Evidencia del aprendizaje; Cinética enzimática

5 de agosto de 2016

Evidencia del aprendizaje; Cinética

enzimática

Ingeniería de Biorreactores I

05/08/2016
Docente: Dra. Lilia Sánchez Minutti
Alumno: María Esther Michel Hagelsieb
Evidencia del aprendizaje; Cinética enzimática

Cinética enzimática

Lee documento llamado “estudio cinético de la actividad proteolítica de la enzima ficina”

localizado en la pestaña de material de apoyo de la unidad.

Localiza la tabla 1 del documento

Con base en esta tabla, calcula la Km y Vmax de la cinética enzimática de la ficina

utilizando la ecuación de Michaelis-Mentel y Lineaweaver-Burk

Tabla 1. Velocidad inicial para distintas concentraciones de BAPNA

(BAPNA) M (BAPNA)mM Vo Ab/s 1/(BAPNA)mM 1/Vo Ab/s
0.0006 0.600 0.00118 1.66666667 847.458
0.0011 1.100 0.00220 0.90909091 454.545
0.0017 1.700 0.00316 0.58823529 316.456
0.0023 2.300 0.00405 0.43478261 246.914
0.0029 2.900 0.00481 0.34482759 207.900
0.0038 3.800 0.00578 0.26315789 173.010

En este ejercicio grafique los valores de la tabla 1 para la ecuación de Michelis Mentel. La
dependencia de Vo con la concentración de BAPNA sigue la cinética propuesta por
Michaelis-Menten, la gráfica de Vo en función de la concentración de BAPNA es una
hipérbola.

Michaelis-Mentel
0.007
0.006
Vo (As/min)

0.005
0.004
0.003
0.002
0.001
0
0.0000 0.0010 0.0020 0.0030 0.0040
[S] M

Sin embargo en este caso la gráfica de la velocidad de la reacción, v0, contra la

concentración de substrato, [S], no es posible determinar la condición en que se ha
llegado a la velocidad máxima, Vmax, debido al incremento de la pendiente en la hipérbola
a concentraciones de substrato elevadas. Ya que la velocidad máxima (Vmax) se obtiene
cuando el enzima está saturada por el S.

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Vmax = k3 [ET]

Aun así, si se grafica una doble recíproca, es decir, el inverso de la velocidad (1/v0) contra
el inverso de la concentración de substrato (1/[S]), se obtiene una línea recta. El gráfico
de Lineweaver-Burke, también se denomina de “dobles recíprocas” y se utiliza para
calcular la Km y la Vmax

La ecuación que describe a la gráfica de Lineweaver-Burke es:

1 Km. 1 1
= +
v0 Vmax[S] Vmax

Lineweaver-Burke
900.00
800.00 y = 0.48x + 37.828
700.00 R² = 0.9981
600.00
Vo (As/min)

500.00
400.00
300.00
200.00
100.00
0.00
0.000 500.000 1000.000 1500.000 2000.000
[S] M

La ecuación del grafico es una recta que responde a la ecuación y= m. x + b

La pendiente es KM/Vmax

La ordenada en el origen es 1/ Vmax

Entonces en este ejercicio

Vmax 1/37.828 = 0.026 M /s

KM = (0.026)(0.48) =0.01248

Recuerda que las unidades de la velocidad son nM s-1

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a. Calcula la Km Vmax de una enzima que arrojo los siguientes datos, utilizando la
ecuación de Michaelis-Mentel y Lineaweaver-Burk

So Vo 1/ So 1/ Vo
(mM) (As/min) (mM) (As/min)
0 0 0 0
0.50 0.075 2.00 13.333
0.75 0.090 1.333 11.111
2.00 0.152 0.500 6.579
4.00 0.196 0.250 5.102
6.00 0.210 0.167 4.762
8.20 0.214 0.122 4.673
10.00 0.230 0.100 4.348

Nota: Corregí el primer punto decía 0.05 y es 0.5 esto lo deduje ya que si elimino el primer punto se
obtiene una recta con un coeficiente de correlación R mayor 0.99 y con la ecuación de la recta calcule y
teórica y la Vo corresponde a una concentración 0.5 mM

Se grafica una doble recíproca, es decir, el inverso de la velocidad (1/v0) contra el inverso
de la concentración de substrato (1/[S]), se obtiene una línea recta. El gráfico de
Lineweaver-Burke,

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La ecuación del grafico es una recta que responde a la ecuación y= m. x + b

y = 4.8572x+4.0627

La pendiente es KM/Vmax

La ordenada en el origen es 1/ Vmax

Entonces en este ejercicio

Vmax 1 / 4.627 = 0.216 mM /min

KM = (0.21)(4.8572) =1.05 mM

b. Calcula la Km y Vmax de una enzima que arrojo los siguientes datos, utilizando la
ecuación de Michaelis-Mentel y Lineaweaver-Burk

Vo 1/ Vo
So (mM) 1/So (mM)
( As/min) ( As/min)
5.00 22 0.200000 0.045455
10.00 39 0.100000 0.025641
20.00 65 0.050000 0.015385
50.00 102 0.020000 0.009804
100.00 120 0.010000 0.008333
200.00 135 0.005000 0.007407

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Se grafica una doble recíproca, es decir, el inverso de la velocidad (1/v0) contra el inverso
de la concentración de substrato (1/[S]), se obtiene una línea recta. El gráfico de
Lineweaver-Burke,

Lineweaver-Burke
0.050000
0.045000 y = 0.1961x + 0.0061
0.040000 R² = 0.9995
0.035000
Vo (As/min)

0.030000
0.025000
0.020000
0.015000
0.010000
0.005000
0.000000
0.000000 0.050000 0.100000 0.150000 0.200000 0.250000
[S] mM

La ecuación del grafico es una recta que responde a la ecuación y= m. x + b

y = 0.1961x+0.0061

La pendiente es KM/Vmax

La ordenada en el origen es 1/ Vmax

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Entonces en este ejercicio

Vmax 1 / 0.0061 = 163.93 mM /min

KM = (163.93)(0.1961) = 32.14 mM

c. Una reacción catalizada por una enzima tiene una Km=1.3 mM y una Vmax= 4.9
nM s-1 ¿Cuál es la velocidad de la reacción cuando la concentración del sustrato
es
a. 0.35mM, = 350 000nM = 3.5 x105 nM
b. 2.0 mM = 2 000 000nM = 2.0 x106nM
c. 30 mM = 30 000 000 nM = 3.0 x107nM

[𝑉𝑚𝑎𝑥 ][𝑆]
𝑉0 =
[𝐾𝑀 ] + [𝑆]

a.
[4.9 𝑛𝑀.𝑠][3.5 x 105 𝑛𝑀] 1.715 x 106
𝑉0 = [1.3 𝑥 106 𝑛𝑀]+[3.5 x 105 𝑛𝑀]
= = 1.040 nM.s-1
1.65 x 106

[4.9 𝑛𝑀.𝑠][2.0 x 106 𝑛𝑀] 9.8 x 106

b. 𝑉0 = [1.3 𝑥 106 𝑛𝑀]+[2.0 x 106 𝑛𝑀]
= 2.6 x 106 = 3.769 nM.s-1

[4.9 𝑛𝑀.𝑠][3.0 x 107 𝑛𝑀] 1.47 x 108

c. 𝑉0 = [1.3 𝑥 106 𝑛𝑀]+[3.0 x 107 𝑛𝑀]
= 3.13 x 107
= 4.696 nM.s-1

Bibliografía

Wiseman, A. C., Wiseman, E., Padilla, P., Virginia Salamanca Gómez, F., FERREIRO, A.,
ARRIERO, E. G. D. B., ... & King, J. (1991). Manual de Biotecnología de los Enzimas (No.
577.2. 08). Acribia,.

Problemas relacionados con la ecuación de Michaelis-Menten, y el cálculo de las

constantes cinéticas km y Vmax
http://www2.uah.es/sancho/farmacia/problemas%20cinetica%20enzimatica%2010-
11%20con%20respuestas.pdf

Ehu. (s.f.). Motivos que hacen de km un parámetro cinético importante. Recuperado de:
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#km

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Lecc12, Cinética Enzimática recuperado de

http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/201103/leccin_12_cintica_enzimtica.html

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