LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE ESTRUCTURA DE
BIOMOLECULAS Y CINETICA ENZÍMATICA

Reporte No.1

Aislamiento, Identificación y Cuantificación de

Carbohidratos.

Profesor:
DR. LUIS FELIPE PADILLA VACA

Equipo No. 2:
JAIR CORRALEJO MUÑOZ
MAURICIO LUNA CHAGOLLA
MA. KRISTEL MARTÍNEZ NIETO

Fecha de entrega:
Martes 04 de septiembre del 2018
INTRODUCCIÓN

Antecedentes:

Hermann Emil Fischer (9 de octubre de 1852; Euskirchen – 15 de julio de 1919;

Berlín) fue un químico alemán. Descubridor del barbital (primer somnífero del
grupo de los barbitúricos), fue galardonado con el Premio Nobel de Química en
1902. En 1876 descubrió la fenilhidrazina, compuesto que le sería muy útil
posteriormente pero que le provocó un eczema crónico. Su trabajo supuso una
ordenación de la química de los hidratos de carbono, en parte gracias al empleo
de fenilhidrazina. Esta investigación proporcionó la síntesis de una serie de
azúcares; su mayor éxito fue la síntesis de la glucosa, de la fructosa y de la
manosa en 1890.

Los carbohidratos son uno de los tres micronutrientes básicos necesarios para
mantener la vida (los otros dos son las proteínas y las grasas). Se encuentran
en una amplia gama de alimentos que aportan una variedad de otros nutrientes importantes para la
dieta, como las vitaminas y los minerales, los antioxidantes y la fibra alimentaria. Las frutas, los
vegetales, los alimentos de grano y muchos productos lácteos contienen naturalmente carbohidratos
en distintas cantidades, incluidos los azúcares, que son un tipo de carbohidrato que puede agregar un
atractivo sabor a una dieta nutritiva.

Clasificación:

Los carbohidratos se clasifican en función del número de unidades de sacárido (la forma más simple
de carbohidrato); los monosacáridos son aquellos que no se pueden dividir en una forma más simple,
los disacáridos pueden hacerlo en dos moléculas de monosacáridos, los oligosacáridos producen de 3
a 10 unidades y los polisacáridos desde 10 a más de 10000 unidades de monosacáridos.

Tipos Fuentes de origen

Monosacáridos – Frutas, frutos secos, verduras, dulces
 Hexosas (6 carbonos):
1. Glucosa
2. Fructosa – No están en forma libre en los alimentos
3. Galactosa

(Galactosa)

Pentosas (5 carbonos):
4. Ribosa
5. Xilosa
6. Arabinosa

Disacáridos Caña de azúcar y remolacha

 Sacarosa: glucosa + fructosa – Sobrecocción del almidón
 Maltosa: glucosa + glucosa – Azúcar de la leche

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  Lactosa: glucosa + galactosa

(Sacarosa)

Polisacáridos – Cereales, tubérculos y legumbres

 Diregibles – Carne y pescado
1. Almidón y dextrinas
2. Glucógeno
– Tallos, hojas de vegetales, cubierta de
cereales
– Frutos
– Granos y secreciones de plantas
– Algas

(Almidon)
Parcialmente digeribles
3. Inulina
4. Manosanos
5. Rafinosa
6. Galactósidos
7. Estaquinosa
 No digeribles (fibra)
1. Insoluble: celulosa,
hemicelulosa
2. Soluble: pectinas, gomas,
mucílagos, sustancias agar.

Carbono anomérico y anómeros

El carbono anomérico en los azúcares es el carbono del hemiacetal o hemicetal; esto es, el carbono
No. 1 ó 2, respectivamente. Se forma durante la reacción de ciclación de un grupo OH con el grupo
carbonilo en el carbono 1 ó 2. Los anómeros son epímeros en el carbono anomérico 1 ó 2.
Si el OH sobre el carbono anomérico en la proyección de Fischer de un azúcar D se encuentra hacia
la izquierda, se trata del anómero β; por el contrario, si está a la derecha, se trata del anómero α.

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Azucares reductores.

Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo carbonilo (grupo funcional)
intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar como reductores (dadores de electrones) con otras
moléculas que actuarán como oxidantes (aceptando electrones). Esta propiedad permite determinar la
concentración de una disolución de azúcar midiendo la cantidad de agente oxidante que es reducido,
como ocurre en la determinación del contenido de glucosa en muestras de sangre u orina para detectar
la diabetes mellitus.

Distribución en la Naturaleza

a) Monosacáridos Simples

Glucosa (o dextrosa) se encuentra en las frutas y la miel. Es el principal producto

final de los otros carbohidratos más complejos. Es el azúcar que se encuentra en la
sangre, y utilizado por todos los tejidos del organismo (siendo para el sistema
nervioso central la única fuente de energía posible). Se almacena en el hígado y
músculo en forma de glucógeno.

Fructosa (o levulosa) es el azúcar de las frutas, y también se encuentra en la miel. Es el más dulce de
los azúcares.
Galactosa es producida a partir de la lactosa de la leche.

b) Disacáridos

Formados por dos moléculas de monosacáridos, uno de los cuales siempre es la glucosa.

Maltosa se puede encontrar en algunos cereales como la cebada, pero principalmente proviene del
almidón.

c) Polisacáridos

Los de interés en nutrición son uniones de moléculas de glucosa. Son menos solubles y más
estables que los azúcares simples. El almidón y dextrinas, y el glucógeno son
completamente digeribles, la fibra no es digerible.

Almidón o fécula es la gran reserva de glucosa de los vegetales. Está presente en cereales,
tubérculos y legumbres. Para poder ser digerido por el tracto gastro-intestinal humano
precisa de cocción previa (en crudo produce diarreas).

Glucógeno es la reserva de carbohidratos de los animales, y la mayor y primera fuente de disponible

de glucosa. Se almacena en hígado y músculo (unos 340 g).

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Fibra se considera fibra a todos aquellos polisacáridos que no son almidón de la pared celular de las
plantas. Según sea soluble en al agua los diferentes tipos de fibra se clasifican en insolubles (celulosas
y hemicelulosa, que se encuentran fundamentalmente en frutas, vegetales y cereales), y solubles
(pectinas de las frutas, beta-glucanos, gomas de las legumbres, y mucílagos de las cutículas de
cereales). La mayoría de los alimentos contienen una mezcla de fibra soluble e insoluble

Importancia Biológica.

La importancia biológica que yace en el consumo de los carbohidratos, se engloba principalmente en

que es la mayor y principal recarga de energía que se proporcione al organismo, depende del tipo de
carbohidrato del cual se esté hablando, generalizando los carbohidratos aportan a nivel de moléculas
ya que forma nucleótidos, a nivel celular y a nivel de los tejidos del cuerpo.
Como combustible, debido a que forma una molecular de monosacáridos, que cuando se oxidan,
trabajan para obtener de ella 4 Kcal/g, que es una medida para proporcionar una cantidad de 1000
calorías, lo que le da a nuestro cuerpo la suficiente energía. Reserva de energía: Esta hecha por
diversos componentes como el glucógeno y el almidón, que juntos acumulan y almacenan una cantidad
de energía que funciona en momentos en los que la necesidad los requiera. Forma las estructuras: En
su composición posee celulosa o la quitina, que son los que le dan forma a cada una de las estructuras
de soporte del organismo que las obtenga.

Algunos ejemplos:

Fructosa: La fructosa se convierte en glucosa en el hígado e intestinos, de manera

que sirva de combustible metabólico para las células. En cantidades controladas sirve
como un endulzador nutritivo aceptable para el uso de dietas que modifican los
hidratos de carbono y kilocalorías consumidas.

Sacarosa: Aporte de energía a los diferentes tejidos, para cumplir esta función
pasa por un proceso digestivo que empieza en la boca y continúa en el
estómago e intestino delgado descomponiéndose en glucosa y fructosa, sólo
de esta forma se absorben. Es un disacárido.

Ribosa: Formación en la estructura de los ácidos nucleicos, los cuáles a su vez

participan en la síntesis de proteínas (Allinger). Es una genia del ADN La absorción de
la D-ribosa por vía intestinal es del 88%-100%, con una media de 200 mg/kg/h. ayuda
a resintetizar el ATP para su utilización en los músculos esqueléticos.

Las plantas sintetizan los glúcidos o carbohidratos gracias a la intervención del pigmento llamado
clorofila produce monosacáridos a partir de la energía solar y de su capacidad de captación osmótica
de sus propios nutrientes. Por esta razón, los vegetales reciben el nombre de autótrofos puesto que
son capaces de transformar materiales inorgánicos en recursos orgánicos.

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Importancia Biomédica

Los carbohidratos tienen funciones muy diversas en el organismo; desde la transferencia de energía
entre las células, como es el caso de la glucosa que es el sustrato energético fundamental y combustible
universal para el feto, hasta la función de reconocimiento celular y proteico pasando por la función de
reserva energética bajo la forma y resistencia de los organismos vegetales en forma de celulosa. Los
carbohidratos pueden ser precursores de lípidos y de factores vitamínicos como el ácido ascórbico y el
inositol de determinados organismos.

Por ejemplo:

 Forman parte estructural de las membranas.

 Se unen con otras moléculas para constituir: ATP, ADP, DNA, ARN.
 Se unen con proteínas y lípidos. Intervienen en funciones como reconocimiento celular,
cicatrización, y anticoagulación.

Importancia industrial:

Los carbohidratos se utilizan para fabricar tejidos, películas

fotográficas, plásticos y otros productos. La celulosa se
puede convertir en rayón de viscosa y productos de papel.
El nitrato de celulosa (nitrocelulosa) se utiliza en películas de
cine, cemento, pólvora de algodón, celuloide y tipos
similares de plásticos. El almidón y la pectina, un agente
coagulante, se usan en la preparación de alimentos para
el hombre y el ganado. La goma arábiga se usa
en medicamentos demulcentes. El agar, un componente de
algunos laxantes, se utiliza como agente espesante en los alimentos y como medio para el cultivo
bacteriano; también en la preparación de materiales adhesivos, de encolado y emulsiones.
La hemicelulosa se emplea para modificar el papel durante su fabricación. Los dextranos son
polisacáridos utilizados en medicina como expansores de volumen del plasma sanguíneo para
contrarrestar las conmociones agudas. Otro hidrato de carbono, el sulfato de heparina, es
un anticoagulante de la sangre.

La utilización del almidón como componente alimentario se basa en

sus propiedades de interacción con el agua, especialmente en la
capacidad de formación de geles. Abunda en los alimentos amiláceos
(cereales, patatas) de los que pueden extraerse fácilmente y es la más
barata de todas las substancias con estas propiedades.

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El almidón más utilizado es el obtenido a partir del maíz. Sin embargo, el
almidón tal como se encuentra en la naturaleza no se comporta bien en
todas las situaciones que pueden presentarse en los procesos de
fabricación de alimentos. Concretamente presenta problemas en alimentos
ácidos o cuando éstos deben calentarse o congelarse, inconvenientes que
pueden obviarse en cierto grado modificándolo químicamente.

Propiedades físicas y químicas de los carbohidratos.

Propiedades físicas.

1. Presentan puentes de hidrogeno y por lo tanto son solubles en agua excepto los polisacáridos.
2. Son compuestos cristalinos.
3. Presentan alto punto de fusión.
4. Los carbohidratos simples tienen sabor dulce y los complejos no.
5. Presentan isomería.
6. Al disolverse en agua presentan rotación óptica.

Propiedades químicas.

1. Tienen la capacidad de producir energía.

2. Tienen cadenas compuestas de 3 a 6 átomos de carbono.
3. Pueden formar polímeros.
4. Se pueden oxidar para formar el ácido correspondiente.
5. Se pueden reducir para formar el alcohol correspondiente.
6. Pueden sufrir fermentación para formar alcohol y dióxido de carbono.

Ensayos de caracterización.

Ensayo de Molisch: Este ensayo es un ensayo para

reconocimiento general de carbohidratos en el que los
polisacáridos y disacáridos se hidrolizan con ácido sulfúrico
concentrado hasta monosacáridos y se convierten en derivados
del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con α-
naftol formando un color púrpura violeta.

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Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de carbohidratos reductores,
al igual que el reactivo de Felhing, el de Benedict contiene ion cúprico en medio alcalino que se reduce
hasta óxido cuproso en presencia de azúcares con el hidroxilo hemiacetálico libre.

Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacáridos y disacáridos reductores,
también contiene ion cúprico que se reduce hasta óxido cuproso más rápidamente con los
monosacáridos que con los disacáridos.

Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer
polisacáridos, particularmente el almidón por la formación de una coloración azul violeta intensa y el
glicógeno y las dextrinas por formación de coloración roja.

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Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la conversión de la cetosa
en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensación con resorcinol formando así complejos coloreados.

Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en ácido clorhídrico, el cual forma complejos de
coloración sólo con las pentosas.

De otro lado una propiedad importante que permite identificar los carbohidratos, y determinar el grado
de pureza de estos, particularmente monosacáridos es la rotación óptica ocasionada por la presencia
de centros asimétricos o quirales en la estructura molecular, los cuales desvían el plano de luz
polarizada.Esta propiedad no es exclusiva de los carbohidratos pues la presentan todas aquellas
sustancias denominadas óptimamente activas, por tener en su estructura centros quirales.
Para la medición de la rotación óptica los factores importantes a tener en cuenta son: La longitud de
onda de luz polarizada, la cantidad de material óptimamente activo, y la naturaleza del solvente cuando
se usa. Los cambios en la temperatura ocasionan solo pequeñas variaciones en las medidas de la
rotación.

Ensayos de cuantificación.

Espectrofotometría

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección

específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de
distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los
fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos. Las moléculas
pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto permite que se
inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias. La
Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles tiene una
energía:
Efotón = h⋅ν = h⋅c/λ ,

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 Donde c es la velocidad de la luz, ν es su frecuencia, λ su longitud de onda y h= 6.6 10 -34 J⋅s es la
constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia química absorbe luz de longitud de onda λ,
esto significa que las moléculas de esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda. En esta
práctica estudiaremos la absorción de luz en el ultravioleta cercano (λ≈325-420 nm) y en el visible
(λ≈420-900 nm). Cuando una molécula absorbe un fotón en este intervalo espectral, se excita pasando
un electrón de un orbital del estado fundamental a un orbital excitado de energía superior. De está
manera la molécula almacena la energía del fotón: A + h⋅ν → A * E(A * ) = E(A) + Efotón Como la
energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado fundamental de la molécula (A) y su
estado excitado (A * ) debe ser exactamente igual a la energía del fotón. Es decir, una molécula sólo
puede absorber fotones cuya energía h⋅ν sea igual a la energía de un estado molecular excitado. Cada
molécula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que dependen de su estructura
electrónica y que la distinguen del resto de moléculas. Como consecuencia, el espectro de absorción,
es decir, la luz absorbida en función de la longitud de onda, constituye una verdadera seña de identidad
de cada sustancia o molécula. En una ampliación a esta práctica, se puede detectar una mezcla de dos
colorantes alimentarios, el rojo E-124 y un colorante verde midiendo su espectro de ultravioleta/visible.
Cuando dos o más sustancias aparecen mezcladas en una misma muestra sus espectros de absorción
aparecen superpuestos tal como se representa en la siguiente figura:

La cromatografía

La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas

estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de
separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles,
una fija o estacionaria y otra móvil.

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla debido
a la influencia de dos efectos contrapuestos.

a) Retención. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que
puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede
ser un líquido o un gas.

El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria,

impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución. Las dos fases se eligen de forma que los
componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente
con el flujo de la fase móvil; por el contrario, los componentes que se unen débilmente a la fase
estacionaria se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de

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la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.
Para los azucares: en un papel cromatográfico se colocan 4 diferentes azucares en 4 puntos distintos
y en el quinto se coloca una muestra problema, se coloca en el solvente y al finalizar se deja secar, se
revela y se realizan los cálculos de los Rf.

Método óptico de polarimetría.

La polarimetría es una técnica basada en la medición de la rotación óptica producida sobre un haz de
luz polarizada al pasar por una sustancia ópticamente activa.

Cada sustancia ópticamente activa tiene su rotación específica, determinada por la siguiente ecuación:

[𝛼](𝑡, 𝜆) = 𝛼(𝑡, 𝜆)/𝐶𝐼

[𝛼] = 𝑟𝑜𝑡𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎 𝑎 𝑢𝑛𝑎 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑑𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎.

𝛼 = 𝑟𝑜𝑡𝑎𝑐𝑖ó𝑛 ó𝑝𝑡𝑖𝑐𝑎.
𝐶 = 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛.
𝐼 = 𝑝𝑎𝑠𝑜 ó𝑝𝑡𝑖𝑐𝑜 𝑎 𝑡𝑟𝑎𝑣é𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎.
𝑡 = 𝑡𝑒𝑚𝑝𝑒𝑟𝑎𝑡𝑢𝑟𝑎.
𝜆 = 𝑙𝑜𝑛𝑔𝑖𝑡𝑢𝑑 𝑑𝑒 𝑜𝑛𝑑𝑎.

Este método consiste en colocar x gramos de azúcar, disolver en agua con constante agitación,
transferir a un Erlenmeyer y agregar acido concentrado. Colocar en un baño maría, dejar enfriar y
colocar la muestra en un tubo polarimétrico hasta llenarlo completamente. Registrar la lectura del
polarímetro una vez se estabiliza.

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Espectroscopia por infrarrojo cercano.

El empleo de la espectroscopia por infrarrojo cercano (NIRS) para análisis de distintos productos de las
industrias de alimentos, química, bioquímica, ambiental, farmacéutica y médica, se viene desarrollando
desde hace tres décadas.
La espectroscopia estudia la interacción de la radiación electromagnética con la materia. NIRS
comprende el segmento de luz de longitudes de ondas entre 800 y 2600 nm del espectro
electromagnético y analiza la absorción de energía en dicha región por los grupos funcionales de las
moléculas de la muestra.
Su uso generalizado se debe principalmente a que permite realizar análisis cualitativos y cuantitativos
de multicomponentes en muestras, con un mínimo de preparación. Esta metodología, además, se
caracteriza por ser no destructiva, rápida, no emplear reactivos químicos, disminuir el error del operador
y requerir menos mano de obra que los métodos tradicionales empleados en el laboratorio. Sin
embargo, se debe tener presente que es un método secundario, lo cual significa que debe ser calibrado
contra otras metodologías y que sus respuestas no presentarán mayor exactitud que la de los métodos
primarios empleados (Rein, 2007).
También se debe mencionar que presenta algunas desventajas, entre las cuales se destacan: el alto
costo de los equipos, la competencia técnica que debe poseer el operador y el tiempo requerido para
desarrollar una base de datos que permita obtener ecuaciones de calibración robustas, que originen
predicciones confiables (White et al., 2006).

OBJETIVO

Obtener de origen natural y aprovechando sus propiedades físicas y químicas, un carbohidrato con el
cual se pudo hacer pruebas para comprobar sus propiedades físicas y químicas como solubilidad y
poder reductor para finalmente determinar la concentración mediante el método del ácido
dinitrosalicílico.

METODOLOGÍA

Parte A. Cuantificación de azucares.

Revisar metodología y material del manual de bioquímica página No. 3.

Parte B. Identificación de carbohidratos.

Revisar metodología y material del manual de bioquímica página No. 6.

Parte C. Cuantificación de carbohidratos.

Revisar metodología y material del manual de bioquímica página No. 10.

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RESULTADOS

Resultados parte A. Aislamiento de lactosa.

100 𝑔 𝑑𝑒 𝑙𝑒𝑐ℎ𝑒 − 56 𝑔 𝑠𝑜𝑛 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜ℎ𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑜𝑠

25 𝑔 𝑑𝑒 𝑙𝑒𝑐ℎ𝑒 − 𝑋 = 14 𝑔

56 𝑔 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜ℎ𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑜𝑠 − 37 𝑔 𝑠𝑜𝑛 𝑑𝑒 𝑎𝑧ú𝑐𝑎𝑟

14 𝑔 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑜𝑠 − 𝑋 = 9.25 𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑧ú𝑐𝑎𝑟.
Por lo tanto, nuestro rendimiento teórico es:
14 𝑔 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜ℎ𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑜𝑠 − 100%
9.25 𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑧ú𝑧𝑎𝑟 − 𝑋 = 66%
El rendimiento real= 1.195 g
𝑟𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑟𝑒𝑎𝑙 1.195𝑔
%𝑟𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 = (100) = (100) = 12.919%
𝑟𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑛𝑡𝑜 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 9.25 𝑔

Composición por cada 25 g. Contenido energético.

Proteínas 4.75 g
Lípidos 2.87 g
Grasa saturada, g 1.82 g
Hidratos de carbono 14 g
Azucares, g 9.25 g

Resultados parte B. Identificación de carbohidratos.

No. de muestra Nombre Benedict Hidrolisis Tipo de azúcar

Benedict
1 Lactosa + --------------------- Reductor
2 Fructosa + --------------------- Reductor
3 Glucosa + --------------------- Reductor
4 Sacarosa - + No reductor
5 Almidón - - No reductor
6 Miel - + No reductor
7 Muestra + ---------------------- Reductor
Problema

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Resultados parte C. Cuantificación de azúcares.

TABLAS DE MEDICIONES

TUBO GLUCOSA (μg) ABSORBANCIA

575nm F
1 0 0.046
2 5 0.043
3 10 0.046
4 20 0.050
5 50 0.069
6 100 0.111
7 150 0.161
8 200 0.201

GRAFICA DE ABSORVANCIA VS CONCENTRACION DE LA SOLUCIÓN PATRON (GLUCOSA).

Solucion Patron

0.25
y = 0.0008x + 0.0371

0.2

0.15
Absorvancia

0.1

0.05

0
0 50 100 150 200 250
Concentracion mg/ml

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 GRAFICA DE ABSORVANCIA VS CONCENTRACION DE LA MUESTRA PROBLEMA.

Muestra Problema
1.2
y = 0.0054x + 0.0175
1

0.8
Absorvancia

0.6

0.4

0.2

0
0 50 100 150 200 250
Concentracion 10mg/ml

De acuerdo a la siguiente ecuación y = 0.0054x + 0.0175 donde se extrapolo las mediciones de la

concentración de la muestra problema con respecto a su absorbancia. Despejando la ecuación de la
recta de la tendencia lineal se obtuvo la siguiente ecuación:

𝑦 − 0.0175
𝑋=
0.0054

Utilizando esta fórmula y con las respectivas absorbancias podemos obtener la concentración que
10𝑚𝑔
tiene cada muestra tomando en cuenta que la concentración obtenida son por 𝑚𝑙 :

0.041 − 0.0175
𝑋1 = (10) = 43.5185 mg por cada 5 ml
0.0054

0.182 − 0.0175
𝑋2 = (10) = 304.6296 mg por cada 30 ml
0.0054

1.089 − 0.0175
𝑋3 = (10) = 1984.2590 mg por cada200 ml
0.0054

Por lo tanto para obtener la concentración de 1mg en 1 ml se divide a cada uno de ellos
43.5185𝑚𝑔 𝑚𝑔
𝑋1 = 5 𝑚𝑙
= 8.7037 𝑚𝑙

304.6296𝑚𝑔 𝑚𝑔
𝑋2 = 30 𝑚𝑙
= 10.1543 𝑚𝑙

1984.2590𝑚𝑔 𝑚𝑔
𝑋3 = 200 𝑚𝑙
= 9.9212 𝑚𝑙

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Por lo tanto su promedio será la concentración de Lactosa por ml, la cual el cual nos da el siguiente
resultado: 9.5930 mg/ml de la muestra problema.

DISCUSIÓN:
Los Carbohidratos pueden oxidarse para formar ácidos, además sus grupos OH pueden
reaccionar para formar anillos y también su grupo OH sufren oxidación lo cual se comprobó
con la reacción de Benedicta. Los grupos Aldehídos y cetónicos de los mismos se pueden
reducir a un alcohol.
Los azucares son más estables que las proteínas debido a que las mismas tienden a
reaccionar.
Respecto a la Lactosa obtenida en la lactosa la cual fue 1.195 g pudimos observar que la
cantidad esperada fue distinta a la obtenida, esto debido a que en la cristalización no se logró
extraer todo nuestro azúcar, incluso pudo haberse ido anclado en las proteínas presentes.

CUESTIONARIO

1. Cita dos propiedades físicas y o químicas de los carbohidratos que permitan su separación y su
purificación. Véase en la sección de introducción en la página 6.
2. ¿Qué porcentaje de carbohidratos contiene la leche descremada que utilizarás en esta práctica?
Véase en la sección de resultados página 12.
3. ¿Cuánto de ese porcentaje corresponde a lactosa? Véase en la sección de resultados página
12.
4. ¿Cuál es el rendimiento teórico esperado? Véase en la sección de resultados página 12.
5. Explique a que se le llama carbón anomérico con un esquema. Véase en la sección de
introducción página 2.
6. ¿Qué tipo de monosacáridos son la glucosa, la fructosa y la galactosa? Véase en la sección de
introducción página 1 y 2.
7. ¿Qué es un azúcar reductor? Véase en la sección de introducción página 6.
8. Describe las reacciones químicas de las pruebas de identificación realizadas en la práctica.
Véase en la sección de introducción en la página 7.
9. ¿Cuál es el principio químico de la determinación de azúcares de esta práctica? Véase en la
sección de introducción en la página 8.
10. Describe otros métodos para cuantificar monosacáridos, disacáridos y polisacáridos. Véase en
la sección de introducción en la página 8, 9,10 Y 11.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[2] John Mcmurrry, Química Orgánica, 8° ed., Edit. Cengage Learning Editores, S.A. de C.V., México
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[1] Morrison, R.T. y R.N. Boyd. (1998); Química orgánica. 5ª ed. Addison Wesley Longman de México
S.A. de C.V. México. Pág. 517 y 547

[3] Rein, P. 2007. Cane sugar engineering. Ed. Bartens, Berlin, Germany. White, B. E.; L. S.
Polanco and Ch. Verret. 2006. Utilization of NIR spectroscopy for factory control. En: Proc.

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Sugar Processing Research Conference, Frontiers in Sugar Processing, Aguas de Sao
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[5]http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organica/guia_7_c
arbohidratos.pdf
[6] Johnson, T. P. 2000. Cane sugar analysis by near infrared (NIR) to determine grower
payment. Int. Sug. J. 102 (1223): 603-609.

pág. 16