UNIVERSIDAD LAICA “ELOY ALFARO” DE MANABI

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

TEMA:

CAPITULO # 4: HERRAMIENTAS UTILIZADAS POR LA

GENETICA MOLECULAR

Nombres y Apellidos:

Carreño Bravo Andrea Gabriela

Semestre:

Quinto “B”

Catedrático:

Dr. Guillermo Guillen Menéndez

CAPITULO 4:

HERRAMIENTAS UTILIZADAS POR LA GENETICA MOLECULAR HUMANA.

Uno de los grandes objetivos que tiene y ha tenido la genética desde siempre es el
hecho de caracterizar las bases moleculares de las mutaciones causantes de
enfermedades genéticas y mutaciones, utilizando esta información para mejorar en
los métodos diagnósticos para estas o el tratamiento adecuado y más favorable
para la cura y bienestar del paciente.

Análisis de secuencias individuales de DNA y RNA.

Se presentan 2 obstáculos importantes para llevar a cabo ciertas investigaciones

acerca de la base molecular de enfermedades génicas. El primer caso es, lograr
obtener ADN o ARN suficiente para ser analizado. El segundo caso nos habla de
aislar las secuencias antes tomadas de ADN y ARNm de entre todas las secuencias
que están presentes en la célula.

Clonación molecular.

El gran interés en la clonación es el poder realizar aislar una molécula de ADN o

gen que contenga un gen u otra secuencia de ADN de interés, permitiendo
amplificarlo para debido su estudio.

Enzimas de restricción.

Las endonucleasas de restricción, son enzimas descubiertas a inicio de los años

setenta, cuya característica fue uno de los grandes avances para la genética. Estas
enzimas están encargadas de reconocer secuencias de doble cadena especificas
en el ADN, para luego dividirlas. Los sitios de corte pueden estar opuestos entre sí.

En la actualidad se conocen más de tres mil quinientas enzimas de restricción, cada

una de ellas poseen su propio sitio de reconocimiento de mayor tamaño. La
secuencias son palíndromas, es decir, que las secuencias de bases de
reconocimiento es la misma en ambas cadenas cuando esta se lee de manera 5’ a
3’.

Vectores.

Un vector es una molécula de ADN en la que se clona el gen o secuencia de ADN

de interés, esta molécula de ADN resulta es capaz de replicarse en un huésped
determinado, ya sean células de levadura, o bacterias, para finalmente ser aislado
de manera pura, y ser analizado. Tras insertar una molécula de ADN humano en
un vector, gracias a la acción de la ligasa, la nueva molécula puede ser introducida
en el huésped bacteriano y posteriormente este termina propagándose con la
molécula del vector. Los vectores que se replican pueden dar forma a un gran
número de copias. Al ligar moléculas de vectores de distintos origines, se denomina
tecnología del ADN recombinante. Para este tipo de tecnología se utilizan
distintos vectores con ventajas y limitaciones propias, uno de los vectores más
utilizados son los plásmidos.

Los plásmidos son moléculas de ADN circular de doble cadena de bacterias y

levaduras, que se mantienen separados y se replican de forma independiente de
los cromosomas del moo; si son utilizados para la clonación suelen ser pequeños,
y los acompañas tres componentes fundamentales: un origen de replicación, uno o
más marcadores, y uno o más sitios de restricción.

Genotecas.

La genoteca es la colección de clones recombinantes que se sabe contienen un

gen, DNAc u otra secuencia. Si la colección de clones tiene tamaño suficiente,
debería de tener todas las secuencias del ADN.

Métodos de análisis de los ácidos nucleicos.

Para este tipo de análisis se requiere la detección de segmentos de ADN o

moléculas de ARN determinados, entre muchos otros segmentos de ADN o
moléculas de ARN en una muestra celular o tisular. Al analizar el ADN genómico, el
problema se haya en encontrar y analizar el fragmento de ADN de interés, entre un
ADN genómico y un ADN generados por digestión de ADN genómico humano.

La solución a esto, se lleva a cabo de electroforesis en gel separando moléculas de

ADN y ARN según su tamaño y luego identificar la molécula de interés.

Reacción en cadena de la polimerasa.

La reacción en cadena de la polimerasa o PCR por sus siglas en ingles, es la

amplificación enzimática de un fragmento de ADN localizado entre un par de
cebadores. Es una alternativa de la clonación, que ayuda a generar cantidades
ilimitadas de una secuencia de ADN de interés.

Los cebadores están diseñados de tal manera que uno de ellos es complementario
a una cadena de ADN de uno de los lados de la secuencia, y el otro es
complementario a la otra cadena en sentido opuesto. De tal manera los
oligonucleótidos cebadores flanquean la secuencia diana y sus extremos 3’ están
dirigidos a la secuencia a amplificar. Luego la ADN polimerasa sintetiza dos nuevas
cadenas de ADN usando como plantilla la secuencia entre los cebadores. Estas
cadenas son complementarias y capaces de formar otra cadena copia de la
secuencia diana original.

La rápida amplificación mediante PCR puede utilizarse para facilitar la clonación de

genes a partir de muestras ADN y analizar sus mutaciones. La PCR también se
puede aplicar en el análisis de pequeñas muestras de ARN, por un método llamado
PCR con transcriptasa inversa.

Análisis de secuencias de ADN.

Una de las técnicas más utilizadas es la secuenciación de Sanger. Actualmente

una secuencia de segmentos purificados de ADN puede determinarse de manera
sencilla como si se tratara de una secuencia diana amplificada por PCR. En la
secuenciación de Sanger un fragmento de ADN puede utilizarse como plantilla para
ADN cebador, y la ADN polimerasa sigue esta plantilla, ampliando el cebador e
incorporando nucleótidos.
CONCLUSIÓN:

El avance de conocimientos en la genética molecular ha ido en ascenso, y

permitiendo el desarrollo de tecnologías nuevas y revolucionarias, facilitando el
análisis detallado de genes normales, o algunos que presentes anormalidades o
mutaciones, logrando determinar la expresión de estos en estados de salud y/o
enfermedad.

Las enzimas de restricción son enzimas encargadas de cortar el ADN. Cada una
de ellas es capaz de reconocer un número pequeño de secuencias blanco y cortar
el ADN en 0 cerca de esas secuencias. Muchas enzimas de restricción hacen cortes
de manera escalonada produciendo extremos sobresalientes de ADN de cadena
sencilla. Sin embargo, algunos pueden producir extremos romos.

La ADN ligasa es una enzima encargada de unir el ADN. Si dos fragmentos de ADN
tienen extremos complementarios, la ligasa puede unirlos para formar una molécula
única e intacta de ADN. Durante los procesos de clonación de ADN, se utilizan
enzimas de restricción y ADN ligasa para insertar genes y otros fragmentos de ADN
en plásmidos.

Respecto a la reacción en cadena de la polimerasa, o PCR, debemos tener claro

que es una técnica para hacer ilimitadas copias de una determinada región de
ADN dentro de un vector o de manera in vitro; es decir, que la técnica puede
realizarse en un tubo de ensayo en lugar de un organismo. La PCR depende de un
ADN polimerasa termoestable, por ejemplo la Taq polimerasa, además de que
necesita la ayuda de cebadores de ADN diseñados específicamente para la región
de ADN de interés.

En la PCR, la reacción se somete repetidamente a un ciclo de cambios de

temperatura que permiten la producción de muchas copias de la región blanca. La
PCR tiene muchas aplicaciones en la investigación y en la práctica. Se utiliza de
forma rutinaria en la clonación de ADN, el diagnóstico médico y el análisis forense
de ADN.