See

discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.net/publication/309764224

Testes analíticos qualitativos para sangue e

sêmen: aplicações, funcionalidades e
potencialidades forenses

Poster · October 2012

DOI: 10.13140/RG.2.2.22062.31046

CITATIONS READS

0 17

3 authors, including:

Charles Albert Andrade

Civil Police of the Brazilian Federal District
20 PUBLICATIONS 1 CITATION

SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

Revista Brasileira de Criminalística View project

All content following this page was uploaded by Charles Albert Andrade on 08 November 2016.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 Testes analíticos qualitativos para sangue e
sêmen: aplicações, funcionalidades e
potencialidades forenses
A. C. B. Barros1, C. T. A. Rosa2, C. A. Andrade3
1 Aluna do curso de especialização, IFAR/PUC-GO, 2 Instituto de Criminalística, PCDF, 3 Grupo de
Pesquisa em Ciências Forenses, PCDF
INTRODUÇÃO
Testes de orientação/probabilidade confiáveis para identificação de fluidos
biológicos de origem humana podem representar ganhos de tempo e de
qualidade na práxis laboratorial pericial. Amostras desses fluidos
relacionadas a cenas de crimes merecem atenção especial nos
laboratórios, pois além de auxiliarem no esclarecimento da dinâmica dos
fatos, podem ser determinantes para identificação dos envolvidos.
Desses fluidos, os mais comumente relacionados são sangue e sêmen. O
presente trabalho apresenta revisão bibliográfica das técnicas de coleta e
análise química qualitativa de sangue e sêmen para triagem de amostras
relacionadas à prática criminosa. São apresentados os testes Kastle-
Meyer, Adler-Ascarelli, Verde Malaquita e Luminol para sangue e os
testes de PSA, dosagem de Fosfatagem Ácida e Fluorescência UV para
sêmen. São discutidas as metodologias de utilização de cada teste e
interpretação dos resultados, bem como são individualizadas suas
limitações.
OBJETIVOS
Identificar e estudar os testes analíticos qualitativos para sangue e sêmen
mais citados na literatura.
Identificar as metodologias mais recomendadas para a coleta desses
fluidos.
MATERIAL E MÉTODO
O presente trabalho apresenta uma revisão bibliográfica a respeito de
testes preliminares para sangue e sêmen. Para isso, foram consultados
artigos científicos, publicações em revistas relacionadas a órgãos de
Segurança Pública, teses de mestrado e doutorado, livros de ciências
forenses e Procedimentos Operacionais Padrão (POP’s) do Instituto de
Criminalística do Paraná e do DF, conforme referências bibliográficas.
RESULTADOS
Coleta de sangue: com swab embebido em soro fisiológico ou salina,
coletar diretamente do local ou aparato contendo a mancha suspeita de
sangue. Aguardar a secagem à temperatura ambiente, colocar em um
envelope de papel e encaminhá-lo ao laboratório. Caso a mancha esteja
seca, raspá-la do suporte e transferir as porções raspadas para um
envelope. Se não for possível remover a mancha, enviar o suporte ao
laboratório. No caso de extração de DNA, utiliza-se água destilada, pois a
salina pode ocasionar uma lise celular.
Coleta de sêmen: examinar vestes, calçados, roupas de cama, móveis e
outros objetos que possam estar relacionados, ou tenham sido utilizados
para a prática sexual. As técnicas aplicadas na identificação e tipagem do
esperma exigem a realização de um macerado, o qual deve ser efetuado
com o menor volume possível de salina, a fim de que se tenha
concentrações detectáveis de fosfatase ácida, PSA e antígenos. A
extração do material é o primeiro e mais importante passo para a
obtenção de bons resultados.
Luz UV: utilizada para revelar fluídos biológicos e orientar a pesquisa,
deve-se abrir o suporte a ser estudado e, em câmara escura, direciona-se
a luz UV sobre a peça, procurando regiões de fluorescência amarela.
Essa cor justifica-se pelo fato da fluorescina, presente no esperma,
adquirir essa coloração à medida que a mancha vai envelhecendo. O
resultado é uma coloração branco-azulada que tende para o amarelo.
Fosfatase ácida: O P-nitrofenil-fosfato é hidrolisado pela fosfatase ácida
liberando ácido fosfórico e p-nitrofenil. A alcalinização do meio, por adição
de soda cáustica, interrompe a reação tornando o p-nitrofenil amarelo, o
qual é determinado fotometricamente. A timolftaleína monofosfato de
sódio (kit da BIOCLIN®) utilizada para pesquisa de fosfatase ácida
prostática, é hidrolisada especificamente pela fração prostática,
produzindo uma coloração azul. Esta especificidade elimina o emprego
do tartarato e do formol para diferenciar as fosfatases ácidas.
View publication stats
PSA: o teste de precipitina (Ouchterlony dupla difusão, Imunodifusão
radial, Rocket imunoeletroforese e imunoeletroforese cruzada ) ocorre em
uma reação antígeno-anticorpo em meio líquido ou gelificado e formam
flocos visíveis de complexo antígeno-anticorpo insolúveis. O método
ELISA consiste no emprego de um anticorpo conjugado com uma enzima
para detecção do antígeno homólogo. Os testes imunocromatográficos
são realizados em uma membrana cromatográfica onde os anticorpos e
as amostras se movem por capilaridade e reagem formando um
complexo com partículas de coloração azul.
Kastle-Meyer: constituído por fenolftaleína, pó de zinco metálico,
hidróxido de sódio e água destilada. Após a mistura da água destilada
com a mancha, mistura-se o reagente e, por fim, H2O2 a 5%. A
fenolftaleína é reduzida a anidrido ftálico pelo zinco. A reação entre o pó
de zinco e o hidróxido de sódio faz produzir hidrogênio que garantirá a
forma incolor da fenolftaleína. Os eritrócitos presentes no material são
lisados, ocorrendo a liberação da peroxidase eritrocitária. A peroxidase
reage com o H2O2 liberando oxigênio livre, o qual reoxida o anidrido
ftálico transformando-o novamente em fenolftaleína, que em meio alcalino
adquire coloração vermelha, indicando assim a presença de eritrócitos.
Adler-Ascarelli: o sangue é identificado devido à ação de peroxidases
com grupo heme, que usam a benzidina. É baseado na catálise da
decomposição do H2O2 em água e oxigênio pela hemoglobina presente
no sangue. O oxigênio formado irá oxidar a benzidina alterando sua
estrutura, fenômeno perceptível com o aparecimento da coloração azul.
Para realizar o procedimento, usa-se benzidina, ácido acético glacial e
H2O2 de 3 a 5%. Mistura-se a mancha a ser analisada com a água
destilada (ou com o ácido acético) e depois, adiciona-se a benzidina e o
H2O2. A oxidação da benzidina em meio ácido resulta na formação de um
intermediário azul e em produto final de cor marrom.
Verde Malaquita: é realizado em meio ácido e apresenta uma reação
heme-catalisada cujo resultado apresenta cor verde para positivo.
Recomenda-se a mistura de leucobase verde malaquita com H2O2,
acrescentando à solução do suposto sangue. O H2O2 degrada a
hemoglobina, liberando o ferro existente. A hemoglobina catalisa a reação
entre LMG incolor e H2O2, convertendo a LMG na forma cromática do
verde malaquita. Este é considerado o teste menos sensível, seguido
pela fenolftaleína.
Luminol: o composto principal tem como fórmula C10H7O3N3. Ao se
adicionar H2O2 e outros produtos e pulverizar, o ferro presente na
hemoglobina produz uma reação de quimioluminescência, que apresenta
cor azul esverdeada fluorescente, que só pode ser observada com
mínima luminosidade. O Bluestar Forensic® foi desenvolvido na tentativa
de se eliminar alguns inconvenientes como a baixa intensidade da
emissão e o tempo de vida breve da solução associados aos sprays. A
reação de luminol com H2O2 em água necessita de um catalisador redox,
para identificar presença de sangue, o catalisador usado é o íon do
elemento ferro que está presente nos grupos “heme” da hemoglobina.
CONSIDERAÇÕES FINAIS
Como resultado, reafirma-se o grande poder de triagem dos testes
elencados para proporcionar maior agilidade dos laboratórios forenses na
rápida resposta para a investigação criminal. Espera-se que este trabalho
possa ser útil para orientar a escolha de métodos analíticos qualitativos
ágeis e confiáveis para identificação de fluidos biológicos de origem
humana.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1 FACHONE, P. C. V.; VELHO, L.M.L.S. Ciência Forense: Interseção Justiça, Ciência e Tecnologia. Revista Tecnologia e Sociedade, v. N.º 4; 2
DOREA, LUIS E.; STUMVOLL, VICTOR P.; QUINTELA, VICTOR Criminalística. 4ª ed. Millenium Ed.; 3 REIS, ALBANI B.D. Metodologia Científica e
Perícia Criminal. 1ª ed. Millenium Ed.; 4 CARNEIRO, JOSÉ; JUNQUEIRA, LUIS C. Histologia Básica. 10ª edição. Guanabara Koogan; 5 SAWAYA,
M.C.T; ROLIM, M.R.S Manual Prático de Medicina Legal no Laboratório. 1ª ed. Juruá; 6 ALMEIDA, JULIANA P.D. Influência dos testes de triagem
para detecção de sangue nos exames imunológicos e de genética forense, PUCRS; 7 PARANÁ, Instituto Geral de Perícias, POP/AN/LCQB_07_10;
8 CHEMELLO, E. Ciência Forense: Manchas de Sangue - Química Virtual; 9 BRASÍLIA, Instituto de Criminalística, SPAL/IC – Procedimento
Operacional Padrão nº003-B; 10 AZEVEDO, ILMARA L.D. A Aplicação da Biologia Forense na Perícia Criminal, FCC; 11 DEL-CAMPO, EDUARDO
R.A. Exame e levantamento técnico pericial de locais de interesse à justiça criminal: Abordagem descritiva e crítica, USP; 12 TEIXEIRA, WILMES
R.G. A importância do swab na perícia de estupro. IMESC-SP. Revista IMESC, nº1; 13 FREITAS, CRISTINA M. Pesquisa de Espermatozóides em
casos de estupro e atentado violento ao pudor atendidos no IC Leonardo Rodrigues-GO; 14 PARANÁ, Instituto Geral de Pericias,
POP/AN/LCQB_32_10; 15 VAZ, MÁRCIA; BENFICA, FRANCISCO S. Medicina Legal. 1ª Ed. Livraria do Advogado; 16 BRASÍLIA, Instituto de
Criminalística, SPAL/IC – Procedimento Operacional Padrão nº006-B; 17 ALVES, F.C.R. et al. Correlação entre pesquisa de espermatozóides e
análise qualitativa do antígeno prostático específico (PSA) com ferramenta na prática forense IC Leonardo Rodrigues-GO.