Universidad Mariano Gálvez

Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud

Carrera de Médico y Cirujano

EXAMEN DIRECTO, TINCIONES Y CULTIVO PARA HONGOS

PRACTICA 8
1. Introducción
Los hongos que son los organismos del reino Fungi, incluyen mohos y levaduras. El ambiente
esta cargado de esporas de diversos hongos y, por lo general, estas flotan en el aire. Entre la
amplia variedad de esporas que caen sobre la piel o son inhaladas hacia los pulmones solo
algunos producen infecciones menores, y solo rara vez se extienden hacia otras partes del
organismo. Algunos pocos tipos de hongos, como las variedades de Candida, pueden vivir
normalmente sobre la superficie del cuerpo o dentro del intestino. Estos habitantes habituales
del organismo solo ocasionalmente pueden causar infecciones locales de la piel, la vagina o la
boca, pero muy rara vez producen más daño. En ciertos casos, no obstante determinadas
variedades de hongos pueden producir infecciones graves de los pulmones, el hígado y el resto
del cuerpo.

2. Objetivos
Que el estudiante:
1. Aprenda a realizar las técnicas básicas, para la identificación de hongos.
2. Desarrolle la habilidad en la realización de pruebas in Vitro.

3. Alcance
Conocer y comprender la utilidad que tienen los diagnósticos in Vitro.

4. Antecedentes
Los hongos tienen una tendencia especial a causar infecciones en individuos con un sistema
inmunológico deficiente. Por ejemplo los pacientes enfermos de SIDA o que reciben tratamiento
contra el cáncer tienen mas probabilidades de desarrollar infecciones micóticas graves. En
algunos casos, las personas con inmunidad deficiente desarrollan infecciones causadas por tipos
de hongos que, muy rara vez, por no decir nunca, causan daño a los individuos cuyos sistemas
de inmunidad funcionan normalmente. Entre estas infecciones se encuentran las mucormicosis y
la aspergilosis.
Algunas infecciones fúngicas son mas frecuentes en ciertas áreas geográficas. Por ejemplo, la
blastomicosis se produce solo en Norteamérica y África. Debido a que muchas infecciones
fúngicas se desarrollan lentamente, pueden pasar meses o años antes de que una persona se
de cuenta de que necesita atención medica. Estas infecciones pueden ser difíciles de tratar y el
tratamiento suele efectuarse durante mucho tiempo. En la actualidad existen varios fármacos
antimicóticos.
Las infecciones invasoras causadas por hongos son cuadros difíciles de reconocer, ya que tanto
los síntomas como los signos clínicos son, a menudo inespecíficos. Recientemente la NIAID
(Nacional Institute of Allergy an Infectious Diseases) han considerado tres pilares para el
diagnostico de las infecciones fúngicas invasoras en pacientes con cáncer y transplante de
precursores hematopoyeticos:

Pág. 1/7
 Universidad Mariano Gálvez
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud
Carrera de Médico y Cirujano

 Factores predisponentes en el hospedero.

 Elementos clínico-radiológicos
 Hallazgos de laboratorio

FACTORES DE RIESGO PARA DESARROLLAR INFECCIONES MICÓTICAS

Terapia que suprime el sistema inmunológico
 Fármacos anticancerosos
 Corticoesteroides y otros fármacos inmunodepresores
Enfermedades y situaciones
 SIDA
 Insuficiencia renal
 Diabetes
 Enfermedad pulmonar, por ejemplo enfisema
 Enfermedad de Hodgkin y otros linfomas
 Leucemia
 Quemaduras extensas

Microscopia: La observación microscópica puede dar información preliminar sobre la presencia

o ausencia de hongos en la muestra y también orientar sobre la especie causante de la infección
debido a la observación de elementos micóticos característicos. Algunos elementos que
podremos observar al microscopio son levaduras, hiemaciones, hifas septadas o aseptadas,
pseudohifas.
Examen directo: el examen al fresco entre lámina y laminilla es un método de bajo costo,
rápido y que no requiere equipamiento especial; sin embargo, deber ser realizado por personal
entrenado. Su sensibilidad depende del tipo y cantidad de muestra y del número de
microorganismos presentes en ella. Cuando la muestra tiene detritus celulares se utiliza
hidróxido de potasio al 10%, el cual clarifica de material orgánico y deja intactas las estructuras
fúngicas.
Tinción de Gram: también es una técnica barata y rápida, que nos permita observar levaduras
yemantes o formando pseudohifas con mayor claridad que el examen directo, sin embargo; debe
tenerse presente que los hongos filamentosos no se tiñen o lo hacen muy débilmente con tinción
de Gram, por lo que si se sospecha la presencia de un hongo filamentoso, no debe utilizarse.
Cultivos: La siembra microbiológica es necesaria para lograr la identificación de especie de los
diversos hongos comprometidos en infecciones fúngicas y permite además realizar estudio de
susceptibilidad en caso de ser necesario. En general, si no hay suficiente material para realizar
el examen directo y el cultivo, este último tiene prioridad por su mayor sensibilidad.
Cultivos en medio sólido: se pueden utilizar medios no inhibitorios como agar Sabouraud o
agar cerebro-corazón para muestras provenientes de sitios estériles y medios inhibitorios que por
contener antimicrobiamos, evitan un crecimiento bacteriano excesivo para muestras

Pág. 2/7
 Universidad Mariano Gálvez
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud
Carrera de Médico y Cirujano

provenientes de sitios no estériles. En estas muestras en que el cultivo es mixto, esta

demostrando que la siembra en medios corrientes deja de recuperar hasta el 50% de los cultivos
positivos para hongos 14.

Tabla 1. Condiciones de recolección y transporte para muestras frecuentes recibidas en

el laboratorio de micología.
Tipo de muestra Recolección Transporte Observaciones
Sangre Limpie la piel con alcohol < 2 hrs. a temperatura Idealmente obtenga dos
70%. Luego desinfecte con ambiente. botellas separadas al
providota yodada, aplicando menos por 30 minutos de
concéntricamente hacia sitios de punción
fuera. Deje secar y realice la diferentes.
punción venosa. Tome el
máximo de sangre
recomendada para la botella
que se esta utilizando.
Liquido Procedimiento medico Envíe de inmediato al
cefalorraquídeo laboratorio (ideal <15
Obtengo 1-2 ml en tubo
minutos) a
estéril.
temperatura ambiente.
Líquidos de Procedimiento medico, ya Envíe de inmediato al
cavidades sea por aspiración laboratorio (ideal <15
estériles percutáneo o cirugía. Envíe minutos) a
(ascético, la mayor cantidad de temperatura ambiente.
pleural, muestra posible.
pericárdico y
articular)
Muestras En caso de expectoración, < 2 hrs. a temperatura Se prefiere lavado bronco
respiratorias debe preferirse la primera de ambiente alveolar o biopsia s existe
la mañana, 2-3 ml en frasco sospecha de infección
estéril. Lavado bronco pulmonar invasora.
alveolar de resorte medico
Orina Recolecte entre 50-200ml de < 2 hrs. a temperatura No se recomienda
orina matinal en frasco ambiente recolección de 24 horas.
estéril.
Tejidos Procedimiento medico < 2 hrs. a temperatura
ambiente
Heridas, Se prefiere aspirado o < 2 hrs. A temperatura
abscesos biopsia. Cuando sea posible ambiente
tome trozo de la pared del
absceso. Si no es posible,
use rotulado de la zona.

Glosario

Pág. 3/7
 Universidad Mariano Gálvez
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud
Carrera de Médico y Cirujano

Micología: estudio de los hongos y su biología.

Hongos: Reino constituido por organismos eucariontes heterótrofos absortitos que poseen
quitina en su pared y carecen de clorofila. Pueden ser uni o multicelulares, macro o
microscópicos. Por sus características de crecimiento, en el laboratorio se dividen en lavaduras y
hongos filamentosos.
Levaduras: son hongos unicelulares ovoideos, que pueden estar aislados o formando cadenas,
con colonias similares a las de bacterias y que se dividen por yemación.
Filamentosos: son hongos multinucleados, con colonias algodonosas o vellosas. Forman
estructuras filamentosas o hifas, las cuales pueden ser septadas o aseptadas y que crecen por
elongación de los extremos.
Hifa: estructura filamentosa de los hongos, y que en conjunto forma el micelio. Pueden tener
tabique o septo (hifa septada) o carecer de él (hifa aseptada o sifonda).
Pseudohifa: cadena de células, formada por levaduras yemantes y que semejan una hifa, pero
que presentan constricciones a nivel del septo y que en el sitio de ramificación parten con un
tabique.
Gemación: proceso de reproducción asexual característico de las levaduras, en el cual una
nueva célula se genera a partir de una elongación de la célula madre.

5. Materiales y Equipo:
 Microscopio óptico
 Estereoscopio
 Pipetas pasteur
 Perilla de goma
 Laminas porta objetos (2/A)
 Cubre objetos (2/A)
 Caja de petri
 Papel filtro
 Pizetas con agua destilada
 Muestra desconocida
 Beacker con alcohol al 70%
 Goteros con solución de KOH al 10%
 Goteros con solución de Lactofenol
 Aplicadores de madera
 Lentes de protección
 Pizeta con alcohol al 70%
 Pizeta con cloro al 5%

Pág. 4/7
 Universidad Mariano Gálvez
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud
Carrera de Médico y Cirujano

 Guantes de látex
 Papel mayordomo
 Torundas de algodón (1/A)
 Bolsas para descarte de basura

6. Procedimiento
Muestra:
Muestra de hongos saprofitos, provenientes de frutas y verduras del ambiente y del área de
trabajo.
PARTE I. Inoculación o siembra de la muestra:
a. Muestra representativa del ambiente.
- Rotule la caja indicando el tipo de muestra y la fecha.
- Quite la tapa superior de la caja y déjela expuesta al aire del laboratorio durante 15
minutos.
- Cúbrala de nuevo e incúbela a temperatura ambiente por término de 8 días.

b. Muestra de superficies.
- Rotule la caja indicando el tipo de muestra y la fecha.
- Remueva el forro de un hispo estéril y frote la superficie de la mesa de trabajo.
- Con la mano izquierda, tome la parte inferior de la caja que contiene el medio de cultivo.
- Con la mano derecha, tome el hisopo e inocule la muestra. (siga las instrucciones del
catedrático).
- Tape la caja e incúbela a temperatura ambiente por termino de 8 días.

PARTE II. Observación de cultivos

- Utilice dos de las cajas con cultivo de hongos para la observación en el estereóscopo.
- Describa forma, color, apariencia tanto del micelio como del revés de la caja.
- Dibuje y haga su descripción
-
PARTE III. Frotis con azúl de lactofenol
- Coloque las láminas preparadas y teñidas con azúl de lactofenol que se les
proporcionan.
- Enfoque en objetivo de seco débil, con cuidado de no romper la lámina y observe.
- Traslade a objetivo de 40X.
- Anote a continuación los resultados obtenidos, acompañado de ilustraciones
esquemáticas.

Pág. 5/7
 Universidad Mariano Gálvez
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud
Carrera de Médico y Cirujano

PARTE V. Resultados
Se realizara la lectura e cajas, después de una semanas de la siembra.

Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad

a. Lávese las manos después de realizar cualquier tarea dentro de laboratorio de
microbiología.
b. No dejar por ningún motivo cajas, tubos o cualquier otro material contaminado, en
lugares que no corresponda al área de trabajo.

NINGUN EQUIPO DE PROTECCIÓN SUSTITUYE EL CUIDDO, ORDEN Y

PRECAUCIÓN QUE DEBE TENER CADA ESTUDIATE AL REALIZAR SU TRABAJO

Formato de presentación de resultados

1. Haga un dibujo representativo de los resultados obtenidos, utilice crayones para el
efecto.

Informe final
Investigue sobre: De las laminas que observó ya preparadas, complete el siguiente cuadro:
Nombre del Hongo Nombre de la Lugar que afecta en Tipo de muestra (para
afección el cuerpo humano el diagnostico)

Bibliografía de referencia
Ostrosky-Zeichner L, Rex J, Bennet J, Kullberg B J. Deeply invasive candidiasis. Infect Dis Clin
North Am 2002; 16: 821-35 (medline)
Marr K, Patterson T, Denninh D. Aspergillosis: pathogeniesis, clinical manifestations an therapy.
Infect Dis Clin North Am 2002; 16:875-94. (medline)
Walsh TJ, Groll A H. Emerging fungal pathogens: envolving challenges to inmunocompromised
patients for the twenty-first century. Transpl Infect Dis 1999, 1:247-61.
Donnely JP. Symptoms and diagnosis of nosocomial fungal infections- State of the Art. Eur J Med
Res 2002, 7:192-9. (medlline).

Pág. 6/7