Universidad técnica de Manabí

Facultad de ciencias en la salud

Escuela de laboratorio clínico
Integrantes:
Sánchez Intriago Luis Fernando
Rodríguez Rodríguez Erika Noemy
Mieles Brines Maria Lilibeth
Intriago Nelson Daniel
Docente:
Dr. Hector Quintero
Tema:
Extracción del ADN vegetal
Objetivo general
• Extracción e investigación del material genético (ADN) vegetal
mediante un proceso fácil, pero especifico.

Objetivos especifico
• Brindar información acerca de la estructura y funcionamiento del
ADN.
• Utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un
producto natural.
• Observar la estructura fibrilar del ADN.
2. INTRODUCCIÓN
Las características fisiológicas y bioquímicas de todo ser vivo están
contenidas en sus respectivos genomas. Los genomas de bacterias, hongos,
plantas, animales y algunos virus están compuestos por moléculas de ácido
desoxirribonucleico (comúnmente llamado ADN).
El ADN fue descubierto en 1868 por F. Mies Cher, biólogo suizo, en los
núcleos de las células del pus obtenidas de los vendajes quirúrgicos
desechados y en el esperma del salmón. Lo llamó nucleón, aunque no fue
reconocida hasta 1943, gracias al experimento realizado por Oswald Averió.
La estructura del ADN es una pareja de largas cadenas de nucleótidos. La
estructura de doble hélice del ADN fue descubierta en 1953 por James
Watson y Francis Crick, lo que les valió el premio Nobel en 1962 (Gómez,
2008).

El ADN es una estructura química cuyos elementos fundamentales

(nucleótidos) se organizan de manera lineal generando enormes secuencias
de información. La información que define y codifica un carácter
determinado se denomina gen. Los genes se organizan linealmente y se
agrupan formando estructuras llamadas cromosomas, los cuales pueden
ser vistos bajo el microscopio durante ciertas etapas del ciclo de vida de la
célula. Los genes que posee un individuo en su genoma definen su genotipo.
La expresión del genotipo es afectada en gran medida por el medio
ambiente, determinando así la apariencia o rendimiento de un individuo
(fenotipo). La genética estudia cómo el genotipo y el fenotipo son
transmitidos de padres a hijos y junto con la biología molecular han
desarrollado técnicas de análisis de poblaciones y de individuos que
permiten ubicar, caracterizar y explicar la heredabilidad de genes u otros
fragmentos de ADN (Lewin, 1995) .
El código genético fue un misterio hasta que los biólogos descubrieron la
estructura del ADN como una escalera de caracol. La información se
almacena en el ADN como un código formado por cuatro bases químicas
adenina guanina, citosina y timina.
3.JUSTIFICACIÓN
La Genética es una rama de las ciencias biológicas, cuyo objeto es el estudio
de los patrones de herencia, de la manera en el que los rasgos y las
características se trasmiten de padres a hijos. Los genes se hallan formados
de segmentos de ADN, la molécula modifica la información genética en las
células y controla la estructura, la función y el comportamiento de las
células y puede crear copias casi o exactas de sí mismo (Gómez, 2008).
La linealidad de la molécula de ADN y la consecuente disposición de los
genes en cromosomas hacen posible que genes vecinos se hereden juntos
.Este hecho ,junto con las herramientas experimentales y de análisis, han
permitido generar "mapas”, en los cuales cualquier fragmento de ADN
(marcador molecular) puede ser utilizado como una vía indirecta para
seguir el patrón de herencia de una característica .Los marcadores
moleculares establecen relaciones de vecindad con genes de interés
,determinando su localización dentro del genoma del organismo estudiado
.En Arabi dosis Taliana, la primera planta cuyo genoma fue secuenciado
completamente ,existen alrededor de 25.500 genes. Cada uno de ellos varía
en longitud, teniendo la mayoría de ellos entre 500 hasta varios miles de
nucleótidos. Sin embargo, con base en la información obtenida para A.
Taliana y las estimaciones para otras plantas, se calcula que sólo del15al30
% del genoma contiene secuencias codificantes (genes) .El restante 85 a70
% se distribuye en secuencias reguladoras indispensables para la expresión
de los genes y en secuencias repetidas que varían entre una y miles de
copias por célula. Estas secuencias repetidas se pueden encontrar
agrupadas en regiones particulares del cromosoma (centrómero) o
dispersas a lo largo del genoma (Flavell, 1996) .A la determinación de la
posición de genes particulares, secuencias reguladoras y repetidas dentro
del genoma se le denomina mapeo genético.
4. MARCO TEÓRICO
ADN
El ADN tiene la función de “guardar información”. Es decir, contiene las
instrucciones que determinan la forma y características de un organismo y
sus funciones. Además, a través del ADN se transmiten esas características
a los descendientes durante la reproducción, tanto sexual como asexual.
Todas las células, procariotas y eucariotas, contienen ADN en sus células.
En las células eucariotas el ADN está contenido dentro del núcleo celular,
mientras que en las células procariotas, que no tienen un núcleo definido,
el material genético está disperso en el citoplasma celular.

Propiedades del ADN

El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado ADN, constituye el
principal componente del material genético de la inmensa mayoría de los
organismos, junto con el ARN, siendo el componente químico primario de
los cromosomas y el material con el quLa función Principal del ADN es
mantener a través del código genético, la información genética necesaria
para crear un ser vivo idéntico a aquel del que proviene(o casi similar, en el
caso de mezclarse con otra cadena como es el caso de la reproducción
sexual o de sufrir mutaciones. Las cadenas de polipeptídicas codificadas por
el ADN pueden ser estructurales como las proteínas e los genes están
codificados. En las células eucariotas y en las arqueo bacterias (a diferencia
que en las células procariotas), el ADN siempre se encontrará en forma de
cromatina, es decir asociado fuertemente a unas proteínas denominadas
histonas. Este material se encuentra en el núcleo de las células eucariotas y
se visualiza como una maraña de hilos delgados. Cuando el núcleo celular
comienza el proceso de división (cariocinesis), esa maraña de hilos inicia un
fenómeno de condensación progresivo que finaliza en la formación de
entidades discretas e independientes: los cromosomas. Por lo tanto,
cromatina y cromosoma son dos aspectos morfológicamente distintos de
una misma entidad célula
Tipos de ADN

Su clasificación varía según los especialistas concentrados en el tema.

Generalmente se suele tener en cuenta la estructura y particularidades que
contiene cada tipo de ADN, para así determinar la mejor manera de
agruparlos. A continuación, se expone una de las clasificaciones mas
completas:
-ADN cromosómico

Es el ADN de la célula, en el mismo se almacena la información genética

perteneciente de la misma. Su ubicación depende de la célula en cuestión,
en el caso de las eucariotas se encuentra dentro del núcleo celular y en las
procariontes, en el citoplasma asociado a la cara interna de la membrana
celular.

Se trata de una doble cadena de bases complementarias formada cada una

por nucleótido, cada uno de ellos formados por una base de pirmidina o
purina, azúcar desoxirribosa y un grupo fosfato. El genoma humano esta
constituido por 23 moléculas de ADN con una longitud de entre 50 y 250
millones de bases.

-ADN recombinante o recombinado

Se trata de una unión de secuencias de ADN producida de manera artificial

generalmente de forma in vitro. Estas cadenas provienen de dos
organismos de especies diferentes que no tienen ninguna relación.

Esta técnica es utilizada para manipular el material genético, lo que permite

que sea añadido un nuevo tipo de ADN al organismo, esto genera
modificación en los rasgos o la creación de nuevos. Este procedimiento es
llevado a cabo con diferentes fines, como por ejemplo para tratar algún tipo
de enfermedad o la producción de vacunas. Para esto se busca un
organismo que tenga un ADN de interés y luego se propaga el mismo en
otro organismo, objeto, etc. Esto es muy utilizado como tratamiento de
fertilidad.

-ADN mitocondrial

Este tipo de ADN se refiere al material genético existente en orgánulos de

la célula llamados mitocondrias, los cuales son los encargados de proveer
energía a dicha célula. Este ADN se reproduce por si mismo cuando la célula
eucariota se divide. Se cree que evolutivamente este tipo de ADN desciende
del genoma de las bacterias, las cuales fueron englobadas en s células
eucariotas.
-ADN fósil

Se utiliza en el área de paleontología, generalmente para determinar la

antigüedad de ADN en cuestión, para esto se utiliza una reacción en cadena
de polimerasas lo que permite estudiar los registros a nivel molecular del
ADN encontrado para determinar la vejez del mismo. Con este tipo de
procedimiento se dedujo que ADN del fósil más antiguo encontrado
pertenece a neandertales de no más de 50.000 años.

-ADN superenrollado

Esta molécula tiene como característica principal que esta, como su nombre
lo indica, enrollada o girada sobre si misma. Esto fue descubierto gracias a
los diversos estudios topológicos de la molécula de ADN. Se reconoce que
una secuencia de ADN puede estar en diferentes estados de relajación, es
decir planos, o de manera contraria en varios estados de enrollamiento. El
superen arrollamiento se da como consecuencia de una tensión que sufre
la molécula en su estructura y puede aparecer de forma tanto negativa
como positiva. Esto esta regulado por las enzimas topoisomerasas.
Estructura química
Un día como hoy en 1953 los científicos de la Universidad de Cambridge
James D. Watson y Frances H.C. Crick anunciaban el descubrimiento de la
estructura de doble hélice del ADN. El ácido desoxirribonucleico, conocido
como ADN, fue descubierto en 1869, pero recién en 1943 se demostró su
rol clave en la determinación de la herencia genética. En la década de 1950,
muchos científicos intentaron averiguar la estructura de esta molécula,
entre ellos el químico californiano Linus Pauling, quien propuso un modelo
incorrecto a comienzos de 1953. En la mañana del 28 de febrero de ese año,
Watson y Crick determinaron que la estructura del ADN es un polímero de
doble hélice o una espiral de dos hebras enrolladas entre sí, cada una de
ellas conteniendo una larga cadena de nucleótidos. El descubrimiento de
Watson y Crick fue anunciado oficialmente el 25 de abril de 1953, con la
publicación de su artículo en la revista Natura. A partir de allí se sucedieron
numerosos e importantes avances en el estudio de la biología y la medicina,
entre ellos los alimentos genéticamente modificados, el diseño de
tratamientos para enfermedades tales como el SIDA y la capacidad de
detectar enfermedades hereditarias.

Niveles de organización
Primer nivel: nucleosoma

Esta estructura vista al microscopio se ve como si fuera un collar de perlas

del que las cuentas son los nucleosomas.

El nucleosoma está formado por un octámero de histonas en el que hay dos

subunidades de las histonas H2A, H2B, H3 y H4 de las que sobresale un
extremo amino de aproximadamente 30 aminoácidos que permite la unión
de otras proteínas para las funciones de transcripción, replicación y
reparación. Alrededor de este octámero se arrolla el ADN con dos vueltas
(166 pares de bases aprox). El espaciamento entre las cuentas está formado
por ADN que se llama ADN puente o ADN de unión.
El nucleosoma mide 6 nm y se considera la unidad básica de
empaquetamiento del ADN. Los nucleosomas se vuelven a organizar con la
ayuda de la histona H1 habiendo una por cada nucleosoma.

Segundo nivel: fibra de 30 nm.

El nucleosoma que contiene H1 se pliega en una conformación que se
supone en zigzag (pero también se piensa que en hélice o con interacciones
cruzadas) colocándose próximas a la salida y entrada del nucleosoma; y
cuya apariencia sugiere que los nucleosomas interaccionan mediante
contactos entre sus moléculas H1. Esta fibra que se forma tiene 30 nm de
espesor, en el que se aprecian los nucleosomas. Las histonas H1 se disponen
de manera que forman el eje central sobre el que se arrollan los
nucleosomas. Por cada vuelta de la espiral que forma esta fibra hay seis
nucleosomas. A este arrollamiento de los cromosomas sobre sí mismos se
le llama solenoide.

Tercer nivel: fibra de 300 nm.

Algunos autores proponen que el solenoide a su vez se enrolla en bucles de

300 nm, formando otras estructuras llamadas cronómetros.

Si eliminamos las histonas del cromosoma en metafase mitótica se puede

ver que los cromosomas tienen un esqueleto central densamente teñido.
Desde este esqueleto se proyectan lazos de ADN que comienzan y acaban
en el
esqueleto. Este esqueleto central llamado andamio está compuesto por la
enzima topoisomerasa II (también llamada condensita que enlazan o
desenlazan nudos o lazos en una cadena) y por proteínas SMC (Estructural
Manténganse a Cromosomas o Mantenimiento de la estructura del
cromosoma) en el que parece haber regiones especiales llamadas regiones
de unión al andamio. Para eso, se estima que existen las llamadas zonas SAR
( o Regiones de Unión al Andamio) que son zonas de la fibra de 30nm (asas)
muy ricas en amina y timina para unirse al andamio, dando lugar a una fibra
de 300 nm.

El empaquetamiento en este punto es de 2.000 veces la hebra de ADN.

Cuarto nivel: cromosoma

Se produce por el arrollamiento de la fibra de 300 nm sobre sí misma

formando una espiral y empaquetando el ADN hasta 10.000 veces
formando una cromátida. La unión de dos cromátidas hermanas a través de
las condensitas.

Cromosomas politécnicos y plumosos

Los cromosomas politécnicos o gigantes (miden más o menos 2 mm) se

descubrieron en Drosophila y se han observado en otros dípteros. Estos
cromosomas tienen bandas y se producen en ciertas células secretoras que
no se dividen. Este sistema de bandas está muy especializado.

En estas células Barbiana descubrió estructuras largas y con forma de

salchicha que presentaban engrosamientos y estrías cruzadas. Esto eran
cromosomas que se daban en los tejidos secretores de los dípteros, aunque
él no se dio cuenta.

Estos cromosomas eran cromosomas que se replican varias veces sin que
se produzca una separación real de las cromátidas con lo que el cromosoma
se alarga y se hace más grueso. El conjunto de réplicas se denomina
cromosoma politécnico. Este cromosoma queda unido por el cromocentro,
que es la zona de fusión de las regiones hete acromáticas situadas alrededor
de los centrómeros de los pares cromosómicos. A lo largo del cromosoma
politécnico se encuentran estrías llamadas bandas que varían en anchura y
morfología. Hay regiones engrosadas llamadas PUFFS y a veces muy
distendidas llamadas ANILLOS DE BALBIANI que se piensa que
corresponden a regiones de síntesis de ARN. No hay una relación uno a uno
de bandas y genes, aunque se piensa que los genes activos están en las
bandas más claras.
La cromatina

En el núcleo de las células eucarióticas, el ADN está asociado a proteínas

formando una estructura empaquetada y compacta denominada
cromatina, que representa el genoma de las células eucarióticas. Debe su
nombre (cromatina, del griego croma, coloreado) a la facilidad con la que
se tiñe con los colorantes básicos utilizados en microscopía óptica.

La cromatina consta de ADN y proteínas. Las proteínas pueden ser de dos

tipos:

+ Histonas

Las histonas son proteínas muy básicas, debido a la abundante presencia de

aminoácidos -cargados positivamente- arginina y lisina. Se han descrito
cinco clases de histonas: H1, H2A, H2B, H3 y H4, todas ellas de bajo peso
molecular.

+ No histonas

En contraste con el escaso número de proteínas históricas, son muy

numerosas las proteínas no históricas que se han aislado de la cromatina.
Aproximadamente, la mitad corresponden a enzimas implicadas en la
replicación, la transcripción y la regulación del ADN.
Núcleo
Es la estructura más conocido en casi todas las células animales y vegetales;
está rodeado de forma característica por una membrana, es esférico y mide
unas 5 µm de diámetro. Dentro del núcleo, las moléculas de ADN y
proteínas están organizadas en cromosomas que suelen aparecer
dispuestos en pares idénticos. Los cromosomas están muy retorcidos y
enmarañados y es difícil identificarlos por separado. Pero justo antes de que
la célula se divida, se condensan y adquieren grosor suficiente para ser
detectables como estructuras independientes. El ADN del interior de cada
cromosoma es una molécula única muy larga y arrollada que contiene
secuencias lineales de genes. Éstos encierran a su vez instrucciones
codificadas para la construcción de las moléculas de proteínas y ARN
necesarias para producir una copia funcional de la célula.

Envoltura nuclear
La envoltura nuclear consta de dos membranas que separan el contenido
nuclear del citoplasma circundante. Las dos membranas de la envoltura se
interrumpen en algunos puntos formando poros nucleares, de tal forma
que el interior del núcleo se comunica con el citoplasma celular. Los poros
nucleares presentan canales acuosos que permiten el paso de sustancias
del interior de núcleo hacia el citoplasma y viceversa, pero el proceso es
altamente selectivo, permitiendo solamente el paso a moléculas
específicas.
El poro nuclear en realidad es una estructura altamente elaborada,
denominada complejo del poro nuclear, compuesta de más de 100
proteínas diferentes, ordenadas con una simetría octogonal. Las moléculas
pequeñas (5 cada o menos) difunden en forma prácticamente libre, pero
las proteínas de gran tamaño necesitan contar con una señal de localización
nuclear, que generalmente consiste en una corta secuencia de aminoácidos
(de 4 a 8). El proceso de entrada de una proteína destinada al núcleo
necesita que otra proteína citosólica ("receptor nuclear de importación")
llamada nucloporina se una a la señal de localización nuclear y requiere
además de la energía que proporciona la hidrólisis de una molécula de
trifosfato de guanidina (GTP). Esto provoca la dilatación del poro y permite
el pasaje de la proteína. La salida de las subunidades ribosómicas fabricadas
en el nucléolo y el ARNt también dependerían de un sistema de transporte
activo mediado por señales de exportación nuclear.

6. procedimiento del experimento

7. recomendaciones y conclusiones

Citas bibliográfico
LEWIN,B.1995.GenesV.OxfordUniversityPress,NewYork.

FLAVELL,R.B.;TWELL,D.(1996).Plantgenomeconstituentsandtheirorganisati
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