BITACORA DE LABORATORIO

 Día 1: Marzo 28

o Montaje equipo Soxhlet con mecheros, 3 repeticiones empleando como

solvente agua
o Se pesaron 10 g de café por cada repetición
o La cantidad de agua utilizada fueron 400 mL por cada repetición
o Hora de inicio de la extracción: 11:40 am
o Duración del proceso: 30 horas

 Día 2: Marzo 29

o Se generó cierto olor característico a gas en las muestras, por lo que se midió
el nivel de metano C3H8 y de hidrogeno H2 con el electrodo Festo 31b-EX y
se encontró en cada muestra los siguientes resultados:

Tabla 1. Nivel de metano en las muestras. Fuente: Aponte, C., Palomino, M. (2017)
Universidad de América
MUESTRA NIVEL METANO (ppm)
1 37
2 60
3 70

 Día 3: Marzo 31

o Se realizaron pruebas de metano para el café verde, en un Erlenmeyer de 250

mL se agregó agua con 10 Kg de café, con el electrodo festo se midió el nivel
de metano una vez que este hirvió.

 Día 4: Abril 3

o Inicio de la pre-experimentación empleando un nuevo método de extracción:

Ultrasonido y agitación con °T orbital
o Preparación de las soluciones (8) en relación 60:40 con los solventes etanol,
metanol, isopropanol, acetona y agua
o Se pesaron 10 g de café por cada solución y se agregaron a Erlenmeyers de
250 mL
o Teniendo las 8 muestras, en el ultrasonido se pusieron los 4 primeros
erlenmeyers y una vez cumplido el tiempo de 1 hora, todas las muestras se
pusieron en el agitador
Tabla 2. Métodos de extracción. Fuente: Aponte, C., Palomino, M. (2017) Universidad de
América

TIEMPO (Horas)
METODO SOLVENTE
INICIAL FINAL
Ultrasonido
Ispropanol y Metanol 11:40 am 12:40 am
Potencia: 60 Kh
°T: 22°C Etanol y Acetona 1:35 pm 2:35 pm
Agitación Ispropanol, Metanol, Etanol 24 horas
°T: 22°C y Acetona 2:50 pm 2:50 pm

 Día 5: Abril 4

o Se retiraron las muestras del agitador 24 horas después

o Haciendo uso del rotavaporador, se recuperaron los solventes teniendo en
cuenta la presión para cada solvente que se encuentra en el manual de
Heidolph.

Tabla 3. Presión para cada solvente en el rotavaporador. Fuente: Manual de Heidolph

SOLVENTE PRESIÓN
Etanol 175 mbar @60°C
Metanol 556 mbar @60°C
Acetona 337 mbar @60°C
Isopropanol 137 mbar @40°C

 Día 6: Abril 5

o Continuación del proceso de recuperación de solventes

o Filtración de las muestras con la bomba de vacío

Tabla 4. Tiempo de recuperación de los solventes. Fuente: Aponte, C., Palomino, M. (2017)
Universidad de América

TIEMPO
MUESTRA
INICIAL FINAL
Metanol con ultrasonido 9:30 am 11:30 am
Metanol con agitación 11:45 am 1:00 pm
Etanol con ultrasonido 1:10 pm 2:10 pm
Etanol con agitación 2:20 pm 3:20 pm
 Acetona con ultrasonido 3:30 pm 4:05 pm
Acetona con agitación 4:15 pm 4:50 pm
Isopropanol con ultrasonido 5:00 pm 6:0 pm
Isopropanol con agitación 9:00 am 10:00 am

Tabla 5. Tiempo de filtración de las muestras. Fuente: Aponte, C., Palomino, M. (2017)
Universidad de América

TIEMPO
MUESTRA
INICIAL FINAL
Metanol con agitación 9:30 am 9:50 am
Metanol con ultrasonido 10:35 am 10:48 am
Etanol con agitación 11:05 am 11:25 am
Etanol con ultrasonido 11:35 am 11:42 am
Isopropanol con agitación 11:50 am 12:00 pm
Isopropanol con ultrasonido 12:05 pm 12:10 pm
Acetona con agitación 12:15 pm 12:22 pm
Acetona con ultrasonido 12:25 pm 12:30 pm

 Día 7: Abril 6

o Se continuo con el proceso de recuperación de solventes

o Una vez terminado este proceso, las muestras se refrigeraron en la nevera por
una semana

Tabla 6. Tiempo de recuperación de los solventes. Fuente: Aponte, C., Palomino, M.

(2017) Universidad de América

TIEMPO
MUESTRA
INICIAL FINAL
Isopropanol con agitación 9:05 am 10:15 am
Isopropanol con ultrasonido 10:25 am 11:25 am
Acetona con ultrasonido 11:30 am 12:00 pm
Acetona con agitación 12:05 pm 12:35 pm

 Día 8: Abril 17

o Se realizó la cuantificación de polifenoles totales presentes en las muestras

por el método folin-ciocalteu
o Se preparó una disolución de ácido gálico de 100 mg/L (disolución
concentrada), a partir de esta disolución, en tubos de ensayo se prepararon 10
mL de disoluciones diluidas de concentraciones crecientes de ácido gálico
entre 0 y 16 ppm.
Tabla 7. Preparación de las disoluciones de ácido gálico. Fuente: Aponte, C., Palomino, M.
(2017) Universidad de América

Concentración en mg/L de la curva patrón de ácido gálico

Reactivos
0 1 2 4 6 8 10 12 14 16
Ácido
0 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6
gálico
Agua 10 9,9 9,8 9,6 9,4 9,2 9 8,8 8,6 8,4

o Determinación de polifenoles totales en los patrones de ácido gálico

• Tomar 25 μL de cada disolución patrón de ácido gálico y colocarlos
en frascos ámbar de 25 mL
• Añadir 15 mL de agua destilada y 1,25 mL del reactivo folin-ciocalteu
• Homogenizar el contenido y dejar reposar durante 8 minutos en la
oscuridad
• Adicionar 3,75 mL de la disolución de carbonato sódico al 7,5% (7,5
g de carbonato sódico con 100 mL de agua)
• Homogenizar el contenido y dejar reposar durante 2 horas en la
oscuridad a temperatura ambiente
• Medir la absorbancia a 765 nm en el espectrofotómetro

 Día 9: Abril 18

o Determinación de polifenoles totales en las muestras de café

 Tomar 25 μL de cada muestra de café proveniente de la extracción y

colocarlos en frascos ámbar de 25 mL
 Añadir 15 mL de agua destilada y 1,25 mL del reactivo folin-ciocalteu
 Homogenizar el contenido y dejar reposar durante 8 minutos en la
oscuridad
 Adicionar 3,75 mL de la disolución de carbonato sódico al 7,5% (7,5
g de carbonato sódico con 100 mL de agua)
 Homogenizar el contenido y dejar reposar durante 2 horas en la
oscuridad a temperatura ambiente
 Medir la absorbancia a 765 nm en el espectrofotómetro

Tabla 8. Absorbancia de los patrones de ácido gálico. Fuente: Aponte, C., Palomino, M.
(2017) Universidad de América

MUESTRA 0 1 2 4 6 8 10 12 14 16

ABSORBANCIA 0 0,062 0,143 0,186 0,227 0,263 0,310 0,352 0,391 0,409
Tabla 9. Absorbancia de las muestras de café. Fuente: Aponte, C., Palomino, M. (2017)
Universidad de América
MUESTRA ABSORBANCIA
Metanol con ultrasonido 0,360
Metanol con agitación 0,080
Acetona con ultrasonido 0,256
Acetona con agitación 0,111
Etanol con ultrasonido 0,223
Etanol con agitación 0,094
Isopropanol con ultrasonido 0,259
Isopropanol con agitación 0,064

o A partir de los valores de absorbancia de cada concentración de ácido gálico

se realizó la curva patrón o recta de calibrado
o Una vez finalizada la pre-experimentación se planteó el diseño de
experimentos para determinar las variables del proceso y así dar inicio con la
experimentación
o Con los resultados de la absorbancia se escogió a la acetona como el solvente
adecuado para la experimentación ya que con esta se presenciaba mayor
cantidad de polifenoles en la cuantificación

Tabla 10. Diseño de experimentos. Fuente: Aponte, C., Palomino, M. (2017) Universidad de
América
FACTOR NIVEL
Solvente Acetona Agua
Tiempo ultrasonido 30 minutos 60 minutos 0 30 minutos 60 minutos 0
Tiempo agitación 12 horas 24 horas 0 12 horas 24 horas 0
Potencia ultrasonido 30 KHz 60 KHz 0 30 KHz 60 KHz 0

 Día 10: Abril 25

o Inicio de la experimentación con los métodos de ultrasonido y agitación con

°T
o Preparación de las soluciones (30) en relación 60:40 con los solventes acetona
y agua
o Se pesaron 10 g de café por cada solución y se agregaron a Erlenmeyers de
250 mL
o Teniendo las muestras preparadas, se inició con el proceso de extracción de
ultrasonido modificando los tiempos entre 30 y 60 minutos, y posteriormente
se pusieron en agitación teniendo en cuenta los tiempos de 12 y 24 horas
 o Teniendo en cuenta el diseño de experimentos se planteó el número de
repeticiones necesarias para el proceso como se muestra a continuación

Tabla 11. Combinaciones posibles para el desarrollo del diseño de experimentos. Fuente:
Aponte, C., Palomino, M. (2017) Universidad de América
TIEMPO TIEMPO POTENCIA
MUESTRA
ULTRASONIDO AGITACIÓN ULTRASONIDO
1 0 12 0
2 30 12 30
3 30 12 60
4 0 24 0
5 60 12 30
6 60 12 60
7 30 0 30
8 30 0 60
9 60 0 30
10 60 0 60
11 30 24 30
12 30 24 60
13 60 24 30
14 60 24 60
15 0 0 0

o Teniendo en cuenta la tabla XX se realizó el proceso de extracción en

ultrasonido y agitación respectivamente
o Se inició con ultrasonido para las muestras 7, 7R, 8 y 8R

 Día 11: Abril 26

o Se prepararon las muestras 11, 11R,12, 12R, 13, 13R, 14 y 14R para el
ultrasonido y posteriormente en agitación con las muestras 4 y 4R por 24 horas
o Las muestras 7, 7R, 8 y 8R se filtraron con bomba de vacío y se recuperó el
solvente en el rotavaporador en un tiempo de 25 minutos

 Día 12: Abril 27

o Se prepararon las muestras 9, 9R, 10, 10R, para el ultrasonido y

posteriormente se prepararon las muestras 15, y 15R sin ultrasonido, se
dejaron en reposo y oscuridad por 24 horas
o Se retiraron las muestras anteriores del agitador

 Día 13: Abril 28

 o Las muestras 9, 9R, 10, 10R, 13, 13R, se filtraron con bomba de vacío y se
recuperó el solvente en el rotavaporador en un tiempo de 25 minutos

 Día 14: Mayo 2

o Las muestras 4, 4R, 11, 11R,12, 12R, 14 y 14R, 15 y 15R se filtraron con
bomba de vacío y se recuperó el solvente en el rotavaporador en un tiempo de
25 minutos
o Se prepararon las muestras 2, 2R, 3, 3R, 5, 5R, 6 y 6R para el ultrasonido, las
muestras 1, y 1R sin ultrasonido, se dejaron en reposo y oscuridad por 24
horas y posteriormente en agitación por 12 horas

 Día 15: Mayo 3

o Se retiraron las muestras anteriores del agitador

o Las muestras 1, 1R, 2, 2R, 3, 3R, 5, 5R, 6 y 6R se filtraron con bomba de
vacío y se recuperó el solvente en el rotavaporador en un tiempo de 25
minutos

 Día 16: Mayo 8

o Se realizó la cuantificación de polifenoles totales presentes en las muestras

por el método folin-ciocalteu
o Se preparó una disolución de ácido gálico de 100 mg/L (disolución
concentrada), a partir de esta disolución, en tubos de ensayo se prepararon 10
mL de disoluciones diluidas de concentraciones crecientes de ácido gálico
entre 0 y 16 ppm.

Tabla 12. Preparación de las disoluciones de ácido gálico. Fuente: Aponte, C., Palomino, M.
(2017) Universidad de América

Concentración en mg/L de la curva patrón de ácido gálico

Reactivos
0 1 2 4 6 8 10 12 14 16
Ácido
0 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6
gálico
Agua 10 9,9 9,8 9,6 9,4 9,2 9 8,8 8,6 8,4

o Determinación de polifenoles totales en los patrones de ácido gálico

• Tomar 25 μL de cada disolución patrón de ácido gálico y colocarlos
en frascos ámbar de 25 mL
• Añadir 15 mL de agua destilada y 1,25 mL del reactivo folin-ciocalteu
 • Homogenizar el contenido y dejar reposar durante 8 minutos en la
oscuridad
• Adicionar 3,75 mL de la disolución de carbonato sódico al 7,5% (15 g
de carbonato sódico con 200 mL de agua)
• Homogenizar el contenido y dejar reposar durante 2 horas en la
oscuridad a temperatura ambiente
• Medir la absorbancia a 765 nm en el espectrofotómetro

o Determinación de polifenoles totales en las muestras de café, donde se realizó

el mismo procedimiento para la determinación de polifenoles totales en los
patrones de ácido gálico

Tabla 13. Absorbancia de los patrones de ácido gálico. Fuente: Aponte, C., Palomino, M.
(2017) Universidad de América

MUESTRA 0 1 2 4 6 8 10 12 14 16

ABSORBANCIA 0 0,067 0,146 0,190 0,230 0,269 0,317 0,356 0,398 0,415

Tabla 14. Absorbancia de las muestras de café. Fuente: Aponte, C., Palomino, M. (2017)
Universidad de América
MUESTRA ABSORBANCIA
1 0,404
1R 0,417
2 0,628
2R 0,665
3 0,719
3R 0,776
4 0,473
4R 0,483
5 0,684
5R 0,695
6 0,8
6R 0,831
7 0,851
7R 0,904
8 1,029
8R 1,200
9 0,933
9R 1,018
10 1,255
10R 1,284
11 0,483
11R 0,493
12 0,579
 12R 0,603
13 0,496
13R 0,515
14 0,608
14R 0,618
15 0,359
15R 0,398
o A partir de los valores de absorbancia de cada concentración de ácido gálico
se realizó la curva patrón o recta de calibrado