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SESION # 24

RECEPTORES TIROSINA-CINASA COMO BLANCOS


FARMACOLÓGICOS

*Título original: Tyrosine Kinase N.J. Pyne, M. Hollingsworth, K. Huckbody, L. Coleman, K.


Sewell, T.S. Pillay, W. Foster, R. Morgan y J. Walker. British Pharmacology Society, 2004.

*Traducción y adaptación: Claudia Gómez Acevedo y Alfonso Efraín Campos Sepúlveda.

Departamento de Farmacología
Facultad de Medicina, UNAM 2017

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II. OBJETIVOS

Al finalizar el ejercicio los alumnos conocerán:

1. La estructura de los diferentes tipos de receptor tirosina cinasa.


2. El mecanismo de acción de la tirosina cinasa.
3. La interacción entre la insulina y su receptor.
4. Las vías de señalización que producen efectos metabólicos y mitogénicos.

III. COMPETENCIAS

1. Conoce la estructura de los diferentes tipos de receptor tirosina cinasa.


2. Tiene los conocimientos básicos sobre el mecanismo de acción del receptor tirosina cinasa.
3. Reconoce las vías de señalización de este tipo de receptor y sus efectos metabólicos y
mitogénicos.
4. Identifica las posibilidades de manipulación farmacológica en estas vías de señalización
5. La posible manipulación farmacológica de estas vías de señalización.

Para iniciar la sesión presiona el ícono del lado izquierdo:

IV. ESTRUCTURA DEL RECEPTOR TIROSINA CINASA

La familia de receptores tirosina cinasa está formada por proteínas membranales con una porción
extracelular glucosilada, un dominio transmembranal y un componente intrecelular que tiene
actividad de tirosina cinasa cuando es activado.

El siguiente diagrama muestra, de manera general, un receptor tirosina cinasa.

Presiona las estructuras en la imagen para que se despliegue la información correspondiente:

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Existen 4 tipos de receptor tirosina cinasa (I, II, III y IV) de acuerdo a su estructura:

V. RECEPTORES TIPO I

Los receptores tipo I consisten en una cadena polipeptídica única de aproximadamente 175 Kd. La
región extracelular del receptor tiene 2 dominios similares ricos en cisteína, además de un gran
número de sitios susceptibles de glucosilación. Un ejemplo de este tipo de receptor es el receptor
para el factor de crecimiento epidermal (EGF).

Activación inducida por ligando.

Los receptores tipo I existen como unidades separadas (monómeros). La unión del ligando (por
ejemplo el EFG) a los receptores provoca la formación de dímeros. Una vez dimerizados, los
receptores sufren fosforilación cruzada y se activan.

VI. RECEPTORES TIPO II

Este tipo de receptor contiene 4 subunidades que están unidas a través de puentes disulfuro. Las 2
subunidades α son extracelulares y contienen dominios ricos en cisteína. Las subunidades β
contienen tirosina cinasa citoplásmica que normalmente está inhibida por las subunidades α. Esta
inhibición termina cuando la insulina se une a las subunidades α. [este tipo de receptor será
estudiado ampliamente a lo largo del presente ejercicio]. Ejemplos de este tipo de receptor incluyen
a los receptores para la insulina y el receptor para el factor de crecimiento parecido a la insulina
(IGF-1).

Activación inducida por ligando.

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Los receptores tipo II, como el de la insulina existen como dímeros. La unión del ligando (insulina)
induce fosforilación cruzada.

VII. RECEPTORES TIPO III

Los receptores tipo III tienen dominios parecidos a las inmunoglobulinas en la región extracelular.
Un ejemplo es el receptor para el factor derivado de plaquetas (PDGF) que además tiene insertado
en la porción intracelular un dominio adicional de cinasa.

Activación inducida por ligando

Los receptores tipo III se activan de la misma manera que los receptores tipo I.

VIII. RECEPTORES TIPO IV

Los receptores tipo IV tienen un dominio parecido a inmuno-globulinas en la región extracelular,


pero es más corto que el que se encuentra en los receptores tipo III. Un ejemplo es el receptor para
el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF).

a. Activación inducida por ligando

Los receptores tipo IV se activan de la misma manera que los receptores tipo I.

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b. Proteínas tirosina cinasa
Las proteínas tirosina cinasa son miembros de la familia de enzimas cinasas. Se encargan de
fosforilar residuos de tirosina en su proteína blanco. Los grupos fosfato son proporcionados por
moléculas de ATP. La estructura de la tirosina se distingue de la fenilalanina por un grupo OH.
Durante la reacción de fosforilación el grupo fosfato, proveniente del ATP, reemplaza al OH de la
tirosina.

c. Interacciones entre proteínas durante la señalización del receptor tirosina cinasa.

Los receptores existen como unidades independientes. La unión del ligando, por ejemplo factor de
crecimiento (GF) a los receptores provoca la dimerización del receptor. Una vez dimerizados, cada
receptor cataliza la fosforilación de los residuos de tirosina del receptor contrario; a este proceso se
le llama fosforilación cruzada. La transmisión de la señal del receptor para el factor de crecimiento
fosforilado se realiza inicialmente a través de 2 tipos de interacción proteína-proteína:

1. Los residuos de tirosina fosforilados interactúan con proteínas que contienen dominios para SH2
(Src homólogo 2).

2. Secuencias ricas en prolina interactúan con proteínas que contienen dominios para SH3 (Src
homólogo 3)

d. Estructura del receptor a insulina.

El receptor a insulina es un ejemplo de receptor tirosina cinasa que se ha estudiado ampliamente.

El receptor a insulina es un tetrámero que contiene 2 subunidades α extracelulares y 2 subunidades


β transmembranales. Cada subunidad α está conectada a una subunidad β a través de puentes
disulfuro, y las 2 subunidades α están unidas entre sí por un tercer puente disulfuro.

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Subunidades α: Existen 2 subunidades α en cada receptor a insulina. Cada una de ellas es un
polipéptido de aproximadamente 125-135 Kd. Cada polipéptido contiene 719 aminoácidos, de los
cuales 37 son residuos de cisteína que se encuentran concentrados en el dominio rico en cisteínas
en el centro de la cadena.

Subunidades β: Existen 2 subunidades β en cada receptor de insulina. Cada cadena consiste de


620 aminoácidos y contiene 4 sitios de glucosilación unidos a aspargina en la porción extracelular.
La porción transmembranal es relativamente corta (23 aminoácidos) y la porción intracelular
contiene la actividad de tirosina cinasa.

Mayor información acerca de la función de la insulina en el cuerpo:

e. Función de la insulina en el cuerpo. La regulación de los niveles de glucosa es un importante


mecanismo homeostático.

Cuando comemos, los niveles sanguíneos de glucosa aumentan y la insulina es liberada desde el
páncreas hacia la sangre.

La insulina estimula a los receptores en las células del cuerpo, especialmente en músculo, tejido
adiposo e hígado. El hígado y los músculos almacenan el exceso de glucosa convirtiéndola en
glucogeno y el tejido adiposo convierte el exceso de glucosa en grasa. Cuando los niveles de
glucosa en sangre bajan, se libera la hormona glucagon. El glucagon impide incorporar glucosa (vía
insulina) del torrente sanguíneo y estimula a las células hepáticas para transformar el glucógeno en
glucosa y liberarla a la sangre.
La insulina también tiene efecto mitógeno al activar vías mitogénicas a través del receptor a insulina
o del receptor IGF-1. Por lo tanto, la insulina puede estimular el crecimiento
celular del cuerpo, además de sus efectos metabólicos.

f. La insulina aumenta la captura de glucosa.

La glucosa es una molécula esencial en el metabolismo celular. Por lo tanto debe ingresar al interior
de la célula para poder metabolizarse y producir energía. La glucosa
no puede atravesar la membrana plasmática sin la participación de un acarreador llamado GLUT4.
La insulina incrementa la actividad de este acarreador cuando ocupa su receptor.

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g. La unión de insulina con su receptor activa a la tirosina cinasa en el dominio intracelular. Esto a
su vez activa el reclutamiento de transportadores acarreadores GLUT4 hacia la membrana
plasmática lo que permite la captura de glucosa al interior de la célula.

Note que el receptor permanece activo por algún tiempo después de que el ligando ha sido retirado
del receptor. Una vez que el receptor se inactiva, los GLUT4 también se desactivan y se alejan de
la membrana celular.

i. Actividad del receptor a insulina en detalle (Efecto metabólico 1):

El receptor a insulina es un receptor de tirosina cinasa. La unión de insulina provoca la


autofosforilación del dominio intracelular del receptor en múltiples sitios.

Las fosforila-ciones múltiples permiten el inicio de varias vías de señalización. El receptor


completamente activado actúa como tirosina cinasa de otros sustratos incluyendo las proteínas IRS
(IRS1-4, APS, SHC, Gab1, Cbl). La fosforilación de estas proteínas en sus residuos de tirosina les
permite interactuar con otras proteínas que contienen dominios SH2 (Src homólogo 2).

Estos grupos de proteínas forman la base para el transporte de glucosa y las vías mitogénicas
activadas por proteínas cinasas.

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Inactivación de la señal del receptor tirosina cinasa por la tirosina fosfatasa.
La tirosina fosfatasa, PTB 1B tiene la función de retirar el fosfato de la tirosina y por lo tanto inactivar
al receptor a insulina. PTB 1B modula la señal de este receptor.

ii. Actividad del receptor a insulina en detalle (Efecto metabólico 2):

La unión de APS y IRS 1-4 son requisito para que la insulina inicie la estimulación del transporte de
glucosa. La unión de SHC y Gab 1 es requisito para iniciar la vía mitógena activada por tirosina
cinasa que está relacionada con las propiedades de promoción del crecimiento de la insulina. SHP-
2 es una fosfatasa de tirosina (retira el fosfato de la fosfatotirosina) y parece tener un papel
facilitador en la señalización de la insulina, aunque se desconoce su papel definitivo. Es importante
considerar que en el caso de SHP-2, un evento de desfosforilación puede disparar la señal (a
diferencia de PTB 1B, que lo inactiva).

iii. Vía de transporte de glucosa.

La insulina facilita la captura de glucosa en las células al estimular el movimiento del transportador
de glucosa GLUT4 hacia la membrana celular. Esto es mediado por dos vías, que deben ser
activadas para facilitar la movilización del transportador de glucosa.

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iv. Vía independiente de cinasa P13.

La proteína APS se fosforila y atrae a la proteína CAP y a la Cbl que también se fosforila. La proteína
Cbl se une al dominio SH2 de la proteína Crkll que está unida al factor de inetracambio de
nucleótidos de guanina C3G. El C3G activa al TC10.

Se destaca que sin la P13K la translocación del GLUT4 no ocurre.


v. Vía dependiente de cinasa P13.

La cinasa P13K es reclutada por la fosforilación de las proteínas IRS. La P13K activada convierte
PIP2 en PIP3, lo cual activa al PDK1 estimulando la fosforilación de PKC y AKT. Pero como no hay
activación de TC10 no hay translocación del GLUT4. En presencia de la forma activada de TC10,
de la vía independiente de cinasa P13K, sí hay movimiento del acarreador de glucosa.

Se destaca que sin la activación de la vía independiente de P13K la translocación del GLUT4
no ocurre

vi. Velocidad de respuesta.

La autofosforilación inicial del receptor a insulina ocurre en segundos. Sin embargo, el curso
temporal para las acciones metabólicas y mitogénicas de la insulina son diferentes debido
a los mecanismosintrínsecos involucra-dos. ¿En cuánto tiempo cree usted que se manifiestan
los efectos metabólicos de la insulina (los que causan la captura celular de glucosa)?

Actividad del receptor a insulina en detalle (efecto mitogénico).

La señal de la insulina sobre su receptor involucra una serie de eventos moleculares. Una vez que
Grb2-mSOS se asocia con el receptor, el mSOS (una proteína dependiente de nucleótidos de
guanina) permite que la Ras intercambie GDP por GTP. La Ras-GTP se activa y estimula a la
proteína cinasa Raf. Raf activa a MEK por fosforilación y a su vez MEK fosforila a MAPK en los
residuos treonina y tirosina para activarla. La MAPK activada puede transferirse al núcleo donde
estimula los factores de transcripción que inducen la expresión de los genes necesarios para el
crecimiento de la célula.

Transactivación del receptor tirosina cinasa por agonistas a través de receptores acoplados a
proteínas G.

La unión del agonista (por ejemplo, trombina) al receptor acoplado a proteínas G (GPCR), puede en
ciertos casos activar una metalo-proteasa (E) que libera EGF. Este EGF activa el receptor EGF
(como la cinasa MAP para la insulina).

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Esto se denomina transactivación del receptor de tirosina cinasa por agonistas de GPCR.

Modulación farmacológica de la actividad de tirosina cinasa. Ejemplos:


Es posible modificar la actividad de la tirosina cinasa para producir beneficio clínico. Por ejemplo:

Pequeñas moléculas activadoras pueden estimular al receptor de insulina y disminuir la glucosa


sanguínea en pacientes con diabetes mellitus.

Estimulación de los receptores: Insulina:


Pequeñas moléculas que atraviesan la membrana se unen al receptor a insulina y lo activan, por lo
tanto aumenta la actividad de la vía de la tirosina cinasa. Esto tiene aplicaciones clínicas potenciales.

Los inhibidores de la fosfatasa de tirosina pueden usarse para mantener la activación del receptor
a insulina en el tratamiento de la diabetes mellitus.

Los inhibidores de la fosfatasa pueden usarse para aumentar la señal del receptor y así evitar que
se desactive el receptor. Las fosfatasas de tirosina, como el PTB 1B, funcionan retirando el fosfato
de la tirosina del receptor y por lo tanto inactivan el receptor a insulina. Con el uso de un bloqueador
de PTB 1B se evita la inactivación del receptor. Este tipo de fármacos podría ser útil en el tratamiento
de la diabetes mellitus.

Los inhibidores del receptor para el EGF pueden inhibir el crecimiento de tumores.

El bloqueo de receptores para EGF.

La estimulación de los receptores para EGF aumenta el crecimiento de los tumores. La inhibición
del receptor a EGF, por ejemplo con ZD 1839) puede inhibir el crecimiento tumoral.

Los inhibidores del factor de crecimiento endotelial (VEGF) pueden disminuir el crecimiento de vasos
sanguíneos (angiogénesis) por lo tanto inhibir el crecimiento de tumores.

Bloqueo de receptores para VEGF.

El factor de crecimiento endotelial vascular es secretado por las células tumorales. Se produce un
gradiente de concentración donde se favorece el crecimiento de los
vasos sanguíneos y por lo tanto el crecimiento del tumor.

Si se detiene el VEGF, no se estimula el crecimiento de los vasos sanguíneos y se detiene el


crecimiento del tumor porque no tiene suficiente aporte nutricional. El semaxanib (SU5416) inhibe
al VEGFR-2, Flt-1

IX. LECTURAS RECOMENDADAS

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Brunton LL, Lazo JS, Parker KL eds. Goodman & Gillam’s Las bases Farmacológicas de la
terapéutica. 11ª Ed. México, McGraw Hill; 2007.

Katzung BG, masters SB, Trevor AJ eds. Farmacología básica y clínica. 11a ed México. McGraw
Hill- Lange, 2009.

Koch S, Tuques S, Li X, Gualandi L, Claesson-QWlesh L. Signal transduction by vascular endotelial


growth factor receptors. Biochem J 2011,437(2):169-83

NOTA: Proceda a la evaluación de esta sesión.

- Ingrese a la siguiente dirección: www.facmed.unam.mx/encuestas/farmacologia/practicas.

- De respuesta a las preguntas que ahí se enlistan. Su opinion será considerada y favorecerá el
mejoramiento de la educación farmacológica. Gracias por su participación.
Para ir al examen de opción múltiple, presione el ícono del lado derecho:

Examen de opción múltiple

El siguiente examen está conformado con varias preguntas relacionadas con en el material
contenido en este ejercicio.

Puede haber más de una respuesta correcta a cada pregunta. Puede usted continuar cuando
complete todas las respuestas correctas de cada pregunta.

Cada respuesta correcta sumará un punto. Cada respuesta incorrecta le restará un punto. Su
puntuación aparecerá en la esquina superior derecha.

Pregunta 1

El transporte de glucosa y la regulación de la glucosa sanguínea ocurre de la siguiente manera:

1. La glucosa se difunde pasivamente a través de la membrana celular


2. La insulina estimula la captura de glucosa
3. La glucosa entra en la célula a través del receptor a insulina
4. La glucosa entra en la célula a través de acarreadores de glucosa
5. La insulina estimula el movimiento neto de los acarreadores de glucosa a la superficie de la
célula

Pregunta 2
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Cuando el receptor cinasa de la insulina es activado sucede lo siguiente:

1. Otros receptores transmembranales son fosforilados


2. Los sustratos citosólicos son fosforilados
3. AMP cíclico es generado
4. El receptor se autofosforila
5. El receptor interactúa con las proteínas sustrato

Pregunta 3

La insulina provoca que:

1. La glucosa salga de la célula


2. La glucosa entre a la célula
3. El glicógeno se convierta en glucosa
4. La glucosa se convierta en glicógeno
5. Disminuyan los niveles de glucosa en sangre
6. Aumenten los niveles de glucosa en sangre

Pregunta 4

Después de que se une la insulina al receptor:

1. Hay un cambio conformacional en el receptor


2. El receptor tirosina cinasa se activa
3. La tirosina cinasa se une a ATP
4. La tirosina cinasa se une a ADP
5. El receptor se autofosforila
6. El receptor fosforila otros sustratos
7. Los niveles de AMPc aumentan
8. Los puentes disulfuro se disocian

Pregunta 5

La insulina:

1. Se une a las subunidades alfa


2. Se une a las subunidades beta
3. Se une a las subunidades alfa y a las beta
4. Se difunde en la célula

Pregunta 6

El receptor a la insulina es un ejemplo de:

1. Tipo I
2. Tipo II
3. Tipo III
4. Tipo IV

Pregunta 7

Los receptores tirosina cinasa únicamente fosforilan el grupo OH de la tirsoina.

¿Cuál de los grupos OH en las estructuras químicas es el de la tirosina?

Pregunta 8

Coloque los nombres de las estructuras del receptor a insulina


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Pregunta 9

Indique en dónde se unen el ATP y el factor de crecimiento (GF) al receptor a insulina

Pregunta 10

Coloque los nombres en el diagrama de los diferentes tipos de receptor tirosina cinasa

Pregunta 11

Coloque los nombres en el esquema

Pregunta 12

Cuando usted presione el botón de abajo a la derecha (“Start question”) se le pedirá


que complete el diagrama de la vía de transporte de la glucosa. Conforme complete secciones clave
del diagrama, se activarán las animaciones. Cuando haya completado de manera correcta el
diagrama, los transportadores de glucosa GLUT4 se activarán y las moléculas de glucosa entrarán
a la célula. Cada pieza correcta en el diagrama es un punto.

Cada error es un punto menos. Puede usted abandonar la pregunta sin contestar presionando el
botón “quit question”.

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