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I
ACEPTACIÓN DE LA TUTORA
Por la presente dejo constancia que he leído la propuesta del trabajo de titulación,
presentada por la señorita Diana Estefanía Delgado Güiz cuyo tema es: Evaluación del
rendimiento, calidad y actividad antioxidante del aceite esencial de cáscara de
naranja fresca de Citrus maxima (Burm.) Merr. Familia Rutaceae, obtenida por dos
métodos de extracción, y en tal virtud acepto asesorar al estudiante en calidad de Tutora
durante la etapa del proyecto de investigación e informe final del trabajo de investigación,
hasta su correspondiente presentación y evaluación.
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Firma
CI: 1710993849
II
Índice de contenido
Contenido
INTRODUCCIÓN ............................................................................................ VI
CAPÍTULO II 1 . El problema .................................................................... VII
1.1 Planteamiento del problema ............................................................. VII
1.2 Formulación del problema ............................................................... VII
1.3. Objetivos ........................................................................................... VIII
1.3.1. Objetivo general. .......................................................................... VIII
1.3.2. Objetivos específicos. .................................................................. VIII
1.4 Justificación e importancia .................................................................. VIII
Capítulo II 2. Marco teórico ........................................................................ 10
2.1. Antecedentes de la investigación ..................................................... 10
2.2. Fundamentación teórica ....................................................................... 11
2.2.1. Aceite Esencial .............................................................................. 11
2.2.2. Distribución de aceites esenciales en su estado natural................ 14
2.2.3. Naranja, materia prima en la industria cítrica ................................. 15
2.2.4. Aceites esenciales cítricos y su importancia en la industria ......... 15
2.2.5 Obtención de aceites esenciales .................................................... 16
2.2.6 Métodos de extracción ................................................................... 16
2.2.7 Descripción botánica de la naranja. ................................................ 17
2.3. Hipótesis............................................................................................... 17
2.3.1. Hipótesis alternativa:...................................................................... 17
2.3.2. Hipótesis nula: ............................................................................... 17
2.4. Sistema de variables ............................................................................ 18
ETAPA 1:.................................................................................................... 18
2.4.1. Variables dependientes. ................................................................ 18
2.4.2. Variables independientes............................................................... 18
ETAPA 2:..................................................................................................... 18
2.4.1. Variable dependiente. .................................................................... 18
2.4.2. Variables independientes............................................................... 18
Capítulo III 3................................................................................................... 19
3. Metodología de la investigación .............................................................. 19
3.1. Diseño de la investigación ................................................................ 19
III
3.2. Metodología ...................................................................................... 19
3.3. Materiales y reactivos ........................................................................... 20
3.3.1. Materiales. ..................................................................................... 20
3.3.2. Equipos. ......................................................................................... 20
3.3.3. Reactivos. ...................................................................................... 20
3.4. Procedimientos.................................................................................... 20
3.4.1 Muestreo ......................................................................................... 20
3.4.2. Extracción de los aceites esenciales. ............................................ 21
3.4.3 Método de destilación por arrastre de vapor ................................... 21
3.4.4. Método de expresión ..................................................................... 22
3.4.5.Perfil cromatográfico. ...................................................................... 24
3.4.6. Actividad Antioxidante ................................................................ 25
3.4.5. Diseño experimental ............................................................................ 26
3.5.1Diseño de Bloques Completamente al Azar (DBCA). .......................... 26
3.5.2. Etapa 1. ............................................................................................. 26
3.5.3. Etapa 2 .............................................................................................. 28
3.6. Técnicas de procesamiento de datos (análisis estadístico).................. 28
3.7. Matriz de operacionalización de variables ............................................ 29
Capítulo IV ..................................................................................................... 31
4.1. Marco administrativo ........................................................................... 31
4.2. Recursos .............................................................................................. 31
4.3. Presupuesto ......................................................................................... 31
4.4. Cronograma de actividades.................................................................. 32
Bibliografía .................................................................................................. 33
ANEXOS ......................................................................................................... 34
5.1 Anexo 1: Esquema causa- efecto.......................................................... 34
5.2Anexo 2: Diagrama de flujo para la extracción del aceite esencial ......... 35
5.3. Anexo: Tablas Militari Estándar ............................................................ 36
IV
Título: Evaluación del rendimiento, calidad y actividad antioxidante del aceite esencial de
cáscara de naranja fresca de Citrus maxima (Burm.) Merr. Familia Rutaceae, obtenido por
dos métodos de extracción.
Abstract
A large part of the organic waste from the food industry do not have a purpose beyond
being, a waste. The orange peel remains as residue in a considerable amount after the
extraction of juice from the fruit. The aim of the research is to optimize the use of this
residue in an effective manner. It is planned to carry out the assessment of performance,
quality and antioxidant activity of the essential oil of orange peel fresh Citrus (Burm.) Merr.
Family Rutaceae, obtained by two methods of removal. The methods are: steam distillation
and expression. will identify which of the two extraction methods offer greater oil yield of the
peels of fresh orange and subsequently will analyze the antioxidant activity of oil extracted
by the method DPPH, to determine which is of better quality.
V
INTRODUCCIÓN
La industria alimenticia es un gran productor de residuos orgánicos, en su actividad diaria
se generan toneladas procedentes del procesado al que se someten productos como
vegetales y frutas. La principal dificultad es deshacerse de ellos, además ocupar mucho
espacio, luego de cierto tiempo genera olores y gases durante su descomposición, este
tipo de problemática el sector dedicado a la tecnología alimentaria busca una salida
provechosa a este tipo de residuos. Una de ellas apunta al aprovechamiento de
subproductos obtenidos de los residuos mediante la extracción de distintos ingredientes
que puedan aplicarse en la industria alimentaria. De esta manera, frutas y vegetales que
son algunos de los productos cuyos restos contienen sustancias, tales como ácidos
orgánicos o aceites esenciales tienen un gran interés en la producción alimentaria.
Uno de los residuos que tiene gran cantidad al final el proceso industrial en la elaboración
de jugo de naranja es la cáscara de naranja, el cual puede ser considerado como la
materia prima ideal para la obtención de aceite esencial y demás sustancias derivados de
este.
Las industrias que utilizan aceites refinados o sus derivados, se ven obligados a importar
estos productos, debido a que en el Ecuador no se producen este tipo de aceites. Un
ejemplo claro puede ser la industria dedicada a la confitería en donde se utiliza aceites
esenciales (AE) de menta refinado. De manera se puede confirmar que los AE proveniente
de un materia prima residual, producida en el país puede ser aprovechada de manera más
eficaz.
VI
CAPÍTULO I
1. El problema
1.1 Planteamiento del problema
VII
procesamiento en la elaboración de jugo de naranja, se plantea las siguientes
interrogantes:
Preguntas directrices:
1.3. Objetivos
VIII
residuos representa costos significativos y a menudo se deduce mal por las empresas,
(Sahraoui, Abert Vian, El Maataoui, Boutekedjiret, & Chemat, 2011).
La obtención de una adecuada tecnología que permita transformar estos residuos y
subproductos orgánicos en productos que generen un beneficio económico y
medioambiental, es clave para obtener su máximo potencial, y no simplemente la
Alimentación animal de forma directa o su gestión final a vertedero.
Muchos consumidores están exigiendo alimentos sin lo que ellos perciben como
productos químicos artificiales y perjudiciales, incluyendo muchos usados como
antimicrobianos y conservantes en los alimentos. En consecuencia, el interés por los
antimicrobianos más naturales, no sintéticos, como posibles alternativas a los
antimicrobianos convencionales para extender la vida útil y los patógenos transmitidos por
los alimentos ha aumentado, (Rivera Calo, Crandall, O´Bryan, & Ricke, 2015).
IX
Capítulo II
2. Marco teórico
2.1. Antecedentes de la investigación
Las flavanonas, flavonas y flavonoles son los flavonoides presentes en los cítricos.
Aunque las flavonas y los flavonoles se han encontrado en bajas concentraciones en
comparación con las flavononas, han mostrado ser potentes antioxidantes, secuestradores
de radicales libres o agentes que contribuyen a la acción anticancerígena y
10
cardioprotectora, entre otras. Estos compuestos tienen aplicación en la estabilización de
los alimentos debido a su habilidad de protegerlos contra la peroxidación. Dadas estas
propiedades que pueden aportar dichos compuestos, se plantea la alternativa de utilizarlos
como antioxidantes naturales en grasas y aceites. Por su actividad antioxidante y sus
excelentes funciones biológicas, algunos autores los refieren como sustitutos de los
antioxidantes sintéticos existentes, pudiendo aportar beneficios tecnológicos, científicos,
nutricionales y medicinales. (Mario José Moreno Álvarez, 2004)
11
Tabla I.
Clasificación
12
Tabla II.
13
2.2.2. Distribución de aceites esenciales en su estado natural
Los Aceites Esenciales se encuentran muy difundidos en el reino vegetal, de las 295
familias de plantas, de 60 a 80 producen Aceites Esenciales, entre las cuales 38 crecen en
los trópicos, 8 en los climas templados y tropicales, 17 en clima templado y 24 familias de
plantas habitan en diferentes climas.
Los Aceites Esenciales se obtienen tanto de plantas cultivadas como de plantas
silvestres. Las principales plantas que contienen Aceites Esenciales, se encuentran en las
fanerógamas distribuidas en unas sesenta familias como: compuestas, labiadas, lauráceas,
mirtáceas, rosáceas, rutáceas, umbelíferas, pináceas.
La cantidad y la composición del aceite esencial varían de una especie a otra y dentro de
los mismos géneros de la planta.
Los aceites esenciales, se encuentran en la planta entera o en diferentes partes de la
planta, como se encuentra a continuación en forma gráfica:
14
● Frutos: Alcaravea, cilantro, laurel, nuez moscada, perejil, pimienta, etc.
● En semillas: Comino, anís, cardamomo, eneldo, hinojo, cítricos etc. (Andres, 2010)
Los derivados principales del cítrico son los siguientes: a) aceites esenciales: se
emplean en las industrias de perfumes, dulces, alimentos y farmacéutica; b) jugo: por su
alto contenido de nutrientes, se comercializa como jugo fresco, pasteurizado, concentrado,
pulposo y clarificado, así como concentrado en polvo; de una tonelada de naranja se
obtienen, por ejemplo, 20 galones de concentrado a 65 grados Brix; 1.95 kg de aceite
esencial, y 100 kg de alimento para ganado; e) mermeladas y jaleas, y d) cáscara
deshidratada para alimento de ganado y para la obtención de pectinas. (Bancomext, 1993)
15
alcohólicas, especialmente refrescos. Con respecto a esta utilidad se puede citar las
esencias extraídas del naranjo, limón, mentas e hinojo, entre otros. Estas esencias también
se emplean en la producción de caramelos, chocolates y otras golosinas. (Universidad
Politécnica de Madrid, 1998)
16
2.2.7 Descripción botánica de la naranja.
2.3. Hipótesis
17
2.4. Sistema de variables
ETAPA 1:
Caracterización de la materia prima.
18
Capítulo III
3. Metodología de la investigación
3.2. Metodología
El proyecto de investigación se dividirá en dos etapas:
Etapa 1:
● Obtención de aceite esencial de cáscara de naranja fresca de la especie Citrus
maxima (Burm.) Merr. Familia Rutaceae por dos métodos de extracción.
Etapa 2:
● Evaluación de la actividad antioxidante del aceite esencial de cáscara de naranja
fresca de la especie Citrus maxima (Burm.) Merr. Familia Rutaceae, a partir del
aceite de mejor calidad.
19
3.3. Materiales y reactivos
3.3.1. Materiales.
● Vaso de precipitados de 50 mL.
● Probeta de 10 ml.
● Papel aluminio.
● Frascos ámbar de 50 mL.
★ Extracción del aceite esencial
● Cáscara de naranja fresca
3.3.2. Equipos.
● Balanza analítica.
● Equipo de extracción por arrastre de vapor para aceites esenciales.
● Cocineta.
● refrigerador.
● Cromatografía de gases
3.3.3. Reactivos.
● Hexano 96%.
● Agua destilada.
● Estándar bergapteno.
● Estándar linalol.
● Estándar acetato de linalilo.
★ Actividad antioxidante
● solución 0,5 mM de Etanol 96%
● DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidracilo)
● Vitamina C.
3.4. Procedimientos
3.4.1 Muestreo
❖ Definiciones:
● Muestra: Grupo de unidades extraídas de un lote, que sirva para obtener la
información necesaria que permita apreciar una o más características del lote, lo
cual servirá de base para tomar una decisión sobre dicho lote o sobre el proceso
que lo produjo. (INEN 1 750, 2012).
● Lote: Cantidad definida de la partida, que se presume tiene las mismas
características uniformes (la misma variedad, el grado de madurez, frescura, un
mismo tipo o tamaño, calibre, empaque o embalaje), mediante el cual permite
20
estimar la calidad y se somete a inspección como un conjunto unitario. (INEN 1
750, 2012).
❖ Disposiciones generales
● La toma de muestras debe efectuarse en tal forma que las muestras elementales
representen todas las características del lote. Luego de separar las porciones
dañadas del lote contenido en envases, embalajes, cajas, sacos, fundas, etc.,
deben extraerse muestras separadas de las porciones buenas y de las dañadas.
● La toma de muestras debe efectuarse en tal forma que las muestras obtenidas, los
recipientes que las contengan y los aparatos usados en la extracción, estén
protegidos contra cualquier tipo de contaminaciones.
● Tan pronto se realice el muestreo sobre la muestra global o sobre la muestra
reducida, éste debe almacenarse y transportarse en condiciones tales que se eviten
cambios en el producto.
21
● Eliminar de manera manual el endocarpio y material extraño de la cáscara evitando
perder flavedo.
● Cortar con mucho cuidado, evitando perder aceite, la cáscara de naranja para
lograr introducirla en el Balón del equipo de extracción clevenger.
● Pesar la cáscara de naranja.
● Armar el equipo de extracción.
● Antes de comenzar la extracción, colocar 10 ml de hexano (el cual recolectará el
aceite esencial) en el equipo.
● Extraer el aceite esencial por 2 horas aproximadamente.
● Evacuar durante la extracción el agua en exceso, evitando que el equipo se llene.
● Al finalizar el proceso recolectar en un frasco ámbar el hexano con el aceite
esencial.
● Dejar evaporar el solvente orgánico a temperatura ambiente.
● Almacenar a 8 °C.
● Determinar el porcentaje de rendimiento de la extracción del aceite esencial.
22
● Recolectar el aceite esencial obtenido en frascos ámbar de tapa rosca.
● Almacenar a 8 C.
● Determinar el porcentaje de rendimiento de la extracción del aceite esencial.
● Ensayos de identidad
A. Gases. Examinar los cromatogramas que se obtendrá en la prueba de Perfil
cromatográfico. Los picos característicos en el cromatograma que se obtendrá con
la preparación de la muestra deben ser similares a los tiempos de retención de los
picos característicos en el cromatograma que se obtendrá con la preparación de
referencia.
B. Examinar los cromatogramas que se obtendrá en la prueba de Determinación de
bergapteno.
Interpretación 1. El cromatograma que se obtendrá de la preparación de la referencia,
exhibe en el tercio medio una mancha de florescencia amarillo-verdosa que corresponde a
bergapteno. El cromatograma que se obtendrá de la preparación de la muestra exhibe en
el tercio inferior varias bandas de florescencia azul y no presenta una mancha de
florescencia amarillo-verdosa que corresponde a bergapteno.
Interpretación 2. El cromatograma que se obtendrá de ambas preparaciones exhibe en
el tercio medio una mancha de fluorescencia anaranjado-pardusca que corresponde a
linalol. El cronograma que se obtendrá de la preparación de referencia debe exhibir por
debajo de la mancha de linalol una mancha de fluorescencia amarillo verdosa que
23
corresponde a bergapteno. El cromatograma que se obtendrá a partir de ambas
preparaciones debe exhibir en el tercio superior una mancha de fluorescencia anaranjado-
pardusca que corresponde a acetato de linalilo. El cromatograma que se obtendrá de la
preparación de la muestra puede presentar manchas adicionales.
DENSIDAD RELATIVA. Entre 0.842 a 0.850.
ROTACIÓN ÓPTICA. De +94ª a +99ª.
ÍNDICE DE REFRACCIÓN. Entre 1.470 a 1.476.
ÍNDICE DE PERÓXIDO. No más de 20.
3.4.5. Perfil cromatográfico.
❏ Preparación de referencia 1. Disolver 10 µL de α-pineno, 10 µL de β-pineno, 10
µL de sabineno, 20 µL de β-mirceno, 800 µL de limoneno, 10 µL de octanal, 10 µL
de decanal, 10 µL linalol, 10 µL de citral (compuesto de neral y geranial) 10 µL de
valenceno en 1 mL de acetona.
❏ Preparación de referencia 2. Disolver 5 µL de β-pineno en 10 mL de acetona,
tomar una alícuota de 0.5 mL y diluir a 10 mL de acetona.
❏ Preparación de la muestra. Diluir 300 µL del aceite esencial a examinar a 1 mL
con acetona.
❏ Condiciones del equipo. Gas de arrastre de helio, velocidad de flujo 1.0 mL/min;
detector de ionización de flama; columna de sílice fundido, de 30 m x 0.53 mm,
recubierta con macrogol 20 000 (1 µm). Mantener la temperatura de la columna a
50 °C durante 6 min, después aumentar la temperatura en incrementos de 0.25
°C/min hasta 150 °C, incrementar nuevamente la temperatura en incrementos de
0.33°C/min hasta 180 °C y mantener la temperatura durante 14 min; temperatura
del detector e inyector a 250 °C con una proporción de división de flujo de 1:100.
❏ Verificación del sistema. Inyectar 0.5 µL de la preparación de referencia 1.
Registrar el cronograma y medir las áreas de respuesta bajo los picos, la resolución
no es menor de 3.9 entre los picos de β-pineno y sabineno y no es menor a 1.5
entre los picos correspondientes al valenceno y geranial.
❏ Procedimiento. Inyectar 0.5 µL de cada una de las preparaciones. Los
componentes eluyen en el orden indicado en la composición de la preparación de
referencia 1. Registrar los tiempos de retención. Con los tiempos de retención
determinados en el cromatograma de la preparación de la preparación de
referencia 1, identificar los componentes en el cronograma obtenido con la
preparación de la muestra. Los porcentajes están dentro de los siguientes
intervalos:
24
Tabla 3.1 Porcentaje de componentes estándar para análisis cromatográfico de gases.
Limoneno Entre 92 % y 97 %
25
● Preparar diluciones de acuerdo a la siguiente tabla:
Tabla 3.2. Curva para análisis de actividad antioxidante por el método DPPH.
N° 1 1 μL 2.9 mL 99 μL
N° 2 2 μL 2.9 mL 98 μL
N° 3 5 μL 2.9 mL 95 μL
N° 4 10 μL 2.9 mL 90 μL
N° 5 20 μL 2.9 mL 80 μL
N° 6 50 μL 2.9 mL 50 μL
N° 7 80 μL 2.9 mL 20 μL
3. 5. Diseño experimental
3.5.2. Etapa 1.
3.5.2.1. Variables.
Independientes:
Tiempo de extracción.
26
Tipo de solvente.
Tamaño de la muestra
Método de extracción por arrastre de vapor.
Método de extracción por expresión.
Dependientes:
Cantidad de aceite esencial extraído.
3.5.2.2. Hipótesis
𝑯𝟎 : Aceite esencial de naranja obtenido por arrastre de vapor no presenta mayor
rendimiento que el método por expresión.
𝑯𝟏 : Aceite esencial de naranja obtenido por arrastre de vapor presenta mayor
rendimiento que el método por expresión.
Factores de estudio:
cáscara de naranja.
Niveles
Se evaluarán 3 tratamientos.
Factor de Bloque:
Lote de la muestra
Tratamientos
Bloque Factor de estudio Variable respuesta
T1 T2 T3
lote Cáscara de % rendimiento X1 Y1 Z1
naranja
27
lote Cáscara de % rendimiento X2 Y2 Z2
naranja
lote Cáscara de % rendimiento X3 Y3 Z3
naranja
3.5.3. Etapa 2
3.5.3.1. Variables.
Independientes:
Estabilidad del aceite.
Concentración de aceite esencial.
Dependientes:
Actividad antioxidante del aceite esencial.
3.5.3.2. Hipótesis
𝑯𝟎 : La actividad antioxidante del aceite esencial de naranja no presenta un buen
porcentaje de inhibición frente al radical DPPH.
𝑯𝟏 : La actividad antioxidante del aceite esencial de naranja presenta un buen porcentaje
de inhibición frente al radical DPPH.
El análisis estadístico que se aplicará será un análisis de varianza (ANOVA).
Factores de estudio:
28
(Granada, 2010)
29
V. Dependiente Aceite producto del mayor Porcentaje de inhibición
Actividad rendimiento frente al radical DPPH.
antioxidante del
aceite esencial.
30
Capítulo IV
4.2. Recursos
Humanos:
● Investigador
Materiales:
● Materia prima
● Reactivos
● Estándares
Equipos:
● Cromatografía de gases
● Equipo de destilación por arrastre de vapor
● Equipo de prensado para la extracción del aceite esencial
4.3. Presupuesto
Copias $ 50.00
3 resmas de papel bond $ 50.00
Gastos del Proyecto Búsqueda de información $250.00
Impresión del proyecto $300.00
Empastado
31
4.4. Cronograma de actividades
2017 2018
ACTIVIDADES ENERO
NOVIEMBRE DICIEMBRE FEBRER MARZO ABRIL
O
Semanas 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
CAPTURA Y REVISIÓN DE
INFORMACIÓN BIBLIOGRÁFICA X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
DETERMINACIÓN DE LA X X X
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EVALUACIÓN DE RESULTADOS X X X X
REDACCIÓN DE INFORME X X X X X X X
FINAL
DEFENSA ORAL X
32
Bibliografía
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Contribución a su Evaluación por Organismos Internacionales, 295. Retrieved from
http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/11059/Albaladejo.pdf;jsessionid=2E0B8ED
F9DEE61079819B87432833516.tdx1?sequence=1
Andres, M. M. C. (2010). Actividad Antioxidante y Antibacteriana de Aceites Esenciales
Extraídos de Hojas y Frutos de Siparuna Sessiliflora. Pontifica Universidad Javeriana.
Bancomext, S. Y. (1993). La industria de la naranja en México, 222–247.
Extractora, P., & Esenciales, D. E. A. (2009). No Title.
Restrepo, M. (2006). Producción mas limpia en la Industria Alimentaria. Clearn Production,
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Statistik, B. P. (2014). Diseño de Bloques al azar Diseño. Katalog BPS, XXXIII(2), 81–87.
https://doi.org/10.1007/s13398-014-0173-7.2
33
5 ANEXOS
34
5.2 Anexo 2: Diagrama de flujo para la extracción del aceite esencial
Cáscara de
naranja fresca Eliminar endocarpio
cortar Tijera
Cáscara de naranja
Agua Balón de 1
Colocar
Núcleos de Litro
ebullición
Armar el equipo
clevenger
Aprox 2 H
Aceite esencial
Extraer + vapor de agua
Botella
Envasar ambar
Almacenar a 8 °C
35
5.3. Anexo: Tablas Militari Estándar
36