UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES

FACULTAD DE INGENIERIA
INSTITUTO DE INGENIERIA SANITARIA

PRACTICA DE LABORATORIO N˚1

INTRODUCCION AL LABORATORIO
MICROBIOLOGICO

1. Introducción.-

El laboratorio de microbiología es un área en el cual se manejan en forma rutinaria

muestras que contienen microorganismos patógenos, por lo que se requiere un protocolo
definido para evitar accidentes en el laboratorio

Las dos causas más comunes de accidentes de laboratorio son:

 La ignorancia
 La falta de cuidado

Por lo que en un intento de reducir los riesgos y accidentes, se recomienda las

siguientes normas de seguridad:

 Los laboratorios que manejan materiales peligrosos deben restringir el acceso

al laboratorio y sólo permitirlo al personal especializado.
 Descontaminar el espacio y los materiales a ser utilizados con una solución de
cloro al 10%.
 El personal que trabaja con agentes infecciosos peligrosos, debe estar
vacunado apropiadamente contra ese agente.
 Todos los especimenes microbiológicos se deben considerar potencialmente
infecciosos y manejarse de la forma apropiada.
 Todas las acciones de pipeteado se deben hacer instrumentalmente y no con la
boca.
 El personal de laboratorio siempre debe vestir ropa de seguridad incluyendo
batas o uniformes, y debe practicar el lavado de manos después de manipular
material infeccioso.
 No se debe comer o ingerir bebidas dentro del laboratorio.

Práctica Nro. 1 Dra. Eufemia Briançon 1

  Se debe usar guantes de látex o de vinilo siempre que se maneja material
infeccioso.
 Después de terminada la labor, se debe desinfectar el espacio y los materiales
usados con una solución de cloro al 10%.

2. Limpieza y Esterilización del Material de Laboratorio.-

La esterilización tiene como finalidad la destrucción o eliminación de los

microorganismos o biocontaminantes y sus formas resistentes de los objetos, sustancias
o medios de cultivo, sin alterar la composición de los productos esterilizados.

CLASIFICACIÓN:
Se divide en dos grupos
Procedimientos Físicos.
Procedimientos Químicos.

a) Procedimientos Físicos.-

Dentro de estos procedimientos se encuentra la esterilización a calor seco y a calor

húmedo.

Entre los procedimientos de esterilización por calor seco se encuentra el flameado o

llameado que se utiliza para esterilizar objetos pequeños que no se descomponen
fácilmente por el calor, se los esteriliza sometiéndolos a dicha llama, haciendo que esta
actúe sobre la superficie por un tiempo no menor de 20 minutos o hasta que el objeto
haya sido calentado al rojo vivo.

Estufa: La temperatura a la que se esteriliza en estos aparatos es de 160-180 ºC, el

tiempo varía de 1-2 horas para conseguir la destrucción de microorganismos
contaminantes.
En la actualidad estas estufas son eléctricas y autorregulables.
El material a esterilizar por este método es el de vidrio.

Entre los procedimientos de esterilización por calor húmedo se encuentra la ebullición,

el autoclave que se utiliza para esterilizar medios bacteriológicos e instrumental
quirúrgico, la temperatura a la que se esteriliza es de 120 ºC durante 15 minutos, se debe
tomar en cuenta que el ciclo de autoclavado no debe exceder los 45 minutos, luego
tenemos la Tindalización, Pasteurización, etc.

b) Procedimientos Químicos.-

Estos agentes químicos actúan bajo 2 puntos de vista:

Bactericida.- Destruyen completamente a los microorganismos, se denominan

también desinfectantes.

Práctica Nro. 1 Dra. Eufemia Briançon 2

 Bacteriostático.- Detienen el desarrollo microbiano, se denomina también antiséptico.
Entre estos agentes podemos indicar a el Yodo y sus derivados, mercurio y sus
compuestos, solución de hipoclorito de sodio, alcohol, formol, etc.

3. Medios de Cultivo.-

Los medios de cultivo son mezclas heterogéneas de sustancias de distinta naturaleza

que utilizan los microorganismos para su desarrollo.

Según la finalidad, el medio de cultivo puede tener en su composición los siguientes

ingredientes: Aminoácidos, extractos, productos biliados, carbohidratos, productos
bioquímicos, colorantes e indicadores.

Los medios de cultivo de acuerdo a su naturaleza pueden ser líquidos llamados también
caldos y sólidos llamados agar.

Según su función o aplicación se clasifican en: básicos, enriquecidos, selectivos,

diferenciales, para recuento, para caracterizar bacterias y de mantenimiento.

Para la preparación de los medios de cultivo se debe tomar en cuenta:

 Pesar sustancias de la fórmula, según cantidad a preparar, deben hacerse los

cálculos correspondientes.
 Disolver toda la mezcla en agua destilada.
 Se fraccionan en los tubos de ensayo que se solicitan y se taponan con algodón,
para acumular en vasos o canastillos que van al autoclave, lo mismo sucede
si se trata de cajas de Petri.
 Esterilización que debe ser exacta, ya que si hay sobrecalentamiento hay una
alteración.
 La conservación de los medios de cultivo se la realiza en el refrigerador o en
un lugar oscuro.

En las prácticas de laboratorio se utilizan los medios de cultivo deshidratados que son
productos a los cuales se les han eliminado todas las interferencias de tipo químico y con
un pH ajustado de tal manera que cuando se solubilicen y se esterilicen en tubos o placas
tengan un pH final exacto, con + o – 0,1 de pH, es decir, es un producto estandarizado,
que se les ha controlado físico-químicamente y bacteriológicamente.

Entre los productos mundiales de medios de cultivo deshidratados están:

a) Difco Laboratorios, Detroit, Michigan (USA).

b) BBL, Division of Bio – Quest. Division of Becton, Dickinson and Company.
c) Merck, Darmstadt, R.F. de Alemania.

Práctica Nro. 1 Dra. Eufemia Briançon 3

Práctica Nro. 1 Dra. Eufemia Briançon 4
 Medios de Cultivos

Práctica Nro. 1 Dra. Eufemia Briançon 5