Práctica 20. Pruebas bioquímicas VITEK.

Equipo 9.

Garduño Reyes Rocio Elizabeth 8 de Junio de 2018

Ortega Arellano Anakaren

RESUMEN
En la presente práctica se realizó la prueba bioquímica rápida “vitek” para detección de un cierto microorganismo según su
metabolismo. Se mostró el manejo y las partes del aparato, así como los ciertos cuidados y especificaciones que se debe
tener y seguir para hacer uso de esta técnica. Los resultados en esta práctica arrojaron que analizamos ​Staphylococcus aureus
con 98% de probabilidad y un nivel de confianza excelente.

Palabras clave: Metabolismo, pruebas bioquímicas, vitek.

RESULTADOS inoculación y los sella. Ya dentro del equipo,

La eficiencia del sistema VITEK​® 2 Compact van en un carrusel en el que se introducen a
se basa en su avanzada tecnología incubación y cada 15 min. es removido el
colorimétrica: el sistema lee las tarjetas de casete para llevarlo al sistema óptico de
última generación del VITEK (que contiene 64 transmitancia, el que usa diferentes longitudes
orificios para asegurar la exactitud) cada 15 de onda del espectro visible para interpretar las
minutos utilizando 3 longitudes de onda reacciones de turbiedad o el color de los
distintas. Con esta técnica, más información es productos metabólicos, y es devuelto a su sitio
analizada, lo que incrementa la precisión del en el carrusel hasta el siguiente tiempo de
resultado y reducción del tiempo, ya que arroja lectura.
resultados de 4-10 h.
(​www.biomerieux.com.mx​) De los cuidados y especificaciones, destaca el
uso de solución salina estéril de NaCl 0.45%.
Se realizó el procedimiento empezando por
una tinción de Gram la cual nos arrojó el Tabla 1. Información de identificación
resultado de un microorganismo con una N° de lote: Fecha de
morfología de cocos ​grampositivos​, es decir, Tarjeta:​ GP 2420469403 caducidad:
10-mar-2019
se nos entregó una tarjeta con la terminación
13:00 CDT
“GP”, esto debido a que existen tarjetas
especiales para grampositivos y tarjetas Finalizado: Estado: ​Final Tiempo de
23-may-2018 14:37 análisis: ​5.00
especiales para gramnegativos. Se realizó una CDT horas
suspensión la cual estaba al 0.59 en la escala
de MacFarland medido con un densitómetro,
98% Probabilidad ​Staphylococcus aureus
después se introdujeron todas las tarjetas y los
datos del grupo en un casete que se llevaron al Bionúmero: Nivel de confianza:​ Identificación
010400062663211 excelente
equipo. El casete fue transportado a una
cámara en la que se aplica vacío y en seguida Perfil(es) típico(s) contraindicante(s):​ ​Staphylococcus aureus
AGLU (79)
se reintroduce nuevamente el aire, ésta acción
hace que la suspensión bacteriana pase a través
del tubo de transferencia hacia los Tabla 2. Detalles bioquímicos
microcanales que llenan todos los pozos, en 2 AMY ー
seguida pasan por un mecanismo que corta los
4 PIPLC ー
tubos que contiene cada tarjeta para la
5 dXYL ー 53 dMNE ＋

8 ADH1 ＋ 54 MBdG ＋

9 BGAL ー 56 PUL ー

11 AGLU ー 57 dRAF ー

13 APPA ー 58 O129R ＋

14 CDEX ー 59 SAL ー

15 AspA ー 60 SAC ＋

16 BGAR ー
62 dTRE ー
17 AMAN ー
63 ADH2s ー
19 PHOS ＋
64 OPTO ＋
20 LeuA ー

23 ProA ー ANÁLISIS DE RESULTADOS

24 BGURr ー Las tarjetas reactivas tienen 64 pozos que
contienen, cada uno, un sustrato de prueba
25 AGAL ー individual. Con estos sustratos se miden varias
26 PyrA ー actividades metabólicas como acidificación,
alcalinización, hidrólisis enzimáticas y
27 BGUR ー
desarrollo en presencia de sustancias
28 AlaA ー inhibidoras. Las tarjetas están selladas en
ambos lados por una película clara que evita el
29 TyrA ー
contacto entre las diferentes mezclas
sustrato-microorganismo y a la vez permite la
30 dSOR ー transmisión del nivel de oxígeno apropiada.
31 URE ー Cada tarjeta tiene un tubito de transferencia
pre-insertado para la inoculación.
32 POLYB ＋ (​http://depa.fquim.unam.mx​). Para la
37 dGAL ＋ identificación de un microorganismo son
importantes dos cosas: 1. que se encuentre en
38 dRIB ー
una base de datos de microorganismos
39 ILATk ＋ patógenos para el hombre, de lo contrario no
se encontrara qué microorganismo se está
42 LAC ー
analizando, y 2. que la inoculaiòn sea por
44 NAG ー medio de una suspensión 0.5-0-6 en la escala
de MacFarland.
45 dMAL ＋

46 BACI ＋ De las 64 pruebas obtenidas, solamente se

47 NOVO ー
desarrollarán las siguientes:
→​AMY​: ​S. aureus es incapaz de fermentar la
50 NC6.5 ＋ amigdalina, ya que no promueve su
52 dMAN ＋ degradación.
→​PIPCL​: Fosfatidil inositol Fosfolipasa C es
una enzima hidrolasa, la cual no esta presenta
en ​S. aureus.
→​ADH1​: ​S. aureus presenta la enzima
arginina dihidrolasa y es capaz de degradar
L-arginina, dando un resultado positivo en esta
prueba.
→​AGLU​: La proteína A presente en la pared
celular estafilocócica es detectada por
moléculas de inmunoglobulina y pueden
unirse, da por resultado aglutinación positivo,
sin embargo estos procedimientos son rápidos
y ​S. lugdunensis ​y ​S. schleiferi pueden dar
positivo en esta prueba, ​S. aureus ​no, por eso
está indicado con un perfil contradictorio.
→​PyrA​: Esta prueba es únicamente positiva
para cocos grampositivos, catalasa negativos.
S. aureus presenta la enzima catalasa, por lo
tanto la prueba es negativa debido a no poder
hidrolizar ​la pirrolidonil-beta-naftilamida.
→​dSOR​: S. aureus ​no es fermentadora de
sorbitol, es decir, no promueve la degradación
de este azúcar, por esta razón la prueba es
negativa.
→​URE​: Fue negativa la prueba debido a que
la bacteria en estudio no sintetiza la enzima
ureasa y por lo tanto no puede hidrolizar la
molécula de la urea.
→​LAC​: En la literatura esta prueba se
presenta positiva gracias a que es un
microorganismo anaerobio facultativo, por lo
tanto sí es fermentadora de este disacárido, sin
embargo se le atribuye el resultado negativo a
la concentración preparada con una turbidez de
0.59 de los tubos de McFarland, ya que la
concentración ideal es de 0.5 del tubo de
McFarland.
→​BACI​: Esta bacteria es resistente al sustrato
bacitracina, es decir que su pared celular
inhibe la acción del antibiótico.
→​NOVO​: El microorganismo es sensible al
antibiótico novobiocina debido a que este
inhibe la bacteria y no permite su crecimiento.
→​dMAN y SAC​: ​S. aureus​, como se
mencionó anteriormente, es una bacteria
anaerobia facultativa por lo tanto es capaz de
fermentar estos carbohidratos sin ningún
problema.
CONCLUSIONES
El sistema Vitek nos permite medir varias
actividades metabólicas de un microorganismo
para poder caracterizarlo, y también es útil
para hacer estudios de sensibilidad. La técnica
para la preparación de la suspensión de 0.5 a
0.63 mcF, es el paso primordial y más tardado
para realizar el proceso automatizado,
realizado este paso, el sistema VITEK nos
disminuye el tiempo de identificación.
Está pensado y hecho para industria, esto
debido a la gran cantidad de identificaciones
que se pueden hacer al mismo tiempo, a
diferencia de las pruebas bioquímicas
convencionales que requieren más trabajo por
parte del laboratorista. Con respecto a API
20E, el tiempo de la prueba en estudio es
menor, ya que Vitek te arroja resultados a
partir de las 4 horas y máximo 24 horas,
mientras que API debe de estar en incubación
24 horas obligatoriamente. Estas diferencias,
son lo que hacen al sistema Vitek tan útil en
las industrias farmacéuticas o de alimentos. El
único problema es que solo reconoce
microorganismos patógenos para el ser
humano.
BIBLIOGRAFÍA
*​http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/I
dentificacionConVITEK2_21548
*​http://www.biomerieux.com.mx/microbiologi
a-industrial/vitekr-2-compact
*​http://www.labware-qc.com.ar/html/britania
%5Ck08_06.html
*Winn Washington C., Allen Stephen D.,
Janda William M., Koneman Elmer W.,
Procop Gary W., Schreckenberger Paul C.,
Woods Gail L., ​Koneman. Diagnóstico
Biológico​, 6ta. edición, Ed. Médica Imagen 3. ​Carrusel con el casete, dentro las
panamericana, Madrid España, 2006. tarjetas del grupo llevadas al proceso de
inoculación.
ANEXOS

Imagen 1. ​Fecha: 23/mayo/18

Muestra: Gram positivo
Tinción: Gram
Imagen 4. ​Tarjeta del semestre pasado
Aumento: 100x
finalizada la identificación.
Descripción: Cocos asociados en tétradas y
diplococos mayormente, grampositivos con
residuos de colorante (safranina) por debajo.

Imagen 2. ​Equipo Vitek.

Imagen 5. ​Hoja de informe del examen
realizado.