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Resultados
1. Expresar en forma ordenada los cálculos
efectuados para cada uno de los ejercicios.
REFERENCIAS
1. Villazón SA, Cárdenas CO, Villazón DO,
Sierra UA. Fluidos y electrólitos. México: JGH
Editores; 2000.
2. Peña-Díaz A, Arroyo BA, Gómez PA,
Tapia IR, Gómez EC. Bioquímica. Undécima
INSTRUCCIONES PARA EL USO
DEL MICROSCOPIO MARCA LEICA
1. Nunca use un adaptador entre el cable y muestra con precisión utilizando el mando de
la fuente de alimentación. enfoque micrométrico.
11. Ajuste los tubos oculares a la distancia de
2. Use siempre el microscopio sobre una los ojos.
superficie dura y estable.
12. Al término del uso del microscopio retirar
3. Conecte el cable de alimentación del la muestra de la platina.
microscopio a una toma de corriente con
conexión a tierra. Se suministra un cable de 13. Bajar la platina hasta el tope y regresarla
tres terminales con toma a tierra. a su posición original si es necesario.
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4
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Práctica 2
7 5
Práctica 2
Objetivos
HCO3–/H2CO3 y, con base en ella, conteste la
1. Al finalizar la práctica, el alumno siguiente pregunta:
constatará las actividades reguladoras del
pulmón y el riñón para mantener el equilibrio 1. ¿Cómo participan el aparato respiratorio y
ácido-base en condiciones que tienden a el riñón en el control del pH sanguíneo?
romperlo.
2. Mediante la determinación del pH Material
observará la variación de la concentración de • Diez probetas o vasos de precipitado.
hidrogeniones en la orina de un individuo que • Orina.
ha realizado ejercicio muscular intenso. • Potenciómetro.
3. Relacionará los resultados obtenidos con • Piceta.
los cambios metabólicos originados por el
ejercicio muscular intenso. Método
Un alumno por equipo desayunará o comerá
Conteste las siguientes preguntas: normalmente (evitar ingestión de jugos
ácidos); después hará lo que se indica a
1. ¿Por qué es importante que se mantenga continuación:
constante, dentro de ciertos límites, el pH en
el organismo? 1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de
2. ¿Cuáles son las fuentes de iones H+ en el la clase práctica. Vaciar la vejiga y descartar
organismo? esa orina.
3. ¿Cuáles son los sistemas reguladores que 2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente
antes de la clase práctica.
facilitan la eliminación del H+ producido en el
3. Orinar en un vaso de precipitado de 100
organismo con el fin de mantener constante
ml. Anotar el volumen de la muestra.
el pH sanguíneo?
4. Ingerir 250 ml de agua.
4. ¿Cuáles son las reacciones de formación
5. Realizar ejercicio muscular intenso, como
del ácido carbónico (H2CO3) a partir de CO2 y
subir y bajar varias veces las escaleras de
H2O, y de su disociación para formar el ion
tres o cuatro pisos u otro ejercicio sugerido
bicarbonato? Escríbalas.
por el profesor.
5. ¿Qué sistemas amortiguadores participan
6. Obtener muestras de orina cada 15
directamente en la regulación del pH
minutos, como en el inciso 3, hasta completar
sanguíneo?
por lo menos cinco muestras.
6. ¿Cuáles son los sistemas extrasanguíneos
7. A cada muestra se le determinará el pH
que tienden a mantener el pH extracelular?
inmediatamente después de haber sido
obtenida ya que con el tiempo el pH tiende a
Escriba la ecuación de Henderson y
aumentar debido a la pérdida de dióxido de
Hasselbalch aplicada al sistema
carbono y a que el crecimiento bacteriano
produce amoniaco a partir de la urea.
Análisis de resultados 1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de
la clase práctica. Vaciar la vejiga y descartar
Una vez obtenido el valor del pH para cada esa orina.
una de las 5 muestras de orina, trazar una
gráfica de pH contra tiempo; interpretar los 2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente
resultados y discutirlos en grupo. antes de la clase práctica.
3. Orinar en una probeta de 100 ml. Anotar el
Segunda parte volumen de la muestra.
4. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de
Objetivos bicarbonato de sodio.
5. Obtener muestras de orina cada 15
1. El alumno constatará el papel del riñón en minutos, hasta completar por lo menos 5
el mantenimiento del equilibrio ácido-base en muestras.
una situación de alcalosis metabólica 6. A cada muestra se le determinará el pH
provocada por la ingestión de bicarbonato de inmediatamente después de haber sido
sodio. obtenida.
2. Mediante la medición del pH, observar la
variación de la concentración de Análisis de resultados
hidrogeniones en la orina de un individuo que Una vez obtenido el valor del pH para cada
ha ingerido una carga de bicarbonato de una de las cinco muestras de orina, trazar
sodio. una gráfica de pH contra tiempo; interpretar
los resultados y discutirlos en grupo.
Hipótesis
REFERENCIAS
Elabore la hipótesis apropiada. 1. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
Material Editorial Reverte; 2004.
• Orina. 2. Montgomery R. Bioquímica: casos y texto.
• Solución de bicarbonato de sodio a 3%. 6a. ed. Editorial Harcourt-Brace; 1998: cap.4.
• Potenciómetro. 3. Villazón SA, Cárdenas CO,Villazón
Método
Práctica 3
Titulación de un aminoácido con una
base y la aplicación de la ecuación de
Henderson y Hasselbalch.
Determinación del pK1 y del pK2
REFERENCIAS
1. Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con
aplicaciones clínicas. 4a. ed. Barcelona:
Editorial Reverte; 2004.
2. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de
bioquímica. 4a. ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005
Práctica 4
Cálculo:
Donde A es la absorbencia.
El resultado se obtiene en g/dl.
El método es lineal hasta valores de 6 g/dl (60
g/l).
Los valores mayores de 6 deben diluirse 1:2
con solución salina.
Valores esperado de 3.5 a 5 g/dl (50 g/l).
REFERENCIAS
1. Peters TJ. Clin Chem. 1968; 14: 1147.
2. Murray KR, Granner DK, Mayes PA,
Rodwell VW. Bioquímica de Harper. 16a. ed.
México: Editorial El Manual Moderno; 2004.
3. González de Buitrago JM. Bioquímica
clínica. Madrid: McGraw-Hill Interamericana;
1999.
4. Laguna-Piña. Bioquímica. 4a. ed. México:
Salvat; 1990. Cap. 4.
5. Pacheco Leal D. Bioquímica médica.
México: Editorial Limusa; 2004.
Práctica 5
Cinética enzimática.
Efecto de la concentración del sustrato
sobre la velocidad de reacción enzimática
Fundamento
El método se basa en el hecho de que la
Objetivos
glucosa, en presencia del oxígeno del aire
El alumno:
y con la participación de la glucosa
1. Explicará el efecto de la concentración de oxidasa, se oxida hasta ácido glucónico.
sustrato sobre la velocidad de una reacción El peróxido de hidrógeno que se forma
enzimática. en el curso del proceso se descompone
2. Calculará por métodos gráficos la velocidad mediante la peroxidasa. El oxígeno
máxima y la constante de Michaelis de una
atómico que se desprende en esta última
reacción enzimática.
reacción se combina con un cromógeno
3. Conocerá los diferentes tipos de inhibidores
que se colorea al oxidarse. La intensidad
que existen y estudiará su efecto sobre la Km y
V máx. de la coloración del cromógeno oxidado
4. Conocerá aspectos básicos de es proporcional a la concentración de
fotocolorimetría (ver pág, 115). glucosa.
La glucosa oxidasa (ß-D-glucosa: oxígeno
Para lograr los objetivos de esta práctica
óxidorreductasa, EC1.1.2.4) tiene un peso
contestar las siguientes preguntas:
molecular de 160 000. Existe en forma
1. ¿Qué es la velocidad de una reacción dimérica y contiene dos moles de FAD
enzimática? como grupo prostético por mol de enzima.
2. ¿Cómo se define la constante de Michaelis La glucosa oxidasa es altamente
(Km) de una reacción enzimática?
específica, hecho que ha permitido su
3. ¿Cómo se define la velocidad máxima (V
empleo para el análisis cuantitativo de
máx) de una reacción?
glucosa. La reacción consiste de dos
4. ¿Para qué le sirve a un médico la
determinación de la actividad de algunas pasos:
enzimas? 1. Glucosa+glucosa oxidasa-FAD
5. ¿Cuáles son las enzimas cuya determinación δ–
tiene valor diagnóstico?
gluconolactona + glucosa oxidasa-FADH2
Hipótesis 2. Glucosa oxidasa-FADH2 + O2
Si la velocidad de una reacción enzimática es
glucosa oxidasa-FAD + H2O2
proporcional a la concentración del sustrato;
cuando la concentración del sustrato es muy La δ4-gluconolactona se hidrata
alta, por lo tanto la enzima se satura y alcanza espontáneamente dando ácido glucónico.
su velocidad máxima. La reacción global se expresa:
La enzima que sirve de modelo en esta práctica
Glucosa oxidasa
es la glucosa oxidasa acoplada a la peroxidasa.
Glucosa + O2 Acido glucónico + H2O2 Leer ambas series de tubos en el
fotocolorímetro; utilizar como blanco el
La peroxidasa cataliza la transferencia de tubo 1.
oxígeno del peróxido a un aceptor que es
cromógeno como la ortotoluidina, la
Resultados (cuadro 5.2)
ortodianisidina, la 2,2-azino-bis (3-
1. Cálculo de la concentración inicial de
etilbencentiazolin-6-sulfónico) o la 4-amino-
sustrato en cada tubo; tomar en cuenta
antipirina (y fenol) que se colorean al oxidarse.
que la solución de glucosa contiene 40
La reacción se expresa:
µmolas ml–1.
E+S ES E+P 2. La velocidad será igual a las unidades
Klett por .5 min-1 de incubación.
Material y reactivos 3. Con los datos obtenidos completar el
• 2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada una. cuadro 5.2 y hacer las dos gráficas en
• 1 Pipeta de 5 ml. papel milimétrico.
• 2 Pipetas de 5 ml. 4. Hacer una segunda gráfica con los
• 1 Matraz Erlemeyer de 100 ml. valores de 1/v vs 1/[S].
• Fotocolorímetro con filtro azul. 5. Calcular el valor de la velocidad
• Solución estándar de glucosa 40 mmol/l y una máxima (Vmáx) y de la constante de
dilución 1:10 de ésta para los tubos 2, 3 y 4. Michaelis (Km) con y sin inhibidor.
• 2 frascos con solución de enzimas: 41.6 Uml–1 6. Determinar el tipo de inhibidor de
de glucosa oxidasa, 4.6 Uml–1 de peroxidasa, acuerdo con las gráficas del punto
ortodianisidina 0.21 mmol/l. anterior.
• Solución de azida de sodio 400 mmol/l como 7. Analizar si los resultados obtenidos
inhibidor. están de acuerdo con la hipótesis
• Gotero con HCl. planteada.