UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE BIOANALISIS
INMUNOLOGIA CLINICA
MANUAL DE PRACTICAS
ACADEMICA: CRODA TODD MARIA TERESA
EQUIPO:
CERON SANTIAGO TZINDILU
DAVILA HERRERA DANIEL
RODRIGUEZ SALDAÑA CYNTHIA IRAIS
CELESTINO RUSVELT
 PRACTICA 1 REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCIÓN:
Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo
indica para diagnosticar enfermedades que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea
(Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta) y Rickettsiosis (Fiebre
Q, fiebre manchada de las montañas rocallosas). Cuando el cuerpo humano es
invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos (tipo especial
de proteínas) contra ellos, los cuales pueden ser observados en muestra de
sangre del paciente y ser identificados de acuerdo a cantidad y tipo de infección.
Las infecciones se suelen adquirir en áreas con mala higiene, como zonas
después de desastre o guerras, extrema pobreza y falta de servicios de drenaje y
agua potable, epidemia de piojos y garrapatas, entre otros. No obstante, la
presencia de estos agentes infecciosos también se da en zonas urbanas donde se
consumen alimentos preparados con poca higiene y al aire libre.

FUNDAMENTOS DEL METODO

El suero del paciente se pone en contacto con antígenos específicos. En
este caso se utilizan suspensiones de Salmonellas o Brucellas muertos. Si
la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se producirá una
aglutinación visible macroscópicamente.
MATERIALES
 Antígenos Febriles Salmonella: suspensión en solución salina con
conservantes apropiados, conteniendo los siguientes antígenos
bacterianos:
 Antígenos Paratyphoid A (Salmonella, antígeno flagelar a)
 Antígenos Paratyphoid B (Salmonella, antígeno flagelar b).- Antígenos
Typhoid H (Salmonella, antígeno flagelar d).-
 Antígenos Typhoid O (Salmonella, antígeno somático D).
 Antígenos Febriles Brucella: suspensión de antígenos bacterianos
(Brucella abortus, cepa 1119-3) en solución f isiológica con
conservantes apropiados. La concentración celular de los antígenos se
encuentra entre el 4 y el 6%. Las bacterias utilizadas se encuentran en
fase lisa. Antígenos Febriles Controles:-
 Control Positivo: dilución de suero humano inactivado positivo.-
 Control Negativo: dilución de suero humano negativo.

PROCEDIMIENTO
TECNICA RAPIDA EN PLACA
Colocar en una placa una gota (50 ul) de suero y agregar una gota (50 ul)
de suspensión de Antígeno. Mezclar y agitar la placa en forma circular
durante 2 minutos. Observar la presencia o ausencia de aglutinación
utilizando una luz indirecta sobre fondo oscuro.
TITULACION RAPIDA EN PLACA
1) Dividir una placa de vidrio en sectores de 4 cm2 aproximadamente. 2)
Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80 ul, 40
ul, 20 ul, 10 ul y 5 ul de suero límpido. Repetir el procedimiento para un
control negativo y uno positivo. 3) Colocar 1 gota de Antígeno previamente
agitado sobre cada gota de suero. 4) Mezclar el suero y el Antígeno utilizando
una varilla abarcando un área de 2 cm de diámetro aproximadamente. Debe
emplearse una varilla distinta para cada dilución de suero o la misma varilla
mezclando a partir de la muestra más diluida. 5) Agitar la placa durante 2
minutos en forma circular. 6) Observar la aglutinación utilizando luz indirecta
sobre fondo

RESULTADOS:
durante esta práctica en la muestra que utilizamos no se pudo apreciar una
aglutinación por lo que el resultado se interpreta como negativo.

CONCLUSION
en esta practica analizamos un método semi cuantitativo para la determinacion de
enfermedades que presentan procesos febrilea , el resultado fue negativo así que
no se pudo realzar los títulos en tubo.
 PRACTICA 2 MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
MÉTODO DE HEMOAGLUTINACION
INTRODUCCION:
La Mononucleososis infecciosa, "mono," "enfermedad del beso," la enfermedad de
Pfeiffer y fiebre glandular son todos los términos popularmente usados para una
enfermedad muy común causada por el virus Epstein-Barr (EBV). El 50% de los
niños se infectan por EBV antes de los 5 años, y hasta el 95% de la población
adulta se encuentra infectada. La Mononucleosis Infecciosa (MI) es una infección
viral común. La causa principal de la MI (80% de los casos) es el virus Epstein-
Barr (EBV) o el virus Herpes humano 4. El EBV pertenece a la familia herpesvirus.
El término "mononucleosis" hace referencia a un aumento en un tipo especial de
glóbulos blancos (linfocitos) en sangre en relación al resto de los componentes
sanguíneos como consecuencia de la infección por EBV.
Diagnóstico serológico de la Mononucleosis infecciosa: el diagnóstico serológico
de la infección por EBV comprende una serie de pruebas no específicas como la
detección de anticuerpos heterófilos, así como unas pruebas específicas para EBV
relacionadas con la respuesta de anticuerpos en función del tiempo frente a varios
antígenos producidos durante el ciclo de vida del virus.
Los antígenos tempranos (EA) se producen al comienzo del ciclo lítico, seguido
por la expresión de antígenos de cápside viral (VCA) al mismo tiempo que el
genoma viral. Durante el ciclo latente, los Antígenos nucleares de Epstein-Barr
(EBNA) son sintetizados así como proteínas de membrana latentes (LMP) y EBER
(short non coding ARN).
Durante la infección primaria, aparecen los anticuerpos heterófilos en el 60-80%
de los casos, los anti-EA transitorios en el 70-80% de los casos, las IgG e IgM
anti-VCA en el 100% de los casos.
Durante la fase de convalecencia, el 95% de los pacientes serán positivos para
IgG EBNA, mientras que algunos de ellos nunca producirán anticuerpos anti-
EBNA.
Consecuentemente, la mayoría de las pruebas serológicas más comúnmente
usadas para diagnosticar la infección EBV detectan anticuerpos IgG e IgM anti-
VCA, e IgG anti-EBNA.
MATERIALES:
1.- colocar 40 microlitros de suero problema en la placa
2.- añadir una gota del antígeno monolabtest, mezclar bien con un aplicador
extendiendo sobre toda la superficie
3.- osile suavemente la placa por 2 minutos y observe si aparece aglutinacion
INTERPRETACION:
suspensión uniforme sin aglutinación (negativo -)
Aglutinacion visible por la formacion de agregados grandes (positivo +)
RESULTADOS
En esta prueba el resultado fue negativo al no formarse la aglutinación. Por lo que
podemos decir que el paciente no presenta mononucleosis infeccionsa u otra
enfermedad que tenga que ver con la prueba.

PRACTICA 3 INFLUENZA A+B

Las pruebas de diagnóstico rápido para la influenza, pueden ayudar en el
diagnóstico y tratamiento de los pacientes que presentan signos y síntomas
compatibles. En general las pruebas rápidas deberán hacerse cuando los
resultados afectaran la toma de decisiones clínica
Método: Inmunocromatografía
Este método constituye una variedad de EIA; la técnica permite detectar la
presencia de antígenos virales sobre membranas en las cuales se ha pre
absorbido un anticuerpo específico del virus buscado (influenza A o influenza B).
Dada su rápida y fácil elaboración, la ejecución por personal no entrenado y la no
necesidad de equipos costosos, estas técnicas han sido objeto de estudios
recientes. Los estudios comparativos de estas técnicas diagnósticas sitúan la
sensibilidad entre 47 y 92% con respecto al cultivo.
La especificidad de la prueba comparada con el cultivo varía entre el 92-100%. La
sensibilidad de estas pruebas diagnósticas es mayor para virus influenza A que
para virus influenza B y la sensibilidad se ve favorecida cuando las pruebas se
realizan durante los períodos epidémicos. Estas pruebas permiten la identificación
del agente viral en muy corto tiempo (20 a 30 minutos) por lo que se adaptan
fácilmente a la toma de decisiones clínicas. Las técnicas rápidas fueron evaluadas
al inicio de la pandemia por virus influenza A H1N1 de origen porcino y se pudo
comprobar que la sensibilidad de detección de este nuevo virus es similar a la del
virus endémico. Desde el punto de vista cuantitativo estas pruebas detectan in
vitro títulos virales similares en caso de SOIV y virus estacional.
TECNICA:
Muestra nasofaríngea
1.- Utilizar un tubo de ensayo para cada muestra añadir 15 gotas o 500ml de
diluyente B.
2.- Introducir el hisopo, mezclar y extraer la cantidad máxima posible del líquido a
partir del hisopo.
3.- Sacar el dispositivo para influenza A+B de su empaque y depositar 100µl de la
muestra homogeneizada en el pocillo del test marcado con una “s”
Leer los resultados en 10 min después de dispensar la muestra.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
El resultado fue negativo ya que en ninguna resulto positivo, únicamente se marcó
la línea de control.

Resultado: Negativo (-)

 PRÁCTICA 4 ROSA DE BENGALA
Es un método de aglutinación directa; en placas para la detección cualitativa y
semicuantitativa de anticuerpos anti-Brucela en suero humano o animal. La
suspensión bacteriana y coloreada, es aglutinada por anticuerpos IgG o IgM
presentes en el suero del paciente.
Se trata de una Aglutinación en porta, utilizada como un método rápido de
SCREENING. Es muy sensible, siendo positiva en un 95-99% de los casos,
guarda una buena correlación con la Seroaglutinación.

Según Alton et al, (1976) la Rosa de Bengala es en realidad una modificación de

la prueba de la tarjeta empleada en E.U.A. y las variaciones en cuanto a su
sensibilidad se deben a modificaciones introducidas por diversos laboratorios.

Una de las dificultades que se ha señalado a la prueba es la falta de

estandarización internacional del antígeno lo que impide que los resultados
obtenidos en diferentes países sean comparables. (Argorte, 1984).

Jacobo, (1985) y Pfeifter, (1986) recomendaron emplearla como método de

pesquisaje atribuyéndole una sensibilidad semejante a la conferida por la R.F.C.
En algunos sueros los resultados de la R.B. y la R.F.C. son positivos cuando la
S.A.L. es negativa o tienen menos de 30 UI/ml.

Varios investigadores han señalado la alta sensibilidad y especificidad de la Rosa

de Bengala lo que unido a su fácil manipulación y rápida lectura hacen que la
misma sea de gran utilidad en el diagnóstico masivo de la brucelosis. De este
modo (Plommet, 1972 y Priadi, 1992) recomendaron su utilización en el programa
de control y erradicación de la brucelosis por ser simple, fiel y económica.

En investigaciones realizadas en Argentina donde emplearon la Rosa de Bengala

junto a pruebas de Aglutinación en el diagnóstico de la brucelosis porcina
detectándose, una mayor efectividad con la Rosa de Bengala en un 22.0%.
(Delgado y Centorbi, 1990).

Esta prueba es muy utilizada para el diagnóstico de la brucelosis porcina pues

tiene la ventaja de que en piaras con títulos bajos e inespecificos a la aglutinación,
los resultados son negativos. (Rahway, 1993).

Samartino et al. (1997), aplicaron la técnica del antígeno buferado en placa (BPA)
como prueba tamiz en el diagnóstico de la brucelosis y obtuvieron mayor
sensibilidad al compararla con la Rosa de Bengala aunque las dos fueron
determinante para la condición de animal reaccionante.
METODO:
Método semicuantitativo, se realizaran diluciones dobles de la muestra con
solución salina (1:2, 1:4, 1:8…)y proceder para cada dilución como en la prueba
cualitativa.
Sensibilidad del método 25 UI/ml

Interpretación:
 Positivo: Presencia de aglutinación
 Negativo: Ausencia de aglutinación

INTERPRETACION:

La prueba tuvo un resultado negativo.

 PRACTICA 5 PERFIL REUMATICO (PCR)
El factor reumatoide (FR) es un autoanticuerpo, una inmunoglobulina de
tipo IgM producida por el sistema inmune del organismo.
Los autoanticuerpos atacan a tejidos propios, identificándolos como si fueran
estructuras extrañas. A pesar de que no se conoce con certeza la función del FR,
su presencia es útil como marcador de actividad inflamatoria y autoinmune. Esta
prueba detecta y mide la presencia de FR en la sangre.
El FR propociona información valiosa de cara al diagnóstico de una artritis
reumatoide (AR). Aproximadamente un 80% de personas afectadas por AR
presenta un resultado positivo a la prueba del FR. No obstante, puede también
detectarse FR en individuos con otros trastornos, como enfermedades
autoinmunes (por ejemplo el síndrome de Sjögren), así como en infecciones
duraderas o persistentes de tipo bacteriano, vírico o parasitarias, y en algunos
cánceres. A veces también se detecta FR en personas con enfermedades
pulmonares, enfermedad hepática, enfermedad renal y en 1-5% de personas
sanas.
PCR: Es una proteína que se encuentra en bajas concentraciones en condiciones
normales (<0.5 mg/dl) y que debe su nombre a que es precipitada por el
polisacárido C del neumococo. Su síntesis se realiza en el hepatocito en respuesta
a un estímulo inflamatorio y es inducida por Citocinas (especialmente la
interleucina 6).
Se eleva a las pocas horas de iniciada la inflamación o daño tisular y se normaliza
muy rápidamente, cuando estos cesan. Se consideran patológicos valores
plasmáticos de PCR >0.8 mg/dl. Es al igual que la VSG una prueba de actividad
inflamatoria totalmente inespecífica. Refleja más fielmente la actividad inflamatoria
de la enfermedad que la VSG, ya que no sufre modificaciones por otros
parámetros como edad, sexo, variaciones del tamaño, número y forma de los
hematíes, así como de la concentración
plasmática de otras proteínas.
Se consideran valores notablemente elevados los mayores de 10 mg/dl y estos
valores corresponden a infecciones bacterianas, enfermedades reumáticas con
intensa actividad inflamatoria o neoplasias.

METODO: Aglutinacion indirecta

1.- Colocar una gora de suero problema (50µl).
2.- Añadir una gota del reactivo latex-PCR
3.- Mezclar con un aplicador, y agite por 2 minutos.
METODO SEMICUANTITATIVO:
Preparar diluciones dobles (1:2, 1:4, 1:8…)
Tomar una gota de cada dilución individual y repetir el procedimiento.

INTERPRETACION:
 PRÁCTICA 6 CUANTIFICACIÓN DE IgE
Cuando se desea saber si una persona es alérgica a una sustancia en particular,
se lleva a cabo un análisis de sangre de inmunoglobulina E (IgE) para detectar la
presencia de un alérgeno específico.
La reacción alérgica se produce cuando el sistema inmunológico reacciona de
manera exagerada ante algo que generalmente está presente en el ambiente y es
inocuo para la mayoría de la gente. Para proteger al cuerpo de esta "supuesta
amenaza", o alérgeno, el sistema inmunológico de una persona alérgica produce
anticuerpos denominados "inmunoglobulina E".
Los anticuerpos IgE se encuentran principalmente en los pulmones, la piel y las
membranas mucosas. Hacen que los mastocitos (un tipo de célula involucrada en
el proceso de respuesta del sistema inmunológico del organismo)
liberen/descarguen sustancias químicas, incluyendo histamina, en el torrente
sanguíneo. Son éstas sustancias químicas las que desencadenan muchos de los
síntomas alérgicos que afectan los ojos, la nariz, la garganta, los pulmones, la piel
y el tracto gastrointestinal de las personas.
Dado que hay un anticuerpo IgE específico para cada alérgeno (por ejemplo, el
IgE producido como respuesta al polen es diferente del IgE que se genera con una
picadura de abeja) el análisis de variantes específicas en la sangre suele ayudar a
determinar si se sufre de una determinada alergia.
Los reactivos esenciales requeridos para un análisis inmunoenzimometrico
incluyen anticuerpos de alta afinidad y especificidad (enzima e inmovilizados), con
diferentes y distintos reconocimientos de epítopes, en exceso y antígeno nativo.
En este procedimiento, la inmovilización toma lugar durante el análisis en la
superficie de los pozos de la microplaca a través de la interacción de
estreptavidina que cubre el pozo con el anticuerpo monoclonal anti-IgE marcado
con biotina agregado exógenamente. Después de mezclar del anticuerpo
monoclonal marcado con biotina y el suero que contiene antígeno nativo, la
reacción resultante entre el antígeno nativo y el anticuerpo es la formación de un
complejo antígeno-anticuerpo.
INTERPRETACION:
Positivo: Cuando el valor obtenido no cae en el rango de Concentraciones
obtenidos en la Curva de Calibración que se realice.
Negativo: El valor cae dentro de las concentraciones de la curva.
 Valores CURVA DE CALIBRACIÓN

ABSORBANCIAS CONCENTRACIONES
.139 0
.224 5
.560 25
.767 50
1.368 150
1.458 400

RESULTADOS
Lectura Número 1= 0.541
Lectura Número 2= Ḵ 0.598 = 0.569
Lo cual indica que la cantidad de IgE se encontraría en un Concentración de 25,
en la muestra analizada, por lo tanto, sería un valor aceptable, ya que cae dentro
de los valores de la curva de calibración.
A continuación, se muestra la curva de calibración obtenida, junto con el resultado
de la muestra problema, marcado como "X".

Curva de calibración
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 5 25 "X" 50 150 400

Los resultados de la cuantificación de IgE total en la muestra analizada y

comparándolos con los valores de concentración de la inmunoglobulina en
estudio, en la muestra analizada, se puede concluir que estos caen dentro de los
obtenidos en los resultados de la curva de calibración realizada.
 PRACTICA 7 EOSINOFILOS EN MOCO NASAL

Se utiliza en la búsqueda del tipo y agrupación de las bacterias presentes en el

moco nasal, así como para descartar o afirmar la presencia de alergias (rinitis) con
la presencia de eosinofilos por medio de la tinción de Wright y en el caso de la
tinción de gram, la presencia de bacterias, así como su agrupación.
Las rinitis pueden producirse por causas infecciosas y no infecciosas. Las rinitis
infecciosas se caracterizan por secreciones nasales predominantemente espesas
(blancas, amarillas o verdes), con muchos neutrófilos.
Las rinitis no infecciosas se caracterizan por una secreción acuosa o mucoide. El
grupo de las no infecciosas puede ser dividido en rinitis alérgica estacional, rinitis
alérgica perenne y rinitis no alérgica perenne.
Existe evidencia de que la rinitis no alérgica perenne es un desorden heterogéneo
que consta al menos de dos subgrupos, las rinitis intrínsecas y las rinitis
colinérgicas. Las rinitis intrínsecas se caracterizan por eosinofilia nasal (presencia
alta de un tipo de células llamadas eosinofilos en las secreciones nasales) gran
incidencia de pólipos (formaciones de la mucosa nasal de aspecto gelatinoso
asemejando a una uva, ocasionadas por la inflamación de la mucosa y que no son
de origen tumoral) radiografía anormal de senos paranasales, asma no alérgico
concurrente y buena respuesta al tratamiento con corticoides. Por el contrario tales
características faltan en las rinitis colinérgicas. No obstante tal subdivisión de los
pacientes con rinitis no alérgica no siempre puede ser posible en casos
particulares.
Las pruebas cutáneas positivas concordantes con la historia clínica nos dan el
diagnóstico. Si no se pueden realizar pruebas cutáneas puede utilizarse RAST,
ELISA o CAP, para detectar IgE sérica específica contra el o los alérgenos
sospechosos.
Una eosinofilia superior al 10% en el frotis nasal apoya el diagnóstico. Puede
haber un engrosamiento de la mucosa maxilar aunque en general las alteraciones
radiológicas son ligeras. En casos dudosos se puede el diagnóstico corroborar
mediante la realización de provocaciones nasales con el o los antígenos
incriminados.
Principio de la prueba
Uno de los elementos que es posible estudiar en el Laboratorio es la secreción
nasal. Eyermann en 1927 hizo notar que la eosinofilia de la secreción nasal era un
hecho frecuente en pacientes hipersensibles. Murray y Anderson demostraron que
es posible diferenciar las rinitis alérgicas de las vasomotoras e infecciosas
mediante una tinción especial para eosinofilos en secreción nasal: en las rinitis
alérgicas se encuentra gran cantidad de eosinofilos, los que en cambio están
ausentes o en escasa cantidad en los otros tipos de rinitis.
Los eosinófilos interaccionan con otras células por la expresión de múltiples
receptores en su superficie. Además, son células fagocitarias que demuestran
especial afinidad por los complejos antígeno-anticuerpo, por lo que la mayoría de
los eosinófilos son atraídos por quimiotaxis. También los eosinófilos pueden ser
atraídos por sustancias liberadas de los basófilos, como la histamina. Los
eosinófilos pueden regular la respuesta alérgica y las reacciones de
hipersensibilidad mediante la neutralización de la histamina por la histaminasa, y a
su vez producir un factor inhibidor derivado de los eosinófilos para inhibir la
desgranulación de las células cebadas o de los basófilos, que contienen
sustancias vaso activas. Los eosinófilos juegan un papel de defensa del huésped
frente a microorganismos no fagocitables, poseen una función citotóxica (por sus
proteínas granulares), inmuno reguladora (por las citocinas que libera) y son
capaces de participar en la reparación y remodelación tisular. Los mecanismos de
acción de los eosinófilos mejor estudiados tienen que ver con la alergia y en la
defensa contra parásitos.

Interpretacion
Eosinófilos en el moco nasal: arriba de 20 por campo indican alergia.
Neutrófilos elevados indican la presencia de infecciones bacterianas agudas.

Linfocitos: indican procesos infecciosos crónicos

 PRACTICA 8 ENSAYO ANTIHUMANO DEL VIRUS (HIV I/II)

El sindrome de Inmunodeficiencia adquirida (SIDA) es causado por el VIH-1 y

VIH-2 virus. Este se transmite por contacto sexual, exposicion a la sangre
incluyendo intercambio de agujas y jeringas contaminadas, ciertos productos de la
sangre o transmitida de una madre infectada a su hijo durante la etapa prenatal.
La presencia de anticuerpos frente a los virus en el suero de un paciente indica
infeccion viral. HIV -1 y HIV-2.

Principios de la Prueba
La prueba de ELISA VIH utiliza un par de antigenos recombinados del VIH para
detectar anticuerpos contra el VIH. Los anticuerpos contra el VIH, si esta presente
en la muestra de ensayo, reaccionan con los antigenos recombinados
inmovilizados en la superficie de los micropocillos.
Despues de las etapas de lavado para eliminar los anticuerpos no unidos, los
unidos se visualizan a traves de la incubacion del antigeno recombinado VIH con
otro conjugado con la enzima perooxidasa de rabano (HRP) y sustratos TMB en
una configuracion convencional ELISA sandwich.

Tecnica
1.- Depositar 50 μl del suero problema en un pozo.
2.- Añadir 50 μl de diluyente, mezclar, cubrir con cinta.
3.- Incubar a 37°c durante 45 min.
4.- Vaciar los pozos boca abajo sobre papel abs.
5.- Añadir 50 μl de conjugado.
6.- Incubar a 37°c durante 30 min.
7.- Decantar y lavar 5 veces con buffer y secar.
8.- Añadir 100 μl de TMB sustrato a cada pozo e incubar a 37°c por 10 min.
9.- Añadir 100 μl de sol.stop y mezclar.
10.- Leer a 450 nm.
Calculos
Valor de corte= 0.100 + (0.05)
Relacion de la muestra = absorbancia / valor de corte

Resultados
Absorbancia:
1.- 0.088
2.- 0.119

0.100 + 0.05 = 0.15

0.119/ 0.15 = 0.79
No reactivo.

Interpretacion
No reactivo: < 1.0
Reactivo: > 1.0
 Practica 9 VDRL Y RPR
INTRODUCCION:
La sífilis es una infección causada por la bacteria Treponema pallidum. La
infección suele contraerse por contacto sexual, por ejemplo por contacto directo
con un chancro (úlcera) sifilítico, que es una lesión indolora y sobreelevada. Las
pruebas sifilíticas más comunes son las que detectan en sangre anticuerpos
producidos en respuesta a la infección por Treponema pallidum. Algunos métodos
son capaces de detectar la propia bacteria o su material genético (ADN). Las
pruebas sifilíticas se utilizan para realizar un cribado o diagnosticar la infección por
Treponema pallidum, bacteria causante de la sífilis. Se dispone de varios tipos de
pruebas, aunque las que detectan anticuerpos son las más empleadas.
Detección de anticuerpos (serología) - estas pruebas detectan anticuerpos en
sangre y a veces en líquido cefalorraquídeo (LCR). Existen dos tipos principales
en el caso de la sífilis, pruebas no treponémicas y pruebas treponémicas
(derivadas del nombre de la bacteria). Para el cribado se puede emplear
indistintamente unas u otras, aunque en el caso de que el resultado sea positivo,
éste debe confirmarse por algún otro método que permita diagnosticar una sífilis
activa:
RPR (reagina rápida plasmática) - útil para el cribado pero también en la
monitorización del tratamiento de la sífilis. Se mide el nivel (título) de anticuerpos.
También puede emplearse para confirmar la presencia de una infección activa
cuando una primera prueba treponémica es positiva
VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) - prueba realizada en sangre, pero
principalmente en líquido cefalorraquídeo, y útil en el diagnóstico de neurosífilis
(VDRL)
METODO:
1.- Depositar 50 microlitros se suero problema en un círculo de la placa
2.- agregar 20 microlitros de Ag VDRL
3.- mezclar y agitar de 160-180 rpm 4 minutos y leer loa agregados ya sean
grandes o medianos
 Agregado grande (reactivo)
 Agregado mediano (reactivo debil)
 Sin agregado (no reactivo)

si es reactivo hacer diluciones dobles con solución salina y repetir procedimiento

(RPR) reacción plasmáticas rápidas
Depositar 50 microlitros de suero problema más 20 microlitros del reactivo hacer
diñusiomea dobles y repetir el procedimiento.
RESULTADOS:
Durante esta práctica el resultado se presentó como negativo lo cual indica es
estado den paciente como óptimo y libre de esta enfermedad.
 PRACTICA 10 ANTICUERPOS ANTICELULARES

FUNDAMENTO
Los anticuerpos antinucleares son sustancias producidas por el sistema
inmunitario que atacan los propios tejidos del cuerpo. Las pruebas analíticas de
anticuerpos antinucleares corresponden a una prueba de sangre que examina
los anticuerpos antinucleares (AAN).
El análisis se realiza a partir de una muestra de sangre. No se necesita una
preparación especial; sin embargo, ciertas drogas, incluyendo píldoras
anticonceptivas, procainamida y diuréticos tiazídicos afectan la precisión del
examen. No olvide comentarle al médico acerca de todos los medicamentos que
toma. Significado de los resultados anormales. La presencia de anticuerpos
antinucleares en la sangre puede deberse a:

 Enfermedad hepática crónica.

 Enfermedad vascular del colágeno
 Lupus eritematoso inducido por medicamentos.
 Miositis (enfermedad muscular inflamatoria).
 Artritis reumatoidea.
 Síndrome de Sjogren.
 Lupus eritematoso sistémico.

Los anticuerpos antinucleares (AAN) pueden ser positivos en personas con LES,
sin que ellas mismas padezcan esta enfermedad.

Un ANA positivo siempre necesita una evaluación adicional, incluyendo una

historia clínica cuidadosa, un examen físico y exámenes de sangre para otros
anticuerpos, especialmente anticuerpos anti-ADN bicatenario.
Si el único hallazgo es un título bajo de ANA y todo lo demás es negativo, hay sólo
un 5% de probabilidad de que el paciente presente lupus eritematoso sistémico en
algún momento más tarde en la vida.
 APLICACIÓN CLÍNICA

Los anticuerpos antinucleares (ANA) se encuentran frecuentemente en pacientes

con lupus eritematoso. (LET) y comúnmente en otras enfermedades auto inmunes
Artritis reumatoide, enfermedades del colágeno vascular, enfermedades hepáticas
crónicas, esclerosis sistemática (esclerodermia) los ANA se asocian con varios
antígenos nucleares incluidos dsDNA, SSDNA, RPN, Sm, SSA. Los ANA
frecuentemente se incrementan en edades y personas aparentemente sanas que
rebasan los 45 años de edad sobre todo en mujeres. El ensayo de escrutinio de la
detección de ANA se usa para el diagnóstico de diferentes enfermedades auto-
inmunes.

PRINCIPIO DEL MÉTODO

El suero diluido del paciente es añadido a los pozos cubiertos con antigeno
purificado, el anticuerpo específico IgG se encuentra presente atándose al
antígeno todo aquel material que no se haya unido será lavado y desechado, la
enzima conjugada será añadida para formar el complejo antígeno anticuerpo . El
exceso de la enzima conjugada es lavada y se añade el substrato, el plato se
incuba y se deja hasta que se lleve a cabo la hidrólisis del substrato con la enzima.
La intensidad del color generado es proporcional a la cantidad de anticuerpos IgG
específicos en la muestra.

TÉCNICA

1. Preparar una disolución de las muestras

1:21 agregando 10 µl de la muestra a 200 µl de diluyente de la muestra.
2. Dispensar 100µl de suero diluyente, calibrador y controles dentro de los pozos
incubar por 20 minutos a temperatura ambiente.
3. Remover el liquido de los pozos, repetir el tiempo de lavado por tres veces con
la solución buffer
4. Agregar 100 µl de la enzima conjugada a cada pozo, incubar por 20 minutos a
temperatura ambiente.
5. Remover la enzima conjugada de los pozos, repetir el tiempo de lavado en tres
tiempos con la solución buffer.
6. Agregar 100 µl de TMB solución sustrato e incubarlo por 10 minutos a
temperatura ambiente.
7. Agregar 100 µl de solución paro
9. Leer O.D. estable durante 15 minutos a 450nm.

CÁLCULOS Y RESULTADOS.

1. Checar el factor de calibración (CF) valorado en la botella del frasco, este valor
puede ser que varié de lote a lote marque y cheque con seguridad en cada equipo.
2. Calcular el punto de corte valuado. Calibrador el OD del calibrador por el factor
de calibración.
3. Calcular el anticuerpo catalogado (index) por cada determinación, por división
del OD. Valuado por cada punto de corte de la muestra valuada.

RESULTADOS

Abs1=0.242 nm Abs = 236 nm

Abs2=0.230 nm

INTERPRETACIONES

Interpretación
<.9 no reactivo
0, .9, 1.1 intermedio
>1.1 reactivo Punto de corte valuado = 0.477 x 0.45=0.21465

Resultados Control positivo= 0.769

Anticuerpo (index)=0.769/0.21 =3.5
Blanco: .139
Muestra del paciente =0.236
Corte: .769
Anticuerpo (index) 0.236/0.21 = 1.12
Control: -.206
Calibrador: .473

CONCLUSIÓN

Una vez realizada la practica descrita y siguiendo la metodología indicada,

obtuvimos los resultados ya indicados los cuales al realizar la interpretación de
acuerdo a los valores de referencia podemos concluir que nuestro prueba nos da
como resultado anticuerpos non detectados de Anti ANA por el método de ELISA.
Y dicho resultado indica que nuestro paciente se encuentra con un titulo elevado
en relación a una posible enfermedad auto inmune esto claro se debe de confirmar
y complementárlo con el historial clínico paciente aun que se debe repetir la
prueba para confirmar los resultados debido a que puede ser un error del personal
de laboratorio equipo o reactivo.

BIBLIOGRAFIA

 http://www.labtestsonline.es/
 www.nlm.nih.gov/…us/spanish/ency/article/003535.htm
 https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003535.htm
www.grupomexlab.com
 PRACTICA 12
HGB-BT “TECNICA DE LA INHIBICION DE LA AGLUTINACION”

PROPÓSITO
 Determinar cualitativamente la fracción beta de la Gonadotropina en
sangre por medio de la inhibición de la aglutinación.

INTRODUCCIÓN
Gonadotropina Coriónica Humana (hCG) La hCG es una hormona glicoproteica
producida en el embarazo, fabricada por el embrión en desarrollo poco después
de la concepción y más tarde por el sincitiotrofoblasto (parte de la placenta). Su
función es evitar la desintegración del cuerpo lúteo del ovario y, por ende,
mantener la producción de progesterona que es fundamental para el embarazo en
los seres humanos. (1,2,3) La hCG puede tener funciones adicionales; por
ejemplo, se cree que afecta a la tolerancia inmunológica del embarazo. Las
pruebas de embarazo más precoces se basan en la detección de hCG. (1,2,3)
Debido a que la hCG es producida también por algunos tipos de tumores, es un
importante marcador tumoral, pero no se sabe si esta producción es una causa o
un efecto de la tumorigénesis. Al igual que otras gonadotropinas, la hCG se puede
extraer de la orina de mujeres embarazadas, que es la fuente más usual y
abundante, o por recombinación genética.

FUNAMENTO

Estructura de la hCG La hCG es una glicoproteína compuesta de 244

aminoácidos, con un peso molecular de 36,7 kDa. Sus dimensiones totales son de
75×35×30 angstroms (7,5×3,5×3 nanómetros). Es heterodimérica, con una
subunidad β (beta) que es específica de la hCG, y con una subunidad α (alfa)
idéntica a la de la hormona luteinizante (LH), la hormona folículo-estimulante
(FSH), y la hormona estimulante del tiroides (TSH). La subunidad α (alfa) tiene 92
aminoácidos de largo y unas dimensiones de 60×25×15 angstroms (6×2,5×1,5
nm). La subunidad β de la hCG contiene 145 aminoácidos y unas dimensiones de
6,5×2,5×2 nm, codificados mediante seis genes muy homólogos que están
dispuestos en tándem y en pares invertidos en el cromosoma 19q 13.3 - CGB. Las
dos subunidades crean un pequeño núcleo hidrófobo rodeado por una gran
superficie con una proporción área volumen 2,8 veces mayor que la de una esfera.
La gran mayoría de los aminoácidos exteriores son hidrófilos. Funciones de la
hCG.

La HCG interactúa con el receptor LHCG y promueve el mantenimiento del

cuerpo lúteo durante el comienzo del embarazo, haciendo que éste secrete la
hormona progesterona. La progesterona enriquece el útero con un grueso
revestimiento de vasos sanguíneos y capilares, de manera que pueda sostener el
crecimiento del feto. Debido a su alta carga negativa, la hCG puede repeler las
células inmunitarias de la madre, protegiendo al feto durante el primer trimestre.
También se ha formulado la hipótesis de que la hCG placentaria puede ser un
vínculo para el desarrollo de la inmunotolerancia maternal. Por ejemplo, las células
endometriales tratadas con hCG inducen un aumento en la apoptosis de las
células T. Estos resultados sugieren que la hCG puede ser un enlace en el
desarrollo de la tolerancia inmunológica peritrofoblástica, puediendo facilitar la
invasión del trofoblasto, un proceso que acelera el desarrollo fetal en el
endometrio. También se ha sugerido que los niveles de hCG están vinculados con
la gravedad de los mareos matinales en mujeres embarazadas. Debido a su
similitud con la hormona luteinizante (LH), la hCG también puede usarse
clínicamente para inducir la ovulación en los ovarios, así como la producción de
testosterona en los testículos.

La hCG también juega un papel en la diferenciación y proliferación celular, y

puede activar la apoptosis. Pruebas de Gonadotropina Coriónica Humana Los
niveles de hCG pueden medirse en la sangre o la orina. Con mayor frecuencia, se
hace como una prueba de embarazo, destinada a indicar la presencia o ausencia
de un embrión implantado. También pueden hacerse pruebas de hCG para el
diagnóstico o seguimiento de células germinales y tumores trofoblásticos. La
mayor parte de las pruebas emplean un anticuerpo monoclonal (MAb) específico
de la subunidad β de la hCG (βhCG). Este procedimiento se emplea para asegurar
que las pruebas no dan falsos positivos por interferencia de la LH y la FSH en la
determinación. Tanto la LH como la FSH están siempre presentes en diferentes
niveles, mientras que la presencia de hCG casi siempre indica el embarazo.

La prueba de orina puede ser un inmunoanálisis de distinto fundamento

(aglutinación de látex, ELISA, cromatográfico, etc.). La determinación cuantitativa
de βhCG es útil en el seguimiento de células germinales y tumores trofoblásticos,
el seguimiento después del aborto involuntario, y el diagnóstico y seguimiento
después de tratar un embarazo ectópico. La ausencia de un feto visible en la
vagina por ultrasonido después de que la βhCG haya alcanzado niveles de 1500
UI/ml es muy indicativo de un embarazo ectópico.

TÉCNICA

1. En un tubo colocar 100 ul de la muestra

2. Agregar 100 ul de suero anti-HGC, mezclar
3. Agregar 50 ul de eritrocitos-HGC
4. Mezclar perfectamente hasta homogenizar
5. Colocar en una gradilla en un lugar sin vibraciones

Interpretación:
 Prueba positiva formación del anillo
 Prueba negativa malla uniforme o rota.
 Sensibilidad 1000 UI/L

Orina o suero + suero anti-HGC + eritocitos HGC

Positivos + sueros anti-HGC +eritrocitos HGC

RESULTADOS & OBSERVACIONES

Como se puede observar en las imágenes de la parte superior en el fondo del tubo
de ensaye de 12 x 75 se formó un anillo indicando que la prueba es positiva para
la presencia de Gonadotropina Coriónica Humana o fracción beta indicando ser
una muestra positiva para embarazo con una sensibilidad de 1000 ul/L.

CONCLUSIÓN

Por medio de la técnica de inhibición de la aglutinación se determinó

cualitativamente la presencia de la hormona Gonadotropina Coriónica Humana
que indica un estado hormonal causado un estado de embarazo. Por lo cual
también es una prueba confirmatoria para el embarazo.

BIBLIOOGRAFIA

 http://salud.ccm.net/faq/1604-beta-hcg-diagnostico-del-embarazo
 http://www.mdsaude.com/es/2015/10/beta-hcg-hormona-del-
embarazo.html
 http://www.mdsaude.com/es/2015/10/beta-hcg-hormona-del-
embarazo.html
 http://elembarazo.net/foro/topic/que-es-fraccion-bata-de-hcg

 PRACTICA 13
DETERMINACINO DE GRUPO SANGUINEO Y FACTOR Rh.

OBJETIVO
a) Verificar el tipo sanguíneo por medio de la detección de anticuerpos en el
suero o plasma problema.
SUSTENTO TEORICO
El más importante de los diversos sistemas de clasificación de la sangre es el del
grupo sanguíneo ABO. Los cuatro tipos sanguíneos que se contemplan en esta
clasificación son A, B, AB y O. Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos
rojos que expresan antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los
antígenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre del tipo B tienen
la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y
anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre. Los individuos con
sangre del tipo O ó 0 (cero) no expresan ninguno de los dos antígenos (A o B) en
la superficie de sus glóbulos rojos pero tienen anticuerpos contra ambos tipos,
mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie
y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. (“Grupo Sanguíneo” s.f.).

DESCRIPCION DE LA PRÁCTICA

La identificación de anticuerpos del sistema ABO se realiza poniendo en contacto

el suero problema con antígenos conocidos, que aglutinará en presencia de sus
anticuerpos específicos.

MATERIAL PARA LA REALIZACION DE LA PRÁCTICA

MATERIAL POR EQUIPO MATERIAL BIOLOGICO

 20 tubos de ensaye de 12 x  Sangre total
75mm  Suspensión al 5%
 3 pipetas pasteur c/ bulbo 
  1 gradilla
 1 pizeta con solución salina
 Antisueros
 Centrifuga
PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACION DE LA PRÁCTICA

A. METODO DE AGLUTINACINO DIRECTA

1. Colocar una gota de sangre en cada pozo de la placa

2. Agregar una gota del antisuero correspondiente ( anti-A, anti-B, anti-AB y
anti-D
3. Mezclar con un aplicador extendiendo en toda la superficie de la placa.
Agitar 2 minutos y observar aglutinación

B. METODO EN TUBO

1. Marcar 4 tubos, uno como A, B, AB, y Rh , agregar una gota de antisuero

correspondiente

2. Añadir una gota de la suspensión de eritrocitos al 5 % de la muestra

problema centrifugar 1 minuto a 1000 rpm . desprender suavemente el
tapón de la célula y observar pesencia de aglutinación.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS.
 Anti-A Anti-B Anti AB Anti-D
A No No No No
B No No No Si
0 Si No Si No

Como se puede observar en la table las casillas marcadas con un Si fueron

aquellas donde hubo una reacción de aglutinación positiva entre los antígenos de
superficie de los eritrocitos con los anticuerpos del antisuero correspondiente.

PRUEBA EN TUBO

Tipo Anti-A Anti-B Anti AB Anti-D

A- Si No Si Si
A+ Si No Si No
B- No Si Si Si
B+ No Si Si No
AB+ Si Si Si No
0- No No No Si
0+ No No No No
En el método de tubo se tuvo que diluir 1 gota de sangre en 19 gotas de solución
salina para cada muestra sanguínea (tipo de sangre) para poder tener una
suspensión de eritocitos al 5% lo cual se agregó una gota de esta suspensión a 4
tubos de 12x75 para después agregar los antisueros y poder centrifugarlos a
1000rpm por 2 min lo cual nos formaría un botón en el fondo del tubo, si este
botón desapareció al momento de agitarlo ligeramente no hubo una reacción de
aglutinación pero si el boto aun permaneciera después de agitarlo indicaría que la
reacción de aglutinación fue positiva y estaría afirmando el grupo sanguíneo
correspondiente al igual que el factor Rh como se puestra en la tabla anterior.

CONCLUSIÓN

La pruebas de aglutinación directa pueden realizarse por método de placa o

método de tubo y nos sirve para determinar el grupo sanguíneo de las personas
realizando un tamizaje a la muestra biológica al momento de exponer el suero o
sangre total (Ag de superficie de membrana de los eritrocitos) con los anticuerpos
de los antisuero.

BIBLIOGRAFIA

 http://www.labtestsonline.es/
 www.nlm.nih.gov/…us/spanish/ency/article/003535.htm
 https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003535.htm
 Distribuido por:Grupo Industrial MexLab S.A. de C.V.
 www.grupomexlab.com