LABORATORIO 02

DETERMINACION DE BIOMASA: TURBIDIMETRIA.

I. OBJETIVOS

 Determinar la biomasa de una solución celular desconocida en peso seco y peso

húmedo.

II. FUNDAMENTO TEORICO

La turbidimetría es un método de masa celular indirecto se fundamenta en la medición de la

cantidad de luz transmitida o dispersada a través de cultivos bacterianos. Las dispersiones
bacterianas dispersan la luz como cualquier solución. La dispersión de la luz es proporcional a la
masa de cultivo. Son métodos utilizados frecuentemente en los laboratorios.

Existen dos métodos principales:

1. Espectrofotómetro: Mide la densidad óptica (D. O.), esto quiere decir la absorbancia(A).
Siempre se efectúa una curva de crecimiento para poder medir el valor de A con la masa
bacteriana.

IMPORTANTE: La cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamaño

de la partícula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la técnica aumenta pues
a longitudes de onda cortas.

2. Nefelómetro: Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor está situado

en ángulo recto respecto de la dirección de la luz incidente, y lo que se mide es pues, la
luz dispersada directamente por la preparación. Posee mayor sensibilidad que el
espectrofotómetro.

III. MATERIALES Y METODOS

A. MATERIALES
 Células en suspensión (muestra orginal)
 Pipetas Pasteur.
 Lamina cubre objeto.
 8 Tubos de ensayos.
 Gradilla.
 Agua destilada.
 Levadura L-51. (Saccharomyces cerevisiae).
 Mechero.
 Pipetas de 5 ml.
B. EQUIPOS
 Microscopio.
 Cámara de Neubauer.
  Espectrofotómetro

C. METODOLOGIA

MUESTRA ORIGINAL

Muestra
4/5 3/5 2/5 1/10 1/30 1/50 1/100
original

LECTURA DE ABSORBANCIA A 550 nm.

Se evaluara la absorbancia y se hallara recuento del número de células por mililitro para
cada dilución, posteriormente se hallará el porcentaje de error para el cálculo del error.

 CONSTRUCCIÓN DE CURVA DE CALIBRACIÓN

 Construccion de curva de calibracion
45
40 y = Ax
R² = 1
35
30

Absorvancia
A: factor de
25 conversion
20
15
10 construccionde curva de
calibracion
5
Linear (construccionde
0
curva de calibracion)
0 10 20 30 40 50
células/ml

Figura 1. Determinación del factor de corrección para cada caso.

Cálculo del error de los factores de conversión

%Error 
cel / mlCN  cel / mlF .C x100
cel / mlCN

Tabla 1. Determinación de concentración de células y absorbancia.

MUESTRA DILUCION CONCENTRACION ABSORBANCIA

(células/ml)
(nm)

M.O. 1

1 4/5

2 3/5

3 2/5

4 1/10

5 1/30

6 1/50

7 1/100