UNIVERSIDADE DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE BIOLOGIA ROBERTO ALCANTARA GOMES

DEPARTAMENTO DE HISTOLOGIA E EMBRIOLOGIA
Disciplina Métodos para o Estudo da Célula

MICROSCOPIA ELETRÔNICA
 MICROSCOPIOS ELETRÔNICOS

MICROSCOPIO ELETRÔNICO DE MICROSCOPIO ELETRÔNICO DE

TRANSMISSÃO - MET VARREDURA - MEV
Parâmetros importantes para observação em microscopia:

Aumento

Resolução
✓ Limite de Resolução

Capacidade de:

• Separar Detalhes
• Produzir imagens separadas de partículas muito próximas
• É a menor distância que deve existir entre dois pontos para
que elas pareçam separados
✓ Resolução

Olho humano

Maçã
Formiga

Abelha DNA

1 mm = 1000 mm 1 mm = 1000 nm
Microscópio de Luz
1.000X
0,2mm

Microscópio Eletrônico
de Transmissão
500.000X
0,0002mm

Microscópio Eletrônico
de Varredura
10 a 150.000X
0,02mm
Microscópio de Luz PROCESSAMENTO para
M. OPTICA ou de LUZ:

FIXAÇÃO - formol

DESIDRATAÇÃO - etanol

INCLUSÃO - parafina

MICROTOMIA = 5um - 7um

COLORAÇÃO = H-E
OBSERVAR ao MO
MO MEV

MET

Hemácias
 Tipos de Microscópios

ou Microscópio de Luz

A microscopia eletrônica de transmissão e de varredura se baseia

na interação entre elétrons e componentes dos tecidos.
Microscopia Eletrônica de Transmissão
 Obtenção de amostras biológicas para microscopia
eletrônica de transmissão

Coleta do material
 ME TRANSMISSÃO
MICROSCOPIO ELETRÔNICO DE
TRANSMISSÃO ( MET)
FIXAÇÃO
GLUTARALDEIDO
(fixa proteinas)

PÓS-FIXAÇÃO
TETRÓXIDO DE ÓSMIO
(fixa lipídeos)

DESIDRATAÇÃO
ETANOL

INCLUSÃO
EPON

ULTRAMICROTOMIA 50nm -70nm

obtenção de cortes ultrafinos

CONTRASTAÇÃO

OBSERVAR ao M ET
 Microscópio Eletrônico de Transmissão

.Fixação do material
Glutaraldeido
Tetróxido de Ósmio
.Inclusão
Epon
.Ultramicrotomia
.Contrastação
Uranila
Chumbo
 ULTRAMICRÓTOMO

obtenção de cortes ultrafinos

 TIPOS de FACA para MET :
•VIDRO
•DIAMANTE

Facas de DIAMANTE Facas de VIDRO

 Preparação de cortes semifinos para
localizar a região de interesse para depois
fazer cortes ultrafinos.
PIRAMITOME

Aparelho para aparar os

blocos de MET.

cortes semifinos

área para obter cortes ultrafinos

COMPARAÇÃO entre os PROCESSAMENTOS para MO e MET:
M OPTICA ou de LUZ ME TRANSMISSÃO

FIXAÇÃO FIXAÇÃO
FORMOL GLUTARALDEIDO - (fixa proteinas)

----------------- PÓS-FIXAÇÃO
TETRÓXIDO DE ÓSMIO - (fixa lipídeos)

DESIDRATAÇÃO DESIDRATAÇÃO

INCLUSÃO = PARAFINA INCLUSÃO = EPON

MICROTOMIA = 5um - 7um ULTRAMICROTOMIA 50nm -70nm

COLORAÇÃO = H-E CONTRASTAÇÃO

OBSERVAR ao MO OBSERVAR ao M ET
 Microscópio Eletrônico de Varredura

Microscópio de varredura de vácuo variável, LEO 1450VP - UERJ

Microscopia Eletrônica de Varredura
 Microscópio Eletrônico de Varredura
.Fixação do material
Glutaraldeido
Tetróxido de Ósmio
.Secagem do material
Ponto Crítico – retirada total de
água do sistema > utiliza-se CO2
.Montagem
Suporte - Stub
.Metalização
adiciona-se metal na superfície
da célula -> aumenta a
condutividade da amostra
> utiliza-se ouro e paládio
Microscopia Eletrônica de Varredura
COMPARAÇÃO entre os PROCESSAMENTOS para MO, MET e MEV:

M OPTICA ou de LUZ ME TRANSMISSÃO ME VARREDURA

FIXAÇÃO FIXAÇÃO FIXAÇÃO

FORMOL Glutaraldeido Glutaraldeido

----------------- PÓS-FIXAÇÃO PÓS-FIXAÇÃO

Tetróxido de ósmio Tetróxido de ósmio

DESIDRATAÇÃO DESIDRATAÇÃO DESIDRATAÇÃO

INCLUSÃO = PARAFINA INCLUSÃO - epon

PONTO CRITICO
MICROTOMIA = ULTRAMICROTOMIA
5um - 7um 50nm -70nm METALIZAÇÃO

COLORAÇÃO = H-E CONTRASTAÇÃO

OBSERVAR ao M EV

OBSERVAR ao MO OBSERVAR ao M ET
 Células do MO
EPITÉLIO RESPIRATÓRIO

MET

MEV
FIM