Instituto politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Unidad Zacatenco

FISIOLOGÍA CELULAR

Practica No. 1: Aspectos generales del manejo de animales de laboratorio y vías de

administración.

Ciclo escolar: Enero 2018 – Junio 2018

Fecha: 26 de Febrero del 2018

Introducción:

En la actualidad el uso de animales en la investigación ha permitido que en el último siglo se consigan grandes
avances en la comprensión del funcionamiento en los seres vivos. Un animal de laboratorio es aquel que es
engendrado y producido en condiciones controladas, mantenido en un entorno controlado, que posee claros

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antecedentes genéticos y microbiológicos y que existe una comprobación sistemática de estos antecedentes
(Sosa,2009).

Desde su inicio como especie el hombre lleva usando animales para su propio beneficio como fuente de
alimentos, aprovechando su piel para hacer ropa y calzado etc. En los últimos siglos se ha añadido también el
empleo de animales como avance de la ciencia y desarrollo de nuevos tratamientos y técnicas biosanitarias que
mejoren la salud del hombre. Siendo necesarios para la práctica en aspectos médicos, farmacéuticos y
cosméticos. Los animales constituyen un modelo valido y vivo con el cual trabajar (Marín, 2013).

Cuando hablamos de uso de animales de laboratorio la ética es una de las más presentes, La primera ley que
protege a los animales contra crueldad fue decretada en el Reino Unido en 1876 y posteriormente los gobiernos
de otros países aprobaron leyes similares, en el caso del México la NOM-062-ZOO-1999 (s. De Aluja, 2002).

La unión europea por ser la primera involucrada en el trato de los animales de investigación contiene una
cantidad mayor de información al respecto, arrojando que en el 2011 el número total de animales utilizados
para experimentación u otros fines científicos se aproximaron a 11.5 millones de los cuales 80% son roedores y
conejos (ratones 61%), asegurando además que los animales solo eran ocupados en 10% de conjuntos en la
investigación biomédica (COMISIÓN EUROPEA, 2013).

Una vía de administración puede definirse como: el sitio donde se coloca un compuesto farmacológico. Las vías
dependen de las necesidades clínicas y de las circunstancias. Actualmente estas vías se han dividido en dos
clases mayores: enteral (referida al intestino) y parenteral (diferente al intestino). Cada una tiene diferentes
ventajas, mientras la vía enteral es: más cómoda, practica, segura, económica y fácil de extraer en caso de
intoxicación, las parenterales: permiten que la concentración del medicamento sea exacto, permiten infundir
grandes volúmenes de líquido, ofrecen control sobre la entrada del fármaco y permite que la totalidad del
fármaco sea absorbido (Mitchel, 2013).

La distribución de los animales permite tener una población más homogénea, es decir que entre los individuos
de un mismo grupo de investigación no predomine alguna característica y esto pueda afectar el curso de la
investigación. Existen dos métodos para la distribución de los animales. Uno de ellos es la Distribución Aleatoria
en el cual los individuos de la población son asignados al azar para cada tratamiento. Otro método utilizado es el
de la Culebra Japonesa, el cual consiste en ordenar de manera decreciente alguna característica de los animales
utilizados (Álvarez, 2007).

Objetivos:
 Manipular correctamente ratas de laboratorio.
 Distribuir aleatoriamente a las ratas utilizando un método adecuado.
 Determinar la importancia de la distribución aleatoria de los animales.

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  Aprender el marcado adecuado de animales para la realización de experimentos agudos.
 Aprender a administrar, a los animales más usados en el laboratorio, sustancias o fármacos por vías
enterales y parenterales.
 Calcular el volumen de las sustancias que se van a administrar en función de la dosis.
 Organizar los datos obtenidos para su reporte y análisis.
 Determinar el efecto que tiene el pentobarbital sódico en la temperatura y reflejos de una rata
adulta.
 Determinar cuál es la vía más eficiente para la administración de un anestésico en una rata adulta.

Fundamento.
Equipo y especie utilizado Porque
NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones técnicas para la
producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio.
Es función de la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y
Alimentación, fomentar la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio
mediante la aplicación de técnicas tendientes a garantizar la producción, proteger la
salud y favorecer el buen uso de los animales de laboratorio.
Colorantes o tinturas: Sólo se recomiendan en casos de identificaciones temporales,
en un tiempo no mayor de 20 días y usar colorantes que no sean tóxicos para los
animales.
Eutanasia
Describir los procedimientos empleados para inducir de manera humanitaria la
muerte de los animales (eutanasia) empleados en la investigación científica.
Todos los barbitúricos son recomendados para la eutanasia, ya que inducen
inconsciencia con sólo el dolor mínimo o transitorio de la venipuntura. Los más
NOM-062-ZOO-1999
deseables son los más potentes, de más larga acción, estables en solución y baratos,
tales como el pentobarbital sódico y el secobarbita
La velocidad de acción de los barbitúricos depende de la dosis, la concentración,
velocidad y vía de administración, las cuales deben combinarse para inducir la
eutanasia suavemente y con mínima incomodidad para el animal. La dosis de
pentobarbital sódico administrado por vía intravenosa es de 90 a 210 mg/kg, para la
mayoría de las especies; ratas y ratones requieren una dosis mayor (120 a 210
mg/kg). La dosis de secobarbital sódico es de 88 mg/kg.
ANIMALES METODOS RECOMENDADOS METODOS ACEPTADOS
CONDICIONALMENTE Roedores y otros animales pequeños Anestésicos inhalables,
CO2, Ar, N2 irradiación con microondas, barbitúricos N2, Ar, dislocación cervical,
decapitación

El ratón diverge del hombre aproximadamente 70-80 millones de años y, a su vez, la

rata (Rattusspp.) y el ratón (Mus spp.) divergen de un ancestro común entre 10 y 12
millones de años (Benavides, Guénet, 2003) siendo una especie filogenética con la
Rata cual trabajar proyectos de genética.

El ratón es probablemente el animal de laboratorio más usado se considera un

modelo animal excelente porque es pequeño, manejable, fácil de criar en cautiverio

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 debido a que puede llegar a tener hasta 6 camadas por año, puede tener entre 10 a
15 crías y su utilidad para investigación en área reproductiva. Además de pertenecer
a la misma clase animal que nosotros (mamífero) y ser de bajo costo económico.
Dependiendo de la especie con la que se trabaje se utilizan en diferentes pruebas
por ejemplo:
En Toxicología es utilizada la especie Rattusnorvegicusal no tener reflejos de vómito
es una especie que puede medir la toxicidad de un medicamento por vía enteral.
Un roedor muy usado en investigación, fuera del ya descripto, es el ratón ciervo
(Peromyscusmaniculatus), perteneciente a la familia Cricetidae. Este pequeño
roedor omnívoro de 20-25 gramos de peso se encuentra distribuido en toda América
del Norte y es muy utilizado en estudios genéticos y en virología.

Barbitúrico de acción corta. Efecto depresor no selectivo del SNC por disminución de
la excitabilidad pre y postsináptica. Como resultado: sedación, inducción del sueños
depresión respiratoria, actividad anticonvulsivante y reducción de la fase REM* del
sueño.
Pentobarbital sódico
Realización deun trabajo igualen 10 caninos de ambos sexos con Pentabarbitol
sódico 6.5% se vieron anestesiados 45 min con disminución de frecuencia cardiaca,
respiratoria, disminución considerable de temperatura (38.5-37) como consecuencia
de las disminuciones cardiaca y respiratoria y buena sedación, sus valores normales
regresaron a las 5 horas (Laforé, 2005)
La temperatura corporal permite evaluar la eficiencia de lo regulación térmica que
se presentan en un cuerpo. Esta permite el seguimiento de tratamientos, detección
de enfermedades y es afectada por:
 La exposición al calor y al frio
 Hormonas (en la ovulación o menstruación)=posible causa del uso de ratas
macho
 Alcohol, drogas o medicamentos
La medición de la temperatura se logra principalmente de 3 maneras oral, rectal y
axial. La medición de la temperatura corporal de estas tres formas es aceptable
Temperatura siempre y cando se tengan valores referencia de la población a la que se esté
determinando, aunque muchos científicos prefieren la rectal debido a que las otras
dos se ven afectadas por el entorno (superficial: axial, o en la frente) o por vicios
nocivos como mascar chicles de tabaco en el caso de la toma sublingual.

Es la administración de un fármaco por ingestión. Constituye la vía más común para

la autoadministración de medicamentos
Ventajas:
Vía Intragástrica
Es conveniente para el paciente.
Constituye una vía de administración fácil y cómoda
Es una vía muy segura y práctica

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 Se trata de un método económico y eficaz
Es factible extraer por medios físicos medicamentos administrados por esta vía,
particularmente lavado gástrico
Desventajas:
Ciertos medicamentos provocan irritación gástrica
Algunos medicamentos son destruidos por los jugos gástricos o inactivación a nivel
hepático antes de llegar a la circulación
Efectos lentos
No se pueden utilizar con pacientes con vómito o que están inconscientes

Es la introducción de soluciones en la cavidad peritoneal; se realiza para efectuar el

método de diálisis peritoneal (a causa de insuficiencia renal), eliminación de potasio
en exceso y en la intoxicación por barbitúricos o salicilatos.
Ventajas:
Vía intraperitoneal Equipo de bajo costo o no muy especializado
Desventajas
Necesitan de la presencia de un médico
Posibilidad de contraer hemorragias, peritonitis, infecciones y formación de
adherencias.
Es la introducción de un compuesto farmacológico por debajo de la piel en el tejido
subcutáneo, se realiza por lo general en la cara externa del brazo o muslo
Ventajas:
Permite la administración eficaz de cierto fármaco y de algunas hormonas
Vía subcutánea La absorción en general es rápida y eficiente debido al acceso directo a los vasos
sanguíneos del tejido subcutáneo
Desventajas
Puede causar reacciones adversas
No es aplicable con sustancias irritantes

Metodología

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 Marcar y pesar las Calcular, para cada para
Distribuir aleatoriamente ratas utilizando un cada rata el volumen de
18 ratas en 6 equipos ácido pícrico o un pentabgarbitol sódico
marcador indeleble que se requiere.

Medir la temperatura Medir la temperatura

colonal y la presencia o Determinar que via de colonal y determinar la
ausencia de reflejos administracion se ausencia o presencia de
flexor y de utilizara con cada rata los reflejos flexor y de
enderezamiento enderazamiento

Repetir el paso 6 cada 5

minutos durante 25
minutos

Resultados.
Cantidad de pentabarbitol sódico administrado.
Base de cálculo.
35 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑒𝑛𝑡𝑜𝑏𝑎𝑟𝑏𝑖𝑡𝑜𝑙 𝑠𝑜𝑑𝑖𝑐𝑜 𝑋 = 𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑚𝑔
=
1 𝑘𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑌 = 𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑟𝑎𝑡𝑎 𝑒𝑛 𝐾𝑔
63 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑒𝑛𝑡𝑎𝑏𝑎𝑟𝑏𝑖𝑡𝑜𝑙 𝑠𝑜𝑑𝑖𝑐𝑜 𝑋
=
1 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑎 𝑎𝑑𝑚𝑖𝑛𝑖𝑠𝑡𝑟𝑎𝑟

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 Grafica 1: Efecto del pentabarbitol sódico sobre la temperatura respecto al tiempo. +/-
ee, n=6
*diferencia significativa de medias descritas a continuación.

Medias de tiempo cuyo valor de significancia es igual o mayor a .05:

Vía IP Vía IG
0- 10 min 0-20 min El análisis de medias del tiempo respecto a la disminución de temperatura arroja
0-15 min 0-25 min que hay una mayor diferencia entre las medias de la vía IP. Es decir la diferencia
0-20 min 5-25 min de la temperatura con respecto al tiempo de la vía intra peritoneal es más
0-25 min drástica comparada con las otras dos vías. Esto comparado con la bibliografía de:
5-15 min “Evaluación de la anestesia inducida con el uso del Pentobarbital Sódico (Penta -
5-20 min Hypnol) en caninos” donde reporta una disminución de temperatura de 1.5°C
5-25 min causada por el pentabarbitol sódico por vía endovenosa, reafirma que la
10-25 min disminución de temperatura es obvia y al ser uno de los factores que se estudian
en este ensayo, solo estaba pendiente saber cual vía lo haría más rápidamente;
Vía SC esa misma seria la vía mas rápida por la cual actúa este barbitúrico.
0-20 min
5-25 min

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 Se observa que la vía que pierde más rápida
y drásticamente es la vía IP, resultado que
se esperaba al ser el pentabarbitol sódico
un anestésico, sedante e hipnótico, muestra
que la vía mas rápida para perder el reflejo
de enderezamiento con pentabarbitol
sódico es la vía IP

Grafica 2: efecto del pentabarbitol sódico sobre el

reflejo de “equilibrio”; % de pérdida n=6
Se observa que dos vías (IP, SC) llegan al
mismo punto de pérdida de reflejo flexor al
mismo tiempo, pero la vía IP llega más
rápidamente.

Grafica 3: efecto del pentabarbitol sódico sobre el

reflejo “flexor”; % de pérdida n=6

De forma general y reuniendo todos los resultados de las diferentes graficas podemos establecer que la via IP es
la via mas rápida para ver actuar los efectos del pentabarbitol sódico

Discuciones

Evidencia

Fisiología Celular
Bibliografia

Patricia Marín García, 2013 “SEBBM DIVULGACION: La ciencia al alcance de la mano”

http://www.sebbm.es/web/images/archivos/archivos_tinymce/diciembre2013_patriciamarin_2.pdf

COMISION EUROPEA, 2013 “Informe de la comisión al consejo y al parlamento europeo ”http://eur-

lex.europa.eu/legal-content/ES/TXT/PDF/?uri=CELEX:52013DC0859&from=ES

Aline S. de Aluja, 2002 “Animales de laboratorio y la Norma Oficial

Mexicana”http://medicina.iztacala.unam.mx/pdfs2015/GMM-etica-anim-lab.pdf

Pierre MitchelAristilChéry, 2013 “Manual de Farmacologia básica y clinica” 6ª Edicion. MC Graw Hill, Mexico.
D,Fpag 24-27

Álvarez R. 2007. Estadísticas aplicadas a las Ciencias de la Salud. Ediciones Díaz Santos. España. 869-871

Laforé ,2005, “Evaluacion de la anestesia inducida con el uso del pentabarbital sódico en caninos”., Lima
http://www.vetermex.com/Pdfs/Trabajos_investigacion/Penta-Hypnol/trabajo_campo_penta_hypnol.pdf

Benavides, Guénet, 2003, Universidad de alcalde Henares, “Manual de genética de roedores de laboratorio:
principios básicos y aplicaciones” pag 85-90

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