Sei sulla pagina 1di 4

Hipótesis 3: las variaciones en la actividad enzimática se debe a las diferencias en las

concentraciones del pH final del medio de cultivo.

A. Establezca la garantía:

La variación en la actividad enzimática se debe a las diferencias en las concentración de


pH final del medio de cultivo, En el experimento realizado observamos que el pH no fue
controlado durante la fermentación y que las UA/enzimática, junto con el pH final varían.
Con lo anterior se explica a que cada enzima tiene un pH y la variación en la actividad
enzimática se debe a las diferencias en las concentración de este y la temperatura en un
medio de cultivo; cada enzima tiene un pH en el cual su actividad es máxima, este valor
corresponde a un pH optimo el cual poseen la mayoría de las enzimas, pero no
necesariamente coinciden con el pH intracelular, lo que significa que en condiciones
fisiológicas algunas enzimas no actúan al máximo de su capacidad. Las enzimas alfa
amilasa Se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza, donde juegan un rol muy
importante en la degradación de almidón, en diversas especies como hongos y bacterias,
donde se caracterizan pH óptimo y la sensibilidad a la temperatura.

El pH óptimo puede variar por la influencia de los siguientes factores:

Origen de la enzima; las enzimas que modifican el mismo sustrato pero que por provenir
de diferentes fuentes difieren en su pH óptimo, pl, KM, velocidad de inactivación térmica,
etc., reciben el nombre de isoenzimas; en ellas las variaciones en pH óptimo pueden ser
hasta de 2,5 a 3 unidades de pH.

Origen del sustrato: en estos casos la variación en pH generalmente es menor de 0,5


unidades de pH.

Concentración de sustrato: a bajas concentraciones de sustrato, KM varía con el pH y el


pH óptimo se desplaza hacia la zona donde KM aumenta al aumentar el pH. Esta es la
razón por la cual KM se determina a [S] elevadas con el fin de evitar los cambios en
función de pH.
Presencia de sustancias asociadas: Generalmente las impurezas modifican el pH óptimo
debido a sus componentes

B. Analice la evidencia.

En resultados de en la práctica de laboratorio, la actividad alfa-amilasa fue trabajada con 3


muestras de microorganismo productoras de amilasa, a, b, c, donde los caldos del medio de
cultivo estaban estériles, los microorganismos más efectivos en el crecimiento fueron los de
pH óptimo y a temperatura adecuada, es decir sin que la actividad de la enzima amilasa se
inactivara.

La enzima alfa-amilasa es inactivada a un pH en el rango de 4.8 - 5.0. Mientras que a este


mismo rango la beta-amilasa es estable. La enzima E.C. 3.2.1.2., es inactivada en un pH
alrededor de 6.0-7.0, y en caso reciproco las alfa-amilasa son estables bajo estas
condiciones. Teniendo en cuenta que el pH medio de cultivo puede variar y causar
modificaciones en el sustrato por no llevar un control, los resultados arrojados de pH
finales van de 5,2 a 5,9 en donde se puede decir que como no se llevó control el ph del
medio de cultivo pudo estar en un rango de 4.8 - 5.0 lo cual arroja resultados diferentes en
las UA/enzimática .

La actividad alfa-amilasa intestinal fue medida y caracterizada en cinco especies de


aspirados que habitan en el mar mediterráneo Diplodus annurlaris (Linnaeus 1758). Las
principales evidencias fueron observadas en el pH óptimo y en la sensibilidad a la
temperatura.

Efecto de distintos factores sobre la actividad amilasa


Para caracterizar el pH y la temperatura óptimos de la actividad amilasa se utilizó un rango
de pH entre 2,0 y 12,0, y un rango de temperatura entre 25 y 70 °C. Para la determinación
de la estabilidad al pH de la actividad amilasa, los extractos fueron preincubados (90 min,
25 ºC) a valores de pH de 2,0, 5,0, 7,0, 9,0 y 12,0, mientras que la estabilidad a la
temperatura se determinó mediante la preincubación de los extractos a temperaturas de 30,
40, 50 y 60 °C. La sensibilidad al inhibidor comercial de α-amilasa (de Triticum aestivum
Linnaeus, 1753, tipo I, Sigma, A1520) fue determinada incubando 100 U de actividad
amilasa con 15 U de inhibidor durante 30 min, y comparando la actividad con un control
que consistió en una cantidad equivalente de extracto en ausencia de inhibidor.

C. Respalde la Garantía.

La actividad alfa-amilasa intestinal fue medida y caracterizada en cinco especies de


aspirados que habitan en el mar mediterráneo: Pagrus (linnaeus 1758), Pagellus erytrhinus
(Linnaeus 1758), pagellus bogaraveo (Brunnich, 1978) Boops boops (Linnaeus, 1758) y
Diplodus annurlaris (Linnaeus 1758). Las principales evidencias fueron observadas en el
pH óptimo y en la sensibilidad a la temperatura. La actividad amilasa en B boops, resulto
ser poco resistente a las altas temperaturas a diferencia de la D, annularis que resulto muy
resistente. La separación electroforética en condiciones nativas (PAGE) e isoelectoenfoque
(IEF) revelaron la existencia de un numero de isoformas de la alfa-amilasa, que osilo entre
una y tres fracciones activas en las especies estudiadas. Estas diferencias posiblemente
estén relacionadas con los distintos hábitos alimentarios de las especies estudiadas.

Los óptimos de pH para la actividad amilasa se mostraron modelos diferentes:

Un máximo a pH 7,0 .dos máximos pH 7,0 y 9,0 y pH 6,0 y 9,0, mientras que para P.
bogaraveo se detectaron tres óptimos a pH 4,0 6,0 y 8,0.

La actividad residual a diferentes pH, mostro que las amilasas son poco estables en medio
ácido, reduciéndose su actividad en más de un 70% después de 30 minutos de incubación
en todas las especies estudiadas, el pH alcalino o neutro no redujo la actividad amilasa,

D. Encuentre las posibles excepciones,

La Temperatura las enzimas presentan un comportamiento dual en el rango de 5°C-50°C


la actividad aumenta ya que la velocidad de reacción se incrementa. A temperaturas
superiores 60°C-80°C, la gran mayoría de las enzimas se inactivan debido a la
desnaturalización que sufren.

El origen de la enzima que modifica el mismo sustrato pero que por provenir de diferentes
fuentes difirieron en su pH optimo, pl, KM, velocidad de inactivación térmica, reciben el
nombre de isoenzimas, en ellas la variación del pH puede ser hasta de 2,5 a 3 unidades de
pH.

Las impurezas en los medios de cultivo modifican el pH óptimo, las variaciones de


actividad con cambios de pH, indican la necesidad de usar tampones al estar trabajando con
enzimas.

E. Concluya. Ratifique la Hipótesis escogida

Con los resultados obtenidos en el presente estudio, se considera que el pH y la


temperatura influyen en las variaciones en la actividad enzimática, teniendo en cuenta que
en el experimento no se realizó un control en el Ph este pudo modificar los sustratos y no
activar las enzimas, haciendo que los resultados obtenidos sean diferentes.

Referencias Bibliográficas

I, f. f. (febrero de 2002). Caracterización de la actividad alfa-amilasa, en algunos espáridos


mediterráneos. boletín. instituto español de oceanografia,

Ortiz, f. biotecnología_305689 Producción de enzimas de interés industrial. Universidad


nacional abierta y a distancia
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/305689/enzimas_ova.pdf

Padilla, B; Acuña, J; Velásquez, L (2006) Inhibidores de α -amilasas de la broca del café


hypothenemus hampei en diferentes especies vegetales. Revista Colombiana de
Entomología

Wiseman, A. (1985. Manual de biotecnología de las enzimas. Editorial Acribia s.a.


Zaragoza- España.

Potrebbero piacerti anche