Protocolo para coloração das células por MTT

1. Ao final do tratamento de suas células, retirar o sobrenadante de todos os poços e

colocar 180 μl de meio RPMI incompleto. Adicionar 20 μl da solução de MTT 5 mg/ml
de MTT em todos os poços. Proteger da luz!!!!, Deixar por 4 horas incubando.

2. Retirar o sobrenadante e adicionar 200 μl da solução solubilizadora em cada poço.

Deixar no mínimo 4 horas incubando (placa envolta em papel alumínio para proteger os
cristais azuis).

3. Ler em espectrofotômetro de placa em λ 570 nm.

Preparo das soluções utilizadas no MTT:

Solução MTT – Preparar no fluxo e depois congelar ► pesar 50 mg do MTT, completar

com 10 ml de PBS 1X autoclavado. Aliquotar em 1 ml (solução 5mg/ml).

Solução solubilizadora (manter na geladeira)► dissolver 2 ml de triton 100X em 18 ml

de água (solução de triton 10%). Fazer solução álcool ácida misturando-se 20 ml de
álcool isopropílico e 162μl de ácido clorídrico 37%. Adicionar 20 ml desta solução
álcool ácida aos 20 ml da solução de triton 10%.

ATENÇÃO!!! Despreze o triton sem que a ponteira toque a água, uma vez
que o triton é muito viscoso e pode se gelificar dentro da ponteira. Após misturar
os reagentes, mixar bem ou colocar a 37ºC para diluir o triton.