Extraccion de ARN
*Si las muestras tienen un alto
Primeramente se sacrificara el
ratón siguiendo las tecnicas
adecuadas para evitar el
sufrimiento del animal.
Posteriormente agregar 0.2 mL de
Cloroformo por 1 mL de Trizol e
incubar por alrededor de 2-3 min.
Tomar una muestra de tejido del
animal y agregar 1 mL de rectivo
de Trizol por cada 100 mg de
tejido y homogenizar.
Posteriormente centrifugar la
muestra durante 15 minutos a
12,000 rpm a 4 °C.
( La mezcla se separa en un rojo
inferior de fenol-cloroformo y una
fase superior incolora)
contenido de grsa, se debe
Una vez homogenizada la
centrifugar durante 5 min a
muestra se debe incubar por 5
12000 rpm a 4-10 °C y uego
min a 25 °C
transferir el sobrenadante a un
tubo nuevo.
Finalmente volver a transferir la
.Transferir la fase acuosa que fase acuosa que contien el ARN a
contiene el ARN a un nuevo tubo. un nuevo tubo inclinando el tubo
a 45 ° y pipeteando la solución
 Aislamiento de ARN

*Si la muestra inicial es

pequeña (<106 células o <10
mg de tejido), agregue 5-10 μg
de glucógeno libre de RNasa
como transportador a la fase
acuosa.
Agregar 0.5 ml de isopropanol El precipitado de ARN total
a la fase acuosa, por 1 ml de Centrifugar durante 10 minutos forma un sedimento blanco
reactivo Trizol e incubar a 12,000 rpm a 4 °C. similar al gel en el fondo del
durante 10 min. tubo.

Desechar el sobrenadante con

ayuda de una micropipeta.

Nota: El glucógeno se coprecipita con el ARN, pero no interfiere con las aplicaciones posteriores.
 Lavado de ARN

Resuspender el sedimento
en 1 ml de etanol al 75%
por 1 ml de reactivo Trizol.
Homogenizar la muestra
brevemente con ayuda de Desechar el sobrenadante
un Vortex y posteriormente con ayuda de una
centrifugar durante 5 min a mirocpipeta
7500 rpm a 4 °C.

Aspirar o secar al aire el

sedimento de ARN al
rededor de 5 -10 min.

Nota: El ARN se puede almacenar en etanol al 75% durante al menos 1 año a

-20 ° C, o al menos 1 semana a 4 ° C.
 Solubilizar el ARN

Resuspender el sedimento
en 20-50 μL de agua libre de
Posteriormente incubar en Proceda a aplicaciones
RNasa, EDTA 0,1 mM o
un baño de agua a 55-60 ° C posteriores, o almacene el
solución de SDS al 0,5%
durante 10-15 minutos. ARN a -70 ° C
pipeteando hacia arriba y
hacia abajo.

*
Nota: No disuelva el ARN en SDS al 0,5% si el ARN se va a utilizar en reacciones enzimáticas posteriores.