Biología

 Celular  y  Molecular  
Departamento  de  Bioquímica  

Enzimas!
 Enzimas: Catalizadores biológicos!

•  La mayor parte de las reacciones

biológicas no ocurrirían a tiempos
compatibles con la vida, a no ser por la
existencia de los catalizadores…!
!
¿Qué son las siguientes sustancias?!

1- Ácido acetilsalicílico (Aspirina)!

!
2- Penicilina (Ampicilina)!
!
3- Oseltamivir (Tamiflu)!
!
4- Enalapril!
1- Ácido acetilsalicílico (Aspirina): inhibidor
de la enzima ciclooxigenasa que media la producción
de prostaglandinas.

2- Penicilina (Ampicilina): inhibidor de una

enzima transpeptidasa bacteriana que participa en
la síntesis de la pared celular de las bacterias
formada por peptidoglicanos.

3- Oseltamivir (Tamiflu): inhibidor de la enzima

neuraminidasa del virus de la influenza, que participa
en el corte de residuos de ácido síalico de la célula
infectada para poder despegarse e infectar otra célula.

4- Enalapril: inhibidor de la enzima convertidora de

angiotensina que regula la presión arterial.
 Enzimas!

A.!Propiedades generales de las enzimas!

!
B. Velocidad de Reacción Química y Efecto de los
Catalizadores!
!
C.!Principios fundamentales de su acción catalítica!
!
D.!Introducción a la cinética enzimática!
!
E.!Enzimas reguladoras!
 Enzimas!

A.!Propiedades generales de las enzimas!

!
B. Velocidad de Reacción Química y Efecto de los
Catalizadores!
!
C.!Principios fundamentales de su acción catalítica!
!
D.!Introducción a la cinética enzimática!
!
E.!Enzimas reguladoras!
A. !Propiedades generales de las enzimas (I)!

1.  Son los catalizadores de las reacciones

químicas de los sistemas biológicos!

2.  Tienen gran poder catalítico!

3.  Poseen un elevado grado de especificidad

de sustrato!

4.  Funcionan en soluciones acuosas en

condiciones suaves de pH y temperatura!

5.  Su actividad puede ser regulada!

A. !Propiedades generales de las enzimas (II)!

6. !La mayoría de las enzimas son proteínas:!

•  La función depende de la integridad de la

conformación proteica nativa!
•  Existen enzimas que son proteínas simples
y otras que requieren componentes
químicos adicionales:!
- !Cofactores: !- iones inorgánicos!
! ! ! !- complejos orgánicos!
! ! ! ! !coenzimas!
! ! ! ! !grupos prostéticos!

•  Holoenzima / Apoenzima!
Las enzimas se clasifican según la
reacción catalizada:!
 Enzimas!

A.!Propiedades generales de las enzimas!

!
B. Velocidad de Reacción Química y Efecto de los
Catalizadores!
!
C.!Principios fundamentales de su acción catalítica!
!
D.!Introducción a la cinética enzimática!
!
E.!Enzimas reguladoras!
 Orden y Velocidad de Reacción!
A B!

v = mol.L-1.s-1 !
d [B] - d [A] !
v=! =! =! k[A]! k = s-1 constante de vel. !
dt! dt!
[A]! [A]! - kt!
ln! =!- kt à! = e!
[A0]! [A0]!

•  Vel. es proporcional a la [A]!

•  Vel. de la reacción disminuye a medida que disminuye la [A]!
•  [A] disminuye de manera exponencial con el tiempo!
 Constante de Equilibrio!
k 1!
A B!
k -1!

- d [A]! k1 y k-1= s-1

-v = ! =! -k1[A] + k-1[B]
dt! constantes de vel. !
0 = -k1[A]eq + k-1[B]eq à [B]eq/[A]eq = k1/k-1 = Keq.

•  Como A se consume en la reacción hacia la derecha y se

forma en la reacción hacia la izquierda à V =!
•  Este tipo de reacción ocurren hasta alcanzar el equilibrio
quimico, en el cual la vel. de ambas reacciones es igual y la
velocidad global es cero à !
•  La Keq. es la relación entre k1 y k-1 y que relación de
concentración de reactivos y productos existen una vez
alcanzado el equilibrio !
 Definición de constante de equilibrio y velocidad!

A P!

Constante de [P]eq!
Keq. =!
Equilibrio! [A]eq!

d [P] - d[A] !
v=! =! =! k[A]!
dt! dt!

Velocidad: concentración/ tiempo (µM/min)!

k (de primer orden): tiempo -1 (min-1)!
Estados de transición y Velocidad de Reacción!

A P!

GA!
∆G!
GP!

•  Que determina la vel. de una reacción química? Que hace

que una k de vel. sea grande o chica?!

•  Existen múltiples evidencias que muestran que para reaccionar

las moléculas deben ser “activadas” de alguna manera à
Barrera o Energía de activación/Estado de transición!
Estados de transición y Velocidad de Reacción!
•  Si asumimos que existe un equilibrio entre las moléculas
de A que se encuentran en el estado basal y el estado
activado à la fracción activada se puede calcular: !

[A]# = [A]°.e-∆G#/RT  

•  Como  únicamente  las  moléculas  que  alcanzan  el  estado  

de  transición  pueden  reaccionar,  la  constante  de  reacción  
es  proporcional  a  la  [A]#  à!
 Las velocidades de reacción y los equilibrios
tienen definiciones termodinámicas precisas!

•  Equilibrio de reacción depende ΔG’o!

•  Velocidad de reacción depende de ΔG‡!

!S ! !P!

[P]!
Keq’ = ! ΔG’o = - RT ln Keq’!
[S]!

KT!
V = k [S]! k=! e - ΔG‡ / RT!
h!
K = constante de Boltzmann!
h = constante de Planck!
 Como actúa un catalizador?!
ΔG‡ = ΔH‡ - T ΔS‡!

•  1. Muchas veces las moléculas para poder reaccionar

tienen que adoptar estados conformacionales “tensos”
que demandan energía… los catalizadores pueden
reducir esta esta energía uniéndose a las moléculas de
reactivos en una conformación similar a la del estado de
transición!
•  2. Para que una reacción ocurra se requiere que los
reactivos adopten una orientación determinada… como
una mariz externa, los catalizadores pueden forzar a las
moléculas a orientarse para favorecer la reacción!
Como actúa un
catalizador?!
ΔG‡ = ΔH‡ - T ΔS‡!
 Enzimas!

A.!Propiedades generales de las enzimas!

!
B. Velocidad de Reacción Química y Efecto de los
Catalizadores!
!
C.!Principios fundamentales de su acción catalítica!
!
D.!Introducción a la cinética enzimática!
!
E.!Enzimas reguladoras!
B. !Principios fundamentales de la acción
catalítica de las enzimas!
¿ cómo funcionan las enzimas ?!

•  En condiciones fisiológicas las reacciones sin

catalizar tienden a ser lentas (estabilidad de
biomoléculas)!

•  Muchas reacciones bioquímicas suponen

situaciones poco probables!

•  Una enzima soluciona estos problemas

proporcionando un ambiente tridimensional
favorable a la reacción (sitio activo)!
El  rasgo  dis:n:vo  de  una  reacción  
enzimá:ca  es  que  :ene  lugar  dentro  de  
un  pequeño  lugar  de  la  enzima:    
el  si:o  ac:vo  
 
La  molécula  fijada  en  el  si:o  ac:vo,  sobre  la  
que  actúa  la  enzima,  se  denomina  sustrato  
 Las enzimas alteran las velocidades de reacción
pero no los equilibrios!

(A) S ! !P!

(B) E + S ! ES ! ! EP ! ! E + P!

(A) ! (B) !
Como actúan las enzimas como catalizadores?!
•  Modelo  llave-­‐cerradura  (E.  Fischer,  1894):  

•  Para  que  una  enzima  catalice  una  reacción  su  siPo  acPvo  ha  de  
ser  complementario  al  estado  de  transición  de  la    reacción  (L.    
Pauling,  1946).  
•  Modelo  de  ajuste  inducido  (D.  Koshland  1958):  
 
 
 
Las interacciones débiles entre enzima y sustrato
son óptimas en el estado de transición!
En el estado de transición las interacciones entre la enzima y
el sustrato son óptimas!
 La energía de fijación entre enzima y sustrato
proporciona especificidad de reacción y catálisis!
Grupos catalíticos específicos contribuyen a la
catálisis!
 Enzimas!

A.!Propiedades generales de las enzimas!

!
B. Velocidad de Reacción Química y Efecto de los
Catalizadores!
!
C.!Principios fundamentales de su acción catalítica!
!
D.!Introducción a la cinética enzimática!
!
E.!Enzimas reguladoras!
 El modelo de Michaelis-Menten (1913)!

Leonor Michaelis! Maud Menten!

E+S ! ES ! ! E + P!
•  Postularon que la enzima se combina en primer
lugar con el sustrato, de forma reversible!
•  El complejo se descompone en una reacción más
lenta, dando lugar al producto y enzima libre!
 Cinética Enzimática: estado estacionario!

vo = k2 [ES]!
Cinética del estado estacionario!
 Formación de ES: k1[E][S]!
Descomposición de ES: k-1 [ES] + k2 [ES]!
! !k1[E][S] = k-1 [ES] + k2 [ES]!
! !k1[E][S] = (k-1 + k2 ).[ES]!

! !k-1+ k2 = [E][S]!
! k1 [ES]!
ET = E + ES!
E = ET - ES!
 Relación entre concentración de sustrato y
velocidad de reacción enzimática!

k1[EL][S] = k-1 [ES] + k2 [ES]!

k1[ET - ES][S] = k-1 [ES] + k2 [ES]!

k1[ET][S] – k1[ES][S] = k-1 [ES] + k2 [ES]!

k1[ET] [S] = k-1 [ES] + k2 [ES] + k1[ES][S] !

k1[ET] [S] = [ES] (k-1 + k2 + k1[S]) !

Dividimos por k1:! [ET] [S] = [ES] ((k-1 + k2 ) + [S])!

k1!
Constante de Michaelis:!

k-1+ k2 = [ET - ES][S]!

KM =!
k1 [ES]!

Constante de disociación del complejo ES:!

k-1 = [E][S]!
Ks =!
k1 [ES]!
ET = E + ES!
E = ET - ES!
 [ET] [S] = [ES] (KM +[S])!

[ET] [S]!
[ES] =!
(KM +[S])!

ü  como vo = k2 [ES]!

Cuando toda la enzima se
encuentra formando complejo

k2 [ET] [S]!
ES: !k2 [ET] = vmax!
vo =!
KM + [S]! vmax [S]!
Ecuación de vo =!
Michaelis-Menten! KM + [S]!
Variación de la velocidad de reacción con la
concentración de sustrato de acuerdo a la
ecuación de Michaelis y Menten!
La concentración de sustrato afecta la velocidad
de reacción catalizada por enzimas!
La concentración de sustrato afecta la velocidad
de reacción catalizada por enzimas!
Km y Vmax son característicos para cada pareja
enzima-sustrato!
Km y Vmax son característicos para cada pareja
enzima-sustrato!
 Diferencias entre KM y Ks !

Constante de Michaelis:!

k-1+ k2 = [ET - ES][S]!

KM =!
k1 [ES]!

Constante de disociación del complejo ES:!

k-1 = [E][S]!
Ks =! ET = E + ES!
k1 [ES]!
E = ET - ES!
Si k2 es la constante del paso limitante de
reacción entonces: !
k2 = kcat à ! vmax = kcat [ET]!
kte catalítica es una medida directa de la
producción catalítica de producto! Cuanto más
grande kcat à más rápidos son los eventos
catalíticos en el sitio activo. !
Kcat = s-1 à1/kcat = s à el tiempo necesario para
que una mólecula de enzima transforme un
sustrato en producto = tiempo que dura un ciclo
catalítico.!
Kcat nos dice cuantas moléculas de sustrato la
enzima saturada transforma en un segundo = Nro
de recambio!
 Kcat y KM !

kcat
Cuando [S] << kM à [E]T ∼ [E]L à! v = [ E ][S ]
Km
 El significado de Km y Vmax y la eficiencia
catalítica!

De este modo la relación kcat/Km se aproxima a

una constante de velocidad de segundo orden
para la reacción de S y E, sería k1.!
d[ES] = k1 [E][S]! v = kcat [E] [S]!
dt!
KM!
Enzima Km (M) kcat (s-1) kcat/Km (M-1s-1)
Pepsina 3x10-4 0.5 1.7x103
Ribonucleasa 7.9x10-3 790 1.5x107
Fumarasa 5x10-6 800 1.6x108
 Gráfico de dobles recíprocos!

vmax [S]!
vo =!
KM + [S]!

1 KM 1 1!
=! +!
vo Vmax [S] Vmax!

y= ax + b!

Ecuación de Lineweaver -Burk!

 Inhibición competitiva!

KM aparente es mayor
que KM real!
Vmáx no se modifica!
 Inhibición mixta (no-competitiva)!

KM aparente es igual que

KM real!
Vmáx disminuye!
 Inhibición incompetitiva!

KM /Vmáx se mantiene
constante!
Efecto del pH sobre la actividad enzimática!
Muchas enzimas catalizan reacciones con dos o
más sustratos!
 Enzimas!

A.!Propiedades generales de las enzimas!

!
B. Velocidad de Reacción Química y Efecto de los
Catalizadores!
!
C.!Principios fundamentales de su acción catalítica!
!
D.!Introducción a la cinética enzimática!
!
E.!Enzimas reguladoras!
 Enzimas reguladoras!

1.  Enzimas alostéricas!

•  Son reguladas por unión no-covalente de
moduladores!
•  Constituyen excepciones a muchas reglas
generales!
-  efecto homotrópico (positivo o negativo)!
-  efecto heterotrópico (positivo o negativo)!
-  Hay dos modelos que explican el
comportamiento cinético de las enzimas
alostéricas!
-  modelo simétrico (Monod)!
-  Modelo secuencial (Koshland)!
 Enzimas reguladoras!

2.  Modulación covalente reversible!

•  Fosforilación!

•  Adenililación!

•  Uridililación!

•  ADP-ribosilación!

•  Metilación!
Fosforilación / defosforilación!
Activación de zimógenos!