Bioquímica I

Aula 16

Química dos ácidos nucléicos +

propriedades de polinucleotídeos

1
 Química dos Ácidos Nucléicos

Química de Ácidos Nucléicos

• Entendimento de Função
• Bases para Técnicas de Biologia Molecular

2
 Química dos Ácidos Nucléicos

• não “destrutivas”

ou reversíveis
• separação
Transformações • desnaturação
• hibridização
estruturais
do DNA
• “destrutivas”

ou não-reversíveis
• mutação/modificação
covalente

3
 Química dos Ácidos Nucléicos

Transformações Não-“Destrutivas”

4
 Química dos Ácidos Nucléicos
Desnaturação

Rompimento de :
• Pontes de hidrogênio
• Interações hidrofóbicas

Renaturação
* Passo Lento (encontro)
* Passo Rápido (anelamento)

Cooperatividade
no anelamento
5
 Química dos Ácidos Nucléicos
Ponto de fusão do DNA

• composição de bases (GC)

• tamanho
• pH
6
 Química dos Ácidos Nucléicos
Efeito hipercrômico/hipocrômico

Empilhamento das bases

diminui Absorvancia em
260nm (efeito hipocrômico)
7
 Química dos Ácidos Nucléicos

Desnaturação controlada

• iniciação
• replicação
• transcrição

A-T
Desnatura mais
rápido

8
 Química dos Ácidos Nucléicos

Separação das fitas - Replicação

9
 Química dos Ácidos Nucléicos

Separação das fitas - Transcrição

10
 Química dos Ácidos Nucléicos

Hibridização
(renaturação)

DNAs com semelhança

formam híbridos

Técnicas (genética molecular)

*detecção de seqüências
11
Química dos Ácidos Nucléicos

Drosophila (mosca de frutas)

DNAs com semelhança

formam híbridos

12
 Química dos Ácidos Nucléicos

Outras aplicações de híbridização de DNA

PCR
Rastreamento de bibliotecas de DNA
FISH (“Fluoresence in-situ Hybridization”)

entre outros ................

13
 Química dos Ácidos Nucléicos

Transformações “Destrutivas”

14
 Química dos Ácidos Nucléicos
Transformações Espontâneas
Desaminação

Ausente do DNA
C U
1/107/dia
(~300/dia)

A, G
1/109/dia
(~3/dia)

15
 Química dos Ácidos Nucléicos
Transformações Espontâneas
Depurinação

1/105 purinas/dia
~30000 / dia
16
 Química dos Ácidos Nucléicos
Transformações NÃO-Espontâneas
Radiação eletromagnética Luz UV

Timinas
adjacentes

torção

17
 Química dos Ácidos Nucléicos
- Abertura do anel da ribose (oxidação)
Raios X
Radiação Ionizante - Oxidação e fragmentação dos nucleotídeos
Raios Gama
- Ruptura de fitas

Efeito direto do espécie ionizada

Efeito indireto via a formação de

um radical livre derivado da água

18
 Química dos Ácidos Nucléicos
Espécies Reativas de Oxigênio (EROs)

Oxigênio

Aníon
superóxido

Radical e
íon hidroxilo

Peroxido de
hidrogênio
19
 Química dos Ácidos Nucléicos

Agentes Químicos
Agentes Desaminantes - CONSERVANTES

HNO2
HSO3-
Catalisadores
de desaminação

20
 Química dos Ácidos Nucléicos
Agentes Alquilantes

Agentes carcinogênicos
- modificam Base Nitrogenada C-G
21
 Química dos Ácidos Nucléicos
Agentes Intercalantes
Intercalantes associam com DNA (interação não covalente) e muda a sua estrutura.

Acridine orange

Brometo de etidio
 Química dos Ácidos Nucléicos

Sistemas bioquímicos que corrigem as mutações do DNA

- Controle de espécies reativas do oxigênio
– SISTEMA REPARO de DNA

Taxa de mutação = taxa de modificação – taxa de reparo

23
 Química dos Ácidos Nucléicos

Diminuição na concentração de espécies reativas de oxigênio

(EROs) por catálise enzimática.

H2O2 catalase 2 H2O + O2

Catalase tem uma eficiência catalítica alta:

kcat/KM ~2-4 x 106

24
 Reparo de DNA
• Os núcleos das células têm enzimas de reparo, que removem
as mutações e restaurar o DNA mutado para a sua forma
original.
MECANISMOS REPARO DIRETO
MECANISMOS DE REPARO POR EXCISÃO

• Se estes mecanismos naturais de reparação do DNA não

acompanhar a taxa de mutação, ou os mecanismos de reparo
se estiver com defeito, a taxa de mutação aumentará.
 MECANISMOS REPARO DIRETO
Agente mutagênico O6-Metilguanina
CH3
G G
G
C C
C Reparo direto pela
Exemplo:
metilação enzima MGMT

Reconhecimento da base alterada e

transferência do grupo metil para
resíduo de cisteína no sitio ativo da O-
6-methlguanine-DNA metiltransferase
(MGMT)
MECANISMOS DE REPARO POR EXCISÃO

Agente mutagênico

etapa 1 = incisão (endonuclease) e

excisão (exonuclease)

etapa 2 = síntese do DNA (DNA

polimerase I)

etapa 3 = ligação das extremidades (DNA

ligases)
 Teste de mutagênese
Testes Citogenéticos (célula de raiz de cebola).

Allium cepa

Anáfase normal Anáfase anormal

 Teste de mutagênese
Identificação de mutagênicos usando a bactéria Salmonella (Bruce Ames, 1973).

his-