CURSO: LICENCIATURA EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

UTFPR – Campus Ponta Grossa

DISCIPLINA: Biologia Celular e Molecular e Noções de Biotecnologia

Roteiro da aula Prática 3: Extração de DNA com reagentes domésticos

Introdução:

O DNA é a estrutura que identifica os seres vivos e apresenta características

próprias que permite distinguir até indivíduos de uma mesma espécie. A sigla DNA
coresponde a abreviatura do termo em inglês para ácido desoxirribonucleico (ADN, em
português). Em organismos procariontes essa macromolécula está dispenso na célula,
enquanto em eucariontes encontra-se no núcleo.
O DNA é formado a partir da união de compostos químicos chamados
nucleotídeos e constitui-se na maior macromolécula celular. Cada nucleotídeo é
formado por 3 substâncias: Base nitrogenada, que pode ser adenina (A), guanina
(G), timina (T) ou citosina (C), sendo que estas bases são complementares,
produzindo as seguintes ligações no DNA: A-T e G-C; um grupamento fosfato e um
glicídio do grupo das pentoses, que no caso do DNA é a desoxirribose. Internamente
à fita dupla, os desoxirribonucleotídeos estão unidos por ligações de hidrogênio
(pontes de hidrogênio), produzindo uma cadeia torcida em forma de hélice.
Para a análise do DNA, uma etapa importante é o seu isolamento. O
procedimento utilizado nessa aula prática possibilita extrair grandes quantidades de
DNA a partir de morango, banana ou cebola. Protocolos similares são usados nas
extrações de DNA de outras fontes, como amostras de sangue, tecidos, etc.

Material:
Dois morangos;
Álcool 70% gelado;
Sal de Cozinha;
Saco plástico (”Zip Loc”);
Peneira;
Palito de madeira (para churrasco);
Detergente líquido incolor;
Funil, Erlenmeyer (ou copo) e tubo de vidro.

Objetivos:
1. Conhecer os princípios básicos da extração do material genético;
2. Observar a grande quantidade de DNA existente nas células;
3. Evidenciar a localização intracelular do DNA;
4. Discutir algumas propriedades químicas do DNA;
5. Demonstrar a simplicidade do experimento e sua viabilidade de execução pelo
professor de ciências, em sala de aula.

Procedimento:
A extração de DNA de células eucariontes vegetais consta fundamentalmente de
três etapas: Ruptura (física e química) das membranas celulares para liberação do
material genético; desmembramento dos cromossomos em seus componentes
básicos: DNA e proteínas; separação do DNA dos demais componentes celulares.

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 1. Coloque dois morangos (sem pétalas) no saco plástico e macere (esmague
com o punho) por cerca de 2 minutos;
2. Adicione meia colher de sopa de sal de cozinha (misture por 1 minuto);
3. Adicione uma colher de detergente líquido. Misture tudo, apertando com as
mãos por 1 mim;
4. Coe o material no copo, com o auxílio da peneira e da colherzinha plástica;
5. Transfira o volume total para o tubo e deixe descansar por 5 minutos,
envolvendo o tubo com uma das mãos.
6. Adicione um volume igual de álcool (gelado) delicadamente pela parede e vá
observando o que acontece (de 3-5 minutos);
7. Decorrido este tempo, introduzir o palito de sorvete na parte de cima
(sobrenadante) e retire o material de aspecto viscoso que se formou (com
aspecto de cola transparente) = DNA

Resultado:
Desenhos ou fotos do tubo (item 7) evidenciando a solução e o DNA extraído.

Questões:
1. Por que macerar o morango?
2. Como quebrar a membrana celular?
3. Por que aquecer a solução?
4. Por que usar o detergente?
5. Qual a função do álcool e do sal?
6. Faça a comparação do tamanho do DNA com o tamanho da célula.

Referências Bibliográficas

1. LEHNINGER, A. L., COX, N., YARBOROROUH, K. Princípios de Bioquímica.

4ª ed. São Paulo: Editora Sarvier, 2006;
2. http://cbme.usp.br/inbeqmedi;
3. http://lameducacional.com.br