26/03/2015

Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Ciencias Biomédicas y Tecnológicas
Departamento de Microbiología
Microbiología General
Germán González M.
ggonzalm@uc.edu.ve
Microbiología
• Es la ciencia que estudia los microorganismos, un
grupo amplio y diverso de organismos microscópicos
que existen como células aisladas, asociadas e
inclusive como biomoléculas integradas (virus).
• Deriva de 3 palabras griegas:
• mikros (pequeño)
• bios (vida)
• logos (ciencia)
• La Microbiología, es una ciencia que nos permite
comprender las complejas interrelaciones entre el ser
humano y los microorganismos, así como la relación
con el medio ambiente.

Subdisciplinas y otras disciplinas

relacionadas PROCARIOTAS

Bacteriología: Estudio de los procariontes (bacterias,

arqueas).

Virología (Virus)

Micología (hongos).

Parasitología (parásitos)

Protozoología (protozoos)

Protistología (protistas)

Micropaleontología (microfósiles)

Palinología (polen y las esporas)

Ficología o Algología (algas y microalgas).

Reinos

Eubacteria (bacterias verdaderas)
Incluye todas las bacterias que infectan al
hombre.

Archaea (archaebacteria)
Microorganismos encontrados en ambientes
extremos.

Morfológicamente, los organismos de ambos reinos

parecen similares, sobre todo por la ausencia de un
núcleo, por lo que están clasificados como
procariotes

1
 26/03/2015

Procariontes

Eubacteria Archaea
Eucariontes
Taxonomía
La taxonomía es la disciplina biológica referida a la
Núcleo No No Sí: limitado por
membrana
teoría y práctica de la clasificación de los
Sí: mitocondria,
organismos.
Organelos No No lisosomas, retículo
endoplásmico etc. La clasificación, nomenclatura e identificación son
tres áreas separadas, pero interrelacionadas de la
Cromosomas Uno Circular Uno Más de uno
Circular
taxonomía.

ARN polimerasa Una (simple) Más de una Más de una (complejo)

(complejo)
La clasificación es el ordenamiento de
microorganismos en grupos taxonómicos (taxa)
con base a semejanzas o interrelaciones.
Peptidoglucanos Sí No No

Nomenclatura
Categorías Taxonómicas Fundamentales
Existe un orden jerárquico:
Establece una terminología que permite saber, a partir
del sufijo de un taxón cualquiera, cuál es su categoría

Reino taxonómica y conocer su posición en la jerarquía
sistemática.

Filo (Phylum) o División (fuera de la Zoología)

Clase
La nomenclatura es un “Sistema Binomial” donde

Orden cada especie recibe un nombre formado por dos
Criterios taxonómicos

Tribu palabras: Bacillus subtilis.
• Morfológicos

Familia • De cultivo

Género • Composición química
Cada clase distinta de organismo se denomina como
• Actividad bioquímica una “especie”.

Especie
• Características antigénicas
y moleculares
Las “especies” se nombran con dos vocablos latinos.

Nomenclatura Morfología y agrupación de las

bacterias

La primera palabra del nombre es el género (Mayúscula)
- Corresponde a una palabra latina o griega Fundamentalmente se diferencian tres
Ej.: Lactobacillus, Micrococcus morfologías:
- El nombre latinizado de una persona. 1. Formas esféricas
Ej.: Neisseria (Albert Neisser). 2. Formas cilíndricas rectas o bacilos
3. Formas cilíndricas incurvadas o

La segunda palabra describe alguna característica espirilos.
(Minuscula). - Otras: filamentosas y ramificadas
- Un adjetivo que modifica al nombre: (Actinomicetos), largas y finas, enrolladas en
- Staphylococcus albus espiral y bacterias con un gran pleomorfismo.

Además del nombre científico las bacterias pueden tener

un nombre común.
Ej.: Gonococo Neiseria gonorhoeae
Bacilo de “Koch” Mycobacterium
tuberculosis

2
 26/03/2015

Agrupaciones Bacterianas

Cocos Bacilos

Morfología de las
bacterias
Espirilos

Célula eucariota
Estructura celular

Célula eucariota
Células

Procariota

Eucariota

3
 26/03/2015

Organización, estructura Bacteriana Pared celular. Propiedades:

Elementos obligados: 1. Gran rigidez, que contrarresta las fuerzas
Pared bacteriana.
osmóticas a que está sometido el protoplasto
Membrana citoplasmática.
Citoplasma.
2. Gran flexibilidad: esto junto con su rigidez,
Ribosomas.
ayuda a soportar amplias variaciones de la
Nucleoide o cromosoma bacteriano
tensión osmótica del protoplasto
Elementos facultativos:
Capsula 3. Condiciona la forma celular.
Flagelos.
Fimbrias o pili.
Espora.

Pared Celular Espacio entre la cápsula y la

membrana citoplasmática
Peptidoglicano. Composición
química y estructura
• La pared celular bacteriana debe su resistencia a una
envoltura compuesta por mureína, mucopéptido o
peptidoglicano.
• Está formado por repeticiones de una unidad disacárida
fundamental unida a su vez a un tetrapéptido.
• La unidad disacárida repetitiva consiste en :
N-acetilglucosamina (NAG), unida por enlace ß(14) a
N-acetilmurámico (NAM).

• Un tetrapéptido típico de muchas bacterias es:

L-alanina - D-glutámico –mesodiaminopimélico -
D-alanina
Gram negativas Gram positivas

4
 26/03/2015

Peptidoglicano. Disacáridos
N-acetil
(NAM) (NAG) glucosamina

M: N-acetil
murámico

Formación de peptidoglicano
Conexión entre
las unidades
peptídicas y las
de glicano

Pared Celular de Gram positivas Acidos teicoicos:

• Están presentes en muchas bacterias
Gram-positivas, pero no en todas.
• Son polímeros de hasta 30 unidades de
glicerol-fosfato o ribitol-fosfato, unidas
entre sí por enlaces fosfodiéster,

Acidos lipoteicoicos:
• Están presentes en todas las bacterias Gram-positivas,
aun en condiciones de carencia de fosfato.
• Constituyen ácidos glicerol-teicoicos que se encuentran
unidos a la membrana citoplásmica

5
 26/03/2015

Pared Celular. Bacterias Gram negativas

Pared celular. Bacterias Gram negativas
Estructura Básica:

Membrana citoplasmática (membrana canales proteícos que
permiten el paso de
interna) ciertas sustancias

contiene enzimas importantes

Pared celular delgada de peptidoglicano, que para la nutrición en estas
bacterias.
rodea a la anterior

Membrana externa, que recubre la pared

celular.

Lipopolisacárido (LPS) Gram + Bacterias Gram -

El LPS es una molécula

anfipática que contiene
tres regiones diferentes: el
lípido A, el core y el
antígeno O.

responsable de la El lípido A, es un complejo

toxicidad del LPS de azúcares, fosfatos,
(endotoxina). ácidos grasos y forma una
bicapa con los fosfolípidos
de la membrana.

Tinción de Gram
 Es un tipo de tinción diferencial empleado en
Microbiología para la visualización de bacterias, debe
su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que
desarrolló la técnica en 1884.

 Se utiliza para referirse a la morfología celular

bacteriana y para poder realizar una primera
aproximación a la diferenciación bacteriana,

 Considerándose Bacterias Gram positivas a las

bacterias que se visualizan de color violeta y
Bacterias Gram negativas a las que se visualizan de
color fucsia.

6
 26/03/2015

Técnica de la coloración de Gram

1. Hacer el extendido o frotis
2. Dejar secar a temperatura ambiente
3. Fijar la muestra al calor (flameado 3 veces aprox.)
4. Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y
esperar 1 min.
5. Lavar con agua.
6. Agregar lugol dejar por 1 min.
7. Lavar con agua.
8. Agregar alcohol - acetona y esperar 15 segundos
9. Lavar con agua.
10. Agregar safranina o fucsina y esperar 1 min.
11. Lavar con agua.
12. Para observar al microscopio óptico se hace con el
objetivo de 100x con aceite de inmersión.

Tinción de Gram Tinción de Gram. Fundamento

El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las
células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram
negativas).

El lugol contiene yodo, el cual penetra en las células y
forma un complejo insoluble en solución acuosa con el
cristal violeta.

La mezcla de alcohol-acetona, sirve para realizar la
decoloración, ya que el complejo yodo/cristal violeta, es
soluble en la misma.
Las bacterias Gram positivas, al poseer una pared
celular resistente y con una mayor proporción de
peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del
solvente orgánico, sino que éste deshidrata la pared
celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio
entre las moléculas y provocando que el complejo de
cristal violeta-yodo, quede atrapado dentro de la pared
celular, manteniendo así, la coloración azul-violácea.

Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras

que los Gram negativos sí lo hacen.

Tinción de Gram. Fundamento

Las bacterias Gram negativas, tienen una capa de
peptidoglucano delgada, soluble en solventes
orgánicos, como la mezcla de alcohol/acetona; que
Bacterias Gram + disuelve la membrana exterior de la pared celular. Esta
delgada capa de peptidoglicano, es incapaz de retener
el complejo de cristal violeta/yodo y la célula se
decolora. Por lo tanto, al aplicar el colorante de
contraste (de color rojo, como la safranina o la fucsina
básica), las células gramnegativas se observan de
color rosado-fucsia.

7
 26/03/2015

Membrana citoplasmática:
 Esta formada por fosfolípidos y proteínas, y a diferencia de
las eucariotas, no contiene esteroles (excepto el
mycoplasma).
 Contiene las enzimas del transporte electrónico (produce
energía).
 Componentes de la cápsula y la pared celular se sintetizan
aquí.
 Es una barrera osmótica, selectiva y activa.
 Las bacterias gramnegativas tienen dos membranas: una
Bacterias Gram - interna y otra externa, mientras que las grampositivas, solo
poseen una membrana (interna).
 Tiene un papel fundamental en la división del núcleo
bacteriano. Los mesosomas, repliegues de la membrana,
tienen gran importancia en esta etapa.

Citoplasma Bacteriano
• El citoplasma bacteriano es la masa de materia viva
delimitada por la membrana citoplásmica.
• Formado 85 % por agua.
• En su interior se albergan: cuerpos nucleares
(nucleoide), plásmidos, ribosomas , inclusiones.
• Nucleoide o cromosoma bacteriano, carece de membrana
nuclear y esta formado por un único filamento de ADN.
Confiere sus propiedades genéticas a la bacteria y regula la
síntesis proteica .
• Ribosomas, son elementos granulosos compuestos por
ARN ribosómico, cumplen un papel importante en la Nucleoide de E. coli
síntesis proteica.

 El ADN de la bacteria está constituido por una sola Cápsula

molécula en doble hélice, circular, superenrollada y
asociada a proteínas no histonas y puede estar unida
a los mesosomas.
 En las células bacterianas puede haber también una
o varias moléculas de ADN extracromosómico de
menor masa molecular que el cromosoma
denominadas plásmidos.
 Estructura polisacárida de envoltura
 Factor de virulencia de la bacteria.
 Protege a la bacteria de la fagocitosis y facilita la
invasión.
 Permite la diferenciación en tipos serológicos.

 Estos plásmidos, pueden tener genes intervienen en

los procesos de intercambio genético (plásmido F).

8
 26/03/2015

El flagelo bacteriano es
un apéndice movido por
Flagelos un motor rotatorio, incluye:
1. Filamento
 Estructuras proteicas, de mayor longitud que los pili. 2. Espacio periplásmico
 De estructura helicoidal y locomotores 3. Codo
4. Unión
(responsables de la motilidad bacteriana). 5. Anillo L
 Constituyen el soporte de los antígenos “H” 6. Eje
7. Anillo P
8. Pared celular
Monotrico
9. Estator
10. Anillo MS
Lofotrico 11. Anillo C
12. Sistema de secreción
Anfitrico de tipo III
13. Membrana externa
14. Membrana
Peritrico citoplasmática
15. Punta

Fimbrias - Pili Endosporas (esporas)

Fimbria: Función de  Son formas latentes de células bacterianas
adhesión a superficies. producidas por ciertas bacterias en condiciones de

Pili sexual: Permite la deficiencia, son formas de reposo (perpetuación) y
unión durante la no formas reproductivas. Las formas de crecimiento
conjugación. activo se llaman células vegetativas
 La espora es resistente a condiciones adversas (altas
temperaturas y solventes orgánicos).
 El citoplasma es deshidratado y contiene ácido
Fimbrias y flagelos de dipicolínico, el cual está relacionado con la
Salmonella typhi en división
resistencia de la espora al calor extremo.
 Producidas principalmente por los géneros Bacillus y
Clostridium.

Esporas Estructura de la
Morfología y localización intracelular Espora
(proteínas)

Cutícula (proteínas)

(peptidoglicano)

Ácido dipicolinico Pared

celular
Terminales Sub-terminales Centrales Ca++

9
 26/03/2015

Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Característica Célula vegetativa Endoespora Escuela de Ciencias Biomédicas y Tecnológicas
Departamento de Microbiología
Contenido de Calcio bajo alto
Ac. dipiconílico ausente presente
Pequeñas proteínas
solubles en ácido
ausentes presentes
Fisiología y metabolismo
Contenido de agua 80-90% 10-25% bacteriano
pH citoplasma 7 5,5 - 6
Actividad enzimática elevada baja
Germán González M.
Metabolismo elevado Bajo o ausente
ggonzalm@uc.edu.ve
Resistencia: calor, baja elevada
radiación, compuestos
químicos
Sensibilidad lisozima Sensible Resistente

Composición química de una célula

bacteriana
% del peso Cant. por
total celular molécula Requerimientos
Agua 70-85 1 Físicos
Iones inorgánicos 1 20
Azucares 1 250
Aminoácidos y nucleótidos 0,4 100
Acidos grasos 1 50
Otras pequeñas moléculas 0,2 ~300
Macromoléculas (proteínas, ac.
nucleicos y polisacáridos) 26 ~ 3000

Clasificación de las bacterias según

Clasificación de las bacterias según
los requerimientos de O2
Aerobios estrictos Anaerobios estrictos

Requieren oxígeno para su
No pueden crecer en
crecimiento, dependen de presencia de oxígeno
este elemento para cubrir (carecen de las enzimas
sus necesidades superóxido dismutasa y/o
energéticas. catalasa

El oxígeno es el aceptor
Utilizan respiración
final de electrones en la anaerobia (fermentación),
cadena respiratoria. donde los aceptores finales

No efectúan fermentación de electrones pueden ser
SO42-, Fumarato2- o CO32-
los requerimientos de O2
Anaerobios facultativos Microaerófilos

Pueden crecer en presencia • Sólo pueden crecer con
o ausencia de oxígeno. bajas tensiones de oxígeno,

Utilizan al oxígeno como porque las altas tensiones
aceptor final de electrones son tóxicas (1 a 12% de O2
en la cadena respiratoria, en la fase gaseosa).
cuando está disponible. • La energía la obtienen por

En ausencia de oxígeno, la respiración aeróbica, cuando
energía la obtienen por no hay aceptores
fermentación o respiración electrónicos terminales
anaerobia. alternativos o anaeróbica
Anaerobios aerotolerantes: Pueden crecer en presencia o ausencia
de oxígeno, pero la energía la obtienen por fermentación.

10
 26/03/2015

Nutrición bacteriana
Carbono
El carbono es utilizado por los microorganismos para sintetizar
los compuestos orgánicos requeridos para las estructuras y
funciones de la célula.

Autótrofas o litotrofas Heterótrofas u organotrofas

Aerobio Anaerobio Anaerobio Anaerobio Microarófilo
estricto facultativo aerotolerante estricto
• Son capaces de sintetizar • Utilizan sustancias orgánicas
casi todos sus componentes como fuente de carbono. En
orgánicos a partir de este último grupo se
compuestos inorgánicos encuentran todas las
como el CO2. bacterias de interés médico
• Son de vida libre (suelo,
agua). No necesitan parasitar
a otros organismos
SOD: Superoxido dismutasa

Temperatura
Organismo Fuente Energía Fuente de • Psicrófilas: -5 a 30ºC, óptimo: 15ºC
Carbono • Mesófilas: 10 a 45ºC, óptimo: 30ºC
Quimioautótrofos Compuestos CO2 • Termófilas: 25 a 80ºC, óptimo: 55ºC.
Inorgánicos
Quimioheterótrofos* Compuestos Compuestos
Inorgánicos Orgánicos
Fotoautótrofos Luz CO2

Fotoheterótrofos Luz Compuestos

Orgánicos

* Grupo más extenso de bacterias cultivadas en laboratorios y bacterias patógenas

pH (Concentración de Hidrógeno) Reproducción

La regulación del pH interno de los bacteriana
microorganismos se realiza mediante un sistema
de transporte de protones localizado en la Fisión Binaria
membrana citoplásmatica, es una bomba de
protones ATP dependiente.
El rango de pH óptimo = 5 - 8.

Acidófilo (pH 1 - 5)

Neutrófilos (pH 5 - 9)

Alcalófilos (pH 9 - 10)

11

Crecimiento Bacteriano
El tiempo que tarda en dividirse (duplicar) una bacteria, se
denomina Tiempo de Generación. El crecimiento de un
cultivo se produce en 4 fases en el tiempo:
Crecimiento Bacteriano
Fase Estacionaria

La muerte y la división de los
organismos están en equilibrio.

La muerte es debida a la
reducción de nutrientes,
cambios de pH, desechos
tóxicos y reducción de oxígeno.

Las células son más pequeñas
y tienen menos ribosomas.

En algunos casos las células
no mueren, pero no están
multiplicándose.
26/03/2015
Crecimiento Bacteriano
Fase de Latencia o Fase de crecimiento
adaptación exponencial (Logarítmica)

Los organismos están
La división se produce en
adaptándose al ambiente una proporción constante
(poca o ninguna división). (tiempo de Generación)
pero varía con las

Están sintetizando ADN, distintas especies, con la
ribosomas y enzimas por temperatura y los medios
descomposición de de cultivo.
nutrientes, para ser
En este momento las
usados posteriormente células son muy
para el crecimiento. susceptibles a los
inhibidores (antibióticos)
Fase de declinación o
muerte

La población está muriendo
en forma geométrica, ocurren
más muertes, que aparición
de nuevas células.

Las muertes son debidas a
los factores de la fase
estacionaria, además de las
enzimas líticas que se liberan
cuando se lisan las bacterias.
12