UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA

MINISTERIO DE EDUCACIÓN NACIONAL

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
PROGRAMA DE BIOLOGÍA

FISIOLOGÍA VEGETAL

PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 3

CROMATOGRAFIA DE PIGMENTOS VEGETALES

1. Introducción

Los pigmentos vegetales, pueden dividirse en dos grandes grupos, en base a su solubilidad: a) Solubles
en agua: antocianinas y antoxantinas, que se encuentran en el jugo vacuolar. b) Solubles en solventes
orgánicos: clorofilas "a" y "b" y carotenoides (rojo, naranja y amarillo), que se encuentran en las granas y
tilacoides de los cloroplastos. Son los responsables de la captación de la energía luminosa en el proceso
de la fotosíntesis. Las clorofilas poseen unas estructura porfirínica, formada por cuatro anillos pirrólicos
con un átomo de magnesio en su centro, un anillo de ciclopentanona y un éster de fitól unido a uno de los
anillos de pirrol que provee a la molécula de una cola lipófila.

La diferencia entre las distintas clorofilas existentes (se conocen al menos siete) se encuentran en los
sustituyentes que se presentan; así la clorofila "a" (verde azulada) presenta un grupo metilo (-CH3) en el
carbono 3, y la "b" (verde amarillenta) un grupo aldehído (-CHO) en la misma posición. Existen plantas
que contienen solamente clorofila "a", como las algas azules, las diatomeas, las algas rojas y las pardas.
Sin embargo muchas de ellas contienen en los plastidios, pigmentos adicionales tales como otras
clorofilas (c, d, e), fucoxantinas (amarillo pardo) y ficocianina (azulado), que comunican sus respectivos
colores a las algas. Entre los carotenoides se encuentran los carotenos (anaranjados), cadenas
hidrocarbonadas de unos cuarenta átomos de carbonos, y las xantofilas (amarillas u ocre), que son
derivados oxigenados de aquellos. Fórmulas estructurales de las clorofilas "a" y "b", β-carotenos y la
luteína (una xantofila) se presentan en la Figura.
Clorofilas y carotenoides se encuentran en estrecha asociación entre si y con proteínas y lípidos de las
membranas en los grana de los cloroplastos. Los pigmentos fotosintéticos pueden extraerse de los tejidos
gracias a su solubilidad en disolventes orgánicos como éter y benceno. Sin embargo, para que su extracción
sea completa, el primer paso - la trituración - no se realiza con estas sustancias sino con otras que además de
disolver los pigmentos sean solubles en agua, como acetona o alcohol etílico, ya que gran parte del peso
fresco de los tejidos vegetales corresponde al agua. Posteriormente el extracto acetónico o alcohólico se
mezcla con éter o benceno, en los que se disuelven las clorofilas y parte de los carotenos y xantofilas.

2. Objetivos

❖ Extraer los pigmentos fotosintéticos e identificarlos de acuerdo con las

características mostradas en el papel.
❖ Manejar una de las técnicas sencillas de cromatografía para aislar pigmentos
foliares.

3. Materiales

❖ Biológicos: Hojas de espinaca, lechuga y/o (Alguna planta a la cual deseen extraer
su pigmento vegetal.)
❖ Equipo: Balanza, hornilla eléctrica
❖ Reactivos: Alcohol etílico 96%, éter de petróleo, benceno.
❖ Vidriería: Matraz, embudo, un tubo de ensayo grande con tapón, capilares
❖ Material: mortero con mano, gradilla
❖ Otros: Papel de filtro Whatman # 1, una tachuela, tijeras

4. Metodología

Triture 10 g de hojas de espinaca y lechuga con 50 cm3 de alcohol al 96%. Caliente suavemente en
una hornilla. Cuando las hojas se decoloren y el alcohol adquiera un color verde intenso, deje enfriar
y filtre el extracto a través del papel filtro, utilizando el embudo y un matráz donde se deposite el
filtrado.

Recorte una tira de papel filtro como se indica en la figura 1. Coloque con el capilar una gota del
extracto alcohólico y deje sacar: Repita el procedimiento por lo menos dos veces más. Llene el fondo
del tubo con una solución de 9 partes de éter de petróleo y una parte de benceno (aprox. 2 a 3 ml).
Introduzca la tira de papel cargada con el extracto, teniendo en cuenta de evitar que el solvente
alcance el extracto. Sostenga la tira con cinta de enmascarar, tape el tubo y observe. Identifique las
bandas o zonas en el papel. Qué tipo de pigmentos cree que está observando. Analice y discuta.
Figura 1. Cromatografía de pigmentos vegetales.

Figura 2. Extracción del pigmento vegetal

Figura 3. Filtración de pigmentos en un matráz

Figura
4. Colores representativos de los pigmentos.

5. Cuestionario

❖ A qué se debe que los pigmentos se separan unos de otros?

❖ Por qué cree que se utiliza el benceno y el éter de petróleo en esta experiencia?
❖ Qué es y qué clase de clases de cromatografía existen?
6. Bibliografía

❖ Rovalo, M. & Rojas, M. 1993. Fisiología vegetal experimental. Prácticas de laboratorio.

Ed. Limusa. México.

❖ Rojas, M. 1982. Fisiología vegetal aplicada. Interamericana. McGraw-Hill México.

❖ Salisbury, F. & Ross, C. 1998. Fisiología vegetal. Ed. Iberoamericana.