Ruiz Alonso Marco Antonio. Grupo 3IM1. Sección: 1 Fecha de entrega: miércoles 29 de agosto de 2018.

Solano Valeriano Deniss.

REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS. Reacción de la ninhidrina: Es una reacción que se
caracteriza por la detección de grupos amino libres en pH
Introducción: alcalino es decir; reacciona con todos los aminoácidos con
Las proteínas son bio-macromoleculas, de un alto peso carbono alfa cuyo pH es alcalino, dando una coloración que
molecular constituidas por aminoácidos unidos entre sí por va de azul a violeta, este producto colorido (llamado azul de
enlaces peptídicos. Por su compleja estructura para la Ruhemann).Esta prueba es positiva tanto para proteínas como
identificación y cuantificación de aminoácidos así como para aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la
proteínas, tienen como fundamento las características prueba de Biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no
químicas que les confieren sus grupos R de reaccionar o no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres.
con determinados reactivos por lo que reflejan las Reacción de Hopkins-Cole: Es específica del grupo indol
propiedades químicas de los residuos de aminoácidos característico del Triptófano. El anillo del indol se hace
mediante reacciones coloridas que dependen de la existencia reaccionar con ácido Glioxálico en presencia de ácido
de un aminoácido en específico de ellas. Sulfúrico concentrado para formar un compuesto violeta que
Objetivos: se forma en la interface entre la solución de proteína y el ácido
sulfúrico. La reacción de Hopkins Cole es positiva sólo para
 Identificar la presencia de aminoácidos con grupo R las proteínas que contienen Triptófano.
específico que constituyen a una proteína a través
de reacciones coloridas. Reacción de Millón: Es específica para el grupo fenólico por
lo tanto, la dan positiva todas las sustancias que poseen esta
Resultados: función, como la Tirosina y todas las proteínas que contengan
Tirosina. El primer paso de la reacción de Millón consiste en
Reacción Reacción de la Reacción de la nitración del anillo fenólico de la Tirosina, por el ácido
para grupo – Ninhidrina. Hopkins- Nítrico del reactivo. La Tirosina nitrada forma complejos con
SH. Cole. los iones Mercurosos y Mercúricos del reactivo produciendo
Gelatina. - + - un precipitado rojo o una solución roja, ambos resultados
Peptona. + + + positivos. Cualquier sustancia con un grupo fenólico dará
Albumina. + + + positiva la reacción de Millón y puede interferir con la
Aspartame. No utilizo. No utilizo. No utilizo. detección de Tirosina.
Tirosina. No utilizo. + No utilizo. Reacción Xantoprotéica: Algunos aminoácidos como
Triptófano. No utilizo. + + Fenilalanina, Tirosina y Triptófano, tienen anillo aromáticos
Fenilalanina. No utilizo. + - derivados de benceno y por ello tiene las propiedades
Cisteína. + No utilizo. No utilizo. químicas del benceno. Una de estas propiedades es la
Agua. - - - reacción de nitración del anillo bencénico con ácido Nítrico
concentrado. Los anillos Benceno de Tirosina y Triptófano
Reacción de Reacción Reacción del
están activados debido a un sustituyente en el grupo
Millon. Xantoproteica. Biuret.
bencénico y reaccionan fácilmente, mientras que el benceno
Gelatina. + + +
de la Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y no
Peptona. + + + reacciona.
Albumina. + + +
Aspartame. No utilizo. No utilizo. - Reacción del Biuret: Es una reacción en general para
Tirosina. + + - proteínas con más de dos enlaces peptídicos y tres o más
constituyentes de aminoácidos. El reactivo de Biuret contiene
Triptófano. No utilizo. + -
CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH). La reacción
Fenilalanina. - - - se basa en la formación de un compuesto de color violeta,
Cisteína. No utilizo. No utilizo. No utilizo. debido a la formación de un complejo de coordinación entre
Agua. - - - los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del
nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.
Significado de los signos en cada una de las pruebas.
Interpretación y conclusión de cada una de las reacciones.
Prueba positiva (+). Prueba negativa (-).
Reacción del plomo para la cisteína: Es una prueba
específica para identificación de aminoácidos con grupos
Fundamentos de las Reacciones: sulfhídrico, por lo cual la peptona, albumina y la cisteína,
experimentalmente nos resultaron positivas es decir en su
Reacción de plomo para la cisteína: Cuando los
cadena de las moléculas se encuentra un tiol por lo tanto
aminoácidos y las proteínas que contienen grupos
concluimos que habrá una precipitación en color negro en
sulfhídricos y se calientan en medio alcalino, el azufre
proteínas que en su cadena tenga un grupo –SH.
presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede
detectarse por la formación de un precipitado color negro de Reacción de la Ninhidrina: Es una prueba general para
sulfuro de plomo por adición de acetato de plomo. aminoácidos libres, por lo cual todas las soluciones problema
dieron un resultado positivo a excepción del agua, el color

Prácticas de Laboratorio de Bioquímica 1

Ruiz Alonso Marco Antonio. Grupo 3IM1. Sección: 1 Fecha de entrega: miércoles 29 de agosto de 2018.
Solano Valeriano Deniss.
que denota un resultado positivo es el violeta, en el caso de la
gelatina, el color violáceo fue muy tenue, lo que quiere decir
que contiene un nivel bajo de proteínas y concluimos que la a
gelatina, peptona, albumina, tirosina, triptófano y
fenilalanina, contienen en su estructura grupos amino libres.
Reacción de Hopkins Cole: Es específica para identificar
grupos indol, al ser el triptófano el único aminoácido con este
grupo, se trata una prueba específica para este, por lo cual
concluimos que el aminoácido triptófano resulta una prueba
positiva, así como en la estructura de la albumina y peptona
se encuentra el triptófano dando una prueba positiva.
Reacción de Millón: Es específica para la detección de
grupos fenólicos en un aminoácido, la prueba fue positiva
para aquellas soluciones que dieran un color rojo. En el caso
de la albumina, se obtuvo una mezcla de colores, entre blanco
y rojo, mientras que la fenilalanina fue completamente un
precipitado color blanco. Por lo cual concluimos que la
gelatina, albumina y peptona, al dar positivo a la prueba nos
indicaron la presencia de grupos fenólicos en dichas
proteínas.
Reacción Xantoproteica: Es una reacción especifica para la
identificación de grupos aromáticos activados. Los anillos
aromáticos presentes reaccionaron con ácido nítrico
concentrado formando nitro-derivados de color amarillo, por
lo cual concluimos que en los aminoácidos, dio positivo para
tirosina, triptófano así mismo nos indicó la presencia de estos
aminoácidos en peptona, albumina y gelatina, este
comportamiento se debe a la presencia de anillos bencénicos
en la estructura de las anteriores proteínas y aminoácidos.
Reacción de Biuret: Es una reacción general para
identificación de enlaces di-peptídicos en adelante. En esta
prueba de identificación, las soluciones de aspartame,
tirosina, triptófano, fenilalanina y agua, resultaron ser
negativas, en varias de ellas se obtuvo una coloración distinta
al violeta, que era el color esperado en caso de ser una prueba
positiva por lo cual concluimos que la gelatina, albumina y
peptona contienen enlaces di-peptídicos al obtener un
resultado positivo con la coloración adecuada (Violeta) en la
prueba de Biuret.
Discusión:
Existe una variación de resultados en algunas de las pruebas,
por lo cual, el tubo de ensaye que contenía agua destilada fue
usado como testigo para comparar con las soluciones que
tenían una coloración muy tenue, ya que el agua en todas las
pruebas resultaría negativa al no contener aminoácidos y
proteínas. En el caso de la cisteína, los grupos tiol de dos
moléculas de cisteína se han oxidado para formar un grupo
di-sulfuro de modo que se establece un enlace covalente
transversal entre ellas. La reacción se lleva a cabo en un
medio alcalino, es decir en presencia de NaOH, el cual
permite la separación del azufre de la estructura del
aminoácido. Al añadir el acetato de plomo, el azufre se
combina con el plomo para producir un precipitado de color
negro que corresponde a sulfuro de plomo. En el caso de que
el aminoácido reacciona con la ninhidrina, el cual es un
agente oxidante fuerte que efectúa la descarboxilación
oxidativa de los aminoácidos, y forman dióxido de carbono,
Prácticas de Laboratorio de Bioquímica
amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de carbono
menos que el compuesto original. El amoníaco y la molécula
de ninhidrina desprotonada con una segunda molécula de
ninhidrina da lugar a la formación de un pigmento color azul
o violeta, la variación del color azul o violeta dependerá de la
concentración del aminoácido por lo cual al comparar con el
testigo todas la reacciones dieron positiva a excepción del
agua que fue el testigo. En la reacción de Hopkins-Cole el
aminoácido Triptófano nos resulta una prueba positiva al
tener al grupo indol es grupo R, así como la albumina y
peptona en su cadena presentan a algún grupo R con
Triptófano contenido en él, por lo cual los demás compuestos
al no tener el aminoácido mencionado anteriormente darán
negativa a la prueba. En la reacción de Millón se observó que
en el tubo de albumina la coloración rojiza era parcial, aunque
es indudable la presencia de grupos fenólicos en ella. En esa
misma prueba se observó que la fenilalanina formo un
precipitado totalmente blanco, teóricamente se sabe que en
ese caso es una prueba negativa ya que la proteína no tenía
un pH acido adecuado para poder reaccionar y formar la sal
mercúrica que daría el color rojo. La reacción Xantoproteica
se obtuvo en todas las reacciones a excepción de la
Fenilalanina, este comportamiento se debe a la presencia de
anillos bencénicos activados en la estructura de las anteriores
proteínas y aminoácidos. Los anillos aromáticos presentes
reaccionaron con ácido nítrico concentrado formando nitro-
derivado precipitando de color amarillo. Por último la
reacción de Biuret reacciono en la albumina, peptona y
gelatina debido a que el NaOH se constituye en el medio que
permite la formación de complejos de coordinación Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma
parte de los enlaces peptídicos. Por tanto, el reactivo de Biuret
cambió a color violeta en presencia de las anteriores
proteínas.
Conclusiones:
 Es posible diferenciar las proteínas mediante
reacciones específicas, debido a que cada una
contiene un grupo R en particular.
 Las pruebas de identificación, nos proporcionaran
la forma específica de determinados aminoácidos
dentro de una proteína, y así conocer de forma
empírica su estructura.
Bibliografía Consultada:
Lehninger, Principios de Bioquímica, David. L. Nelson,
Michael. M.Cox Ed. Omega. Sexta Edición, pag 75-84, 96-
115.
Fundamentos de Bioquímica, Donald Voet, Judith G. Voet,
Charlotte W. Pratt; Ed. Médica Panamericana, pag 216.
Horton, Principios de Bioquímica, Laurence. A. Morán, J.
David Rawn, Ed. Pearson. Cuarta Edicion, pag 52-69,72-80.
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