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OBJETIVOS
Reconocer las estructuras básicas fungosas tales como hifas, micelio y esporas y cuerpos
fructíferos.
Reconocer los tipos más comunes de esporas y cuerpos fructíferos.
Describir una técnica que permita cultivar e identificar hongos en láminas portaobjetos.
Familiarizar al estudiante con las técnicas utilizadas en el diagnóstico de enfermedades
causadas por hongos, virus, bacterias, nematodos y sus métodos de aislamiento.
MARCO TEORICO
En frutales se ha registrado en
Banano (f.sp. cubense)
Cítricos (f.sp. citri)
Melón (f.sp. melonis)
Guayaba (f.sp. psidii)
Vid (f.sp. herbemontis)
En leguminosas de grano
Fríjol (f.sp. phaseoli)
Soya (f.sp. glycines)
Alverja (f.sp. pisi)
Lenteja (f.sp. lentis)
Garbanzo (f.sp. ciceris).
En ornamentales
Clavel (f.sp. dianthi)
Crisantemo (f.sp. chrysanthemi)
Delfinio (f.sp. delphiniii)
Gladiolo (f.sp. gladiolorum)
En plantas aromáticas
Albahaca (f.sp. basilici)
En plantas forrajeras
Trébol (f.sp. trifolii)
Alfalfa (f.sp. medicaginis¡)
Lupino (f.sp.lupini)
Arboles en eucalipto (Esp. eucalipti)
Algunas coníferas (Esp. pini)
Fuente: (Armstrong y Armstrong, 1981; Connick et al., 1998, Farr et al., 1989).
Fusarium oxysporium invade la planta bien sea de forma activa a través de las raíces o
pasivamente a través de orificios en la zona callosa de esquejes jóvenes. Después de la
penetración el patógeno se desarrolla dentro del sistema vascular de la planta y produce
marchitamientos vasculares, manchas y añublos de las hojas, pudrición de raíces y de tallos,
pudrición de frutos, granos y semillas la sintomatología más común incluye marchitez
inicial y amarillamiento de las hojas, que ocurre típicamente después de la floración. A
medida que la planta madura, presenta marchitez en algunos sectores de la planta. Es
común ver síntomas cloróticos en una mitad de la hoja, donde todos los foliolos de un lado
se tornan amarillos. A medida que la enfermedad progresa se observa marchitez y amarillez
en una parte o en toda la planta (Nelson, 1990).
Fuente:http://elhocino-adra.blogspot.com/2011/01/fusarium-oxysporum-f-sp-
cucumerinum.html
fuente: http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/enfermedades/Fusarium_tom.html
fuente:https://www.researchgate.net/figure/Figura-44-Sintomas-de-marchitamiento-
vascular-en-plantas-de-uchuva-y-aislamiento-de_fig4_257139624
fuente: http://www.enfermedades-fungosas-del-suelo-tomate/enfermedades-fungosas-del-
suelo-tomate.shtml
Taxonomia de Fusarium oxysporium
Dominio: Fungi
División: Deuteromycota
Clase: Sordariomycetes
Orden: Hypocreales
Familia: Nectriaceae
Género: Fusarium
Especie: F. oxysporum
SCHLTDL.
Las esporas después del transporte se depositan sobre los substratos de cultivo, Fusarium
oxysporium invade la planta bien sea de forma activa a través de las raíces o pasivamente a
través de orificios en la zona callosa de esquejes jóvenes o por heridas o aperturas
naturales. El patógeno se desarrolla dentro del sistema vascular de la planta. La penetración
por la raíz tiene lugar directamente a través de la epidermis de la planta por la zona de la
raíz próxima al ápice que está en proceso de diferenciación, esto se ve favorecido por
heridas o por actuación de nematodos como es el caso de Meloidogyne (Navas et al.,
1990).
El hongo se caracteriza por producir colonias de crecimiento rápido y tres tipos de esporas:
microconidias, macroconidias y clamidosporas. Las macroconidias son esporas,
unicelulares, rectas o curvadas. Las macroconidias, son esporas de pared
delgada,fusiformes,largas,moderadamente curvadas, con varias células y de tres a cinco
septas transversales, con la célula basal elongada y célula basal atenuada. Las
clamidiosporas son esporas formadas a partir de condensación de células de las hifas o de
las macroconidias y se caracterizan por poseer paredes bastante gruesas, lo que las hace
muy resistentes acondiciones ambientales desfavorables o a la ausencia de plantas
hospedantes o en el suelo (Nelson, 1981)
Figura 1. Esporas reproductivas (clamidiosporas) del hongo fitopatógeno fusarium oxyporum vistas
al microscopio. Con previa tinción con azul de metileno (Salmerón, 2015)
clc1 Canal de cloro dependiente de voltaje Reducida (Cañero & Roncero, 2008)
ctf1 / ctf2 Regulador de lipasa/ regulador de lipasas Reducida (Bravo-Ruiz et al., 2013)
Avirulento
Con7-1 Factor de transcripción
(Ruiz-Roldan et al., 2014)
Reducida
cti6 Factor de transcripción (Michielse & Rep, 2009)
fmk1 /
MAP quinasa/ Subunidad β de proteína G Avirulento (Di Pietro et al., 2001)
fgb1
fmk1 /
MAP quinasa/ histidina quinasa Avirulento (Rispail & Di Pietro, 2010)
fhk1
fmk1 /
MAP quinasa/ proteína WW Avirulento
fso1
(Rosales & Di Pietro, 2008)
fmk1 /
MAP quinasa/MAP quinasa Avirulento Este estudio
hog1
fmk1 /
MAP quinasa/MAP quinasa Avirulento Turrá et al sin publicar
mpk1
fmk1 / MAP quinasa/mucina Avirulento (Perez-Nadales & Di Pietro, 2011)
Tabla 2. Principales genes que participan en la patogénesis del hongo Fusarium oxyporum.
Las especies de Fusarium pueden sobrevivir varios años en el suelo, desde donde pueden
infectar la planta y los tubérculos. La mayor parte de la infección de los tubérculos se
presenta durante la cosecha, penetrando a través de heridas. Sin embargo, las lesiones que
se inician en las heridas se hacen evidentes aproximadamente un mes después en
almacenamiento. Durante este período se desarrolla la enfermedad produciendo pudrición
y esporulación del hongo. Al usar tubérculos semilla enfermo, los propágulos en estos
tubérculos contaminan sacos y equipamiento usados para la selección y plantación e
infectan otros tubérculos, a través de las heridas producidas en la manipulación. Así, la
semilla entera o fraccionada que se ha infectado, se pudre e infesta el suelo que queda
adherido a la superficie de los tubérculos cosechados.
La pudrición seca se desarrolla bajo condiciones de alta humedad relativa y entre 15 y 20º
C. Humedad sobre el 70% no altera la incidencia y severidad de la pudrición, pero a menor
humedad, la infección y severidad de la enfermedad se retardan. La enfermedad continúa
desarrollándose lentamente a temperaturas más frías, las que a su vez son convenientes para
la papa (Acuña & Tejada)
Ciclo de la enfermedad: las especies de Fusarium pueden sobrevivir durante varios años en
el suelo, pero el inóculo primario se mantiene generalmente en la superficie de los
tubérculos, a partir de lo cual se contaminan: envases, el equipo usado para la recolección y
almacenamiento, y las papas que presentan heridas provocadas durante la cosecha y
transporte. La papa-semilla entera o fraccionada que se ha infectado, se pudre e infecta el
suelo que queda adherido a la superficie de las papas cosechadas. Los tubérculos son
resistentes a la infección, al momento de la cosecha; la susceptibilidad aumenta durante el
almacenaje. Las condiciones de alta humedad relativa y temperaturas entre 15 y 20 ºC en
almacenaje, favorecen el desarrollo de la enfermedad. La pudrición de la papa-semilla
después de la plantación no se promueve cuando la temperatura y la humedad relativa del
suelo favorecen la emergencia rápida de los brotes(Castro, I.; Contreras, 2011).
Figura 2. Ciclo biológico Fusarium sp. El hongo sobrevive en el suelo y en tubérculos.
Las papas que presentan heridas provocadas durante la cosecha y transporte son
contaminadas por el hongo, luego estas al ser almacenadas con condiciones de alta
humedad relativa y temperaturas entre 15 y 20 ºC en almacenaje, desarrollan la pudrición.
(Dibujo realizado por Ingrid Castro U.).
Técnicas para el diagnóstico del patógeno estudiado
En cámara húmeda aparece sobre los vasos a las 24 horas un micelio blanco algodonoso.
En PDA el aspecto de la colonia es variable, en general micelio algodonoso de crecimiento
rápido con pigmentación de cultivos desde el blanco al violeta, pasando por distintos tonos
de rosa, salmón y avinado. En ClK+hojas de clavel se observan las características
morfológicas descritas para Fusarium oxysporum: •Microconidios siempre presentes
ovoelípticos, cilíndricos, unicelulares y/o bicelulares, hialinos que se forman en falsas
cabezas sobre monofiálidas laterales, simples y cortas. •Macroconidios de los
esporodoquios son fusoides, con célula basal pedicelada, de tamaño medio, con 3-5
tabiques, siempre menos de 7 y una anchura menor o igual a 4 µm. •Presencia de
clamidosporas (aunque a veces tarda en formarlas), solitarias o en cortas cadenas,
intercalares o terminales (Merino & Fernández, 2010).
OBSERVACIÓN MICROSCOPIO (ESTRUCTURAS REPRODUCTIVAS)
Las especies del género pueden producir tres tipos de esporas asexuales llamadas
macroconidios, microconidios y clamidosporas. El macroconidio es la espora principal en
la caracterización. Su forma y tamaño varían según la especie (figura 2). Los
macroconidios pueden originarse a partir de estructuras especializadas, los esporodoquios,
como así también en monofiálides, polifiálides o directamente a partir del micelio aéreo. La
presencia de una célula basal en forma de pié se considera característica de Fusarium spp.
El microconidio es un carácter taxonómico primario y se considera su presencia o ausencia.
Si está presente las características consideradas son forma, modo de formación, si están
solos, en falsas cabezas, cabezas o cadenas. Pueden formarse en el micelio aéreo a partir de
mono o polifiálides pero no en esporodoquios. Otros caracteres taxonómicos primarios son
clamidosporas, conidióforos y mesoconidios. Para observar este tipo de características
suelen usarse medios naturales como el agar hojas de clavel (CLA) y agar nutriente
sintético (SNA). Este tipo de identificación requiere de una cuidadosa observación y un
grado de conocimiento de taxonomía para distinguir los patógenos a nivel de especie. Esto
ha llevado a un creciente interés en la obtención de métodos más sensibles para la
identificación de especies de Fusarium en el material vegetal infectado, incluyendo las
técnicas que implican el diagnóstico molecular (Departamento de microbiología UNLP,
2010).
AISLAMIENTO DE HONGOS
Porciones
Examinar el Lavado Con agua
•Sintomas Corte de con tegido
material
tegido.
de de la llave
vegetal. •Signos enfermo y tegidos. y jabón.
sano.
•Hipoclorito
•Empleando de sodio al •Alcohol
un trozo de Sumergi 0,5%. Sumergi antiseptico
Escurrir gasa. r los •Durante un r los al 70%.
•Sobre un trozos minuto. trozos •Durante 1
recipiente. Escurrir minuto.
nuevamente
Retirar toda
Tres veces Flamead Constanteme
Lavado Secado humedad con
muy bien, con nte en la
papel o de
de los agua de los absorvente
llama del
destilada material mechero
trozos trozos (servilletas
esteril. metalico. (esterilizado)
esterilizadas).
Todos los aislamientos obtenidos de Fusarium spp. Son finalmente transferidos a cajas de
Petri con medio APG y CLA para observar características macroscópicas y microscópicas,
respectivamente (Departamento de microbiología UNLP, 2010).
PRUEBAS DE PATOGENICIDAD.
2) Se debe aislarse y obtener un cultivo axénico del microorganismo en estudio y anotar sus
características (morfológicas, culturales, bioquímicas entre otras).
4) El microorganismo fitopatógeno debe ser reaislado otra vez en cultivos axénicos y sus
características deberán ser exactamente igual a las del paso dos (Hernández, 2010).
MATERIALES Y METODOS
Las prácticas para aislamiento y purificación del hongo se realizaron en los laboratorios de
la Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia (UPTC) ubicada a 5°32′25″ norte y
73°21′41″ oeste, a una altura de 2.690 msnm, bajo condiciones de laboratorio. El material
biológico utilizado del cual se tomaron las muestras del hongo Fusarium oxysporium,
fueron dos tubérculos de papa Solanum tuberosum obtenidos de una plaza de mercado a las
afueras de la universidad.
Materiales:
Muestras de tejidos enfermos recién traídas del campo.
Hipoclorito de sodio al 0.5%
Alcohol antiséptico al 70%
Agua destilada estéril
Gasas y papel de filtro esterilizado.
Cajas petri con medio de cultivo PDA-A
Pinzas
Mecheros
Vinipel
Marcador permanente (vidrio)
Recipiente de vidrio estéril
Procedimiento.
Procedimiento
Porciones
Examinar el Lavado Con agua
•Sintomas Corte de con tegido
material
tegido.
de de la llave
vegetal. •Signos enfermo y tegidos. y jabón.
sano.
•Hipoclorito
•Empleando de sodio al •Alcohol
un trozo de Sumergi 0,5%. Sumergi antiseptico
Escurrir gasa. r los •Durante un r los al 70%.
•Sobre un trozos minuto. trozos •Durante 1
recipiente. Escurrir minuto.
nuevamente
Retirar toda
Tres veces Flamead Constanteme
Lavado Secado humedad con
muy bien, con nte en la
papel o de
de los agua de los absorvente
llama del
destilada material mechero
trozos trozos (servilletas
esteril. metalico. (esterilizado)
esterilizadas).
Materiales:
Alcohol antiséptico al 70%
Agua destilada estéril
Gasas y papel de filtro esterilizado.
Cajas petri con medio de cultivo PDA-A
Pinzas
Mecheros
Vinipel
Marcador permanente (vidrio)
recorte toalla
de papel, dos como 2 Colocarlos al
ASÉPTICAMEN colóquelo en 3PORTA base y un lado de los
TE ultimo
CUBREO cubre
el fondo de OBJETOS
atravezado. BJETOS. objetos.
una caja de
Petri.
Materiales:
Cristal violeta
Alcohol acetona
Safranina
Porta y cubreobjetos
Materiales:
Proceso: Con asa redonda realizar un raspado de la bacteria y sembrar en cada medio luego
se debe flamear muy bien cada medio y finalmente marcar y sellar con vinipel
Preparación de la suspensión.
La suspensión de bacterias y de hongos debe ser preparada con agua destilada estéril, es
recomendado agitar los tubos vigorosamente durante 5 minutos. La inoculación debe
realizarse muy rápido menos de dos horas la suspensión debe ajustarse en una
concentración entre 106 y 106 bacterias/ml. Para hongos 104 y 105 hongos/ml. Una
concentración impide el estableciemito de bacerial y hongos.
recorte toalla
de papel, dos como 2 Colocarlos al
ASÉPTICAMEN colóquelo en 3PORTA base y un lado de los
TE ultimo
CUBREO cubre
el fondo de OBJETOS
atravezado. BJETOS. objetos.
una caja de
Petri.
con la jeringa
Realice un INOCUL con una
INMERCI en hipoclorito triple lavado concentració
ACION
ON Y de sodio por LAVADO con agua n de la
un 1 minuto destilada DEL suspensión
LAVADO
estéril. HONGO sobre
tuberculos.
Coloque los
INOCULA tuberculos en
MONTEGE EN En el fondo de la caja colocar servilletas
CION las cajas
CAJAS estériles y humedecer con agua destilada
DEL plásticas
PLASTICAS estéril para favorecer la infección.
HONGO previamente
desinfectadas
Materiales:
Suelo de campo
Tamiz
pañuelos desechables
frasco con tapa
Recipiente de agua
Agua
plato de decantación
portaobjetos
cubreobjetos
Proceso: Agite la muestra de suelo en un cubo de agua los nematodos quedan suspendidos
en el agua Trasvasar el agua a través de un tamiz de 1000 micras de abertura (A) a un
segundo cubo (2). Los nematodos pasan a través del tamiz. Las partículas minerales quedan
en el primer cubo. Los materiales gruesos son retenidos por el tamiz. Filtre el agua del
segundo cubo por el tamiz de 53 micras de abertura (6). Muchas partículas de tierra pasarán
a través del tamiz. En este tamiz quedan retenidos los nematodos Junto con partículas finas.
Al residuo que queda en el segundo cubo se le agrega agua, se agita y se pasa nuevamente a
través del tamiz de 53 micras de abertura. Este proceso de lavado se repite 3-4 veces. Lave
el tamiz de 53 micras de abertura con una corriente de agua a baja presión con et objeto de
eliminar las partículas más finas. Recoja en un vaso, por lavado, los nematodos retenidos en
el tamiz de 53 mieras de abertura. Deposite la suspensión de nematodos en un tamiz con
pañuelos faciales humedecidos se coloca en un plato colector durante 48 horas y finalmente
se examinan en un microscopio o estereoscópico. Su observación puede obstaculizarse por
la abundante cantidad de partículas finas que acompañan a los nematodos.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN
Imagen 1: Medio de cultivo sin presencia de R. solani y medio de cultivo roto (Fuente
propia)
Imagen 2: (posible) Hongo Fusarium
oxiporum. (Fuente propia)
Después del tiempo de incubación, se realizó una caracterización morfológica sencilla del
hongo dentro de la caja Petri; donde en la figura 2 se evidencia el crecimiento de una masa
algodonosa de color blancusca algo azul o violeta muy pálido correspondiente al hongo
fusarium oxysporum. Se veía micelio aéreo que sobresalía del medio de cultivo y
desbordaba del cubre objeto. Lo anterior concuerda con una serie de características para
identificación de hongos propuesta por (Cañedo & Ames, 2004) en su manual.
Después de abrir la caja de Petri frente a los mecheros y remover los cubre objetos y
descartar el medio de cultivo para montarlos en las nuevas láminas; observamos las
características microscópicas del hongo, Figura 3; donde se observa un tipo de micelio
septado y esparcidas algunas clamidiosporas que tienen una forma elipsoidal; lo cual
corresponde en similitud a lo encontrado por (Quilambaqui, 2005) en un trabajo realizado
en realizado en cinco municipios de Guanajuato México que consistió en Aislamiento e
identificación de especies de Fusarium spp asociadas al declinamiento del espárrago
(Asparagus officinalis L.); en donde las colonias identificadas como F. oxysporum
desarrollaron micelio de color violeta a púrpura con macroconidios, clamidosporas
esféricas y microconidios producidos en fiálides cortas y ramificadas Figura 4.
Se observó que el medio de cultivo fue infectado con penicillium en pequeñas cantidades,
sin embargo, la bacteria si se desarrolló obteniendo las siguientes características:
TINCIÓN DE GRAM
Se puede determinar cómo bacterias gram negativas debido a su coloración rosa, por otra
parte, probablemente haya presencia de dos tipos de bacterias, una las que toman forma
alargada y la otra son visibles como puntos que se encuentran muy agrupados.
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las
diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula
bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo, así como para prevenir la lisis
osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el
peptidoglicano. La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas
interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80% -
90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-
negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de
peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos,
lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa
es peptidoglicano (Santambrosio, Ortega, & Garibaldi, 2009)
KB
Negativo
Pseudomonas
AGAR PECTINA
Negativo
Xanthomonas
YDC
Positivo
Erwinia
PRUEBAS DE PATOGENESIDAD
Teniendo el cultivo puro del hongo re realizo la prueba de patogenicidad donde se cumplió
con los cuatro postulados de Robert Koch en 1882, los cuales fueron usados para
verificar la hipótesis de que el patógeno aislado (Fusarium oxysporum) efectivamente
es el causante de la enfermedad de la pudrición húmeda en tubérculos de papa
pardo pastusa
Luego de varios días (4) de haber realizado el inoculo del patógeno (Fusarium oxysporum)
en el hospedero que fueron los tubérculos de papa (Solanum tuberosum L.) variedad pardo
pastusa de la cual también se realizó el aislamiento del hongo; se logró observar los
siguientes síntomas:
Síntomas Macroscópicos del Tejido Infectado
Color del tejido: Marrón oscuro
Forma y tamaño de la lesión: Prácticamente todo el tubérculo fue infectado y puesto
en descomposición a causa del fitipatogeno.
Olor: Era fuerte, desagradable y podía sentirse a una distancia considerable.
Consistencia del tejido: El tejido presentó un aspecto húmedo y suave
correspondiente a la pudrición característica que produce el hongo en su hospedero.
Presentó micelio aéreo de color blanco sobre el tejido de los tubérculos, así como también
la presencia de microconidios; lo que concuerda con lo hallado por (Garcés de Granada,
Martha, Bautista, & Valencia, 2001) en donde manifiestan que morfología de las colonias
es muy variable y puede presentar dos tipos: una de tipo micelial caracterizada por la
producción de abundante micelio aéreo, algodonoso, con una coloración variable, de blanco
a rosado durazno, pero usualmente con un tinte púrpura o violeta más intenso en la
superficie del agar y pocas microconidias (Booth, 1970) y una de tipo pionotal con la
formación de poco o ningún micelio aéreo y abundantes microconidias.
Imagen 3: Papas sanas. Fuente propia Imagen 4: Papas inoculadas con Fusarium
Oxysporum. Fuente propia
EXTRACCIÓN DE NEMATODOS
NEMATODO: Pratylenchus
Características:
El nematodo lesionador o de los prados se encuentra en todas partes del mundo, donde
ataca a las raíces de todas las clases de plantas, como es el caso de los cultivos del campo,
los cultivos de cereales, cultivos de hortalizas, árboles frutales y muchas plantas de ornato.
La gravedad de los daños que ocasiona el nematodo lesionador varía con el cultivo atacado
y consisten en una reducción o inhibición de su raíz causada por la formación de lesiones
locales en las raíces jóvenes, que se producen antes de que los hongos y bacterias
secundarios ocasionen su pudrición. Debido a los daños que sufre la raíz, las plantas
afectadas muestran un crecimiento deficiente, dan poco rendimiento y finalmente mueren.
(Agrios, 1995)
Sintomas: Las plantas herbáceas hospedantes susceptibles que son afectadas por el
nematodo lesionador se quedan achaparradas y muestran clorosis, como si estuvieran
sufriendo deficiencias minerales o falta de agua. Con frecuencia, en una sola área son
afectadas varias plantas, lo que hace que se vean manchas de plantas con crecimiento
deficiente y un color verde amarillento que puede observarse a gran distancia. Conforme
transcurre la estación, el achaparramiento de las plantas avanza, el follaje se marchita
durante los días cálidos del verano y las hojas adquieren un color café amarillento. Con
frecuencia, los síntomas consisten en árboles aislados o manchas de árboles que
gradualmente dejan de prosperar y dan poca cosecha. Las hojas son de menor tamaño y de
color verde opaco o amarillo. Las ramas terminales pueden perder sus hojas
prematuramente y sufrir muerte descendente. El aspecto total de los árboles afectados
indica que están debilitados y se encuentran en decadencia. Las manchas de árboles
afectados pueden aumentar lentamente de tamaño, aunque eso sucede más bien durante un
período prolongado. (Agrios, 1995)
Desarrollo de la enfermedad. Las larvas y los adultos del género Pratylenchus penetran en
las raíces comúnmente en sentido radial por cualquier punto (figura 15-11 B). El nematodo
penetra intracelularmente cuando introduce con fuerza y en forma sostenida su estilete y su
cabeza en las células de la raíz, que al parecer sufren ablandamiento y ruptura de su pared
celular. Lasparedes celulares y el citoplasma adherente comúnmente adquieren un color
café claro y toman el aspecto de pequeñas manchas decoloradas unas cuantas horas después
de producidala inoculación. Los nematodos se desplazan por la corteza, donde se alunen tan
y reproducen. La endodennis no sufre daños, aun cuando los nematodos llenen totalmente
el área comprendida entre la endodennis y la epidermis. La necrosis de las células corticales
sigue a la trayectoria de los nematodos, pero el manchado de las células vecinas varía con
la planta hospedante. En ocasiones, sólo son afectadas 162 células a cadalado de los túneles
que abre el nematodo, pero en otras ocasiones la lesión se extiende hasta más de la mitad de
la circunferencia de la raíz. La zona de la capa endodérmica adyacente al
nematodo adquiere también un color café oscuro que se extiende hasta abarcar grandes
grupos de células. Conforme el nematodo continúa alimentándose de las células corticales,
las paredes celulares se degradan y aparecen cavidades en la corteza, cuyas paredes en
ocasiones se encuentran revestidas por depósitos de color café. (Agrios, 1995)
IDENTIFICACIÓN DE VIRUS
CONCLUSIONES
Se determinó gracias a la tinción de gram que la bacteria aislada se clasifica como gram
negativa, también se logró evidenciar que se desarrolló el medio de cultivo YDC donde
se encontró la bacteria Erwinia lo cual se constató con la literatura respecto a los
síntomas que esta bacteria produce y que efectivamente fueron los mismos presentes en
el material vegetal trabajado.
Se logró la visualización de los síntomas y signos que prentaban los tubérculos de papa,
diagnosticando según las características observadas que se trataba del patógeno
Rhizoctonia solani.
No se logró en un segundo intento el aislamiento y purificación del hongo Rhizoctonia
solani obtenido del tubérculo de papa Solanum tuberosum, en un medio de cultivo
acidulado con ácido láctico.
A la hora de realizar estos procedimientos es indeispensable contar con la asepsia
necesaria y realizar los procedimientos adecuadamente, con el fin de evitar otros
resultados futuros negativos.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Agrios G. 2005. Plant Pathology. (5thed.) Published Elsevier. United States of America.
948 p.
Arias, Y., Aspectos generales de la interacción Fusarium oxyporum F. sp. Lycopersici-
TOMATE, 2012, disponible en:
https://www.researchgate.net/publication/262784860_ASPECTOS_GENERALES_DE_LA
_INTERACCION_Fusarium_oxysporum_f_sp_lycopersici-TOMATE
Barrientos, J., & Ñústez, C. E. (2014). Difusión de seis nuevas variedades de papa en
Boyacá y Cundinamarca (Colombia) entre 2003 y 2010. Revista Colombiana de
Ciencias Horticolas, 8(1), 126–147.
Buritaca, P. Las enfermedades de las plantas y su ciencia en Colombia. Universidad
Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Departamento de Agronomía,
Medellín. 1999
Burgess L.W. Tesoriero L., and Phan H.T., K. T. E. (2008). Diagnostic manual for plant
diseases in Vietnam. ACIAR Monograph, 129, 210.
Caracuel, Z., A. L. Martínez-Rocha, A. Di Pietro, M. P. Madrid & M. I. G. Roncero, (2005)
Fusarium oxysporum gas1 encodes a putative beta-1, 3-glucanosyltransferase required
for virulence on tomato plants. Molecular plant-microbe interactions 18: 1140-1147.
Connik, W.1.,DJ. Daigle, A.B. Pepperman, K.P. Hebber, R.D. Lumdenr, T.W. Anderson Y
D.C. Sands. Preparation of stable granular formulations containing Fusarium oxysporum
pathogenic to narcotic plants. Biological control 13: 79-84.1998.
Farr, D.F.,G.F.Bills, G.P. CHamurris Y A.Y. Rosman. Fungi on plants and plant products
in the United States. American Phytopathological Society Press. St. Paul, Minnesota. 1989
Fernández Olmos, A., García de la Fuente, C., Saéz Nieto, J. A., & Valdezate Ramos, S.
(2010). Metodos de Identificacion Bacteriana en el Laboratorio de Microbiología.
Procedimientos en Microbiología Clínica (Vol. 37).
https://doi.org/10.1016/j.eimc.2011.03.012
Hernández O. 2010. Detención y caracterización del agente causal del tizón foliar en Teca
(Tectona grandis L. F.) en Huimanguillo, Tabasco. Tesis de Ingeniero Forestal. Universidad
Autónoma Chapingo. México. 63 p.
Jain, S., K. Akiyama, K. Mae, T. Ohguchi & R. Takata, (2002) Targeted disruption of a G
protein alpha-subunit gene results in reduced pathogenicity in Fusarium oxysporum.
Current genetics 41: 407-413.
Jones, lB., IP. Jones, RE. Stall y T.A. Zitter Compendium oftomato diseases. The American
Phytopathological Society Press. St. Paul. 1997
Merino, S., & Fernández, A. (2010). Laboratorio de Diagnóstico del Servicio de Sanidad
Vegetal de Extremadura. Grupo de Trabajo Fitosanitario De Laboratorios., 342, 2–3.
Namiki, F., M. Matsunaga, M. Okuda, I. Inoue, K. Nishi, Y. Fujita & T. Tsuge, (2001a)
Mutation of an arginine biosynthesis gene causes reduced pathogenicity in Fusarium
oxysporum f. sp. melonis. Molecular Plant-Microbe Interactions 14: 580-584.
Nelson, P.E. Taxonomy of fungi in the genus fusarium with emphasis on fusarium
oxysporum.p.27-35. In R.C. ploetz (ed.). fusarium wilt of banana. American
Phytopathological Society Press. St. Paul.
1990.https://es.slideshare.net/rogerasalmeron/clase-13-agentes-etiologicos-de-
dermatofitosis-2015
Ospina-Giraldo, M. D., E. Mullins & S. Kang, (2003) Loss of function of the Fusarium
oxysporum SNF1 gene reduces virulence on cabbage and Arabidopsis. Current genetics 44:
49-57.
Rosales, R. C. P. & A. Di Pietro, (2008) Vegetative hyphal fusion is not essential for plant
infection by Fusarium oxysporum. Eukaryotic cell 7: 162-171
Sands, D.e., EJ. FORD, R.V. MILLER, B.K. SALL Y, M.K. Mccarty,T.W.nderson,M.v.
Weaver, C.T.Morgan, A.L. Pilgeram Y t,c Darmilong. Characterization ofa vascular wilt of
Erythroxylum coca caused by Fusarium oxysporum f.sp erythroxyli Forma Specialis Nova.
Plant Disease 81:501-504.1997.
Varela, G., & Grotiuz, G. (2002). Fisiología y metabolismo bacteriano. Uruguay, Editorial
Cefa, 43–58. Retrieved from
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/FisiologiayMetabolismoBacteriano.pdf
Van der DoesHC, DuyvesteijnRG, Goltstein PM,van Schie CC, Manders EM,
Cornelissen BJ, et al. Expression of effector gene SIX1 of Fusarium oxysporumre quir es
liv ingpl antcells. Fu nga l Ge net Biol. 2008; 45( 9):1257- 1264
Santa C, Marín M, Díez MC. Identificación del agente causal de la pudrición basal del tallo
de vainilla en cultivos bajo cobertizos en Colombia. Rev Mex Micol. 2012;35(1):23-34.
Wilt, V., & In, B. (2014). Estudio De La Patogenicidad De Aislados De Fusarium Spp .,
Asociados a La Marchitez Vascular Del Babaco En Loja- Ecuador, 3, 61–72.
Tapia, C., Amaro, J. (2014). Género Fusarium, Retrato Microbiológico. Rev. Chilena
Infectol. 31(1): 85-86.
Nelson, P. E., Dignani, M. C., & Anaissie, E. J. (1994). Taxonomy, biology, and clinical
aspects of Fusarium species. Clinical Microbiology Reviews, 7(4), 479 504.
Cañedo, V., & Ames, T. (2004). Manual de laboratorio para el manejo de hongos
entomopatógenos. Cip. https://doi.org/cip@cgiar.org, www.cipotato.org
Cortes-valle, E. (2015). Aislamiento e identificación de Fusarium sp . a partir de planta de
melón injertada en el municipio de Colima , Col ., (October).
Quilambaqui, M. (2005). Aislamiento e Identificación de Especies de Fusarium spp
Asociadas al Declinamiento del Espárrago ( Asparagus officinalis L .) en Cinco
Municipios de Guanajuato , México. Rev. Tecnologica ESPOL, 18(5), 135–140.
Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia Facultad de Ciencias Agropecuarias
Ingeniería Agronómica. (n.d.).