PRÁCTICA No.

3: Preparacion de medios de cultivo, medios selectivos y diferenciales

Autores y códigos: Francisco Javier Patiño cod. 411534, Daniel Beltran Carbonero cod. 413504,
Juan Daniel Erira Taramuel cod. 515512 Fecha: feb/21/2017

Objetivo:
 Aprender a preparar medios de cultivo a partir de la información dada en el laboratorio
 Conocer por medio de la ficha técnica como hacer la preparación
 Identificar los medios de cultivos existentes en el cual se puede desarrollar diferentes tipos de
microorganismos

De los medios de cultivo suministrados por su tutor, registre la información solicitada y prepare el medio
de cultivo.

PARA CALCULO REAL

PARA CALCULO TEORICO

DISCUSIÓN PREPARACION MEDIOS DE CULTIVO:

Para la preparación de cada medio de cultivo son necesarias ciertas cantidades de soluto, esto se debe a que cada
producto tiene establecido una necesidad de solvente específica las cuales vienen dadas en cada una de las
presentaciones de dichos productos comerciales. Es necesario aplicar cálculos matemático sencillos para determinar
exactamente la cantidad necesaria de soluto y solvente que se requiere para cada medio de cultivo.
Durante la preparación del medio de cultivo se aconseja adicionar primero el polvo al recipiente (generalmente un
beaker) y luego el agua destilada, garantizando así su completa disolución y evitando la formación de grumos o
coágulos.
Después de haber calentado el agua destilada en la que se había agregado el medio de cultivo en polvo (para facilitar
su completa disolución), esta debe dejarse en reposo por un corto período de tiempo para evitar que a la hora de
verterse en una Caja Petri o en un tubo de ensayo se forme vapor de agua, el cual puede llegar a estropear el cultivo
que se pretenda realizar.
Cuando se vierte el medio de cultivo en un recipiente de laboratorio se aconseja que este proceso se lleve a cabo
lentamente, para prevenir la formación de burbujas o partículas que determinen la baja calidad del mismo.

Xiomara Rodríguez
RESULTADOS DE LA SIEMBRA EN LOS MEDIOS PREPARADOS EN CLASE
IMAGEN DEL MEDIO EXPLICACION DE LOS
CON CRECIMIENTO FUNDAMENTO DEL MEDIO RESULTADOS QUE
MICROBIOLOGICO SE ESPERAN OBTENER EN EL
CRECIMIENTO DE LA CAJA TIPOS
DE
COLONIAS, CAMBIOS DE
COLORACION.
AGAR XLD La degradación de los Las colonias sospechosas de Shigella
carbohidratos presentes en el sobre el agar XLD son transparentes y
medio (xilosa, lactosa y sacarosa) parecen rojas por el color del medio.
genera la producción de ácido Este género bacteriano al no fermentar
haciendo virar el indicador (rojo la xilosa, la lactosa, ni la sacarosa, no da
fenol) de rojo a amarillo. En este lugar a que el rojo fenol vire a amarillo.
medio se incorpora la xilosa Las colonias típicas de la Salmonella son
porque es prácticamente de color rojo con el centro negro
fermentada por todas las debido a la producción de H2S.
enterobacterias con excepción de Mientras que las de E. coli son grandes,
los microorganismos amarillas con o sin precipitado de bilis.
pertenecientes al género Shigella

AGAR MAC CONKEY En el medio de cultivo, las Las colonias de los microorganismos
peptonas, aportan los nutrientes fermentadores de lactosa (coliformes)
necesarios para el desarrollo en agar MacConkey son de color rojo
bacteriano, la lactosa es el hidrato ladrillo, eventualmente rodeadas de
de carbono fermentable, y la bilis precipitada.
mezcla de sales biliares y el cristal
violeta son los agentes selectivos
que inhiben el desarrollo de gran
parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa,
disminuye el pH alrededor de la
colonia. Esto produce un viraje
del color del indicador de pH (rojo
neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las
sales biliares.
Los microorganismos no
fermentadores de lactosa
producen colonias incoloras.

Xiomara Rodríguez
 AGAR VOGEL En el medio de cultivo, la
JOHNSON
tripteína y el extracto de
levadura, aportan los nutrientes
necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano. El manitol
es el hidrato de carbono
fermentable. El telurito, el cloruro
de litio y la alta concentración de
glicina, son los agentes selectivos
que inhiben el desarrollo de la
flora acompañante y el rojo fenol
es el indicador de pH.
Los estafilococos coagulasa positivo,
fermentan el manitol, produciendo la
acidificación del medio y el viraje del
indicador de pH al color amarillo, y
también reducen el telurito a teluro.
Debido a esto, se observan como
colonias de color negro, rodeadas de
una zona amarilla.

AGAR TRIPTICASA La tripteína y la peptona de soya aportan Es un medio adecuado para cultivar y
DE SOYA nutrientes ricos en péptidos, aminoácidos
mantener cepas de aeromonas, y
libres, bases púricas y pirimídicas,
minerales y vitaminas. La peptona de
aumentando el porcentaje de cloruro
soya aporta también carbohidratos que de sodio para mantener cepas de
estimulan el crecimiento de muchos algunos vibrios (Excepto V. cholerae)
microorganismos. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico.
Adicionado con 5-10 % sangre, se logra
un medio enriquecido y adecuado para
observar reacciones de hemólisis.
Cuando se prepara como agar chocolate,
es útil para el cultivo de Neisseria spp.,
Haemophilus influenzae y
microorganismos exigentes similares.
Incubado en forma anaerobia, permite el
crecimiento de Clostridium spp. y
anaerobios NO esporulados. Es un medio
adecuado para cultivar y mantener cepas
de Aeromonas, y aumentando el
porcentaje de cloruro de sodio, para
mantener cepas de algunos Vibrios
(excepto V. cholerae).
AGAR CITRATO DE SIMMONS En el medio de cultivo, el fosfato Es un medio utilizado para la
monoamónico es la única fuente de nitrógeno
y el citrato de sodio es la única fuente de
diferenciación de enterobacterias en
carbono. Ambos componentes son necesarios base a su capacidad de utilizar el citrato
para el desarrollo bacteriano. Las sales de
una reacción positiva se observa por el
fosfato forman un sistema buffer, el magnesio
es cofactor enzimático. El cloruro de sodio crecimiento en el medio con un intenso
mantiene el balance osmótico, y el azul de color azul, una reacción negativa es
bromotimol es el indicador de pH, que vira al
indicada por la ausencia o pobre
color azul en medio alcalino. El medio de

Xiomara Rodríguez
 cultivo es diferencial en base a que los crecimiento sin cambio de color en el
microorganismos capaces de utilizar citrato
como única fuente de carbono, usan sales de
medio que permanece verde
amonio como única fuente de nitrógeno, con
la consiguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en
aquellas bacterias poseedoras de citrato
permeasa, a través del ciclo del ácido
tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este
último, en presencia de un medio alcalino, da
origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados
como fuente de carbono, producen carbonatos
y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces
vira al azul y esto es indicativo de la
producción de citrato permeasa.
AGAR PDA Potato Destrose Agar es un medio Es altamente nutritiva. Permite la
de los Métodos Estándar utilizado esporulación, Recuento colonial y
en el aislamiento , cultivo y Producción de pigmentos en
recuento de hongos y levaduras, Dermatofitos.
de muestras lácteas y otros El color del medio es ámbar claro
alimentos. Otro de sus usos es el
mantenimiento de cultivos. La
Dextrosa y la infusión de patata
favorecen el crecimiento de
hongos y levaduras, que se ve
favorecido por la ligera inhibición
del crecimiento bacteriano al
tener un pH ácido de 5,6. Es un
medio que favorece la
esporulación y permite visualizar
las características morfológicas de
las colonias

AGAR SIM El triptófano es un aminoácido El desarrollo de un color rojo-fucsia en

constituyente de muchas peptonas, y la interfase del reactivo y de los medio
particularmente de la tripteína, que segundos después añadir el reactivo de
puede ser oxidado por algunas
Kovacs indica la presencia de indol y
bacterias para formar indol. En el
por lo tanto una prueba positiva.
proceso interviene un conjunto de
enzimas llamadas triptofanasa. El
indol producido se combina con el
aldehido del reactivo de Kovac´s o de
Erlich, para originar un compuesto de
color rojo. Las cepas móviles pueden
apreciarse en este medio, por la
turbidez que producen alrededor de
la punción de siembra, mientras que

Xiomara Rodríguez
 aquellas cepas productoras de
sulfhídrico se distinguen por la
formación de un precipitado negro
de sulfuro de hierro a partir del
tiosulfato siempre que el medio se
mantenga a un pH mayor a 7.2.

AGAR NUTRITIVO Por las características de sus

componentes es un medio usado
para el cultivo de
microorganismos poco exigentes
en sus requerimientos
nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo
bacteriano. La pluripeptona es la
fuente de carbono y nitrógeno
para el desarrollo bacteriano. El
agregado de cloruro de sodio
permite el enriquecimiento con
sangre de carnero u otras
sustancias para facilitar el cultivo
de microorganismos exigentes

DISCUSION DE LOS RESULTADOS QUE SE OBTIENEN SEMBRAR EN LOS MEDIOS DE CULTIVO

En el laboratorio no hicimos los medios de cultivo la información e imágenes insertadas son tomadas de paginas de
internet

Xiomara Rodríguez
CONSULTA

Microorganismo Interpretación del medio

Medio de Composición Forma de preparación (Imagen del medio de cultivo con el crecimiento
(s) objeto
microbiológico)
cultivo (g/L)
Salmonella spp Peptona 5 Suspender 46g de
Sales biliares 1 polvo en 1L de agua
Caldo Carbonato de destilada.Mezclar
Tetrationato. calcio 10 vigorosamente,calentar
Tiosulfato de sodio con agitación frecuente
30 y llevar a ebullición
para disolución
total.Enfriar a
45°C.Agregar 20mL de
solución iodada

Peptona Suspender 52,3g del

bacteriológica 10 medio en 1L de agua
Salmonella spp,
Agar Indicador bismuto destilada. Mezclar y
Bismuto Especialmente sulfito 8 calentar
Sulfito. salmonella thypi Extracto de carne 5 continuamente. Hervir
Dextrosa 5 por 1minuto hasta que
Fosfato disodico 4 se disuelva por
Sulfato ferroso 0,3 completo. Dejar que el
Verde brillante medio se enfrie a 45°C
0,025
Agar bacteriológico
20

Xiomara Rodríguez
 Staphylococcus Peptona de caseína Suspender 60 g del
10 medio deshidratado en
aureus
Agar Baird Extracto de carne 5 940ml de agua destilada.
Parker. Extracto de levadura Dejar en reposo 5 a 10
1 minutos. Calentar
Cloruro de litio 5 agitando frecuentemente
Agar 17 y hervir durante 1
Glicina 12 minuto. Distribuir y
Piruvato de sodio 10 esterilizar en autoclave a
121°C (15 libras) durante
15 minutos. Enfriar a 45°-
50°C y agregar 50 ml de la
emulsión de yema de
huevo y 10ml de la
solución de telurito
coliformes Triptosa 5 Suspender 17g en
Cloruro sódico 5
un litro de agua
Caldo LMX- Sorbitol 1
Fluorocult. Triptófano 1
destilada. Se calienta
Hidrogenofosfato hasta ebullir y se
dipotasico 2,7 disuelva
Dihidrogenofosfato completamente
potásico 2
Laurilsulfato, sal
sódica 0,1
5-bromo-4-cloro-3-
indolil-B-D-
galactopiranosido(x-gal)
0,08
4-metilumbeliferil-B-
D-glucoronido
(MUG) 0,05
1-isopropil-B-D-1-
tiogalactopiranosido
0,1
Medio rico para el Pluripeptona 5 Suspender 31g de
Extracto de carne 3 polvo por litro de
cultivo de
Agar Cloruro de sodio 8
microorganismos en Agar 15
agua destilada,
Nutritivo.
general, crecen una mezclar y reposar
gran mayoría, por 5
excepto algunos minutos.calentar
muy exigentes suavemente
agitando y hervir 1
o 2 minutos hasta
su disolucion

Xiomara Rodríguez
 bacterias, Infusión de Disolver 52g de
cerebro y corazón
levaduras y hongos polvo en un litro de
Caldo BHI de (solidos) 8
(Infusión filamentosos Digerido péptico de agua destilada,
Cerebro ß-hemólisis o tejido animal 5 calentar
Corazón). Digerido
hemólisis total α- conagitacion
pancreático de
hemólisis o caseína 16 freceunte y llevar a
hemólisis parcial γ- Cloruro sódico 5 ebullición hasta su
hemólisis o no Glucosa 2 disolución total
Fosfato disodico de
hemólisis hidrogeno 2.5
Agar 13,5
Enterobacterias Extracto de carne 3 Suspender 62,5 g
Pluripeptona 20
del polvo por litro de
Agar TSI Cloruro de sodio 5
(Agar Hierro Lactosa 10 agua destilada.
Tres Sacarosa 10 Mezclar bien y
Azúcares). Glucosa 1 calentar con
Sulfato de hierro y
amonio 0,2 agitación frecuente,
Tiosulfato de sodio hervir 1 o 2 minutos
0,2 hasta disolución
Rojo de fenol 0,025
total.
Agar 13
salmonella spp Peptona de Suspender 35 g del
gelatina 5
medio deshidratado
Agar LIA Extracto de
(Agar Lisina levadura 3 en un litro de agua
Hierro). Glucosa 1 destilada. Dejar
Lisina 10 embeber unos 15
Citrato de hierro y
amonio 0,5 minutos. Calentar
Trisulfato de sodio cuidadosamente,
0,04 agitando con
Purpura de
bromocosol 0,02
frecuencia y hervir
Agar 15 durante un minuto
hasta la disolución
completa. Distribuir
y esterilizar a 121°C
durante 15 minuto
Hongos y levaduras Dextrosa 20 Rehidratar 39 g del
Agar Papa Infusión de papa 4
medio en un litro de
Dextrosa Agar 15
(PDA). agua destilada.
Reposar 10 a 15
minutos. Calentar
agitando
frecuentemente
hasta el punto de
ebullición durante 1
Xiomara Rodríguez
 minuto para
disolverlo por
completo

Peptona 10 Suspender 36 g del

Agar EMB Lactosa 5
Enterobacteriaceae. polvo en un litro de
(Eosina - Sacarosa 5
Azul de Bacilos gram Fosfato dipotasico agua destilada.
Metileno -
negativos 2 Reposar 5 minutos;
Lactosa).
Agar 13,5 mezclar, calentando
Eosina 0,4
Azul de metileno a ebullición durante
0,065 1 o 2 minutos hasta
su disolución.
Pseudomonas Digerido Suspender 45,3 g
pancreático de
eurigenosas del polvo por litro de
gelatina 20
Cloruro de agua destilada.
Agar
Cetrimide magnesio 1,4 Agregar 10 ml de
Sulfato de potasio glicerina. Dejar
10
Cetrimida 0,3 reposar 5 minutos.
Agar 13,6 Calentar agitando
frecuentemente y
hervir durante 1
minuto
Colonias de Pluripeptona 5 Suspender 60 g del
Extracto de carne 5
Salmonella: polvo por litro de
Agar Lactosa 10
Salmonella- incoloras, no Mezcla de sales agua destilada.
Shigella fermentan la biliares 8,5 Reposar 5 minutos y
lactosa y con punto Citrato de sodio 8,5 mezclar hasta
Tioslfato de sodio
central negro 8,5 homogeneizar.
(producen sulfuro). Citrato férrico 1 Calentar a ebullición
Colonias de Agar 13,5 durante 2 o 3
Verde brillante
Shigella: incoloras, 0,00033 minutos
sin punto central Rojo neutro 0,025
negro. Coliformes
(E. coli, Klebsiella,
Enterobacter)

Xiomara Rodríguez
 lactobacilos y otras Proteasa peptona Suspender 64 g del
n°3 10
bacterias ácido medio en un litro de
Agar MRS Extracto de carne 8
lácticas Extracto de agua destilada.
levadura 4 Reposar 5 minutos y
Glucosa 20 mezclar calentando a
Monoleato de
sorbitan 1mL ebullición durante 1
Fosfato dipotasico2 ó 2 minutos.
Acetato de sodio 5 Esterilizar en
Citrato de amonio2
Sulfato de
autoclave durante 15
magnesio 0,2 minutos a 121 ºC.
Sulfato de
manganeso 0,05
Agar 13

BIBLIOGRAFÍA

http://www.condalab.com/uploads/media/1011__AGAR_BISMUTO_SULFITO_REv_0_Abril_2010_01.pdf
http://www.britanialab.com/
http://www.ucv.ve/
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis263.pdf
http://www.mibius.de/out/oxbaseshop/html/0/images/wysiwigpro/Fluorocult_LMX_Broth_modif_110620_e
ngl.pdf
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-cultivo.pdf
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-laboratorio-de-
microbiologc3ada.pdf
http://www.medioscultivo.com/brain-heart-infusion-agar/

Xiomara Rodríguez