidtices son los principales compuestos quimicos para el tratamiento de las enfermedades infecciosas. A medida que se iban haciendo estos descubrimientos en microbiologia médica, algunos cientificos dirigieron su atencién hacia el papel de los mi- croorganismos en otros campos distintos de la medicina. El campo de la microbiologia del suelo arrancé de las investigaciones de un ruso, Serge Winogradsky (1856-1953), quien mostré la importancia de ciertas bacterias para el mantenimiento de la fertilidad del suelo, Demostrd que ciertas bactevias eran capaces de tomar nitrdgeno (N,) de la atmésfera, en donde es abundante, y convertirle en compuestos nitrogenados que las plantas pueden utilizar como nutrientes. En 1901, Martinus Beijerinck (1851- 1931), un famoso microbidlogo holandés, descubrié otras bacterias en el suelo que eran importantes para la fertilidad del mismo, al sintetizar tam- bign compuestos nitrogenados, pero a través de un proceso diferente del que habia descubierto Winogradsky. Estos descubrimientos desencadenaron otras investigaciones acerca de las relaciones de los microorganismos con la fertilidad del suelo. Tal como ya hemos mencionado, Pasteur establecié el papel de los micro- organismos en la industria de la fermentacion, a través de sus estudios sobre los vinos. Otros extendieron rapidamente sus hallazgos a otros procesos de fermentacién. Un danés, Emil Christian Hansen (1842-1909), inicié un negocio que proporcionaba los tipos deseados de microorganismos para la fabrica- cién de vinagre y de productos lacteos (mantequilla y quesos). Posteriormente, en el siglo diecinueve, Thomas J. Burrill (1839-1916), en la Universidad de Illinois, encontré que una enfermedad de los perales, co- nocida como quemazén, estaba causada por una bacteria. Este descubri- miento establecié un nuevo campo, el de la fitopatologia (el estudio de las en- fermedades de las plantas), que atrajo.a mis investigadores, Aproximadamente al mismo tiempo, Erwin F. Smith (1854-1927), del Departamento de Agri-y biologia Resumen y perspectivas 20. INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA cultura de Estados Unidos, logré transmitir la amarillez del melocotonero. otra enfermedad vegetal, de plantas enfermas a plantas sanas. La transmisién de enfermedades viricas de plantas por insectos habia sido observada también por un granjero japonés en 1894 e independientemente en 1907 por varios cientificos americanos. En 1892, Dimitri Ivanowski descubrié que el agente causal del mosaico del tabaco, una enfermedad de las plantas de tabaco, podia ser transmitida por el extracto filtrado (el jugo colado) de una planta enferma. Se sabia que el tipo de filtro que utilizé era capaz de retener a las bacterias. El jugo filtrado no contenia ningiin microorganismo visible al mi- croscopio. Posteriores observaciones dejaron claro que el material filtrado contenia un virus que era el agente infeccioso. A partir de estos ejemplos y de los primeros descubrimientos médicos, se desprende ficilmente que la microbiologia se desarrollé inicialmente como una ciencia aplicada A finales del siglo, el estudio de la microbiologia se ramificé en dos direc- ciones diferentes pero complementarias: la primera estaba interesada en posteriores estudios a fin de descubrir usos de los microorganismos y la segunda se encargaba de hacer estudios detallados de las caracteristicas biolbgicas de los microorganismos (ver Tabla 1-2). Los resultados de la in- vestigacion acerca de las caracteristicas biolégicas de los microorganismos han tenido un valor incalculable para todas las ciencias biolégicas. La razon de esto radica en que los primeros estudios sobre la fisiologia y caracteristicas quimicas de los microorganismos pusieron de manifiesto que éstas eran iguales a las de todos los organismos vivos. Dado que poseen muchas carac- teristicas que los hacen ideales para su utilizacién en investigacién —entre ellas figura su rapida velocidad de crecimiento (algunas bacterias se reprodu- cen cada 10-15 minutos), su facil cultivo y manipulacién bajo las condiciones de laboratorio y su gran diversidad, lo cual facilita la investigacion de los pro- cesos biolégicos fundamentales—, han sido estudiados con frecuencia para obtener informacién acerca de otros organismos que no podrian conseguirse facilmente mediante experimentos directos utilizando estos organismos. Las investigaciones realizadas con microorganismos han dado como resultado La historia y el desarrollo de la microbiologia como ciencia puede dividirse en tres periodos. El primer periodo se inicié con la revelacion del mundo de Jos microorganismos a través de las observaciones microscépicas de Leeuwen- hoek en 1675. Estas despertaron Ia curiosidad cientifica acerca del origen de la vida. Pero no fue hasta después de la mitad de la década 1860 cuando quedé refutada la teoria de la generacién espontinea y se acept6 el principio de la biogénesis, cuando el conocimiento de los microorganismos se hizo mis que especulativo, Durante el periodo siguiente, entre 1860 y 1900, se realizaron muchos descubrimientos importantes fundamentales. El desarrollo de la teoria de los gérmenes en la fermentacidn fue seguido de la teoria del germen en la enfermedad. en 1876. Esto increments el interés acerca de pro-Tabla 1-2. Algunas Sraas basicas (fundamentales) y aplicadas. do la mierobiologia HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 21 LA BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS (BIOLOGIA BASICA) Citologia: El estudio de las estructuras celulares y de sus funciones. Caracteristicas culturales: E| aspecto del crecimiento bacteriano sobre va- ios medios. Metabolismo: Todos los procesos a micos llevados a cabo por el orga- nismo. Taxonomia: Denominacién y clasifi- cacién de organismos. Genética: Los procesos mediante los cuales, las caracteristicas de la célula Parental son transmitidas a la célula hija Asociaciones microbianas: Como se atectan entre si los microorganismos en su ambiente natural. Patogenicidad y virulencia: La capa- cidad de los microorganismos para producir enfermedades. Inmunologia: Procesos asociados a la resistencia del hospedador ante la infecci6n, cedimientos y téeni ‘APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGIA (CAMPOS APLICADOS) Medicina: Etiologia y diagnéstico de ‘enfermedades infecciosas Salud publica: Medidas para controlar la aparicion y difusién de las enfer- medades. Industria: Productos de fermentacion, tales como alcoholes, acidos y pro- ductos farmacéuticos como antibié- ticos y vitaminas. Leche y alimentos: Control de calidad de la leche y derivados lécteos y pro- duccién de queso y yogur, en curtidos yotros alimentos. Agricultura: Fertilidad del suelo, enfer- medades de los animales y de las co- sechas. Aerobiologia: Existencia de los micro- organismos en el aire y dispersion de los microorganismos a través del aire Microbiologia del agua doméstica y de los desechos domésticos: Control de calidad del suministro de agua y procesos de tratamiento de los resi- duos y aguas residuales. Microbiologia marina: El papel de los microorganismos en ambientes ma- rinos. Exobiologia: La busqueda de vida (microorganismos) en el espacio, s de laboratorio para el aistamiento y caracterizacion de microorganismos. En este periodo se descubrieron muchos de los agentes etiologicos de enfermedades microbianas y se encontraron métodos para prevenir, diagnosticar y tratar estas enfermedades, Los descubrimientos en el campo de la microbiologia médica revolucionaron la practica de la medicina, Desde 1900, la estrecha alianza entre la microbiologia, la medicina y otras reas de la microbiologia aplicada fue creciendo también. Adems, ios mi croorganismos se convierten en sistemas modelo para el estudio de numerosos procesos biolégicos, fundamentales para muchos o para todos los organis- ‘mos vivos. Se siguen haciendo nuevos descubrimientos. Continuamente se descu-Figura 1-14. Galardonados con el Premio Nobel en fisiologia 0 medicina. En los Uikimos afios, muchos de los cientificos que han sido galardonados con el Premio Nobel por sus destacadas aportaciones a la biologia fundamental, han usado microorganismos en sus investigaciones. Unos cuantos de los ganadores del Premio Nobel pueden verse aqui. (A) (1) Joshua y Marguerite Lederberg, (2) Edward Tatum y (3) George Beadle, que ‘compartié el Premio Nobel de fisiologia y medicina con Joshua Lederberg y Tatum en 1958 poor sus investigaciones en genética microbiane. (B) (1) Max Delbruck, (2) Alfred D. Hershey y (3) Salvador E. Luria ganaron el Premio Nobel en 1969. Trabajando individualmente, pero con frecuente comunicacién, realizaron investigaciones sobre los procesos biologicos de los virus que infectan a las bacterias, ayudando a establecer tas bases de gran parte de la modems biologia molecular. Sus investigaciones contribuyeron también a nuestros conocimientos de las enfermedades viricas en general 2Palabras clave Preguntas HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA 23 bren nuevas especies de microorganismos y a través de los microorganismos se estudian muchos procesos bioldgicos. abiogénesis —_cocos inmunizacion putrefaccion agar-agar colonia leucocitos quimioterapia antibiético —cultivo medio sepsia anticuerpos cultivo puro. __microbiologia técnica aséptica antisepsia _espirilos microorganismos _vacunacién atenuado —_—etiologia parasitismo virulencia bacilos fagocitos pasteurizacion biogénesis _fermentacién _postulados de Koch . Describa las contribuciones de Leeuwenhoek a la microbiologia. Compare las contribuciones de Pasteur con Jas de Koch, Haga un co- mentario sobre sus diferentes maneras de establecer conceptos y las apli- caciones practicas de sus descubrimientos. {Cuil es la relacién entre la reoria de los gérmenes en la fermentacién y la teoria de los gérmenes en la enfermedad? {Por qué fue necesario el desarrollo de la microbiologia para refutar la teoria de la generaciéin espontinea? Cite una importante aportacién a la microbiologia realizada por cada una de las siguientes personas: Schulze, Ehrlich, Koch, Lister, Metchnikoff, Schwann, Holmes, Burrill, Winogradsky. {Qué sucede en el proceso de la fagocitosis? {A qué criterios debe ajustarse un determinado microorganismo para demostrar que causa una determinada enfermedad? {Como se denomi- nan estos criterios? Describa la importancia de los microorganismos en cinco areas aplica- das de la microbiologia. {Cuales son cinco de los mas importantes acontecimientos histéricos (contribuciones, cientificas) que condujeron al establecimiento de la mi- crobiologia como ciencia? {Por qué se utilizan frecuentemente los microorganismos para el estudio de fenémenos bioldgico:ESQUEMA: UNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO La unidad basica estructural de la El lugar de los microorganismos en el mundo vivo El eino protista de Haeckel / El sistema de cinco reinos de Whittaker / El reino Procaryotae, segiin el Manual de Clasificacién en Bacteriologla de Bergey Protistas procariéticos y eucariéticos Células procariéticas / Células eucariéticas Principales grupos de microorganismos Protistas procariéticos / Protistas eucariéticos / Virus ida: fa céluta Dénde se encuentran los microorganismos Microorganismos terrestres / La basqueda de microorganismos extraterrestres, Resumen y perspectivas Son varios grupos distintos de microorganismos los que componen el mundo microbiano. La mayoria de los microorganismos son unicelulares, es decir, compuestos por una sola célula. Algunos tienen caracteristicas de células vegetales, otros de células animales y todavia otros, tanto de células animales como de vegetales. Los microorganismos se denominan colectivamente como protistas.. Una importante caracteristica que distingue a ciertos grupos microbianos de otros es la organizacién de su material celular. Esta diferencia, que es de importancia fundamental, divide a todos los protistas en dos categorias principales, los procariotas y los eucariotas. (Todos los organismos que no son protistas, incluidos los seres humanos, estin también formados por células eucaridticas; de esto se hablara aqui mas adelante.) En este capitulo se estudia la unidad estructural y funcional de todos los sistemas vivos, incluidos los protistas: la célula, Luego se considera el lugar que ocupan los protistas en el mundo vivo, examinando brevemente la clasificacién bioldgica. Una vez. visto esto, se pasard a ver los tipos de célula procariética y eucariética y las caracteristicas distintivas de cada una de ellas. Se verdn también los grupos principales de organismos procaridticos y eucariéticos, empleando de nuevo el instrumento de clasificacién. Finalmen- te echaremos la primera mirada a los virus, entidades no celulares que, sin embargo, comparten varias propiedades de los organismos unicelulares y que, por esta razén, caen dentro del dominio de la microbiologia. 4La unidad basica estructural de la vida: la célula UNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO 25 La unidad fundamental estructural y funcional de la vida es la célula. En los microorganismos unicelulares, la célula no es solamente la unidad estructu- ral, es el organismo. Por el contrario, en los organismos pluricelulares, las células estén integradas en un sistema o sistemas que juntos forman el organismo vivo La palabra célula fue utilizada por primera vez hace mas de dos siglos por un inglés, Robert Hooke, en sus descripciones (1665) de la estructura fina del corcho y de otros materiales vegetales. La estructura en forma de panal que observé en una limina fina de corcho (ver Fig. 2-1), era debida a las paredes celulares intactas de las células que anteriormente estuvieron vivas. Pero el concepto de célula como unidad estructural de la vida, conoci- do como ‘eoria celular, se debe a dos alemanes, Matthias Schleiden y Theodore Schwann. quienes en 1838-1839 describieron a las células como las unidades basicas esiructurales y funcionales de todos los organismos. Schlei- den y Schwann reconocieron que todas las células, sin tener en cuenta el organismo al que pertenecen, poseen la misma estructura, A medida que el concepto de la célula como unidad base de la vida fue ganando aceptacién, los investigadores especularon sobre la naturaleza de la sustancia contenida dentro de la célula. El término protoplasma (del griego prote, «primero» y plasma «sustancia formada) fue introducido para caracterizar el material vivo de una célula. Se pens6 que el protoplasma era responsable de todos los procesos vivos. Posteriores investigaciones realizadas con microscopios po- fentes y métodos de observacién nuevos, hicieron avanzar enormemente nuestros conocimientos sobre la organizacién estructural dentro de la célula Schema, Figura 2-1. Dibujo hecho Fg por Robert Hooke de una 3 fina lémina de corcho, tal como la observaba al mi croscopio. El dibujo fue in Cluido en un informe hecho a la Royal Society (Lon dres) en 1665. Se lo consi dera como la primera per sona que utiliz6 la palabra élula. (Cortesia de ta Na: tional Library of Medicine.)‘Aparato de Golgi LUsosoma, Reticulo endoplasmico — Figura 2-2. Dibujos com- uestos que representan células «tipicas». (A) Partes ‘que se encuentran en una Colla tipica. (B) Parame- ‘cium, un microorganismo (un protoz00) unicetuiar pparecido a los animales. (C) Eugiena, un microbio (alga) unicelular parecido a Tos vegetales. (D) Una célula bacteriana Memrana itopasmstica 5 i Sureo orl Vacuola atimenteia Retculo Micronacieo endopismico| \ Ciostoma Clos — sss | Citopigio romosome e yde c &, Sor Nicteo BiayfS Coron Ticocsto ~ Vescula Membrana elu” | T Canal de pinoctosa | Veuok “waste Endoplasma convaei|_comtécti Fagelo a Mateial nuclear a conte Ctoropastos Grénulos de pacamilo x Gxénulo lipidico Grinulo de voluting > Tal como Schleiden y Schwann reconocieron hace mas de un siglo, todas las oétulas de todos los organismos vivos comparten varias semejanzas funda- mentales. La Fig. 2-2 compara una célula tipica con varios tipos de oélulas microbianas. Cada célula esté encerrada por una membrana, una capa extre- madamente fina de un material que rodea a la sustancia de una célula; cada una contiene un micleo, el protoplasma central de una célula, diferenciado y rico en nucleoproteina, o un cuerpo nuclear equivalente, y cada célula contiene citoplasma (del griego citos «célula», plasma wsustancia formadan) dentro del cual hay varias entidades estructurales particuladas. Como citoplasma se considera generalmente todo el material no estructural conteni- do dentro de la membrana. Todos los organismos vivos poseen las siguientes caracteristicas en co- min: 1) la capacidad de reproducirse, 2) la capacidad de ingerir o asimilar nutrientes y metabolizarlos para tener energia y crecer, 3) la capacidad de excretar productos de desecho, 4) la capacidad de reaccionar ante cambios en el ambiente, a veces llamada irritabilidad y 5) susceptibilidad a la mutacin (cambio en las caracteristicas de un organismo). En el estudio de la micro- biologia encontramos incluso organismos que pueden representar la linea fronteriza de la vida: los virus. Los virus proporcionan una excitante oportu- nidad de obtener un mejor conocimiento de la naturaleza de las sustancias organicas complejas, allamente organizadas, que pueden tender un puente sobre la laguna entre lo animado y lo inanimado. 26El lugar de los microorganismos en el mundo vivo El reino protista de Haeckel UNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO 27 Los virus, como veremos mas adelante, son parasitos obligados. Es decir. que estin obligados a crecer dentro de una célula hospedadora apropiada —vegetal, animal o microbiana—. No pueden multiplicarse fuera de una célula hospedadora apropiada, Sin embargo, cuando una particula de virus penetra en una célula viva apropiada, es capaz de crear cientos de particulas de virus idénticas, utilizando energia y la maquinaria bioquimica de la célula hospe- dadora. Un virus es una entidad que estructuralmente es mas sencilla que una sola célula, pero que esta formada por sustancias unicas de la vida, dcidos nucleicos (sustancias quimicas que constituyen el material genético) y proteinas (sustancias nitrogenadas complejas que se encuentran en varias formas en animales y vegetales). En biologia, como en cualquier otro campo, clasificacién significa la disposi- cién ordenada de las unidades en estudio, formando grupos de unidades mayores. La clasificacién actual en biologia fue establecida por el trabajo de Carolus Linnaeus (1707-1778), un botanico sueco. Sus libros sobre la clasifi- cacién de los vegetales y los animales estén considerados como el inicio de la moderna nomenclatura boténica y zoolégica, un sistema para nombrar a vegetales y animales. La nomenclatura en microbiologia, que leg mucho més tarde, se bas6 en los principios establecidos para los reinos vegetal y animal. Hasta el siglo dieciocho, la clasificacién de los organismos vivos colocaba a todos los organismos dentro de uno de dos reinos, vegetal 0 animal. Pero a medida que los investigadores fueron aprendiendo mas y més acerca de los mictoorganismos, fue poniéndose cada vez mas de relieve que algunos de ellos no encajaban adecuadamente en ninguno de los dos reinos. Algunos eran semejantes a las plantas en ciertos aspectos importantes, pero no en otros. Algunos eran parecidos a los animales en ciertos aspectos importantes, pero no en otros. Y algunos poseian caracteristicas estructurales y/o funcio- nales muy diferentes de las de las plantas y animales. Por tanto, estaba claro que un sistema con s6lo dos reinos no podia abarcar adecuadamente a todos los organismos vivos. De acuerdo con esto, se propusieron nuevos sistemas de clasificacién que introducian nuevos reinos para acomodar a los microor- ganismos, Una de las primeras propuestas para mejorar la clasificacién en dos reinos fue hecha, en 1866, por el zodlogo aleman E. H. Haeckel. Sugirié la adicion de un tercer reino que incluyese a los microorganismos. Haeckel denomind a estos organismos «protistas» («primera vida) y propuso que formasen un nuevo reino, el Protista, que contendria solamente organismos unicelulares. Asi, cuando se habla en general de los protistas se incluye a las bacterias, algas, hongos y protozoos, pero no a los virus porque no son organismos celulares. Se hace referencia a las bacterias como protistas inferiores: los otros —algas, hongos y protozoos— se denominan protistas superiores. Existen, sin embargo, diferencias muy fundamentales entre las estructuras celulares de los protistas inferiores y de los protistas superiores. Estas dife- rencias fueron descubiertas después de descubrirse técnicas de laboratorioEl sistema de cinco reinos de Whittaker Figura 2-3, Una represen- tacién esquematica simplif cad del sistema de cinco reinos de Whittaker. (Erwin F. Lessel,ilustrador.) 28 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA que permitian a los investigadores observar las estructuras finas internas de estas células e identificar la composicién quimica de las estructuras subcelu- lares. Los protistas inferiores se caracterizaron por ser células procariéticas (pronucleares, es decir, que su material nuclear no est encerrado dentro de una membrana) y los protistas superiores, como células eucaridticas (que contienen un niicleo verdadero 0 tipico). Mas adelante, en este capitulo, se presenta una comparacién detallada de las células procariéticas con las eucaristicas Un esquema de clasificacién mas reciente fue propuesto por R. H. Whittaker en 1969. Propone cinco reinos, tal como se muestra en la Fig, 2-3. Este esquema pose varias caracteristicas atractivas. 1) Sugiere posibles (0 al menos plausibles) relaciones evolutivas entre los varios grupos; 2) distingue tres lineas principales de nutricién, y 3) refleja las diferencias en la organiza- cidn celular entre los tres reinos, concretamente Plantae, Fungi, Animalia (ver Fig. 2-3). Los microorganismos se encuentran en tres de los cinco reinos el reino Monera que comprende las bacterias, incluidas las cianobacterias (anteriormente conocidas como algas verdes azuladas). el reino Protisia que comprende las algas y protozoos microseépicos y el reino Fungi que com- prende las levaduras y los hongos filamentosos. Los virus, al no ser celulares, estin excluidos de este esquema de seres vivos. Reino Fungi Reino Plantae Reino Anioalia Toms de nutnentes or ingestion Tome de nutrentes por absorcion FotosintéticaUNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO 29 El reino Procaryotae, El «Bergey's Manual of Determinative Bacteriology» octava edicion (1974), el segtin el Manual patron de referencia para la faxonomia (clasificacién) bacteriana, ha recono- de Clasificacién en cido el reino Monera de Whittaker, pero le ha denominado reino Procaryotae, Bacteriologia de Bergey porque todas las células procariéticas son ademas células monereas. El reino Procaryotae tiene dos divisiones, una para las cianobacterias y otra para las bacterias. El sistema de clasificacién para las bacterias que se propone en el Manual de Bergey esté generalmente aceptado y es utilizado internacional- mente. Este tema sera tratado con mas detalle en el capitulo proximo. Sin embargo, conviene hacer notar aqui que utilizaremos el esquema del Manual de Bergey para la clasificacién de las bacterias a lo largo de todo el libro Los sistemas de clasificacién de microorganismos distintos de las bacterias. seran descritos en las Partes Tres y Cuatro. Es importante comprender qué no existe un manual de clasificacion de Jos hongos, algas y protozoos comparable al Manual de Bergey para las bacterias. Para cada uno de los grupos de estos protistas eucaridticos existen publicaciones realizadas por individuos que son autoridades en clasificacién ¥ estas publicaciones sirven de referencia para la clasificacion Protistas Ya hemos dicho que existen diferencias fundamentales en la estructura procariéticos interna de las células procaridticas y eucaridticas. Estas diferencias nos y eucariéticos _permiten distinguir las bacterias y las cianobacterias de los otros miembros Figura 2-4, Unidades de medida en micrabiologia. La unidad Tamafios __Objetos Microscopios basica de longitud es el metro (m). Los tamafios relativos de los 7 mmicrobios, de las moléculas y de los Stomos se indica aqui junto @ una orientacién acerca del rango til de los diferentes tipos de ‘microscopio. (Cortesia de A. J. Rhodes y C. E. van Rooyen, Textbook of Virology, Williams & Wilkins, Baltimore, 1968.) 11 angstrom (A) = 107" m=0,0000000001 m 1 nanémetro (nm) =10~* m=0,000000001 m 1 micrémetro (yim) = 10-* m=0,000001 m 4 milimetro (mm) =10-? m=0,001 m 1 metro=39.4 pulgadas 0.1 mm 1000 nm 100 am 100m nmFigura 2-5. Una célula rocariética tipica. (A) Mi- crografia electronica de una bacteria, una célula proce: riética. (B) Representacin esquemitica de A. (Erwin F. Lessel, ilustrador.) Células procariéticas Pared ‘Membrana plasmética © citoplesmatica Material nuclear — Mesosoma: ibosome Material nuctear — del mundo microbiano. Deseamos hacer hincapié en que esta division de las células en procariotas y eucariotas tiene una gran significacién. Todos los organismos, incluidos los organismos pluricelulares, estén formados por células que son o bien procaridticas o eucariéticas. Las principales caracteristicas de la célula procaridtica pueden resumirse como sigue: 1. No hay membranas internas que separen el nucleo del citoplasma. Tam- poco hay ninguna membrana interna rodeando a otras estructuras corpiisculos dentro de la célula. 2. La divisi6n nuclear es por fisién (un proceso simple, asexual de divisién) y no por mitosis (un proceso complejo de division nuclear que se encuentra en los eucariotas). 3. La pared celular contiene una clase de molécula compleja denominado mucopéptido. El mucopéptido proporciona la rigidez estructural de la pared. Las células procaridticas son las células vivas mas sencillas en cuanto a estructura y se cree que son la forma de vida que primero aparecié sobre Ia tierra, Son muy pequeiias (ver Fig. 2-4). Un grupo de bacterias, los micoplas- mas, miden solamente 0,2 jum. Sin embargo, la célula bacteriana tipica tiene un didmetro de 0,5 a 1,5 ym y una longitud de 1,0. 3,0 um. Las cianobacterias son unas cuantas veces mayores que las bacterias. La Fig. 2-5 muestra una célula procaritica tipica. El material de la célula procaristica (el citoplasma y su contenido) esta todeado por una membrana citoplasmédtica (también llamada membrana plas- miética) que controla el paso de materiales hacia dentro y fuera de la oélula Externa a la membrana citoplasmatica y recubriéndola, esta la pared celular rigida (una cubierta protectora) formada por sustancias quimicas tinicas de 0Células eucariéticas UNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO 31 Jos procariotas. Algunos procariotas poseen apéndices en forma de hilos que se originan en el citoplasma y se prolongan mas alld de la pared celular. Se denominan flagelos y son responsables de la movilidad (capacidad de movi- miento) de los microorganismos, Algunas células procariéticas tienen una cubierta mucilaginosa 0 mucosa en torno a la pared celular rigida. Esta se denomina cdpsula 0 capa mucosa. Dentro del area del citoplasma de la célula procariética pueden observar- se las siguientes sustancias Ribosomas: pequefias particulas que constan de proteinas y dcidos ribonu- cleicos (RNA), que estin implicados en la sintesis (fabricacién) de nueva proteina. Gramulos: depésitos de varias sustancias quimicas que pueden servir de alimento almacenado. Material nuclear: filamentos de dcido desoxirribonucleico (DNA), el por- tador de la informacion genética. Mesosomas: repliegues (0 invaginaciones) de la membrana citoplasmattica hacia el interior del citoplasma. La célula eucaridtica es estructuralmente mas compleja que la célula proca- ridtica. Recordemos, sin embargo, que ambos tipos de células realizan muchas de las mismas funciones biologicas para crecer, reproducirse y man- tenerse vivas. La Fig. 2-6 muestra una célula eucariotica tipica. Una importante caracteristica de la estructura interna de la célula euca- ridtica, es su extenso sistema de membranas internas, Estas membranas, denominadas rericulo endoplismico, se extienden por todo el citoplasma y dividen la célula, cerrando ciertas estructuras 0 sitios de actividad bioqui- mica. Estas estructuras limitadas por membranas tal como se denominan, también se les llama orgdnulos («pequefios Srganos») porque llevan a cabo funciones especializadas dentro de la célula, de una manera muy similar a como los érganos (estructuras pluricelulares complejas) realizan funciones especializadas en sistemas vivos pluricelulares. Vamos a describir los principales elementos de la célula eucariética en términos de su aspecto y funcién. Estas descripciones, junto con las ilustra- ciones de la Fig. 2-6, le familiarizardn a usted con las partes principales de la célula eucaridtica y le ayudarin a ver en qué se diferencia de la célula procariética Reticulo endoplismico. Este complejo sistema de membranas, se extiende por todo el citoplasma y lo divide en compartimentos y canales. Parte del reticulo endoplismico rodea al micleo y forma la membrana nuclear. Algu- nas partes estn recubiertas de ribosomas. El reticulo endoplismico realiza muchas funciones. Sirve de barrera entre los varios organulos y los mantiene en constante posicién relativa. Propor- ciona canales que dirigen el flujo de materiales dentro de la célula, Es una fuente de membranas internas adicionales. Y proporciona una superficie firme para la alineacién de los ribosomas que funcionan en la formacién de nuevas proteinas (sintesis de proteina)32 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA ———— Ribosomas — Pred celular ‘Aparato de Golgi a — Envoltura nuclear Nucléolo —Grano de alison —- Coroplasto — Vacuola —Reticule endoplésmico Figura 2-6. Una microgra- Nicleo. Este es un cuerpo prominente, usualmente circular, rodeado por una fia electrénica del alga envoltura nuclear (Fig. 2-6). La envoltura nuclear es continua con el reticulo (reco ee Seer endoplismico que, a su vez, tiene conexiones con la membrana plasmatica ariética, (Cortesia de ‘La Sustancia nuclear consta de DNA en forma de cromosomas, de RNA y de George E. Palade, The proteinas. Dentro del niicleo hay uno o mas cuerpos densos denominados Rockefeller University, con nucléolos. Estan empaquetados con RNA y se cree que son los sitios de la Years Oe Het Nueva sintesis del RNA ribosbmico. . Leowy y Philp Sekovte, __ El niicleo es Ia principal localizacién del material genético y como tal Cell Structure and Fune. furiciona como centro control de Ia célula, tion, 1969,). (B) Represen- tacién esquemstica de (A). Aparato de Golgi. También llamado complejo de Golgi, este orginulo mem- (Ewin F hese! branoso esti formado por un grupo de sacos en forma de disco. aplastados. ‘estader} aisouestos en pilas como galletas y rodeados de tiibulos y de pequeiias vesiculas, Esta estructura, localizada en la region del reticulo endoplasmico empaqueta y transporta proteinas y polisaciridos al exterior de la célula, Es también el sitio de sintesis de nuevo material para kt pared celular. Mitocondrias. Estos orginulos encerrados dentro de una doble membrana funcionan como los sitios principales de produccién de energia en procesos celulares. Cloroplastos. Son los organulos de las células vegetales que contienen el pigmento verde clorofila y en los que tiene lugar la forosintesis (ver Fig. 2-6). La fotosintesis es el proceso mediante e! cual los organismos que contienen clorofila, convierten la energia de la luz en energia quimi Vacuola. Este es un espacio limitado por una membrana dentro del citoplas- ma, que contiene soluciones diluidas de varias sustancias.Tabla 2-1. Algunas caracteristicas distintivas de las células procariéticas y de las células eucarioticas Principales grupos de microorganismos Protistas procariéticos UNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO 33, Microtibulos y microfilamentos. Estas varillas muy finas (los microttibulos, 250 nm, y los microfilamentos, 40 a 80 nm) existen libres o en haces, en el Citoplasma o dentro de estructuras citoplasmaticas. Mantienen la forma de la célula y promueven el movimiento ordenado de los componentes dentro de los organulos. Flagelos y cilios. Los flagelos y los cilios son apéndices que se extienden mas alla de 1a pared celular de ciertas bacterias, algas, hongos y protozoos. Estos organulos, en general, funcionan para mover sll organismo. Por esta razon se denominan con frecuencia orgémulos locomotores. Los flagelos de los eucario- tas son estructuralmente mas complejos que los de los procariotas. Paredes celulares. Algunas células eucaridticas poseen un recubrimiento ex- temo de la membrana citoplasmitica, Su estructura consta de dos tipos principales de componentes: una red de microfibrillas que dan rigidez a la pared celular y una sustancia en la que estan incorporadas las microfibrillas. La composicién de estas materias varia de acuerdo con el tipo de organismo. Los protozoos no tienen paredes celulares, pero tienen un material que los cubre, denominado pelicula. Las principales caracteristicas de las células procarioticas y eucarit estan resumidas en la Tabla 2-1 CELULA EUCARIOTICA, CELULA PROCARIOTICA (ALGAS, HONGOS, . (BACTERIAS, PROTOZOOS, VEGETALES, ‘CARACTERISTICA CIANOBACTERIAS) ANIMALES) Pared celular (cuando esté presente) Peptidoglicano (mureina © mucopéptido) como componente quimico) + Regién citoplasmatica Mesosomas| + Mitocondrias = Cloroplastos - Estructura de Golgi - Reticulo endoplasmico - Vacuolas con membrana - Material nuclear: Rodeado de membrana - Reproduccién sexual: Rara +++ + ++ Tal como se expuso en el Cap. 1, los principales grupos de microorganismos son las bacterias (incluidas las cianobacterias), los hongos, las algas micros- cépicas y los virus. Lo que viene a continuacién es una vision general de las caracteristicas de cada grupo. Cada uno de ellos sera tratado con mas detalle en los capitulos subsiguientes Las bacterias y las cianobacterias son protistas procariéticos.Figura 2-7. Las células de las bacterias son general- mente 0 bien (A) esféricas (cocos), 0 alargadas (baci los) 0 en espiral (espirilos) ‘Sin embargo, como puede verse, existen muchas mo- diticaciones de estas formas bisicas. (Erwin F. Lessel, ‘tustrador } Protistas eucaridticos 34 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA A Staphylococcus 8 Lactobaciius c Spiritum Bacterias. Las bacterias son células procaristicas tipicas. Son unicelulares y no contienen estructuras rodeadas de membranas, dentro del citoplasma. Sus células aisladas son caracteristicamente esféricas, alargadas o en espiral (Fig. 2-7). Una bacteria tipica mide aproximadamente de0,5.a 1,0 um de diame- tro y de 1,5 2,5 ym de longitud, La reproduccién es predominantemente por fisién binaria simple, que es un proceso asexual, Algunas pueden crecer a temperaturas tan bajas como 0 °C (32 °F); otras se desarrollan en manantia- les de aguas termales, a temperaturas de 90 °C (194 °F) 0 mas. La mayoria crecen a temperaturas entre estos extremos. Las bacterias causan una gran variedad de cambios quimicos en las sustancias sobre las que crecen; pueden descomponer muchas sustancias. Son esenciales para el mantenimiento de nuestro ambiente en el que descomponen material depositado sobre o dentro de la tierra y el mar. Algunos tipos causan enfermedades a los animales {incluidos los humanos) a las plantas y a otros protistas. Estin ampliamente distribuidos dentro y sobre la superficie de la tierra en la atmésfera y en nuestro entorno cotidiano. Cianobacterias. Las cianobacterias son organismos procariéticos fotosintéti- cos. Es decir, que contienen clorofila y otros pigmentos que les permiten realizar fotosintesis. Las cianobacterias son ligeramente mayores que las bacterias. Son unicelulares y se encuentran aisladas o en cadenas de células, que a veces son ramificadas (Fig. 2-8). La reproduccién es por fisién binaria simple, por fisién miltiple o mediante un proceso por el que liberan células especializadas denominadas esporas. Los hongos, los protozoos y las algas, como las bacterias y las cianoba rias, son protistas, Sin embargo, se diferencian de las bacterias y cianobacte- rias en que sus células son eucariéticas; las células de las bacterias y de las cianobacterias son procariéticas. Esta distincign es de fundamental impor- tancia. Hongos. Los hongos son organismos que carecen de clorofila y poseen paredes celulares rigidas. Algunos son unicelulares; otros son pluricelulares y presentan alguna diferenciacion en sus partes estructurales. Varian en tama- fio y forma desde las levaduras microscépicas unicelutares hasta los hongos microscépicos filamentosos (mohos) y hasta las setas gigantes pluricelulares.Figura 2-8. Microfotogra- fia de la cianobacteria Ana- ‘baena azollae. La mayoria de las membranas fotosin- téticas estén localizadas cerca de la periferia de la cblula, pero algunas se ex- tienden a la porcién media de la célula. (Cortesia de Norma J. Lang, J. Phycol 1127 y 134, 1965.) Virus Membrana fotosinética Los hongos se reproducen mediante urla variedad de procesos tanto sexuales como asexuales. Estos métodos de reproduccién se describen en el Cap. 8 Protozoos. Los protozoos son protistas eucariéticos unicelulares que carecen de clorofila y de paredes celulares. Los protozoos varian enormemente en cuanto a tamafio. Unos son tan pequefios como 1 um, otros miden cientos de micrémetros y son visibles a simple vista. Por ello existe una considerable variacién en su forma. Los protozoos serén examinados en el Cap. 9 Algas. Las algas son protistas eucariéticos que contienen clorofila, Su tama- ia entre los organismos de 5 a 10 ym de longitud y los quelpos gigantes, que pueden tener una longitud de mas de 100 pies. Las algas microscépicas, que son las de primordial interés para el microbidlogo, son en su mayoria unicelulares. La reproduccién es principalmente por fision bina- ria asexual, pero en algunas especies existen otros métodos de reproduccién. Las algas crecen abundantemente en agua dulce y marina, asi como en el suelo, Estos organismos son el objeto de estudio del Cap. 10. Virus. Los virus no son células; su estructura y composicién son més simples gue las de la célula procariética. No viven libres, sino que son pardsitos obligados, es decir, requieren una célula viva para su propagacién. Constan de una cadena de Acido nucleico, o bien DNA o bien RNA, envuelta en una capa de proteina. En comparacién con la mayoria de los microorganismos, Jos virus son muy pequefios. Su tamafio oscila entre los 20-25 nm y los 200- 300 nm. Los virus no pueden verse utilizando el microscopio éptico. Las particulas viricas pueden verse por microscopia electronica y muestran varias formas. Los virus tienen hospedadores especificos. Es decir, que solo se 35Donde se encuentran fos microorganismos M croorganismos terrestres, La bisqueda de microorganismos extraterrestres Resumen y perspectivas 36 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA multiplican dentro de una clase particular de célula viva —vegetal, animal 0 microbiana—. Los virus seran estudiados en los Caps. Il y 12. Las principales caracteristicas distintivas de los principales grupos de microorganismos se presentan en la Tabla 2-2, y en la Fig. 2-9 se muestran algunas especies tipicas. Tal como hemos dicho antes, los microorganismos son ubicuos; estén en cualquier lugar del entorno humano. Se encuentran en el suelo, en ambientes acuaiticos, que van desde arroyos a océanos, y en la atmésfera, Las condicio- nes ambientales locales determinan las caracteristicas de la poblacién micro- biana. Pueden estar presentes en ntimeros extremadamente grandes y con una gran variedad de tipos. Contrariamente a la creencia popular, hay muchos mas microorganismos beneficiosos que daiiinos. En la ciencia de la microbiologia intentamos aprender la distribucién de los microorganismos en varias localizaciones ambientales, el niimero y la clase de ellos alli presentes y los papeles que desempeiian en el ambiente. Los cientificos, los filésofos, los poetas y por supuesto los escritores de ciencia ficcién han especulado acerca de la posibilidad de vida en cualquier otro lugar del universo. El interés en este campo se ha avivado gracias a los tremendos avances logrados en la tecnologia aeroespacial durante las dos tiltimas décadas. Estos avances han hecho posible una nueva dimension de la ciencia biolbgica, la exobiologia, la busqueda de vida extraterrestre. Cuando los astronautas se posaron en la Luna en 1969. se prepararon medios muy elaborados para el examen microbiolégico de muestras de suclo lunar que trajeron a la tierra. Sin embargo, los extensos examenes realizados no revelaron la presencia de ningiim microorganismo, En 1977, una unidad espacial buscadora de vida lego a posarse en Marte. Realizd alli varios experimentos en busca de vida microbiana. Los resultados de estos experi- mentos también fueron negativos. Pero no puede haber duda de que la biisqueda de vida en otros planetas —o en cualquier otro lugar— continuara Los primeros sistemas de clasificacién colocaron a todas las formas de © bien en el reino vegetal o bien en el reino animal. Al ir obteniéndose mas conocimientos acerca de los microorganismos result que algunos mostraban caracteristicas solo de vegetales, otros sélo de animales y otros poseian racteristicas de ambos, vegetales y animales. Esto sugeria la necesidad de establecer un tercer reino (Protista) para incluir en él a todos los microorga- nismos unicelulares. Posteriores investigaciones con microorganismos, especialmente las inves- tigaciones sobre su estructura celular interna por microscopia electrénica, revelaron una diferencia fundamental entre ellos. Algunos, las bacterias y las cianobacterias, no mostraban, dentro del citoplasma, unidades estructurales encerradas por membranas. Estas se designaron como células procariéticas, Otros microorganismos, las algas, los hongos y los protozoos. asi como lasUNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO 37 Figura 2-9. Caracteristicas morfoldgicas o estructurales de varios grupos de microorganis mos. (Obsérvese que con esta ilustracion se intenta solamente faciltr la impresién de di- versidad y no mostrar las relaciones de tamario entre los diferentes grupos de microorga- rismos.) La amplia gama de tamarios microbianos no permite mantener una amplificacion Constante y mostrar al mismo tiempo detalles morfol6gicos significativos. (A) La bacteria Escherichia coli (1.000); (B) La bacteria Rikettsia tsutsugamushi en una céla linfoblas tode raton. La flecha apunta hacia las ricketsias. (Cortesia de R. Marilyn Bozeman.) (C) Vitus del mosaico del tabaco (100.000). (Cortesia de Hitachi Ltd. Tokyo.) (D) El hhongo levaduriforme Candida utilis (x 2.000 aproximadamente). (Cortesia de G. Svihla, J.L Dainko y F. Schlenk. J. Bacterio! 85:399, 1963.). (E) £1 hongo filamentoso Asper- ails sp. (Cortesia de Douglas F. Lawson.) (F) Una ameba, que es un protoz00. (De Carolina Biological Supply. Co.) (G) El alga Chlorella infusionum (x 1.000). (Cortesia de Robert W. Krauss)38 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Tabla 2.2. Algunas caracteristicas de los principales grupos de microorganismos. (Enwin F. Lessel. ilustrador.) GRUPO MORFOLOGIA Cianobacterias OS "canes © gZ Vv oO Virus A 1 a ¢ Hongos: Levaduras 20mm TaManiO Tipico: 05a 1,5 um por 1.0.3.0 um Limites: 0.2 por 100 jm Limites: 50a 15 pm imites: 0.015 20,2 um Limites: 5,0 a 10,0 ym CARACTERISTICAS IMPORTANTES Procariéticas. Unicelula- res. Estructura interna sencilla. Crecen en me- dios artificiales de labo- ratorio. Reproduccin asexual, caracteristica- mente por simple division de la célula. Procariéticas. Unicelula- res. Estructura celular como la de las bacterias. Crecen en medios artifi- ciales de laboratorio. Re- produccién asexual por division celular 0 produc- cién de esporas. Contie- nen clorofila y son foto- sintéticas. No crecen en medios arti- ficiales de laboratorio, re- quieren células vivas dentro de las cuales se reproducen. Todos son pardsitos obligados. Para verlos es necesaria la mi- croscopia electronica. Eucariéticas. Unicelula- res, Se cultivan en el la~ boratorio como las bac- terias. Reproduccion por division celular asexual, por gemaci6n o por pro- ces0s sexuales. SIGNIFICADO PRACTICO ‘Algunas causan enfer- medades. Desempefian apeles importantes en los ciclos naturales de los elementos, lo cual con- tribuye a la fertitidad del suelo, Utiles en la indus- tria para la fabricacién de compuestos valiosos. Algunas alteran los ali- mentos; algunas produ- cen alimentos. Fuente de alimento para animales acusticos. Con- tribuyen a la formacion Y enriquecimiento del suelo. Causan enfermedades en las personas, otros ani- males y vegetales. Tam- bién infectan a microor- ganismos. Produccién de bebidas alcohélicas. También usadas como suplemento alimenticio. Algunas cau- san enfermedades.Tabla 2-2 (Continuacién) UNA VISION GENERAL DEL MUNDO MICROBIANO 39 CARACTERISTICAS GRUPO MORFOLOGIA TAMANO IMPORTANTES. SIGNIFICADO PRACTICO Hongos: Limites Eucariéticos. Pluricelula- Responsables de la des- Filamentosos 2,0 a 10,0 um resconmuchascaracte- composicién (deterioro) por risticas estructurales dis- de muchos materiales. ; : varios mm tintivas. Se cultivan en _Utiles para la produccién el laboratorio como las. industrial de muchos bacterias. Reproduccién —_ productos quimicos, in- por procesos asexuales _cluida la penicilina. Cau- — y sexuales. ‘san enfermedades en — ean personas, otros animales y vegetales. Protozoos Limites: Eucariéticos. Unicelula- Alimento de animales 2,0 a 200 um es. Algunos se cultivan _acuéticos. Algunos pro- y en el laboratorio como las ducen enfermedades. bacterias. Algunos son Algas pardsitos intracelulares. Reproduccién por pro- Sem cesos asexuales y se- xuales. Limites: Eucariéticas. Unicelulares _Importantes en la produc- 1,0 yma muchos y pluricelulares. La ma- cin de alimentosen am- metros yoria se encuentra en _bientes acusticos. Usa~ ambientes acudticos. dos como suplemento Contienen clorofila y son alimenticio y en prepara- fotosintéticas. Reproduc- _ciones farmacéuticas. cidn por procesos ase- Fuente de agar para los, xuales y sexuales. medios mictobiol6gicos. Algunas producen sus- tancias toxicas, células vegetales y animales, contenian dentro de su citoplasma varias estruc- turas limitadas por membranas. Estas células se designaron como células eucaristicas. Esta importante distincién representa un gran avance en la microbiologia moderna Entre los problemas que quedan por resolver est la situacién de los virus en cualquier esquema de clasificacién de la vida. Muchos se preguntan si los virus son agentes vivos y si representan el enlace entre las moléculas organi- cas complejas sin vida y las formas celulares microscépicas mas sencillas. La bitsqueda de nuevas formas de vida en nuestro entorno, proporciona périddicamente el descubrimiento de nuevas especies microbianas. Tales hallazgos amplian nuestro conocimiento del mundo de los microorganismos.Palabras clave Preguntas 40 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA ‘icido desoxirribonucleico (DNA) membrana citoplasmatica icido ribonucleico (RNA) mesosomas aparato de Golgi microfilamentos cipsula microtiibulos célula mitocondrias cilios nomenelatura citoplasma niicleo clasificacién organulos cloroplastos procariotas cromosomas protistas eucariotas protoplasma exobiologia reticulo endoplismico flagelos ribosomas fotosintesis teoria celular granulos vacuola membrana 1. gEn qué se diferencia el esquema de clasifica del propuesto por Haeckel? {Cual fue la contribucién a ta ciencia de la biologia. realizada por Schleiden y Schwann? zY la de Linnaeus 3. GPor qué son importantes los esquemas de clasiticacion en microbiologia y en biologia en general? 4. (Cuil es la diferencia fundamental entre una célula procariética y una Célula eucariotica? 5. Cite varias caracteristicas por las que pueda distinguir una célula proca- ridtica de una célula eucaridtica 6. Cite dos grupos de microorganismos que sean protistas procaridticos y dos grupos que sean protistas eucaridticos. 7. gEn qué se diferenciai los virus de los protistas? 8. Cite los grupos principales de microbios. Mencione tres caracteristicas distintivas de cada grupo. 9. {Dénde se encuentran los microorganismos en Ia naturaleza? n propuesto por WhittakerESQUEMA: La clasificacion de los microorganismos CLASIFICACION Y DENOMINACION DE LOS MICROORGANISMOS La clasificacién de los microorganismos El concepto de especie / Categorias taxondmicas (taxa) Denominacién de los microorganismos. El sistema binario de nomenclatura Cédigos de nomenclatura / Principios de nomenclatura / Nombres cientificos y nombres comunes ‘Avances recientes en taxonomia microbiana Taxonamia numérica / Taxonomia genética Conceptos taxonémicos cambiantes Resumen y perspectivas Una meta en cualquier campo cientifico es la organizacién de la informacion que a través de los hechos se descubre en ese campo. Asi ocurre en microbio- logia. {Cémo es posible agrupar a muchos microorganismos dentro de un patron © de un sistema ordenado que identifique semejanzas dentro de un grupo, asi como diferencias entre grupos? El estudio de los organismos para establecer un sistema de clasificacion que refleje lo mejor posible todas sus similitudes, asi como todas sus diferencias, se denomina faxonomia. Una vez que un organismo ha sido asignado a un grupo taxonémico, conviene darle un nombre. La denominacién de los microorganismos (nomenclatura) pro- porciona una etiqueta o punto de apoyo para referirse a ellos conveniente- mente y para la comunicacion, Si queremos desarrollar un sistema satisfactorio de clasificacién, debemos conocer meticulosamente las propiedades o caracteristicas de los sujetos, en este caso microorganismos, que queremos clasificar. En el capitulo preceden- te hemos identificado las principales caracteristicas de los microorganismos En este capitulo vamos a entrar en contacto con la clasificacién de los microorganismos. Vamos a utilizar ejemplos de los esquemas de clasificacion para las bacterias. Tengamos en la mente que los sistemas de clasificacio para todos os microorganismos son similares. Clasificaci6n es un término relacionado y a veces intercambiable con taxono- mia. Taxonomia es la ciencia de la clasificacin 0 del ordenamiento sister tico de los organismos en grupos o categorias denominados ‘axa (singular, a42 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA taxon). Sin embargo, el ordenamiento sistematico de los microorganismos Tequiere que éstos estén adecuadamente identificados y con el nombre idé- neo. La actividad completa —clasificacién, denominacién e identificacién se conoce como microbiologia sistemdtica. Los tres procesos, descritos a continuacién, son muy interdependientes. 1. Taxonomia (clasificaciin). E\ ordenamiento de unidades en unidades mayores. Puede establecerse una analogia con el juego de la baraja. Li cartas individuales pueden ir eligiéndose por el color y luego por formar tun conjunto, Después, cada conjunto puede ordenarse en orden numérico 2. Nomenclatura. Es la denominacién de las unidades caracterizadas y deli- neadas por la clasificacién. Puede usarse la misma analogia. A cada carta se le da un nombre y tal vez mas de un nombre. Por ejemplo, un as y un triunfo pueden referirse a la misma carta, Afortunadamente, la nomencla- tura cientifica es la misma en todos los idiomas. 3. Idemtificacién. Es la utilizacién de criterios establecidos para la clasifica- cin y nomenclatura para identificar los microorganismos al comparar las caracteristicas de unidades desconocidas con las de unidades conocidas. La identificacion de un microorganismo recientemente aislado requiere una adecuada caracterizacién, descripcién y comparacién con las descrip- ciones publicadas de otros microorganismos parecidos. Como hemos dicho antes, el objetivo de un sistema de clasificacion es agrupar organismos de manera que refleje sus semejanzas, asi como sus diferencias. A partir de la clasificacién, se han establecido los criterios necesarios para Ia identificacién de los microorganismos. La clasificacién proporciona ademas un medio para determinar relaciones evolutivas entre grupos de microorganismos y para seleccionar microorganismos que puedan poseer caracteristicas 0 capacidades de especial interés, tal como la produc- cién de antibidticos. Antes de 1700, los organismos visibles a simple vista fueron clasificados simplemente como vegetales o bien como animales, Esta practica fue acepta- da por los bidlogos como base para separar el mundo viviente en dos reinos, Animalia y Plantae. En los aios 1700 estos dos reinos fueron subdivididos en grupos identificables y relacionados, por Carolus Linnaeus, un naturalista sueco. Una caracteristica esencial del esquema linneano se usa todavia: es el sistema binario de nomenclatura (de dos partes). Luego veremos mas acerca de la denominacién, Los sistemas de clasificacién se desarrollan generalmente a través de la cooperacién internacional de cientificos. Mediante la utilizacion de los es- quemas linneanos, los botdnicos desarrollaron sistemas de clasificacién para el reino vegetal y los zodlogos lo hicieron para el reino animal. Las algas y los hongos fueron incluidos en el reino vegetal y los protozoos en el reino animal. Después de estos sistemas mas antiguos, se fueron desarrollando muchos sistemas de clasificacién para las bacterias. En la ultima década se ha propuesto un esquema de clasificacién para los virus porque ya se habia ido acumulando suficiente cantidad de datos en los que basar tal esquema de clasificaciénEl concepto de especie Categorias taxonémicas (taxa) CLASIFICACION Y DENOMINACION DE LOS MICROORGANISMOS 43 La unidad basica 0 grupo, en todos los sistemas de clasificacion de organis- mos incluidos los microorganismos, es la especie, Utilizamos este término frecuentemente, pero con demasiada frecuencia con un sentimiento de injus- tificable autoridad. La verdad es que el concepto de especie es algo arbitrario y no est definido con precision; ademas es usualmente subjetivo (basado en €l juicio individual) en el campo de la microbiologia. En general, se define una especie como un grupo de individuos estrechamente relacionados que 1) se pueden distinguir de los individuos de otros grupos similares y 2) que son capaces de cruzarse con otros miembros de! grupo. El criterio de cruce 0 hibridacién no es facil de aplicar ni de aplicarse rutinariamente a los mi- croorganismos, en especial a las bacterias. Asi, la ultima parte de la defini- cidn mencionada mas arriba, no se ajusta y por ello debemos ir en busca del asesoramiento de un investigador experimentado, para ver hasta qué punto deben ser semejantes un grupo de microorganismos, para poder designarlos como una especie. Esta es de nuevo una decision subjetiva hecha por un microbidlogo. De aqui se desprende que cuanto mas completa sea la caracte- rizaci6n de un microorganismo, mas facil resulta juzgar lo que constituye tuna especie Un sistema de clasificacién biolégica esta basado en una jerarquia taxonémi- ca u ordenamiento de grupos 0 categorias que coloca a la especie en un extremo, y en el otro al reino, en la siguiente sucesion: Especie: Un grupo de organismos (en nuestro caso microorganismos) estrechamente relacionados, en los que los individuos del grupo son iguales en el mayor niimero de caracteris Género: Un grupo de especies similares. Familia: Un grupo de géneros similares. Orden: Un grupo de familias similares. Clase: Un grupo de érdenes similares. Phylum (plural, phyla) o division: Un grupo de clases relacionadas. Reino: Todos los organismos dentro de esta jerarquia El ordenamiento de las especies dentro de un sistema de clasificacién —por ejemplo, especie—genero-+familia—rorden-clase -sphylum o division podria parecer relativamente facil inequivoca. No es asi. {Hasta qué punto deben ser similares las especies para incluirlas en el mismo género? {Cudles son las fronteras de un determinado género, familia u orden? Estas preguntas no pueden ser contestadas de forma absoluta. Ademas, los diferentes axa no son siempre igualmente utiles. Por ejemplo, la junta editora del Manual de Bergey ha llegado a la conclusién de que «para la mayoria de los grupos de bacterias, los géneros y las especies son solamente, ahora, categorias que pueden reconocerse y definirse con razonable precision. La manera en que se solapan las caracteristicas de las bacterias entre las especies, presupone el establecimiento de claras lineas de demarcacién entre grupos taxonémicos. La categoria de especie es el grupo mas importante en este esquema de clasificacién. Proporciona la base para toda la estructura jerarquica completa,Denominacién de tos microorganismos. EI sistema binario de nomenclatura Tabla 3-1. Ejemplos de nombres taxonémicos tal como se aplican a las especies en los reinos vegetal, animal y microbiano Codigos de nomenclatura Principios de nomenclatura 44 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Los microorganismos, como todas las otras formas de vida, se nombran de acuerdo con el sistema binario de nomenclatura (Tabla 3-1). La finalidad primaria de un nombre es proporcionar un medio para referirse a un mi- croorganismo, no para describirle, Cada organismo se designa por el nombre de un género y un témino ordinario © descriptivo al que se conoce como epiteto especifico; ambos estin en latin o latinizados, El nombre del género se escribe siempre con mayiiscula: el epiteto especifico es siempre inferior Los dos componentes juntos se denominan nombre cientifico (wénero y epiteto especifico) y siempre se imprimen en cursiva: por ejemplo, Neisseria gonorrhoeae, la bacteria que causa la gonorrea EJEMPLOS DE TAXA TAXA Leon* Diente de le6n* —Ameba*——_—Bacilo tuberculoso Reino Animalia Plantae Protista Procaryotae Phylum (0 Chordata —-‘Tracheophyta_—-Sarcodina._—_Bacteria division) Clase Mammalia Angiospermae —_Rhizopoda - Orden Carnivora Campanulales.~ Amoebida__—_Actinomycetales Familia Felidae Compositae Amoebidae — Mycobacteriaceae Género Felis Taraxacum Amoeba Mycobacterium Especie F leo T officinale A. proteus__—_-M. tuberculosis “Nombre comin. Para conseguir una denominacién uniforme y consistente para los organis- mos, se han establecido reglas. internicionalmente aceptadas, que siguen los bidlogos de todo ef mundo. Tales reglas para vegetales y animales fueron ya establecidas por botinicos y zodlogos a principios de los afios 1900. EI Codigo internacional de nomenclatura zoolégica se publicd por primera ver en 1901. El codigo internacional de nomenclatura botinica se publicd por primera vez en 1906. En 1947, la Asociacion Internacional de Sociedades Microbiolégicas adopté un Cddigo Internacional de Nomenclatura de Bacte- rias y Virus. El eddigo. conocido hoy como Cédigo Intemacional de Nomen- clatura de Bacterias, esta modificandose continuamente en un esfuerzo por mejorar y clasificar sus reglas y normativas. La edicién mas reciente se publicé en 1975 Los cédigos zooldgico. botinico y bacteriolégico estin basados en ciertos principios comunes. Algunos de los mas importantes son 1. Cada tipo distinto de organismo se designa como una especie 2. La especie se designa por una combinacién binaria en latin que le propor- ciona una etiqueta uniforme, internacionalmente comprensible. 3. La nomenclatura de los organismos est regulada por la organizacién supervisora adecuada que en el caso de las bacterias es la International Association of Microbiological Societies.Nombres cientificos y nombres comunes Avances recientes en taxonomia Taxonomia numérica CLASIFICACION Y DENOMINACION DE LOS MICROORGANISMOS 45 4, Una ley de prioridad asegura el uso del nombre legitimado mas antiguo de que se dispone para un organismo. Esto significa que el primer nombre gue se dio a un microorganismo, si se siguid para ello el procedimiento adecuado, es el nombre correcto. Para la clasificacién de los organismos se requiere la designacién de categorias. 6. Se han establecido criterios para la formacién y publicacién de nombres nuevos. Los nombres cientificos de los organismos se forman de acuerdo con las reglas del sistema binario de nomenclatura, como indicamos antes. Los organismos con los que nos hemos familiarizado y a los que nos referimos con frecuencia adquieren nombres comunes. Abajo se relacionan varios ejemplos de organismos a los que frecuentemente se hace referencia por sus nombres comunes, junto a sus nombres cientificos. (En muchos casos el nombre comin empieza a utilizarse antes de que se le conceda al organismo un nombre cientifico.) NOMBRE COMUN NOMBRE CIENTIFICO Perro Canis familiaris, Mosca doméstica Musca domestica Roble blanco Quercus alba Hongo del pan Neurospora crassa Gonococo Neisseria gonorrhoeae Bacilo tuberculoso Mycobacterium tuberculosis ar nombres comunes son la conveniencia y una comunicacién més efectiva entre los médicos y los pacientes. Por ejemplo, en tuna conversacién en el laboratorio con una persona lega es mas conveniente referirse al agente causante de Ia tuberculosis hablando del bacilo tuberculo- so que decir Mycobacterium tuberculosis. Los nombres comunes se derivan a veces de los nombres genéricos como por ejemplo pseudomas a partir de Pseudomonas. La taxonomia microbiana no es asunto estatico. Los esquemas de clas Gidn estan evolucionando continuamente a medida que se va obteniendo mas informacion y se van desarrollando métodos diferentes para interpretar los datos. Dos avances relativamente modernos se han sugerido para su utiliza- cidn en taxonomia microbiana, ya que por diferentes vias, realizan decisiones ms objetivas. Uno de ellos es la taxonomia numérica y el otro la taxonomia genética, La taxonomia munérica, también conocida como taxonomia por computadora, esta basada en principios publicados hace muchos afios y que hasta hace muy poco no se han aplicado a la taxonomia microbiana, La taxonomia numérica requiere que se disponga de una gran cantidad de informacion acerca de losTaxonomia genética Conceptos ‘texonémicos cambiantes 46 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA microorganismos, informacién acerca de tantas caracteristicas no relaciona- das como se pueda obtener. A cada caracteristica se la concede un valor igual, para construir los taxa. La semejanza total se basa en la proporcién de caracteristicas que los organismos poseen en total. En la practica, el micro- biGlogo acumula datos para cada cultivo, Mediante el uso de ordenadores, se comparan datos de cada cultivo con los de cada uno de los otros cultivos. (Se requiere la ayuda de un ordenador de alta velocidad porque, de otro modo. la comparacién de miles de comparaciones de varias caracteristicas tomaria un tiempo extremadamente largo.) El resultado final es que el microbidlogo puede calcular y expresar numéricamente el grado de similitud de cada cultivo con cada uno de los otros cultivos. Los taxa se establecen sobre la base de grados de similitud. La taxonomia numérica tiene dos ventajas, Una es que puede hacerse objetiva: los puntos de vista del taxonomista no entran, en el procedimiento y por ello los resultados (si el procedimiento es aplicado correctamente) no estan abiertos a controversia. La otra gran ventaja de la taxonomia numérica es que sus hallazgos son reproducibles o repetibles. Otro taxonomista que siga el mismo procedimiento con los mismos datos, debe obtener el mismo resultado. Como verdn en los Caps. 16 y 17, es mucho lo que se conoce acerca del material genético de las bacterias, es decir. del DNA. Existen procedimientos de laboratorio mediante los cuales se determina la composicién de bases (contenido de guanina mas citosina, 0 GC) del DNA de un determinado organismo y luego se compara con la composicién de bases del DNA de otros microorganismos. El grado de relacién o de similitud de los DNA de diferentes microorganismos puede determinarse también por experimentos de hibridacién, En esta técnica, cadenas aisladas del DNA de un microorganis- mo se exponen ante cadenas aisladas de DNA de otro microorganismo. El grado en el que se retnen estas cadenas aisladas, refleja su grado de simili- tud. (El significado de esto quedara mas claro cuando lea los Caps. 16 y 17.) La informacién genética es muy valiosa para revalidar los grupos taxoné- micos existentes y para establecer grupos nuevos. Una vez que los microorganismos han sido asignados a un lugar del sistema taxonémico, ges esta la decision final? No. Los esquemas de clasificacién en microbiologia se modifican periédicamente; los ordenamientos taxondmicos anteriores dan paso a otros mejores basados en nuevos conocimientos. Los siguientes ejemplos ilustran la naturaleza de algunos de los cambios que han tenido lugar El Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8.° edicién (1974), es la autoridad generalmente aceptada en taxonomia bacteriana. Cada una de las ocho ediciones publicadas en distintos aftos desde 1923, han dado listas de distinto nimero de especies para varios géneros. Algunos ejemplos presenta- dos en la Tabla 3-2 muestran que han tenido lugar cambios considerables a lo largo de los afios, en el niimero de especies situadas en cada uno de estos géneros. {Por qué? Existe una variedad de razones. A algunos microbidlogos que trabajan en el campo de la taxonomia se les conoce como disgregantesTable 3-2. 70 Tota 65 0 gs $50 eis 2 3 Fostes fos 2b Sas fvkentes g 20 Eis Zi 5 oes 9 Re ee 2B 5 Anos Figura 3-1. Cambios en el rntimero de especies de pro- ‘0200s identificadas desde 1900. (Cortesia de N. D. Levine.) CLASIFICACION Y DENOMINACION DE LOS MICROORGANISMOS 47 (que rompen); establecen nuevas especies sobre la base de ligeras diferencias entre grupos relacionados. A otros microbidlogos que trabajan en taxonomia se les conoce como conglomerantes (que amontonan); no consideran las pequefias diferencias como suficientes para garantizar una nueva especie. Otra razén de estos cambios esta asociada a la acumulacién de nueva informacién acerca de los microorganismos. La informacién nueva puede proporcionar mejores pruebas para establecer nuevas especies. para eliminar algunas especies 0 para ambas cosas, Otra razin también es el creciente interés por un grupo de microorganismos. Volvamos de nuevo a la Tabla 3-2 ¥y veamos lo que ha sucedido con el género Streptomyces. Esta «explosion» de especies nuevas se produjo a causa del descubrimiento realizado en los afios 1940, de que las especies de Streptomyces producen antibioticos. Este descubrimiento inicié una importante bisqueda a nivel mundial, de estos microorganismos, con la esperanza de encontrar nuevos y mejores anti- bidticos. EDICION DEL NUMERO DE ESPECIES EN GENEROS SELECCIONADOS MANUAL DE BERGEY Bacillus Actinomyces Pseudomonas Escherichia Streptomyces 1.2 (1923) 75 64 20 22 0 28 (1925) 75 64 20 2 0 3.9 (1930) 93 70 31 29 ° 42 (1934) 93 70 a 2 0 5.» (1939) % 62 31 2 0 6 (1948) 33 2 148 3 B 7.8 (1957) 25 3 149 4 149 82 (1974) 22 5 29 1 a5 Una reduocién del nimero de especies dentro de un género esti ilustrada por Escherichia (Tabla 3-2). Las cuatro primeras ediciones del Bergey's Manual daban una lista de mas de 20 especies; la octava slo tiene una. Esto refieja la valoracién de las caracteristicas que justifican que un grupo se divida en varias especies. Un cambio asociado a la taxonomia de los protozoos se muestra en la fi- gura 3-1, Con los protozoos, a diferencia de las bacterias, los datos pueden obtenerse a partir de muestras fésiles, asi como de organismos vivos. Esto ¢s posible a causa de su mayor tamafio y de la naturaleza de sus esqueletos. Las muestras fosilizadas proporcionan un registro de especies que existieron en tiempos pasados. Los datos presentados en la Fig. 3-1 revelan que ha sido descubierto un gran mimero de nuevos protozoos desde el comienzo de este siglo. Un gran nimero de especies nuevas han sido identificadas tanto en fosiles como en formas vivas. Los protozodlogos piensan que probablemente hay todavia cientos de miles de especies que estan sin descubrir. En conse- cuencia, a medida que se van descubriendo nuevos microorganismos, los esquemas de clasificacién necesitan ser modificados para poderlos acomodar.Resumen y perspectivas Palabras clave Preguntas 48 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA El tema de Ia clasificacién microbiana tiene una larga historia y a lo largo de Jos afios se han propuesto muchos sistemas taxonémicos. Un buen sistema de taxonomia microbiana es esencial para organizar la ciencia de la microbiolo- gia. La ciencia no es simplemente una coleccién de hechos variados y mezclados; es la organizacién ¢ interpretacin de estos hechos dentro de un sistema que pone de manifiesto relaciones entre las varias categorias y asi sucede con la taxonomia microbiana. Un buen sistema de (axonomia debe reducir la confusion y establecer orden. Desde un punto de vista muy pritctico, los esquemas de clasificacién proporcionan un método para apren- der simulténeamente las principales caracteristicas del género a que pertene- con. Por ejemplo. el Bergey's Manual (1974) describe 48 especies del género Bacillus y 61 especies del género Clostridium. Ambos géneros pertenecen a la familia Bacillaceae. Si usted aprende los criterios en los que se basa este taxon, aprender al mismo tiempo algunas de las principales caracteristicas de 109 especies de bacterias. La taxonomia microbiana es un campo dindmico mas que estatico. Continiian siendo descubiertos nuevos microorganismos y se va disponiendo de nuevos conocimientos acerea de los microorganismos ya clasificados. La informacién nueva mas prometedora de que se va disponiendo procede de un anilisis del DNA de la célula microbiana. Esta informacion es extremada- mente importante y valiosa para determinar la validez de grupos taxonémi- cos. Ademas, el uso creciente de la taxonomia numérica © por computadora, favoreceri’ una mayor objetividad en el establecimiento de grupos taxo- némicos. clasificacion taxon, especie taxonomia género taxonomia genética nomenclatura taxonomia numérica sistema binario de nomenclatura 1. ;Cual es el significado de un cédigo internacional de nomenclatura? 2. {Por qué es esencial clasificar a los microorganismos? ;Qué problemas especiales surgen en la clasificacién de los microorganismos? 3. Cite varias categorias taxonémicas de microorganismos y defina cada taxon. 4. El Bergey's Manual of Determinative Bacteriology esta ahora en su octava edicién. {Cual es la principal diferencia entre esta titima edicién y las primeras ediciones? 5, Se est acumulando considerable cantidad de conocimientos sobre genéti- ca bacteriana. {Como puede afectar esto a los esquemas de clasificacién existentes? {Por qué? 6. {En qué difiere el concepto de especie entre los organismos proc: del concepto entre organismos eucaristicos? Expliquelo.CLASIFICACION Y DENOMINACION DE LOS MICROORGANISMOS 49 7, Se describe la taxonomia numérica como un sistema de clasiticacion objetivo en lugar de subjetivo. {Cuil es la base de esta afirmacion? 8. Cite ejemplos de algunos nombres comunes usados para microorganis- mos. {Cual es la razén de tener nombres comunes? 9. {Cuil es la diferencia entre las dos palabras siguientes segiin se escriban bacilo 0 Bacillus?ESQUEMA: METODOS EN MICROBIOLOGIA Microscopios y microscopia Microscopia de campo claro / Microscopia de campo oscuro / Micrascopia de fluorescencia / Microscopia de contraste de fases / Microscopia electronica Preparaciones para el examen por microscopia éptica Las técnicas de montaje himedo y de gota pendiente / Técnicas de tincion Técnicas de cultivo puro Cultivo y aislamiento de cultivos puros / Mantenimiento y conservacién de cultivos puros ‘Técnicas para caracterizar a los microorganismos Resumen y perspectivas Se ha dicho que la microbiologia es una ciencia definida mas por las técnicas que utiliza, que por el contenido de sus estudios. Estas técnicas son muchas y en su aplicacién se utilizan muchos instrumentos de laboratorio. ‘Los microorganismos se estudian en el Laboratorio con muchas finalidades. El grado de detalle con el que se estudia a los microorganismos depende de la finalidad de su examen en el laboratorio, Por ejemplo, el microbidlogo puede querer determinar solamente los tipos o tipo principal de microoganismos que hay en una muestra, es decir, hongos, bacterias o ambos. O bien el microbidlo- 20 tiene que identificar cada una de las especies que hay en una muestra tomada de un paciente, para asi proporcionar informacién que ayude al diagnéstico de una enfermedad, en cuyo caso el microbidlogo debe examinar las carac- teristicas del microorganismo con mucho detalle. O bien, veamos atin otro ejemplo, el microbiélogo desea determinar con exactitud en qué forma se realiza cierto proceso biol6gico fundamental, por ejemplo, la sintesis de una proteina en una célula microbiana. Se dispone de técnicas para determinar el tamafio, la forma y la estructura de las células individuales, asi como para saber como se agrupan las células. Existen procedimientos para crecer (cultivar) microorganismos en el laborato- rio. Algunos de estos procedimientos requieren condiciones muy especiales, tales como la ausencia total de oxigeno libre. Se han realizado grandes avances en la dotacién de instrumentos y aparatos para el laboratorio de microbiologia, desde ef comienzo de Jos afios 1900. Los instrumentos utilizados actualmente pueden, por ejemplo, identificar con gran detalle la composicién quimicade una célula microbiana, asi como los compuestos quimicos que produce una celula. 50Microscopios y microscopia Microscopia de campo claro METODOS EN MICROBIOLOGIA 51 En este capitulo vamos a examinar algunos procedimientos de laboratorio que usan los microbidlogos para estudiar a los microorganismos. Vamos a hacer hincapié en la microscopia y los métodos microsc6picos El microscopio, el instrumento mas frecuentemente utilizado y el mas util en un laboratorio de microbiologia, proporciona la amplificacién 0 agrandamiento aparente que nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista. Los microscopios permiten una amplia gama de amplificaciones, desde cien veces a cientos de miles de veces. Las dos categorias de microscopios disponibles son los microscopios épticos (con luz) y los microscopios electrénicos. Estas categorias difieren en el principio basico en que se funda la amplificacién. Los microscopios dpticos, todos los cuales utilizan un sistema de lentes épticas, comprenden los micros- copios de 1) campo claro, 2) campo oscuro, 3) fluorescencia y 4) contraste de fases. Los microscopios electronicos, como su nombre indica, emplean haces de electrones en lugar de ondas de luz, para producir una imagen ampliada Al iniciarse el estudiante, debe realizar la mayoria de sus observaciones, si no todas, con el microscopio de campo claro, que es el instrumento mas, ampliamente utilizado para el trabajo microscépico de rutina. Los otros tipos de microscopia son utilizados en investigacién en procedimientos usa- dos en el laboratorio de microbiologia para diagnésticos y para otros fines especiales. Cada tipo es especialmente til para el examen de alguna caracte- ristica morfologica especifica. tal como se expone mas adelante en este apitulo En la microscopia de campo claro, el campo microscépico o area observada esta brillantemente iluminada y los objetos en estudio aparecen mas oscuros que el fondo. La Fig. 4-1 muestra las partes principales de un tipico micros- copio de campo claro y la trayectoria que siguen los rayos de luz para producir la amplificacién del objeto. Generalmente, los microscopios de este tipo producen un aumento util maximo de unos 1.000 diimetros. Con algunas modificaciones que incluyen el uso de oculares mas potentes, este aumento puede ampliarse. Sin embargo, una amplificacién de 1,000 a 2.000 didmetros es el limite de amplificacién util que se puede obtener con un instrumento asi Lentes del microscopio. Los microscopios como el que se muestra en la fi- gura 4-1 son microscopios compuestos. La amplificacién se logra mediante el uso de sistemas de lentes a diferencia del microscopio simple como el de Leeu- wenhoek, que utilizaba lentes tnicas. Como puede verse en la Fig. 41B, hay lentes presentes en el condensador, el(los) objetivo(s) y el ocular. La lente condensador enfoca un cono de luz sobre el campo donde se sitia la muestra. Algunos de los rayos de luz de este cono de luz pasan directamente a la lente objetivo para formar el fondo de luz o campo claro, Los rayos de Juz que chocan con los objetos (microorganismos) que hay en la muestra y se «curvan» son conducidos al foco por la lente objetivo para formar una imagen del objeto. La imagen es ampliada por la lente ocular. Asi pues, es elFigura 4-1. Un modemo microscopio 6ptico compuesto. (A) Identificacién de fas partes. {B) Esquema de un corte de un microscopio mostrando las partes Opticas y la trayectoria de la tur, Objetivos. Platina para la muestra ~Tornilo de ajusto ara la patina Condensador — —"Tomillo de entoque fino Torito do enfoque grosero Estativo con luz incorporada sistema de lentes objetivo el que proporciona el aumento inicial, que luego se incrementa gracias al sistema de lentes ocular. Objetivos del microseopio. Los microscopios comiinmente utilizados en mi- crobiologia estin usualmente equipados con tres objetivos, cada uno de los cuales proporciona distinto grado de aumento, que van montados en una plataforma denominada revélver, la cual puede girar para poner uno de ellos en linea con el condensador. El aumento total que se puede obtener con cada uno de estos objetivos se determina multiplicando el poder de amplificacién del objetivo por el poder de amplificacién del ocular, que generalmente es de 10 veces (x 10). DESIGNACION AMPLIFICACION AMPLIFICACION —_ AMPLIFICACION| DEL OBJETIVO DEL OBJETIVO DEL OCULAR. TOTAL Bajo poder 10 10 100 Elevado poder 40 10 400 (alto seco) De inmersion 100 10 1000 en aceite El objetivo de inmersién en aceite, se designa asi porque se coloca una gota de aceite sobre Ia preparacién que Hleva la muestra y el objetivo introduce en el aceite. La muestra se enfoca cuando estén en contacto la preparacién, el aceite y la lente frontal del objetivo. El aceite permite que entre mas luz en el objetivo. Como el objetivo de inmersion en aceite 82Microscopia de campo oscuro METODOS EN MICROBIOLOGIA 53 proporciona la ampliacién mas alta, se utiliza generalmente para el examen microscépico de células procariéticas. Se usa comunmente para el examen mieroseépico de células eucarioticas. Hay que tener sumo cuidado al enfocar con un objetivo de inmersion porque la muestra queda enfocada cuando la lente frontal del objetivo esté muy cerca de la superficie de la preparacién. Se puede estropear la lente objetivo o se puede romper el cubreobjetos. si no se tiene mucho cuidado. Poder de resolucién. EI aumento iitil de un microscopio esti limitado por el poder de resolucién, que es la capacidad de producir imagenes distintas de dos puntos adyacentes (puntos significa aqui dos objetos o detalles de un objeto). El poder de resolucién de un microscopio dptico esta determinado por la longitud de onda de la luz y por una propiedad del objetivo y de la lente condensador. conocida como apertura numérica (AN). El poder de resolucion de un microscopio éptico se calcula utilizando la siguiente formula Longitud de onda de la luz Poder de resolucion = - order de resolucton bjetivo + AN del condensador ANG A partir de esto, se puede ver que el poder de resolucién puede aumentarse bien sea disminuyendo la longitud de onda de la luz, bien sea aumentando la AN. La escala de luz visible esta entre 400 y 700 nm. Del mismo modo, el grado en que pueden alterarse los objetivos del microscopio es limitado: la maxima AN para el objetivo de luz en seco es aproximadamente de 0,85 y para el de inmersién en aceite es ligeramente superior (1.2 a 1.4) Para ilustrar esto mejor, pensemos que la longitud de onda que estamos utilizando es 0,55 im. Esta longitud de onda puede seleccionarse utilizando un filtro verde. El objetivo de inmersién en aceite utilizado tiene una AN de 1,25 y el condensador una AN de 0.9. Sustituyendo estos valores en la ecuacién arriba indicada. tenemos que: Poder de resolucién = 135 Un poder de resolucién de 0,255 wn significa que si dos puntos estin separados menos de 0,255 jim, aparecern como un solo punto. Deben estar separados mas de 0,255 um para aparecer como dos objetos distintos, Un aumento en exceso del poder de resolucién, no desempefia ninguna funcion “itl, La microscopia de campo oscuro se realiza con el mismo tipo de microscopio utilizado para la microscopia en campo claro, a excepcién de que va equipa- do con un condensador de campo oscuro, con una apertura numérica baja Esta clase de condensador dirige los rayos de luz dentro del campo de la muestra, formando un Angulo tal que s6lo los rayos que chocan contra el objeto que hay en el campo de la muestra son refractados (curvados) y penetran en el objetivo, tal como se indica en la Fig, 4-2. Asi, el objeto queda brillantemente iluminado y destaca sobre el fondo oscuro (campo oscuro) como se muestra en la Fig, 4-3. La microscopia de campo oscuro es especial-Figura 4-3. Micrografias fen campo oscuro. de Treponema pallidum, el agente causal de la sifilis, Obsérvese la naturaleza de las espirales y Ia longitud de cada organismo. (Contesia de la American Society of Microbiology, LS 327) Cc) Célula bacteriona 54 INTRODUCCION 4 LA MICROBIOLOGIA t Figura 4-2. Objetivo Representacion esquematica de la microscopie de campo oscuro. Al bloquear una Cubrctnes — poretin de los rays de uz condensador, el anillo del Ponsobietos campo oscuro permite que s6lo esos rayos de luz que choquen con un objeto colocado sobre e| = -—Aaillo de campo pontaobjetos, entven on el a caaaTt ae objetivo, Asi los objetos tft {mieroorganismos) quedan Rayos de tur iuminados en un campo microscopico que de otro modo es oscuro. Objeto (icroorganismo) ‘que hay en la muestra Platina Condensador Figura 4-4. Microscopia y técnica de tincién de fluorescencia. (A) Técnica de tincién directa con anticuerpos fluorescentes, Cuando una bacteria se incuba con un anticuerpo especifico cconjugado (combinado) con un colorante fluorescente, el anticuerpo-colorante cubriré la superficie de la célula, La técnica se realiza sobre un portaabjetos; el exceso de colorante fluorescente-anticuerpo es lavado y la proparacién so examina por microscopia con luz ultravioleta. La célula bacteriana debe aparecer brillante, como resultado de la fluorescencia causada por Ia iluminacién ultravioleta sobre la célula bacteriana recubierta de colorante. Las Células que no estén recubiertas por el colorante no fluoresceran y por tanto no son visibles por esta ténica. (B) Microfotografia de una preparacién de Proteus mirabilis tenido con Un colorante fluorescente, tal como se describe més arriba. (Contesia de Judith Hoeninger, FM. Clinits y EA. Clinits. J. Bacteriol. $8:226, 1969.) a+ : ayy oN r Colorante fluorescent ee con el anticuerpo recubierto, = B ‘de colorantefluorescente +Microscopia de fluorescencia Microscopia de contraste de fases METODOS EN MICROBIOLOGIA 55 Figura 4-6. Microscopia de contraste de fases comparada con microscopia de campo claro y de campo oscuro. Puede verse la misma muestra de protoz0o, tal como aparece: segiin cada método: (A) contraste de fases; (B) campo oscuro; (C) campo claro. (Cortesia de O. W. Richards, Research Department, American Optical Company.) mente valiosa, como explicaremos luego, para el examen de microorganis- mos vivos. Es una técnica itll para la identificacion de la bacteria que produce la sifilis La microscopia de fluorescencia se ha convertido en un procedimiento importante y muy utilizado en el laboratorio hospitalario 0 clinico. Se usa para examinar muestras que han sido tefiidas con colorantes de fluorocromo, y permite la identificacién rapida de microorganismos, Estos colorantes absorben energia de longitudes de onda cortas, invisibles, pero emiten ondas, de longitudes de onda mayores y visibles. Estos materiales se denominan fluorescentes y el fendmeno fluorescencia. Este principio ha sido incorporado a técnicas que permiten identificar especificamente a los microorganismos por observacién microscépica directa (ver Fig. 4-4). Los procedimientos de laboratorio implicados pueden realizarse con mucha rapidez. Por ejemplo, si un paciente tiene una lesion que se supone que est causada por la bacteria de la sifilis, se puede examinar microscépicamente fluido de Ia lesion, me- inte lo que se denomina técnica del anticuerpo-fluoresceina. La bacteria de la sifilis, si esta presente, puede ser identificada positivamente por este procedimiento La microscopia de contraste de fases es un tipo de microscopia dptica que permite un mayor contraste entre sustancias de diferente grosor o de diferen- te indice de refraccién. Esto se logra mediante el uso de un condensador y un objetivo especiales que controlan la iluminacién del objeto, de manera que acentia las ligeras diferencias en el espesor o en los indices de refraccién de las estructuras celulares. Las diferencias se revelan en forma de distintos grados de brillo o de oscuridad (mejor contraste), tal como se muestra en la 4-5. Con esta técnica se pueden localizar estructuras, dentro de célulasFigura 4-6. Microgratia electronica de transmision (TEM) de Escherichia colt (108.000). EI recuadro incorporado es una microfotografia éptica del mismo organismo. (Cortesta de |. D. J. Burdette y RG. E Munay. J. Bacteriol. 119:1039, 1974.) Microscopia electronica 56 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA sin tefir, que no son visibles en kt microscopia de campo claro. Como veremos mas adelante en este capitulo, con frecuencia se tifte a los microor- ganismos para hacerlos mas fitcilmente visibles. La Tabla 4-1 compara los diversos tipos de microscopia. La microscopia electronica proporciona amplificaciones utiles enormemente mayores que las que se pueden obtener por microscopia dptica. Es posible lograr esto gracias al mayor poder de resolucién obtenible a partir de las, muy cortas longitudes de onda de los haces de electrones que se utilizan en lugar de luz. Los haces de electrones tienen longitudes de onda del orden de 0,005 a 0.0003 am, muy cortas en comparacién con las longitudes de onda de Ja luz visible utilizada en microscopia éptica. La extremadamente corta Jongitud de onda del haz de electrones permite aleanzar poderes de resolu- cién varios cientos de veces mas elevados que los obtenibles en microscopia Optica. Utilizando la microscopia electronica es posible resolver objetos que caen dentro del rango de los 0,003 im. Las amplificaciones finales que se acercan al 1.000.000 de veces se pueden lograr al ampliar la imagen fotogra- fiada. En la Fig, 4-6 se muestra una comparacién de una microgratia hecha con el microscopio éptico y una micrograffa obtenida utilizando el microsco- pio electrénico.Tabla 4-1. Comparacion de rentes tipos de microscopia METODOS EN MICROBIOLOGIA 57 SSS ‘AMPLIFICACION TIPO DE UTIL ASPECTO MICROSCOPIO MAXIMA DE LA MUESTRA _ APLICACIONES UTILES Campo claro Tefiida o sin tefir; Para las caracteristicas las bacterias gene- _morfoldgicas groseras. ralmente tefiidas de bacterias, levaduras, y aparecen del hongos filamentosos color det colorante Campo oscuro Generalmente sin Para microorganismos tefir, aparece (Por ejemplo, las billante 0 «ilumi- _bacterias llamadas nada» en un campo —espiroquetas) que de otro modo exhiben alguna carac- 1,000-2.000 °8euro teristica morfologica especial en estado vivo y en suspension en un fluido Fluorescencia Brillante y colo- Técnicas de diagnés- reada; el colores _tico en las que el el det colorante colorante fluorescente fluorescente ayuda a la identifica- cién del microorga- niismo Contraste Varios grados de Para el examen de de fases eoscuridady estructuras celulares de células vivas de los microorganismos mas grandes como levaduras, algas, protozoos y algunas bacterias, Electrénico 200,000-400.000 Brillante sobre Examen de objetos muy una pantalla equefios, virus y la fluorescente ultraestructura de células microbianas eee een cence eee Para la microscopia electronica, la muestra que se va a examinar se prepara en forma de una finisima pelicula seca sobre pequeiias rejillas y se introduce en el instrumento en un punto que queda entre el condensador magnético y el objetivo magnético (en microscopia electrénica no se usan sistemas dpticos de vidrio), que son comparables al condensador y el objet vo del microscopio éptico. La imagen ampliada se visualiza sobre una Pantalla fluorescente o se registra sobre una pelicula fotogritica utilizando una camara que va incorporada al instrumento (Fig. 4-7). Se han desarrollado muchas técnicas para el examen de los microorganis- mos por microscopia electronica. Entre ellas figuran Jos nuevos métodos de tinci6n, los métodos para hacer cortes finos de las células microbianas, que68 INTRODUCCION ‘Microscopie optico (de ariba abajo) a) \ /i\ Figura 4-7. Representacion esquematica de los sistemas de produccion de la imagen en (A) un ‘microscopio ptico y (B) fen un microscopio, eleotionico de transmision, (Tomado de L. A. Bulla Jr . St. Julian, C. W. Hesseltine y F. L. Baker, ‘Scanning Electron Microscopy, in Methods in ‘Microbiology, vol. 8. Academic Press. New York, 1973,) (C) Un microscopio celectrénico de alta tesolucion (Cortesia de Hitachi-Perkin-Elmer.) A LA MICROBIOLOGIA Microscopie elecwénico ‘de vansmision tvs} Oe. @ () Par eres BG Fuente de luz Caiton do alectrones Lente condensador Lente condensador — Primera apertura Muestra Muestra Lente objetivo Lente objetivo Lente de proyeccién 4 |— Lonte de proyeccion ‘Apertura final Imagen final Imagen finalPreparaciones para el examen por microscopia éptica Las técnicas de montaje humedo y de gota pendiente METODOS EN MICROBIOLOGIA 59 permitan su observacién microscépica, y las técnicas con radiactivos. Estos procedimientos son aplicables a la microscopia electrénica de transmisién (TEM). En esta clase de microscopia, el haz de electrones pasa a través de la muestra y la dispersién de estos electrones da lugar a la imagen. Hacia 1960 se desarrollé una modificacién conocida como microscopia electrénica de barrido (scanning) (SEM). Este procedimiento expone la muestra a un haz de electrones, de manera que permite obtener vistas tridimensionales de la superficie de las células (ver Fig. 4-8) Dos técnicas generales son las que se emplean para proporcionar material 0 muestras para la observacién microscépica. Una es la suspensin de los organismos en un liquido. La otra utiliza peliculas 0 frotis secos, fijados y teftidos de la muestra. La gota pendiente o las preparaciones hiimedas permiten examinar organis- mos vivos suspendidos en un fluido. Las preparaciones himedas se hacen colocando una gota del fluido que contiene el organismo sobre una kimina de vidrio y cubrigndola con una fina pieza de vidrio denominada cubreobje- tos. Para reducir la tasa de evaporacion y eliminar corrientes de aire. general- mente se rodea la gota con vaselina o un material similar que proporciona un cierre entre el portaobjetos y el cubreobjetos. Para las preparaciones en gota pendiente se dispone de portaobjetos especiales con una concavidad (ver Fig, 49). Las preparaciones himedas 0 en gota pendiente son especialmente litiles cuando la morfologia del organismo que se va a examinar puede Figura 4-8. Micrografias electrnicas de barido (scanning) (SEM). (A) SEM de Treponema pallidum. Los treponeras fueron incubades con células de testculo de conejo 1 luego examinades por SEM. Se observ que un gran numero de treponemas quedaban Unidos a los células de testiculo de conejo, (Cortesia de T. J. Fitageald, P. Cleveland. R C. Johnson, J. N. Miler y J.A, Stokes. J. Bacteriol. 130:7333, 1977,) (B) SEM de la flora intestinal de la cucarache americana. (Cortesia do J. W. Bracke, D. L. Cruden, A, J Markovetz. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 13:115, 1978.)Figura 4-9. La técnica de la gota pendiente. (A) Con un palillo se hace un anillo de vaselina en torno a la depresion que hay en el portaobjetos. (B) Se coloca tuna gota de suspension microbiana en el centro de un cubreobjetos. (C) Se invierte el cubreobjetos y se coloca sobre Ia depresion del portaobjetos Técnicas de tincién 60 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Axilio. Gotita de suspension que Clad {de vaselina_contiene los mieroorganismos Ponsobjetos excavado cl) A 8 Gotita de suspensi6n que contiane los microorganismos Cubreobjetos Vesetina distorsionarse por un tratamiento con calor 0 con productos quimicos, 0 cuando los microorganismos son dificiles de tefir. Es también un método de eleccién cuando se trata de observar ciertos procesos bioldgicos tales como la movilidad o la reproduccién. Cuando se examinan las preparaciones himedas por microscopia de campo claro, ¢s extremadamente importante ajustar la fuente de luz de forma adecuada, Es posible disminuir la intensidad de la luz mediante la utilizacion de filtros especiales. La microscopia de campo oscuro y la de contraste de fases offecen una ventaja distinta para la observacién de células microbianas sin tefir, suspendidas en liquidos: proporcionan un mejor con- traste entre el microorganismo (0 alguna parte de él) y el material de fondo Esta técnica se utiliza en el laboratorio clinico de diagndstico, especialmente para el examen de muestras en las que estan suspendidos protozoos. Las Células de los protozoos son generalmente mayores que las de la mayoria de las bacterias y tienen una estructura interna mas elaborada. Estas estructuras © partes intracelulares son importantes para caracterizar las especies y pue- den ser observadas utilizando microscopia de campo oscuro o de contraste de fases. Se usan muchos compuestos orginicos coloreados (colorantes) para teftir microorganismos para su observacin microscépica. Se han desarrollado procedimientos de tincién para 1, Observar mejor el aspecto morfolégico grosero de los microorganismos 2. Identificar partes estructurales de las células de microorganismos. Ayudar a identificar y/o diferenciar organismos similares. Los principales pasos para preparar una muestra tefiida para su examen microscépico son: 1, Colocacién de un frotis una fina pelicula de la muestra sobre un por- taobjetos de vidrio. 2. Fijacién del frotis sobre el portaobjetos calentando, lo cual hace que los microorganismos se peguen al portaobjetos.Tabla 4-2. METODOS EN MICROBIOLOGIA 61 3. Aplicacién de un solo colorante (tincién simple) o de una serie de soluciones de colorantes 0 reactivos (tincién diferencial). Tincién simple. La coloracion de las bacterias 0 de otros organismos por aplicacién de una sola solucién de un colorante a una pelicula fijada, o frotis, se denomina tincién simple. La pelicula fijada se inunda con la solucién de! colorante durante un periodo de tiempo especificado, después del cual se lava la solucién con agua y se seca la preparacion con papel de filtro, Usualmente las células se tiften de forma uniforme. Sin embargo, con algunos organismos, y especialmente cuando el colorante es azul de metileno, algunos grinulos del interior de la célula aparecen mas intensamente teftidos que el resto de la célula ‘Tincién diferencial. Los procedimientos de tincién que ponen de manifiesto s entre células microbianas o entre partes de una célula microbiana se denominan ‘écnicas de tincién diferencial. Las técnicas de tincién diferen- cial implican usualmente la exposicion de las células a mas de una solucin de colorante o de reactivo. Tincién de Gram. Una de las técnicas de tincién diferencial para bacterias, mas importante y mas ampliamente utilizada, es la tincién de Gram. En este procedimiento la extensién de células previamente fijada se somete a las siguientes soluciones en el orden que se indica: cristal violeta, solucion de yodo, alcohol (un agente decolorante) y safranina u otro colorante de con- REACCION Y ASPECTO DE LAS BACTERIAS SOLUCIONES EN ELORDEN — DE SU APLICACION Gram-positivas Gram-negativas 1 Cristal violeta (CV) Las células se tiften Las células se tien de de violeta violeta 2 Solucién de iodo (I) Se forma un complejo __Se forma un complejo CV-Identrode las células. CV-I dentro de las Las células continuan —_—_células. Las células violetas continaan violetas. 3 Alcohol Las paredes celulares se Se extraen lipidos de las deshidratan, los poros _paredes celulares, los merman; la permeabilidad poros se agrandan y el de la pared celular y de complejo CV-1 es elimi- la membrana disminuye; nado de la célula; las el complejo CV-I no células quedan incoloras puede salir de las céiulas; las células permanecen color violeta 4 Safranina Las células no se afectan; Las células toman este permanecen de color colorante y se ponen de violeta color rojoTabla 4-3. Resumen de las preparaciones para el examen por ‘microscopia optica 62 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA TECNICA PREPARACION A. Preparacion himeda Una gota del fluido que y gota pendiente B. Procedimiento de tincion 1. Tincién simple 2. Tinciones diferenciales . Gram b. Acido resistente ° Giemsa a De esporas De cépsulas contiene los organismos sobre un cubreobjetos © sobre un portaobjetos La suspension de células se fija a un portaobjetos, generalmente por el calor El frotis se tifie con una sola solucién de colorante En el proceso de tincién se usan dos 0 més reac- tivos El colorante primario (cristal violeta) se aplica al frotis y luego se trata con reactivos y se hace una tinci6n de contraste con safranina El frotis se tife con fucsina fenicada, deco- lorada y tincion de contraste con azul de metileno Se aplica el colorante a un frotis de sangre © a peliculas de otras muestras El colorante primario (verde malaquita) se aplica calentando para que penetre en las esporas; las células vegetativas reciben coloracién de contraste con safranina Se tife el frotis después de un tratamiento con sulfato de cobre APLICACION” Estudio de la morfologia estructuras celulares inter- nas, movilidad o cambios celulares Varios procedimientos de tincién Muestra la forma, tamafio y ordenamiento de las células ‘Se pueden observar diferencias entre células © partes de células Caracteriza a las bacterias incluyéndolas en uno de dos grupos: 1. Gram-positivas —vio- leta oscuro 2 Gram negativas ~ rojas Separa a las bacterias Acido resistente, aquellas ‘que no se decoloran al aplicar la solucién acida (por ejemplo, las mico- bacterias de las que son decoloradas por el Acido. Permite observar protozoos en frotis de sangre; rickettsias (pequefias bacterias pardsitas) en ciertas células del hospe- dador; el material nuclear de las bacterias. Pueden verse endosporas en especies de Bacillus y Clostridium. La cépsula aparece como tuna zona clara que rodea a los organismos que la poseenTabla 4-3 (Continuacién) METODOS EN MICROBIOLOGIA 63 ET TECNICA PREPARACION APLICACION: f. De flagelos Un mordiente acta Observar flagelos en engrosando los flagelos —_bacterias. antes de ser tefiidos C, Tincién negativa La mezcla se mezcla con _ Estudio de la morfologia; tinta china y se extiende el procedimiento de tincién formando una pelicula _y los reactivos son muy fina suaves en su efecto sobre los microorganismos. Se lama tincion negativa porque los microorganismos no se tifien y se hacen visibles porque el fondo esté oscuro a * Las estructuras bacterianas @ las que se hace referencia estén descritas en el Cap. 5. traste adecuado. Las bacterias teftidas por el método de Gram caen dentro de dos grupos. Uno de ellos, el de las bacterias Gram-positivas, conservan el colorante cristal violeta y, por tanto, aparecen de color violeta oscuro. El otro grupo de las bacterias Gram-negativas pierden el cristal violeta al ser lavadas con el alcohol y al tefirse con el colorante de contraste safranina, que es rojo, aparecen de color rojo. Los pasos a seguir en este procedimiento y los resultados de cada estadio estan resumidos en la Tabla 4-2 {Por qué el procedimiento de tincion de Gram tifie de violeta a unas bacterias y de rojo a otras? La respuesta parece hallarse en diferencias existentes en la estructura quimica de su superficie. Veremos el mecanismo de esta reacci6n de coloracién en el Cap. 5, después de haber tenido oportu- nidad de aprendar mas cosas acerca de la constituci6n quimica de las células bacterianas. La técnica de tincién de Gram fue descrita por primera vez en una publicacién hecha en 1884 por el bacteriélogo danés Christian Gram. Gram desarrolld este método de tincién mientras buscaba un método para demos- trar la presencia de la bacteria neumococo en el tejido del pulmén de los pacientes que habian muerto de neumonia. Ademés, observd que algunas especies bacterianas podrian diferenciarse mediante este procedimiento de tincién, La tincién de Gram es todavia uno de los procedimientos mas amplia- mente utilizados para la caracterizacién de muchas bacterias. Es especial- mente valioso en el laboratorio de diagnéstico de los hospitales en donde la informacién obtenida a partir de una muestra teftida por el método de Gram puede dar ripidamente la clave del organismo que est causando una infec- cién Otras muchas tinciones diferenciales se utilizan ampliamente en micro- biologia. Estas y otros tipos de preparaciones microscépicas se resumen en la Tabla 4-3.Técnicas de cultivo puro Cultivo y aislamiento de cultivos puros Mantenimiento y conservacién de cultivos puros 64 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA La poblacién microbiana existente en nuestro entorno es grande y compleja Cientos de especies microbianas habitan normalmente en las distintas partes de nuestro cuerpo, incluidas la boca, el tracto intestinal y la piel. Estan presentes en niimeros extremadamente grandes. Por ejemplo, un simple estomudo puede dispersar miles de microorganismos, Un gramo de heces pucde contener millones de bacterias. Nuestro ambiente —aire, suelo y agua— alberga jgualmente toda una coleccién de microorganismos. Un estudio adecuado de los microorganismos que hay en estos habitats requiere técnicas que permitan conocer y ordenar la compleja poblacién mixta o aaltivo mixto, separdndole en sus distintas especies como cultivos puros. Un cultivo puro consta de una poblacién de células derivadas todas ellas de una sola célula parental. Los microorganismos se cultivan en el laboratorio sobre materiales nutritivos, denominados medios. Se dispone de una gran cantidad de medios y la clase gue se debe utilizar depende de muchos factores, uno de los cuales es la clase de microorganismo que se va a cultivar Supongamos que queremos aislar cultivos puros de las bacterias de nuestra boca. Empezamos por recoger saliva en una vasija estéril. Luego inoculamos, o sembramos, una muestra de saliva sobre un medio apropiado de manera que las células individuales queden localizadas sobre o dentro del medio, separadas unas de otras. El material que se inocula sobre el medio se denomina inéculo. Al inocular un medio del tipo del agar nutritivo por el método de siembra por estria en placa o por el método de siembra en masa de placa (Tabla 4-4), jas células quedan separadas individualmente. Durante la incubacién, las células microbianas individuales se reproducen tan rapida- mente que en 18 a 24 horas producen masas visibles de células, denominadas colonias. Una colonia es visible a simple vista, Cada colonia diferente es presumiblemente un cultive puro de una sola clase de microorganismo. S dos células microbianas procedentes del indculo original quedan muy cerca una de otra sobre e! medio de agar. las colonias que resultan de cada una de ellas pueden mezclarse 0 al menos juntarse y, por tanto, la masa de células observable no sera un cultivo puro: Un método mas directo para aislar microorganismos consiste en utilizar un equipo micromanipulador denominado ensayo microseépico para aislar una sola célula a partir de una suspensién de células. Por supuesto. este micromanipulador se usa en conjuncién con un microscopio Varias técnicas para el aistamiento de cultives puros, estan esquematiza- das en la Tabla 4-4 Una vez que un microorganismo ha sido aislado en cultivo puro, puede ser necesario mantener el cultivo en condiciones para que siga creciendo durante tun cierto periodo de tiempo. De hecho. Ia mayoria de los laboratorios mantienen una gran coleccién de tales cultivos, a los cuales se hace referencia frecuentemente como cultivos stock. La American Type Culture Collection (Coleccién americana de cultivos tipo), localizada en Washington, D. C., mantiene miles de especies de microorganismos, incluidos virus. Se dispone de un catilogo que ofrece en detalle la historia de cada cultivo. Fl Centre forMETODOS EN MICROBIOLOGIA 65 Tabla 4-4. Métodos para el aislamiento de cultivos puros de microorganismos TECNICA REPRESENTACION ESQUEMATICA Siembra en placa por estria El indculo se siembra sobre la superficie de un medio del tipo del agar nutrtivo, en una placa petri, haciendo estrias con una aguja enmangada, de la manera que se indica en el esquema 4 A. En aquellos lugares en donde las lineas estriadas queden suficientemente separadas creceran colonias aisladas, como se muestra sobre la placa en B. Extension en placa Se coloca una gota de inéculo en el centro de uns placa peti con un medio del tipo del agar nutritivo y utilizando un tubo do vidrio doblado se extiende el inéculo sobre la superficie del medio. Puede utilizarse la misma varilla de vidrio para inocular una segunda placa para asegurar una adecuada «dispersion» de las células. En algunas placas apareceran colonias aisladas. Siembra en masa en placa Paso 1: Un asa; se — > utiliza un alambre con C Un circulo en el extremo de la suspensién original es transferido a un tubo A (liquido estéril, medio ‘con agar enfriado). El tubo A se hace rodar entre las dos manos ppara lograr una meticu- — guspensign «BL | alg losa mezcla del inéculo —bacterana con el medio. Sehacen original transferencias similares de A a By de Ba. — Paso 2: Se vierte el contenido de cada tubo en una placa Petri € © Paso 3: Después de incubadas, se examinan las placas para ver si hay colonias aisladas. A partir de la placa que los tenga pueden aislarse cultivos puros de los microorganismos, al transferir una porcién de una colonia a un tubo de medio estéri re Paso 1 Paso 2 Paso 366 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Tabla 4-4 (Continvacién) TECNICA REPRESENTACION ESQUEMATICA Cultivo de enriquecimiento Para mejorar la probabilidad de aislar un organismo que posee una caracterstica fisiologica 0 bioquimica Unica, se puede sembrar por estria, _ G3) pasando el inéculo a través 3 de una serie de transferencias, Aislamiento de colonias sintmoliode une compostén Trseenl ec an mato snp enon (y condiciones de incubacién) ‘con el enuitrionten deseado rs que favorezcan el desarrollo del microorganismo deseado El procedimiento de enriqueci- miento aumenta en efecto la proporcién del organismo deseado en relacién con la que estaba presente en el indculo inicial. Aislamiento de una sola célula Microorgeniamo Mediante un micromanipulador 1 NL A tects tnoe se puede usar una micropipeta 1 fe ent para coger un solo microorganismo =| Puma dota de una suspension de células rae micropipeta en un liquido, mientras se examina la preparacion con el microscopio. La célula aislada es luego transferida aun medio estéril = Bacteria del tipo fn estudio Disease Control (Centro para el control de las enfermedades), en Atlanta Georgia, que forma parte del Servicio de Salud Publica de los Estados Unidos de América, es otra fuente de cultivos conocidos de microorganis- mos, especialmente de los que causan enfermedades. Como luego veremos. estos cultivos se utilizan con una gran variedad de finalidades en los labora~ torios de microbiologia de todo el mundo. Por ejemplo, cultivos conocidos de microorganismos (cultivos de referencia) procedentes del Centre for Di- sease Control son utilizados por los microbidlogos de los laboratorios clini- cos para evaluar sus procedimientos de laboratorio. Se utilizan muchos procedimientos para conservar y mantener cultivos de microorganismos. El método de eleccién depende de las muchas circunstan- cias asociadas a los cultivos. ;Se va a mantener el cultivo s6lo durante un corto periodo de tiempo (meses), 0 conviene mantenerlo indefinidamente (afios)? Para el mantenimiento durante corto tiempo, los cultivos pueden almacenarse a temperaturas de refrigeracién [de 0 a 10 °C (32 a 55 °F)|: para el mantenimiento durante largo tiempo se almacenan en nitrégeno liquide a = 196 °C (—320 °F), También pueden ser deshidratados en un tubo, cuandoTabla 4-5. Métodos para caracterizar METODOS EN MICROBIOLOGIA 67 CARACTERISTICAS PRINCIPALES Morfolégicas Nutricionales De cultivo Metabélicos Composicién quimica Composicién antigénica Patogénicas METODOS Observacién de muestras por microscopia Optica y electronica, bien tefiidas o sin tefir. Las técnicas de microscopia electré- nica permiten el examen de cortes ultrafinos (secciones) de células microbianas. Determinacién de tas sustancias quimicas especificas y de las condiciones fisicas (temperatura, luz, gases) que se nece- sitan para permitir el desarrollo de! microorganismo. Determinacién del aspecto del crecimiento microbiano sobre varios tipos de medios de laboratorio, tanto liquides como sélidos. Identificacién y medida de los cambios quimicos realizados or los microorganismos. Algunas pruebas son faciles de realizar y simplemente proporcionan una respuesta de si © no acerca de las causas de cambios quimicos en una sus- tancia en particular, por ejemplo si cambian los carbohidratos @ Acidos. En el otro extremo hay métodos que permiten la identificacién de la mayoria de los compuestos quimicos implicados en cualquier proceso metabélico; esto permite econstruit paso 2 paso cémo realizan estos cambios los microorganismos. Veremos ejemplos de esto en los Capi- tulos 14 15. Determinacién de la constitucién quimica de los componentes celulares. Se dispone de técnicas para romper las células y fecuperar (aislat) de la mezcla que resulta, componentes celulares especificos tales como fragmentos de pared celular, ‘material nuclear y membranas. Existen procedimientos dis- Ponibles por los que se puede determinar la estructura quimica de cada componente. La caracterizacién de los microorganismos, particularmente bacterias y virus, mediante el estudio de antigenos, sustancias quimicas presentes sobre su superficie. Los antigenos son sustancias quimicas (anticuerpos) que pueden ser identi- ficadas por procedimientos de laboratorio. Antigenos y anti- cuerpos forman parte del complejo sistema inmunolégico. La aplicacién de procedimientos antigeno-anticuerpo en microbiologia se explica en el Cap. 26, La determinaci6n del potencial productor de enfermedades de un cultivo microbiano se realiza mediante la inoculacién de animales o vegetales con cultivos puros del micro- organismo.Figura 4-10. Proceso de Vioflizacion para la conservacion de cultivos. (A) Pequettos viales taponades con algodén y que contienen suspensiones congeladas de los organismos se colocan en un frasco de vidtio que va unido a un condensador. Este se conecta a una bomba de alto vacio y este sistema deshidrata los cultivos, (B) Después de que los ‘oultivos han sido deshidratados se sacan los viales, se colocan individualmente en tubos mayores, se taponan con asbesto y se cierran al vacio. (Cortesia de la American Type Culture Collection.) Técnicas para caracterizar a los microorganismos 68 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA Come hermético —__ ‘esmeriindo. Proteccién de asbesto {aisla durante fi Valea Condensdor ‘icons | suspension. | ing oe Tubo externo. sine Tr Frasco de vidio Vasija de Dewar (taponado con algodén) (es ieeeonae a : estan congelados. y cerrados herméticamente en el vacio. Este proceso se denomina liofilizacién y est esquematizado en la Fig. 4-10. Una vez que se ha obtenido un cultivo puro de un microorganismo, se esta en disposicién de realizar una serie de examenes de laboratorio, que contri- buyen con informacién acerca del microorganismo. La cuantia de pruebas de laboratorio esta determinada por el tipo de cuestiones que se quieran resol- ver. Tal vez se quiera saber si el cultivo en examen corresponde a una nueva clase de microorganismo 0 a una que ya se conoce. En ambos casos es preciso caracterizar ampliamente el cultivo. Si se estd interesado en encontrar un microorganismo con una capacidad determinada como, por ejemplo, la de degradar ripidamente la celulosa, en este caso las pruebas a realizar deben centrarse en ver si el cultivo degrada la celulosa, y. en caso positivo, a qué velocidad lo realiza. Cualesquiera que sean los objetivos, las caracteristi- cas que deben buscarse y las pruebas que deben realizarse en las distintas reas estin resumidas en la Tabla 4-5. Algunas de estas pruebas son relativa- mente faciles de realizar. Pueden ser sencillas observaciones visualles y des- cripciones, Otras son mis completas; por ejemplo, puede ser necesario determinar no s6lo cuales son los cambios quimicos que produce el microor- ganismo, sino también cdmo realiza estos cambios. Esto exige la utilizacién de téenicas bioquimicas que han sido desarrolladas especificamente para identificar productos del metabolismo. El hecho es que algunos aspectos de la microbiologia dependen en alto grado de la metodologia bioquimica Los problemas que sufrimos actualmente acerca de ciertos aspectos de la taxonomia microbiana pueden ser atribuidos a nuestro incompleto conoci- miento de ciertos grupos de microorganismos, Con un conocimiento mas completo y detallado acerca de las especies microbianas, derivado de una serie de pruebas, sera posible desarrollar sistemas de clasificacion mas satis- factoriosResumen y Perspectivas Palabras clave Preguntas METODOS EN MICROBIOLOGIA 69 Los estudios de laboratorio de los microorganismos se realizan para una gran variedad de finalidades. Por ejemplo, puede uno estar interesado en saber cudntos microbios hay en una muestra, Se puede querer conocer la identidad exacta de cada uno de los distintos microorganismos presentes. O puede uno estar interesado en alguno de los procesos biolégicos fundamenta- les, tal como le lleva a cabo un microorganismo. En general, los métodos de que dispone el microbidlogo permiten la caracterizacion de los microorganis- mos como sigue: caracteristicas morfolégicas, requerimientos nutricionales, caracteristicas de su cultivo, caracteristicas metabolicas, composicién quimi- ca y patogenicidad. Se siguen desarrollando nuevas técnicas y se dispone de nuevos equipos de laboratorio con los cuales se puede ir obteniendo informa- cién mas detallada y especifica acerca de cada caracteristica de un microor- ganismo. Del mismo modo que la microscopia electrénica abrié una nueva dimensién en la morfologia microbiana, los avanees en las técnicas bioquimi- cas han dado como resultado un conocimiento més preciso y detallado de los procesos quimicos llevados a cabo por los microorganismos. Contintia mejorando el equipo de los laboratorios de microbiologia y esto permite identificar caracteristicas especificas de los microorganismos con mayor detalle. Muchos procedimientos se han automatizado y los resultados son analizados de forma rutinaria en programas computerizados. apertura numérica microscopios épticos bacteria Gram-positiva patégenos bacteria Gram-negativa poder de resolucién coleccién de cultivos stock técnica de siembra cultivos mixtos en masa de placa cultivos puros técnica de siembra fluorescencia en placa por estria indculo tincién de Gram liofilizacion tincién diferencial medios tincién simple metabolismo {Cuiles son los aumentos usuales obtenibles con los microscopios épti- os utilizando diferentes objetivos? {Qué determina el limite maximo de amplificacién itil? Compare el principio basico de amplificacién del microscopio éptico con el del microscopio clectrénico. Compare los poderes de resolucion que se pueden obtener con el microscopio electrénico y con el microscopic Sptico. {Qué explica esta diferencia? 3. ¢Cual es la funcién del aceite cuando se utiliza con el objetivo de inmersion? 4, Imagine que una célula de levadura es examinada por microscopia a) de campo claro, b) de contraste de fases y ¢) de campo oscuro, Describa las diferencias que apareceran probablemente en el aspecto de la célula al ser visualizada por cada uno de estos métodos. 2Referencias para la Parte Uno 70 INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA 5. Dé un ejemplo de una situacién en la que seria preferible examinar una muestra por una técnica de preparacién hiimeda o en gota pendiente, en lugar de por tincién 6. {Por qué es tan ampliamente utilizada la tincién de Gram en microbio- logia? 7. Distinga. con ejemplos, la diferencia entre una tincién simple y una tincién diferencial. 8. {Cual es la diferenc aislan cultivos puros? 9. Imagine que tiene un cultivo que se supone que es un cultivo puro y que alguien le pregunta si es realmente un cultivo puro. {Qué clase de pruebas u observaciones podria usted hacer para tener evidencia que confirme que se trata de un cultivo puro? 10. Deseriba qué clases de datos o de informacién de laboratorio deben obtenerse con el fin de caracterizar microorganismos en relacion con cada una de las siguientes propiedades: entre un cultivo puro y un cultivo mixto? Como se morfoldgicas de cultivo _composicién quimica nutricionales —_bioquimica _patogénicas Buchanan. R. E., y N. E. Gibbons (eds.): Bergey's Manuat of Determrinative Bucterio- logy, 8 ed., Williams & Wilkins, Baltimore, 1974, Este volumen es un libro esténdar de referencia internacional sobre la clasificacién y taxonomia de las bacterias. Se describe cada uno de las principales grupos de bacterias y las especies reconocidas estén caracterizadas en desalle Bulloch, W.: The History of Bacteriology, Oxford University Press. London, 1938. La historia con més autoridad y més completa del desarrollo de la bacteriologia: incluye ua amplia bibliografia y una larga lista de notas biogrificas cle algunos de los primeros que trahajaron en bacteriologia. Clark, Paul F.: Pioneer Microbiologists of America, University of Wisconsin Press Madison, 1961. Las personas que se citan hicieron de la microbiologia una ciencia en Estados Unidos. El estilo ameno del autor hace que sea un libro entretenido yt la tez que informative, » su profude conocimiento de mucho de lo que escribe akade al libro wn toque personal. Collins, C. H.. y P.M. Lyne: Microbiological Methods, 42 ed., Butterworth’s Boston, 1976. Como indica el titulo, este volunen contiene procedimientos para la realizacion de una aplia variedad de téenicas microbiolégicas. Dowling. Harry F.: Fighting Infections, Conquest of the Twentieth Century, Harvard University Press, Cambridge, Mass., 1977. Es la historia del progreso hecho durante este siglo en el control de las enfermedades infecciovas. Es una interescnte historia escrita del diagndstico, prevencién y tratamiento de las enfermedades infecciosay y lay fuerzas econdmicas y sociales que lo hicieron posible Gerhardt, P. (ed.): Manual of Methods for General Bacteriology, American Society for Microbiology, Washington. D. C.. 1980. Cubre amplianente tos procedimicntos generales utilizados en el laboratorio de microbiologia. Jennings, R. K., y R. F. Acker: The Protistan Kingdom, Van Nostrand Reinhold, New York, 1970. Este pequeto libro gue trata de los protistas y los virus es a la v informativo y ameno. Puede constituir un estimulo para proseguir el estudio tanto en estudiantes como en los que no lo son.METODOS EN MICROBIOLOGIA 71 Postgate, J.: Microbes and Man, Penguin, Baltimore, 1975. Una muy buena introduc- cién al mundo de los microorganismos. Se cubre especialmente el tema de tos ‘microbios presentes en nuestro ambiente, y, en particular, los cambios que llevan a cabo y que son importantes para nuestro bienestar. Entre los otros temas tratados ‘figuran los microbios en evolucién y el papel futuro de los microorganismos. Wilson, M. B.: The Science and Art of Basic Microscopy, American Society for Medical Technology, Bellaire, Texas, 1976. Este corto manual (61 pégs.) propor- cciona una explicacién «simple, concisa y prictica del microscopio y de cémo funciona,PARTE DOS PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS 5. Morfologia y estructura fina de las bacterias 6. Cultivo, reproduccién y crecimiento de las bacterias 7. Los principales grupos de bacteriasLa ciencia de la microbiologia tal como la conocemos hoy se basé inicialmente, en una amplia proporci6n, en el conocimiento y las técnicas adquiridas por el estudio de las bacterias. Esto se inicié en la era de Pasteur, cuando la importancia de las bacterias en la enfermedad y en nuestro entorno empezaba a ser conocida y valorada. Uno de los principales problemas a los que se enfrentaron los microbidlogos durante muchos afios fue el desarrollo de criterios que permitiesen distinguir claramente a las bacterias de los otros protistas. Esta situacion se clarificd enormemente a medida que fue llegando nueva informacion acerca de la estructura interna de las células microbianas. La Parte Dos proporciona una caracterizacion de algunas de las principales propiedades de las bacterias. Servira para entrar en contacto con la gran diversidad de tipos morfoldgicos y fisiolégicos de bacterias, todas las cuales son procariotas.ESQUEMA: MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS Morfologia grosera de las células bacterianas Tamatio / Forma / Ordenamiento Estructura fina de las células bacterianas Estructuras externas @ la pared celular / La pared celular / Estructuras internas @ la pared celular Protoplastos y esferoplastos Esporas Exosporas / Endosporas Resumen y perspectivas El conocimiento de la morfologia y de la estructura fina de las bacterias, fue adquirido en dos espacios de tiempo diferentes. Las observaciones hechas por Leeuwenhoek con su microscopio simple, revelaron el aspecto grosero de Jos microorganismos, incluidas las bacterias. Sus minuciosos dibujos de lo que hoy nosotros reconocemos como bacterias pusieron de manifiesto que la forma de las células podia ser esférica, alargada o en espiral. Posteriores mejoras del microscopio optico, incluidas las técnicas de tincién, hicieron posible observar con mas precision la forma caracteristica de estas células, su tamafio, algunas de sus estructuras externas y sus modelos de ordenamiento. El tamaiio, la forma y el ordenamiento constituyen las caracteristicas morfo- logicas groseras de las células de una especie bacteriana ‘A comienzos de la década 1940 se pudo disponer del microscopio electrd- nico como instrumento de laboratorio para los microbidlogos. El tremenda- mente alto poder de resolucién alcanzable con este nuevo instrumento junto a nuevos métodos para preparar las muestras hicieron posible identificar las partes estructurales de una célula individual. Por ejemplo, se desarrollaron técnicas mediante las cuales una bacteria podia ser cortada en lonchas muy finas y estas lonchas (0 secciones) ser luego examinadas por microscopia electrénica. Estos estudios revelaron las partes estructurales de las células bacterianas y lo que hoy lamamos estructura fina, en contraste con su morfologia grosera. Junto a los avances en microscopia electronica se fueron desarrollando técnicas para desintegrar células bacterianas, aislar los compo- 8Morfologia grosera de las células bacterianas Tamatio 76 PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS nentes celulares y analizar su composicién quimica. Asi pues, hemos sido testigos de una era en la que se nos han revelado las partes estructurales de la célula bacteriana, se ha conocido con exactitud ka composicién quimica de estas partes y se han adquirido los conocimientos relativos a las funciones llevadas a cabo por las estructuras finas de la célula. Han emergido nuevos campos de especializacién tales como la citologia bioquimica que relaciona forma y funcién. En este capitulo vamos a comenzar con la descripeién de la morfologia grosera de las bacterias, seguida de la caracterizacion de su estructura fina El conocimiento de estas propiedades de las bacterias no s6lo proporciona una ayuda para la identificacién de las especies, sino que ademas aporta informacion de gran valor para otros muchos aspectos de! estudio. uso y control de los microorganismos. Las células bacterianas varian considerablemente en longitud; las células de algunas especies son 400 veces mas largas que las células de otras especies Existe mas uniformidad en su anchura que en su longitud La unidad de medida bacteriana es el micrémetro (jim) que es equivalente a 1/1.000 mm (10-3 mm) 0 1/25.400 pulgadas. Las bacterias mas frecuente- mente estudiadas en un curso de introduccién a la microbiologia miden aproximadamente 0.5 @ 1.0 por 2.0 a 5,0 tim. Por ejemplo. las bacterias esféricas estafilococos y estreptococos tienen didimetros que oscilan entre 0.75 y 1,25 um. El promedio de las formas alargadas tales como las bacterias de la fiebre tifoidea y de ta disenteria tienen una anchura de 0S a I ym y una longitud de 2 a'3 pm. Las células de algunas especies son muy largas; pueden rebasar las 100 pm de longitud y oscilar su didmetzo entre 1.0 y 2.0 ym, Un grupo de bacterias conocidas como micoplasmas son, caracteristicamente, muy pequefias, tan pequeiias que apenas son visibles con el microscopio Optic. Son ademas pleomérficas, es decir que su morfologia varia considera- blemente. Su tamaio oscila entre 0.1 y 0.3 pm: Aunque las bacterias son sumamente diminutas, es posible medir sus dimensiones con relativa facilidad y precision, Para este fin, el microscopio se equipa con un micrdmetro ocular, que es un disco que lleva grabadas lineas equidistantes. La distancia que hay entre las lineas se determina de antemano con respecto a un micrémetro de platina, un instramento que funciona como una reglt, para el trabajo microscdpico (Fig. 5-1A). El examen de las bacterias a través de un microscopio equipado con un micrometro ocular permite ver las lineas de la regla puestas sobre los microorganismos (Fig. 5-1B) de tal manera que se puede determinar convenientemente la longitud y la anchura de las ceélulas (Fig. 5-1C), Es dificil llegar a entender el extremadamente pequefio tamaiio de una bacteria en los términos cuantitativos que acabamos de exponer. Los siguien- tes ejemplos pueden ayudarnos. Un volumen de una pulgada ciibica contiene aproximadamente un promedio de 9 miliones de millones de bacterias alar- gadas. de un tamaito medio. Los célculos indican que aproximadamente un millin de millones de bacterias (1,000.000.000.000 o 10") pesan simplementeFigura 5-1. Para medir las céiulas bacterianas (A) la platina micrométrica se coloca sobre Ia platina del ‘microscopio y se observa ‘con un objetivo de poco aumento. (8) Ahora se nserta el micrémetro ocular en el ocular det microscopio. Cuando se mira con el objetivo de inmersin en aceite (alto poder) Ia escaia del micrémetro ocular esta superpuesta (arriba) en le escala del micrémetro de la patina (abajo). Las divisiones del micrémetro ‘ocular se calibran compardndolas con el micrémetro de platina, (C) El micrémetro ocular calibrado se usa para medir las células bacterianas, (Erwin F. Lessel, ilustrador,) Micromet de platina sobre la plating del microseopio, tal como s fuera MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 77 ‘un portaobjetos coriente EL micrémetro ocular se insert ‘en el ocular del microscopio ——— 2mm 0,08 may = 50 jm Micrémetro de platin, tal como se ve ‘con un objetivo de poco aumento a —— Micrémeto de pain sbre la patina de microscopio Micrémetro ocular dent det ocular Y ponteobjetos que contine la muestra, ‘sobre plating del microscapio Micrometro ocular superpuesto al micrémetro de patina, tal como se ve con el objetivo de inmersion en ace En este caso 78 divisiones dal micrémetro ocular ‘equivalen a 60 yim. Por tanto, cada una de las divsiones mds pequerias de! micrémetro ocular aquivala 2 0,64 ym, (lustracion ligeramente amplficada para que resulte ‘mas clara.) Céiules de Escherichia cal observades ‘con objetivo de inmersi6n que leva colocsdo el micrémetro ocular. Las eélulas de Ecol miden ordinariamente 0.6 = 20 8 3,0 jama Forma Figura 5-2. Tipicas bacterias alargadas (bacilos). Obsérvese las diferencias en longitud y ~anchura. (A) Clostridium sporogenes 06 a 0,3 ym ‘por 3,0 a 7,0 um, (B) Pseudomonas sp. 0.5 1,0 ym por 2,0 a 3.0 um. (C) Bacillus megateriam 0,22 1,5 ampor 2,024.0 pm. (D) Salmonetta typhi 0.8 a 0.7 um por 2,0 a 3.0 yam. (Contesia de J. Nowak, Documenta Microbiologica, Erste! Teil, Bakterien: Gustav Fischer Verlag, KG, Stuttgart. 1927) 7B PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS 1 g (1/454 libras), En la mayoria de los casos ustedes observarin bacterias a tun aumento de 1,000 veces. La mosca doméstica comin, ampliada de igual forma, tendria una longitud superior a los 30 pies (1 metros). ‘Cuando se calcula la proporcién entre el area de su superficie y su volumen, se pone de manifiesto una caracteristica distintiva de las células bacterianas. En las bacterias este valor es muy elevado en comparacién con el de los organismos mayores. En términos practicos, esto significa que el contenido de la célula bacteriana tiene una tremenda zona de exposicién a la interfase existente entre la pared celular y los nutrientes que hay en el medio ambiente, Esta caracteristica explica, en’parte, la elevada tasa de metabol mo y crecimiento de las bacterias. Las células individuales son clipsoidales, esféricas, alargadas (cilindricas) 0 en espiral (helicoidales). Cada una de estas caracteristicas es importante para caracterizar la morfologia de una especie. Las células bacterianas esféricas o elipsoidales se denominan cocos. Como se indied mas arriba, los cocos aparecen ordenados de varias formas caracte- ticas, dependiendo de la especie. Las células cilindricas o alargadas se denominan bacilos. Existen conside- rables diferencias en la longitud y la anchura de las varias especies de bacilos (ver Fig. 5-2). Los extremos de algunos bacilos son rectangulares, otrosFigura 5-3. Bacterias con forma de espiral. Obsérvese la diferencia en la frecuencia de las vueltas u ondas, altura de las espiras Y longitud de las células. (A) Treponema pallidum: (B) Borelia anserina; (C) Spiritlun volutans (Enwin F. Lessel, itustrador.) Ordenamiento MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 79 yo, A A | §] | Sam A Treponema 8 Borrelia c Spirit palioum anserina volutans redondeados y otros estan afilados o puntiagudos, como el extremo de un puro. A veces los bacilos quedan unidos entre si, extremo con extremo, dando la impresién de una cadena, Las bacterias con forma de espiral o espirilos se presentan predominante- mente como células individuales sin unir. Incluidas en este grupo morfologi- co estan las espiroquetas, algunas de las cuales causan serias enfermedades en los seres humanos. Las células individuales de las diferentes especies presen- tan notables diferencias en cuanto a la longitud, nimero y amplitud de las espirales y rigidez de las paredes celulares. Por ejemplo, algunos espirilos son espirales cortas fuertemente enrolladas; otras son muy largas y presentan una serie de torceduras y curvas. Las espirales incompletas cortas, se conocen como bacterias coma 0 vibriones. La Fig. 5-3 muestra varios tipos de bacte- rias en espiral. Obsérvese en particular la forma ondulante de las células, 1a frecuencia de vueltas de las ondas, la separacién de las espiras y la longitud total de la célula Ciertas especies de bacterias muestran patrones de ordenamiento de sus células tales como parejas, racimos, cadenas o filamentos. Los cocos presentan varios ordenamientos, tal como se muestra en la Fig. 5-4. Cada uno de estos ordenamientos es caracteristico de una especie particular de cocos. Asi, al describir la morfologia de los cocos, debe Prestarse especial atencién a su patron de ordenamiento. Debe tenerse pre- sente que raramente estin todas las células de una especie dada, ordenadas exactamente segin el mismo patron, El ordenamiento predominante es la caracteristica importante. Los bacilos no se ordenan segin una variedad de patrones como los caracteristicos de los cocos, Algunas especies, sin embargo, muestran tenden- cia a un ordenamiento de sus células. El bacilo que causa la difteria tiende a producir agrupamientos de células alineadas lateralmente, como una fila de cerillas (ordenamiento en empalizada). El bacilo tuberculoso puede presen- tarse en un ordenamiento en el que se agrupan tres bacilos dando la impre- sion de una Y. Las oélulas de algunas especies acuaticas (ver Cap. 35) se ordenan segin un modelo de roseta. Esto es posible porque las células individuales producen un pediinculo muy fino, llamado holdfast, que puede fijarse a la superficie de un objeto. Las células de otras especies se encuentran80 PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS Diplococos (Streptococcus pneumoniae) Estroptococos (Streptococcus pyogenes) Tetracocos (Padiococcus cerevisiae) a Figura 5-4. Modelos de ordenamiento de los cocos. (A) Diplococos; las células se dividen en un plano y permanecen unidas predominantemente en parejas. (B) Estreptococos: las células se dividen en un plano y permanecen unidas formando cadenas (C) Tetracocos; las células, se dividen en dos planas y forman, caracteristicamente, ‘grupos de cuatro células. (D) Estafilococos: las Células se dividen en tres planos, segiin un modelo itreguler, produciendo eracimos» de cocos. (€) Sarcinas: las células se dividen en tres planos siguiendo una pauta irregular, produciendo un ordenamiento cibico de las células, (Erwin F. Lessel itustrador.) Estructura fina de las células bacterianas Estafilococes (Staphylococcus aureus) Sareinas (Sarena ventricul) en pares (diplobacilos) o en cadenas (estreptobacilos). El ordenamiento en pares y en cadenas puede mass bien atribuirse a un estadio de crecimiento 0 a ciertas condiciones del cultivo, mas que a una caracteristica morfoldgica Algunos de estos ordenamientos celulares se muestran en la Fig. 5-5. Las células en forma de espiral se encuentran predominantemente aisladas. La mayor parte de las bacterias estudiadas en el laboratorio durante un curso de introduccién a la microbiologia tienen la morfologia de coco, ba © espirilo. Como se vera en el Cap. 7, en donde describimos los principal grupos de bacterias, hay especies, particularmente las de ambientes acu y del suelo, que poseen una morfologia grosera muy diferente, El examen de una célula bacteriana por técnicas de microscopia moderna, revela que existen estructuras por fuera de la pared celular. Otras estructuras © corpiisculos se encuentran encerradas dentro de la pared celular. Algunas partes estructurales son comunes a todas las células, tales como la pared celular y la membrana citoplasmatica. Otras estructuras estan presentes solamente sobre o dentro de las células de ciertas especies.Figura 5-5. Modelos de ordenacién de fos bacilos, (A) En empalizada (Corynebacterium diphtheriae, (B) En roseta (Caulobacter vibrioides) (C) Cadenas (Bacillus cereus). (Erwin F. Lessel, iustrador ) Estructuras externas a la pared celular MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 81 A Empalzada (Corynebacterium (Caulobactervibroides) (Bacilus cereus) diphuherie) Imaginemos que, con ayuda de un potente microscopio, enfocamos una célula bacteriana. Las principales estructuras externas a la pared celular que posiblemente veremos son flagelos, pelos y cipsulas, Se muestran esquemati- camente en la Fig. 5-6. Flagelos. Los apéndices extremadamente finos, como cabellos, que salen a través de la pared celular y se originan en el cuerpo basal, una estructura que hay justo debajo de la membrana, en el citoplasma, se denominan flagelos \ Figura 5-6. Principales estructuras externas a la pared celular bacteriana Algunas estructuras, por ejemplo cépsulas, flagelos, esporas y pelos, no son ‘comunes a todas les células, (Erain F. Lessel, ilustrader.) Pred colular CApsutaFigura 5-7. En esta serie puede verse el mecanismo de fiiacién de los flagelos dentro de la célula. La bacteria es Pseudomonas aeruginosa. (A) Antes del examen por microscopia electrOnica, las células fueron parcialmente lisadas ¥ tefiidas para hacer mas Visible el punto de fijacién del flagelo (estructura basal) (ampliacién aproximada x 80.000). (B) Flagelos aislados mostrando la estructura basal unida a un extremo. (C) Modelo de estructura basal, ilustrando su estructura y punto de fijacién dentro de una bacteria Gram-negativa (Cortesia de T. Lino, Universidad de Tokio.) Figura 5-8. Ordenamiento de los flagelos en las bacterias. (A) Monotrico, un solo flagelo; (8) Lofotrico, un manojo de flagelos; (C) Anfitricos, flagelos aislados 0 en manojos, en. ambos ‘extremos de la célula: (O) Peritrico, rodeando a la ‘célula, (Erwin F. Lessel, tustredor.) > Cuerpo basal Pseudomonas aeruginosa Zz AS Spiium serpens 3} Mambrona externa y Capa de Capa peptideglicano > penplésmica > Membrana > citoplasmética 1am Pseudomonas fluorescens ‘Salmonelfa typhi Pared celularFigura 6-9. Flagelos bbacterianos, tal como se ven en preparaciones tefidas. (A) (2.000) y (8) (4,000) son especies de Pseudomonas, que rmuestran la caracteristica flagelacin monotrica 0 lofotrica, es decir un solo fiagelo o un manojo de flagelos en un extremo de la célula. (C) Salmonella typhi mostrando sus fiagelos peritricos en una proparacion tefida. (De General Biological Supply House, Inc.) MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 83 Los flagelos son responsables de la movilidad de Jas oélulas bacterianas. El flagelo tiene tres partes: el cuerpo basal, una estructura en forma de gancho, y un largo filamento fuera de la pared celular (Fig. 5-7). La longitud del Fiagelo es usualmente varias veces la de la célula, pero su didmetro es s6lo tuna pequeiia fraccién del didmetro de la célula, por ejemplo de 10 a 20 nm. EI flagelo esta formado por subunidades de proteina; esta proteina se deno- mina flagelina, No todas las bacterias poseen flagelos; muchas especies de bacilos y espirilos no los tienen, pero los flagelos raramente se encuentran en cocos En el caso de bacterias con flagelos, el patrén de fijacién de estos apéndices asi como el niimero de ellos (ver Fig. 5-8), se utiliza para clasificar estas bacterias dentro de ciertos grupos taxonémicos. Por ejemplo, entre las bacte- rias alargadas Gram-negativas, el genero Pseudomonas se caracteriza por tener los flagelos localizados en el extremo de la célula (flagelos monotricos 0 lofotricos) y el género Escherichia por tener los flagelos rodeando toda la célula (agelos peritricos). Esta disposicién se muestra en la Fig. 5-9. En su estado natural, los flagelos son demasiado pequeiios para ser vistos con el microscopio éptico. Sin embargo, mediante procedimientos especiales de tincién que emplean un mordiente (una sustancia que fija un colorante a una superficie) es posible aumentar su diémetro lo suficiente como para hacerlos visibles con el microscopio dptico, tal como se muestra en la Fig. 5-9. Una prueba indirecta de la presencia de flagelos puede obtenerse examinando las bacterias en una preparacién hiimeda para poner de manifiesto su movilidad. Pelos (pili, fimbriae). Muchas bacterias Gram-negativas tienen apéndices filamentosos que no son flagelos. Estos apéndices llamados pelos, son mas pequefios, mas cortos y ms numerosos que los flagelos (Fig. 5-10). Los pelos slo pueden verse por microscopia electrénica. No tienen ninguna funcion en la movilidad; se encuentran tanto en las especies méviles como en las que no lo son, Existen, sin embargo, varias funciones asociadas a diferentes tipos deFigura 5-10. Bacterias con fimbriae. (A) Shigella flexneri: bacilo en divisién con numerosas fimbriae rodeando a las ccélulas (*20,000); (B) Salmonella typhi, bacitos en division con umerosas fimbriae y unos cuantos flagelos (los apéndices muy largos) (*12.500). (Cortesia de J. P. Dugnid y J. F. Wilkinson The Society for General Microbioloay, Symposium XI, 1967.) Figura 5-11. Bacterias con cépsula: (A) Klebsiella. pneumoniae (De General Biological Supply House, Inc.) (B) Bacteria con cépsula formadora de sustancia mucosa, aislada de una fabxica de papel Obsérvense las cépsulas ‘enormemente grandes (6reas blancas) en tomo a cada una de las cétulas. (Cortesia de P.M. Borick Wallace y Tierman, Ine.) 84 PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS pelos. Una clase, conocido como pelo F (0 pelo sexual) sirve de puerta de entrada del material genético durante el apareamiento bacteriano (ver Cap. 17) Algunos peios funcionan como medio de fijacién a varias superficies. Esta ca- pacidad de los pelos para adherirse a las superficies es importante. Ayuda a muchas bacterias a fijarse a los tejidos animales y vegetales a partir de los cuales pueden obtener nutrientes. Capsulas. Algunas células bacterianas, por ejemplo los neumococos que causan Ia neumonia, estan rodeadas de una capa de material viscoso conoci do como cdpsula 0 capa mucosa. El tamaiio de estas cipsulas esta marcada- mente influenciado por el medio en el que crece la bacteria. En algunos casos el grosor de la cipsula es sdlo una fraccién del didmetro de Ia célula; en otros casos, la cépsula es mucho mayor que la célula. Ejemplos de bacterias con capsula y productores de capa mucosa pueden verse en la Fig. 5-11MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 85 La relacion exacta entre la capsula y el resto de la célula no se conoce. Existen razones para creer que el material que forma la clipsula es segregado a partir de la célula y que, dada su viscosidad, no puede difundir facilmente quedando por ello en torno a la pared celular. El material mucoso mas soluble, excretado por la célula, se disuelve en el medio en el que esta creciendo el microorganismo. La produccién de ciertos tipos de material capsular puede aumentar grandemente la viscosidad del medio en el que se cultiva el organismo. Por ejemplo, las bacterias con capsula que crecen en la leche produciran un espesamiento de ésta. Las cApsulas bacterianas son importantes tanto para la bacteria como para otros organismos. A las bacterias las proporcionan una cubierta protec- tora y ademas sirven de reservorio de alimento almacenado. Las capsulas de ciertas bacterias productoras de enfermedades aumentan la capacidad infecti- va de las bacterias. Si la bacteria pierde totalmente su cApsula, puede perder su virulencia y por tanto su capacidad de producir la enfermedad. Las bacterias con cipsula son también responsables de trastornos en algunos procesos industriales. La acumulacién de sustancia mucosa en el equipo de fabricacion puede tupir los filtros. recubrir las tuberias u otras partes del equipo y/o afectar la calidad del producto, El organismo que se muestra en la Fig. 5-11B, por ejemplo, se vio que era el responsable de la formacién de sustancias mucosas en una planta de fabricacion de papel. Vainas. Algunas especies de bacterias. particularmente las de ambientes de aguas dulces y marinas, estan encerradas dentro de una vaina o tibulo. Las vainas estén formadas por compuestos metilicos insolubles, tales como 6xidos férrico y manganésico precipitados en torno a las células, como productos de su actividad metabélica. Estos compuestos metilicos insolubles, son formados por la célula a partir de compuestos solubles de hierro 0 manganeso presentes en el ambiente. Esta vaina puede formarse en torno a organismos que estén alineados al juntar sus extremos, dando la impresién de un crecimiento filamentoso (Fig. 7-5). De hecho, las células encerradas dentro de la vaina estén separadas individualmente. Periédicamente emergen por un extremo abjerto de la vaina e inician un nuevo proceso de formacion de vaina La vaina no es una parte vital de la célula. Las bacterias con vaina, como veremos en el Cap. 7, constituyen un importante grupo de microorganismos. Son abundantes en aguas dulces ricas en materia orgdnica, asi como en corrientes polucionadas y en las plantas de depuracién de aguas residuales. Pedimculos. Ciertas bacterias se caracterizan por la formacion de un apéndice semirrigido llamado pedinculo que se prolonga desde la célula. El diémetro del apéndice es menor que el de la célula que le ha producido (ver Fig. 7-6) El pediinculo tiene una sustancia adherente en su extremo distal, el extremo mis distante de la célula, que permite a la célula pegarse a superficies s6lidas. Las bacterias pedunculadas se encuentran en aguas dulces 0 en ambientes marinos en los que la posibilidad de fijarse a superficies s6lidas es importante para el crecimiento bacteriano y para su supervivencia.La pared celular 86 PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS Figura 5-12, Corte fino de una célula bacteriana mostrando estructuras formadas por miitiples capas superficiales (pared celular y membrana citoplasmética). (Cortesia de Helen Crane. Tomado de F.L. Crane y J. D. Hall, Ann. N.Y. Acad. Sei 196:24, 1972.) Debajo de las sustancias extracelulares tales como las cipsulas o las capas ‘mucosas y externas a Ja membrana citoplasmatica, que es un componente de todas las células vivas, est la pared celular, una estructura muy rigida que da forma a la célula (ver Fig. 5-12). La rigidez de la pared celular puede demostrarse ficilmente sometiendo las bacterias a presiones muy elevadas 0 bien a otras condiciones fisicas severas. La mayoria de las células bacterianas conservan su forma original durante y después de tales tratamientos. El espesor de Ia pared celular de la mayoria de las bacterias estudiadas hasta ahora, oscila entre 10 y 35 nm; sin embargo, algunas paredes celulares son considerablemente mas gruesas. La pared celular constituye una porcién significativa del peso total de la célula. Dependiendo de la especie y de las condiciones del cultivo, puede suponer del 10 al 40 por ciento del peso seco del organismo, Las paredes celulares bacterianas son esenciales para el crecimiento y la division. Con excepcién de los micoplasmas, todas las bacterias poseen paredes celulares rigidas. Aislamiento de fragmentos de pared celular. Varias técnicas de laboratorio han sido desarrolladas por los investigadores con el fin de poder aislar fragmentos de paredes celulares, separandolos de otros materiales celulares. Los cientificos han analizado el material de la pared celular para ver su composicién quimica y a partir de esta informacién han logrado determinar la estructura exacta de la pared celular. La composicién de la pared celular bacteriana es extremadamente impor- tante para distinguir las bacterias de los otros protistas, asi como para establecer distinciones entre los grupos de bacterias. Composicién quimica de las paredes celulares. Los peptidoglicanos proporcio- nan a la pared celular una estructura rigida. Estos grandes polimeros (gran- des moléculas formadas por unidades que se repiten) estén compuestos de tres clases de bloques estructurales: 1) N-acetil glucosamina (AGA), 2) Acido N-acetil murdmico (AMA) y 3) un péptido que consta de cuatro 0 cincoyura 5-13. Interpretacion ‘esquemitica de las paredes Ccolulares a partir de observaciones al rmicroscopio electronico. (A) Bacterias Gram- positivas. La capa externa no es siempre ondulada y {a capa intermedia no siempre es demostrable. (B) Bacterias Gram- negativas. Pared celular mas delgada y de mayor complejidad. (Erwin F. Lessel,ilustrador.) ros crema vananiaenitantiattameat nnerenrernneasnnnemeneeemncnratSioplasnsich ee MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 87 aminodcidos que son L-alanina, D-alanina, D-icido glutémico y, 0 bien lisina, 0 bien Acido diaminopimélico. La manera en que estén unidas estas subunidades para formar este polimero, se discute en el Cap. 15. La pared celular intacta contiene también otros constituyentes quimicos tales como Acidos teicbicos, proteinas con polisacéridos, lipoproteinas y lipopolisacari- dos, que estan unidos al peptidoglicano Los peptidoglicanos junto con otros dos constituyentes de la pared celu- lar, el Acido diaminopimélico y el dcido teicdico son iinicos de los procariotas. Los peptidoglicanos, sin embargo, varian su composicién quimica y su estructura de una especie bacteriana a otra, La N-acetilglucosamina y el Acido N-acetilmuramico son constituyentes constantes de los peptidoglica- nos, pero pueden existir variaciones con respecto a los aminoacidos presentes y a la naturaleza de los enlaces entre estos aminoacidos. Otro importante descubrimiento realizado durante el curso de la identifi cacién de la composicién quimica de las paredes celulares de las bacterias es que varios de los aminodcidos que forman el péptido integrante de los peptidoglicanos, existen segiin la configuracién D. Esto es lo contrario de lo gue sucede en las proteinas en donde s6lo aparecen con la configuracién L. Diferencias en la composicién y estructura de las paredes celulares. La Fig. 5-3 y Ia Tabla 5-1 ponen bien de manifiesto las diferencias significativas que Citopasma: Membrana U Capa de peptidoglicano Capa de peptidaglicano Capa de lipopolsacérido Capa de lipoproteina (con zonas akernantes cares (capa interna) (capa externa) (capa media) Y oscuras) A. Bacterias Gram-posiivas BBacteias Gram-negativasTabla 5-1. Algunas caracteristicas de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas 8B PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS DIFERENCIAS RELATIVAS. Gram-negativas Estructura de la pared Gruesa (15-80 nm) Deigada (10-15 nm) celular Una sola capa Triple capa (multicapa) (monocapa) Composicién de la Baja en lipidos (1-4%) Alta en lipidos (11-22%) pared celular Peptidoglicano presente Peptidoglicano presente formando monocapa; es en una capa interna un componente impor-_rigida; poca cantidad, tante que supone el 50% representa el 10% del peso del peso seco de algunas seco. No hay dcidos células bacterianas. teicoicos Acidos teicoicos Susceptibilidad Mas susceptibles Menos susceptibles alla penicilina El crecimiento es El crecimiento se El crecimiento se retrasa frenado por colorantes _retrasa notoriamente menos bisicos, por ejemplo el cristal violeta Requerimientos Relativamente complejos _Relativamente sencillos utricionales en muchas especies Resistencia a la rotura_—- Mas resistentes Menos resistentes mecénica existen en la composicion y estructura de la pared celular entre las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, Estas diferencias son importantes de co- nocer porque, tal como se cree actualmente, son las responsables de la manera en que estos dos grupos de bacterias responden a varios tratamientos y agentes, tales como la tincién de Gram y ciertos antibidtico: Como ya mencionamos en el Cap. 4, la tincion de Gram es una de las mas importantes técnicas de tincién en microbiologia, Sin embargo, todavia no se tiene una explicacién plausible de por qué las células responden de forma diferente en este proceso. Las explicaciones mas plausibles del meca- nismo de la tincién de Gram se basan en la estructura y composicion de la pared celular bacteriaha. Las bacterias Gram-negativas contienen un porcen- aje mas elevado de lipidos, una grasa o sustancia de tipo graso, que las bacterias Gram-positivas. Las paredes celulares Gram-negativas son ademas mas delgadas que las paredes bacterianas Gram-positivas. Las pruebas ex rimentales sugieren que durante el procedimiento de tincién, el tratamiento de las bacterias Gram-negativas con etanol (alcohol) extrae el lipido, lo que da como resultado un aumento de la porosidad 0 permeabilidad de la pared celular Gram-negativa. Asi, el complejo cristal violeta-iodo (CV-I) que ha pasado a través de la pared celular durante un paso anterior del proceso deMaterial nuclear Citoplasma ibosome Membrana citoplasmética Mesosome |__ Pared celular Material nuclear Figura 5-14, Principales ‘estructuras que Se encuentran dentro de la pared celular bacteriana Ciertas estructuras, por ejemplo grénulos 0 cuerpos de inclusién, no son comunes a todas las células bacterianas. (Enwin F. Lesse, itustrador.) Estructuras internas a la pared celular MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 89 tincién, puede ser extraido. De este modo, el organismo Gram-negativo queda decolorado. Las paredes celulares de las bacterias Gram-positivas, debido a su bajo contenido lipidico, se deshidratan durante el tratamiento con etanol. El tamaiio de sus poros disminuye, se reduce su permeabilidad y no es posible extraer su complejo CV-I. Otra explicacién similar, se basa también en las diferencias de permeabili- dad entre los dos grupos de paredes celulares bacterianas. Las paredes celulares bacterianas Gram-negativas tienen una cantidad mucho menor de peptidoglicano y este peptidoglicano tiene muchas menos uniones transversa- les que el de las paredes celulares de las bacterias Gram-positivas. Por tanto, los poros de! peptidogticano de las bacterias Gram-negativas permanecen suficientemente grandes, aun después del tratamiento con etanol, como para permitir que sea extraido el complejo CV-I. En las bacterias Gram-positivas, el complejo CV-I queda atrapado en la pared a continuacién del tratamiento con etanol, que presumiblemente disminuye el didmetro de los poros del peptidoglicano de la pared celular Estas dos explicaciones no se excluyen mutuamente y es probable que ambas contribuyan al mecanismo de la tincién de Gram. Ademas, si las células Gram-positivas se tratan con el enzima lisozima para eliminar la pared celular después de la tincién con el complejo CV-I, las estructuras que resultan se teftirin con el complejo CV-I. Son, sin embargo, ficilmente decoloradas por el alcohol. Todas estas pruebas indican que la pared celular de las bacterias Gram-positivas es el sitio de retencién del colorante cristal violeta. Las bacterias Gram-negativas se diferencian de las bacterias Gram-positi- vas, también. por otros caminos. Las bacterias Gram-negativas son mas susceptibles a antibidticos como Ia estreptomicina. Las bacterias Gram- positivas son generalmente mas susceptibles al antibidtico penicilina y menos susceptibles a la desintegracién por tratamiento mecinico (tal como la exposicin a muy altas presiones 0 a vibraciones ultrasonicas) o por exposi- cidn a ciertos enzimas. Las funciones de las estructuras superficiales de la célula bacteriana estan resumidas en la Tabla 5-2. Las estructuras mas comunes que pueden encontrarse dentro de la pared celular bacteriana, se muestran en la Fig. 5-14. A continuacién se hace una descripcién de cada una de estas estructuras. Membrana citoplasmatica. Inmediatamente debajo de la pared celular hay una membrana fina llamada membrana citoplasmatica, también denominada ‘membrana protoplasmética o simplemente membrana plasmética. Los cilculos acerca de su espesor, basados en micrografias electrénicas de cortes finos, son del orden de 7.5 nm, La membrana citoplasmatica es extremadamente importante porque con- trola el paso de sustancias quimicas en solucién hacia dentro y fuera de la célula. Es un logro verdaderamente notable el que una célula microscdpica que flota en un ambiente quimico extremadamente complejo y cambiante,Tabla 5-2. Funciones de las estructuras superficiales de las células bacterianas 90 PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS ESTRUCTURA FUNCION COMPOSICION QUIMICA Flagelos Locomocién Proteina Pili Tubo de conjugacion Proteina Adhesién de la célula Cépsulas y material Cubierta protectora Polisacéridos celular extra Adhesién dela célula —_—Polipéptidos Alimento de reserva Pared celular Cubierta protectora Peptidoglicano, 4cidos Permeabilidad teicoicos, polisacéridos, lipidos y proteina Membrana cito- Cubierta semipermeable. _Lipidos, proteina plasmética Mecanismos de trans- y mesosoma porte. Sintesis de macromoléculas biolégicas sea capaz de tomar y retener cantidades adecuadas de nutrientes y de descargar el exceso de nutrientes y/o los productos de desecho. La membrana citoplasmatica proporciona ademas la maquinaria bioqui- mica para transportar iones inorganicos, aziicares, aminodcidos, electrones y otros metabolitos a través de la membrana. Estas sustancias en solucin 0 solutos pasan a través de la membrana bien por difusién pasiva o bien por transporte activo. A continuacién se da una explicacién de cada uno de estos dos importantes procesos. —Difusién pasiva (ésmosis). La difusion pasiva es inespecifica; no se hace distincién entre los solutos que pasan a través de la membrana. Es un proceso mediante e! cual sustancias quimicas pasan a través de la membrana desde un rea de mayor concentracién a un area de mas baja concentracion La difusién pasiva actita para igualar la concentraci6n de solutos a ambos lados de la membrana, —Transporte activo. El transporte activo, a diferencia de la difusién pasiva, es altamente especifico; es decir, que los solutos pasan después de haber sido seleccionados. Ademas permite que se alcance una concentracién de soluto mis alta, dentro de la célula, que la que existe fuera de la célula, El transporte activo es extremadamente importante para las células bacterianas en ambientes como el océano, en donde los nutrientes estin presentes en pequeiias cantidades. Estas células deben ser capaces de concentrar nutrien- tes para crecer. El proceso de transporte activo implica un intrincado meca- nismo dentro de la membrana citoplasmatica. Compuestos denominados transportadores de membrana (carriers), junto con reacciones bioquimicas que proporcionan energia, realizan esta clase de transporteFigura 5-18. Membranes hectefenas,Estuctura de un mesocoma, tl como #8 ven ut micograia slecrrica do un cota fino, Obsrvese cue continuo eon la mertbvana citoplesmvca. (Cortese de A. Ryer y C. Frebel.) Figura 5-16. Microgratia ‘electrénica de un corte fino de Bacillus subtilis mostrando e! material uclear (éreas que aparecen claras) ademés de la pared celular, ta ‘membrana citoplasmética, mesosoma y el estado inicial de la formacién de tun tabique transversal (35.000). (Cortesia de S. F. Zane y G. B. Chapman, Georgetown University.) MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 91 Mesosomas. La membrana citoplasmatica replegandose hacia el interior de la Célula o invagindndose en el citoplasma, produce una estructura denominada tun mesosoma (ver Fig. 5-15). Los mesosomas son siempre continuos con la membrana citoplasmatica. Con frecuencia se ve que se originan en el punto en donde Ja membrana inicia una invaginacién previa a la division celular y quedan unidos a la region nuclear. Se cree que los mesosomas funcionan en la sintesis de la pared celular y en la divisién del material nuclear. Citoplasma y estructura dentro del citoplasma. El material celular contenido dentro de la membrana citoplasmatica se divide en: 1) el drea citoplasmética de aspecto granular y que es rica en RNA; 2) el area cromatinica 0 drea nuclear que es rica en DNA, y 3) la porcién fluida que contiene nutrientes disueltos y materia particulada, denominada cuerpos de inclusion. —Area citoplasmatica. Densamente empaquetadas a través del Area citoplas- matica hay particulas de proteina-RNA, llamadas ribosomas, que son el sitio de la biosintesis de proteina. Los ribosomas se encuentran en todas las células, eucaridticas y procariéticas —Area nuclear. La célula bacteriana, a diferencia de las células de organis- mos eucaridticos, carece de cromosomas discretos, del aparato mitdtico utilizado para la divisién celular, de nucleolo y de una membrana nuclear. El material nuclear 0 DNA, en una célula bacteriana ocupa una posicién cerca del centro de la oélula y est unida al sistema mesosoma-membrana citoplas- matica (Fig. 5-16). Este material es el aparato genético total o genoma de la bacteria y consta de un nico cromosoma circular, en el que van todos los genes. Al material nuclear de la bacteria se le designa cuerpo de cromatina, nucleoide 0 cromosoma bacteriano,Protoplastos y esferoplastos 92 PROTISTAS PROCARIOTICOS: BACTERIAS Figura 5-18, Micrografia electronica de una célula omal (arriba) y de un protoplasto (abajo) de Rhodospirillum rubrum (65.000). (Cortesia de E, S. Boatman y H.C. Douglas, Electron Microscopy, Vol. 2, Fifth International Congress of Electron Microscopy (Philadelphia), Academic Press, New York, 1962.) Figura 5-17. Microgratia electronica de un corte fino de Thiobacillus thioparus mostrando ‘rdnulos 0 cuerpos de inclusion formados de azufte/ (Cortesia de J. M. Shively, G. L. Decker y J. W. Greenawalt, J. Bacteriol. 101:620, 1970.) —Inclusiones citoplasmaticas, Dentro del citoplasma pueden acumularse dife- rentes clases de sustancias quimicas y formar grinulos y globulos denomina- dos cuerpos de inclusién. Por ejemplo, algunas especies de bacterias del azufre, acumulan grandes cantidades de azufre que aparece como glébulos dentro del citoplasma (Fig. 5-17). Otros cuerpos de inclusién encontrados en las bacterias estan compuestos de polifosfato, lipidos. glucégeno o almidén Sia una célula bacteriana se le quita la pared celular. el cuerpo que resulta, encerrado por la frigil membrana citoplasmatica, normalmente estallard a causa de la gran diferencia existente entre la concentracién de sustancias disueltas dentro y fuera de la célula. Esto se denomina choque osmético. Se han disefiado procedimientos experimentales para eliminar la pared celular de una bacteria mientras se conserva la viabilidad de la bacteria. Esta estructura viable que supone el contenido citoplasmatico rodeado de la membrana citoplasmatica se denomina un protoplasto. Los protoplastos adoptan la forma esférica ya que no poseen ninguna pared celular rigida externa (ver Fig. 5-18). Pueden ser caracterizados como sigue: por carecer totalmente de pared celular, no ser méviles, ser esféricos, incapaces de dividirse, incapaces de formar nuevas paredes celulares y no ser susceptibles a la infeccién por bacteriéfagos, virus que infectan a las bacterias. En el caso de las bacterias Gram-negativas, que poseen paredes celulares con varias capas, la eliminacién de la capa de peptidoglicano puede dejar todavia algin material de la capa externa pegado a la membrana citoplasmatica. En estos casos, las células se conocen como esferoplastos, porque no estin completa- mente libres de pared celular.Esporas Exosporas Endosporas Figura 5-19. Producci6n de esporas por Streptomyces viridochromogens. Esta bacteria produce una cadena de esporas (llamadas conidios) en forma de bucles, que se desarrolian en los extremos. de filamentos vegetativos llamados hifas. Estas estructuras, conidios © hifas, son caractersticas de os hongos (ver Cap. 8). (Conesia de Mary P. Lechevalier) MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA FINA DE LAS BACTERIAS 93 Ciertas especies de bacterias producen esporas, ya sea externas a la célula vegetativa (exosporas) 0 bien dentro de la célula vegetativa /endosporas) Estos son cuerpos metabélicamente durmientes producidos en el tiltimo estadio del crecimiento celular que, bajo condiciones apropiadas, germinan y producen la clase original de célula en crecimiento 0 vegetativa. Las esporas son resistentes a muchos agentes quimicos y fisicos. Varias especies de bacterias producen esporas externas. Streptomyces, por ejemplo, produce una cadena de esporas (Ilamadas conidios) que se forma en el extremo de una hifa, que es un filamento vegetativo (ver Fig. 5-19), Este proceso es similar al de formacién de esporas en algunos hongos, como se describe en el Cap. 8. La endospora es iinica de las bacterias. Es un cuerpo de pared gruesa, muy refringente y sumamente resistente, producido por especies de Bacillus, Clos- tridium y Sporosarcina Las bacterias capaces de producir endosporas pueden crecer y reproducir- se durante muchas generaciones como células vegetativas. Sin embargo, en algiin estadio del crecimiento de una bacteria formadora de esporas, dentro del citoplasma vegetativo tiene lugar la sintesis de nuevo protoplasma desti- nado a convertirse en la espora. Conidios, — cadena de esporas ita, filamento _— collar que leva cconigios