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FACULTAD DE MEDICINA
GUIA DE LABORATORIO
CLINICO
1
INDICE
INTRODUCCIÓN…………………………………………………………..………3
PRÁCTICA N° 1
Bioseguridad en el Laboratorio Clínico…………………….……………………4
PRÁCTICA N° 2
Punción venosa y capilar…………………………………………………………8
PRÁCTICA N° 3
Soluciones y diluciones…………………………….……………………………13
PRÁCTICA N° 4
Elemental y microscópico de orina…………………..…………………………18
PRÁCTICA N° 5
Coprológico y coproparasitario………………………...………………..………25
PRÁCTICA N° 6
CARBOHIDRATOS: Determinación de glucosa en sangre…….……………30
PRÁCTICA N° 7
LIPIDOS: Determinación de colesterol en sangre……………………….……35
PRÁCTICA N° 8
Electroforesis………………………………………………………………...……38
BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………...41
2
INTRODUCCIÓN
3
PRÁCTICA No. 1
OBJETIVO
Conocer y aplicar las normas de bioseguridad para evitar accidentes y
posibles riesgos de contagio.
CONTEXTUALIZACIÓN
PRECAUCIONES UNIVERSALES:
4
3. Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de
látex) la misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio.
Botas y gorra en casos de exposición a microorganismos de alta
peligrosidad.
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11. Evitar conductas inseguras y de riesgo.
12. Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar
tratamiento adecuado especialmente de los infecciosos.
13. Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las
cañerias habituales una vez que hayan sido decontaminados.
14. Lavarse las manos con abundante agua y jabón luego de haber
terminado el trabajo diario.
ACTIVIDAD 1:
Poner en práctica las normas anteriores durante cada sesión de
laboratorio.
Realizar un video de las normas de bioseguridad y subirlo a la
plataforma Moodle.
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PRACTICA No. 2
Objetivos:
1. Conocer la técnica para la obtención de muestras de sangre como
medio para mantener la integridad del profesional de salud y la del
paciente
2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en
la toma de muestras sanguíneas
3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio
con respecto al manejo de líquidos biológicos y material infeccioso
4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el
laboratorio
Fundamento teórico:
La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta técnica
el principal método de obtención de sangre en los laboratorios de análisis
clínicos. A partir de la sangre sin anticoagulante se obtiene suero, si la sangre
contiene anticoagulante, se obtiene plasma. Del plasma forma parte el
fibrinógeno, sustancia de la que carece el suero.
Materiales:
-Torniquete
-Algodón
-Alcohol antiséptico (isopropílico al 70%)
-Jeringuillas
-Sistema vacutainer: capsula, tubos alvacío, agujas de toma múltiple
- Lancetas
-Tubos capilares heparinizados
-Plastilina
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7. Se seleciona una vena adecuada para la punción. Se prefieren las venas
de la fosa antecubital, en particular la cubital interna y la cefálica.
También pueden utilizarse las venas de la muñeca, el tobillo y la mano.
Si existiera ya un catéter intravenoso en un brazo, se utilizará el otro
para la extracción de la muestra.
11. Se fija firmemente la vena tanto por encima como por debajo del lugar
de punción, con la ayuda de los dedos pulgar y medio, o índice y pulgar.
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12. Se realiza la venopunción. a) Se penetra a través de la piel con la aguja
formando un ángulo de aproximadamente 15º con el brazo y con el bisel
hacia arriba. Se sigue la dirección de la vena con la aguja. B) Se
introduce la aguja con suavidad pero con la suficiente rapidez para
reducir las molestias del paciente. No hay que enterrar la aguja. C) Si se
utiliza una jeringa, se tira hacia atrás del émbolo, con tensión lenta y
uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su interior. No debe
realizarse este movimiento con excesiva rapidez, ya que podría
hemolizarse la sangre o colapsarse la vena. d) Si se utiliza un tubo al
vacío, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena, se dirigirá el tubo
todo lo posible hacia delante en el dispositivo de sujeción. Al mismo
tiempo se sujeta tenuemente la aguja en su lugar. Una vez que haya
llenado el tubo, se retira, cogiéndolo por su extremo y tirando
suavemente de él.
14. Una vez que se haya extraído toda la muestra, hay que indicar al
paciente que relaje el puño y que no bombee con la mano.
15. Se coloca suavemente sobre el punto de la punción una bola de algodón
estéril. Se extrae la aguja y a continuación se ejerce presión sobre la
zona.
16. Se venda el brazo. En general es suficiente una tira de esparadrapo
sobre la bola de algodón, para detener la hemorragia.
17. Se mezclan los tubos con el anticoagulante. Si la muestra ha sido
extraída con jeringa, se transferirá la sangre a los tubos
correspondientes tomando las debidas precauciones para evitar la
hemólisis de las muestras.
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18. Se comprobará el estado del paciente; por ejemplo, si se ha mareado y
si la hemorragia está controlada.
19. Se elimina el material contaminado: agujas, jeringas, algodones, etc.
20. Se marcan las etiquetas y se registra la hora en que se extrajeron las
muestras.
21. Se envían los tubos de sangre para su análisis a los correspondientes
departamentos del laboratorio. Si es preciso, se hace constar la hora en
la solicitud.
Punción capilar:
1. Tener todo el material en perfecto orden: algodón, alcohol, lancetas,
tubos capilares y plastilina.
2. Pedir al paciente que se frote el dedo pulgar hasta que obtenga una
buena irrigación de la zona de punción.
3. Desinfectar la zona y secarla con otro algodón libre de alcohol
4. Sacar la lanceta y realizar la punción de forma rápida y firme.
5. Deshechar la primera gota para evitar contaminación con restos de
alcohol.
6. Colocar el capilar en la zona e ir llenándolo hasta las tres cuartas partes
del tubo.
7. Retirarlo de la zona y colocar un algodón con poco alcohol y solicitar al
paciente que se sostenga por unos minutos para que deje de fluir la
sangre.
8. El capilar sellarlo con plastilina y colocarlo en el lugar designado para
ese paciente.
EDTA (tapón lila): Tubo estéril con anticoagulante EDTA: sal de ácido etileno
diamina tetracético di o tripotasica o di sódica, concentración: 1,2 a 2,0mg/ml
de sangre(4,1 a 6,8mmol/l de sangre) basado en EDTA anhidro. Para uso en
hematología
Citrato de sodio (tapón azul 1/9 y tapón negro 1/4): citrato trisódico con
0,100 a 0,136 mol/l de ácido cítrico. Se recomienda 0,105 mol/l para lograr la
estandarización recomendada por la WHO para que quede a 3,2%. Se usa
para pruebas de coagulación (TP, TTP, fibrinógeno), utilizar l parte de citrato y
9 de sangre entera.
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Tapón rojo: Tubo estéril sin anticoagulantes ni aditivos ni geles separadores.
Para obtener suero.
Los tapones de colores con una banda Gris agregada indican que el tubo
corresponde a uno los anteriores y que además contiene gel separador de
suero o plasma
ACTIVIDAD 2
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PRACTICA No. 3
SOLUCIONES Y DILUCIONES
Objetivos:
- Conocer lo que es un soluto y un solvente para preparar soluciones a
diferentes concentraciones
- Conocer dos formas de expresar matemáticamente la proporción de
soluto a solvente dentro de una solución (p/v y v/v)
- Realizar diluciones simples a partir de una solución
Fundamento teórico:
Las soluciones son mezclas homogéneas de dos o más substancias, que
pueden separarse por métodos físicos en sus diversas substancias
componentes. En una solución, aquella substancia que se encuentra en mayor
proporción se conoce como Solvente y las demás como Solutos.
COMPONENTES:
-Soluto: Es la sustancia que se disuelve,se encuentra en menor cantidad y es
común que se encuentre en estado sólido.
-Solvente: Sustancia que disuelve al soluto, se encuentra en mayor cantidad,
se encuentra en estado líquido. El disolvente más común es el H2O, sin
embargo existen otros disolvente orgánicos como el etanol, la cetona y el éter.
Solubilidad: Es la máxima cantidad de una sustancia que es posible
disolver en una determinada cantidad de solvente, bajo ciertas condiciones.
Materiales y reactivos:
Materiales:
- Probeta graduada de 50 ml
- Vaso de precipitación de 50 ml
- Matraz aforado de 50 ml
- Pipetas graduadas de : 1, 2, 5 y 10 ml.
- Peras de seguridad
14
- Tubos de ensayo
- Gradillas
- Balanza
- Varilla de vidrio
Reactivos:
- Safranina en polvo
- Cloruro de sodio en polvo
- Agua destilada
Procedimiento:
1. Método para preparar soluciones:
Unidades de medidas:
p/v = peso de soluto sobre volumen de solvente expresado en gr/ 100ml
v/v = volumen de soluto sobre volumen de solvente expresado en ml/100 ml.
X=0.425gr. deNaCl
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Ejemplo de soluciones v/v:
Preparar 40 ml. de solución de Etanol al 70% en agua destilada
Datos
V1= 40 ml.
V2= 100 ml
Concentrac. Solución= 70% (70 ml de etanol puro diluidos en 100 ml de
agua destilada)
70 ml de etanol 100 ml agua destilada
X 40 ml agua destilada
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2. Método para realizar diluciones
Fd = Volumen mayor = 50 = 20
Volumen menor (alícuota) 2,5
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Realizar de manera grupal los cálculos y la preparación de diluciones
según los datos entregados por la docente. Presentar en un hoja con los
nombres de los integrantes del grupo.
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PRACTICA No. 4
ELEMENTAL Y MICROSCÓPICO DE ORINA
Objetivos
1. Analizar la orina realizando exámenes macróscopico, químicos y
microscópicos en la misma
2. Correlacionar los parámetros analizados con enfermedades renales o
del tracto urinario
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3) Microscópico: leucocitos, eritrocitos, células bajas, células altas (se
reporta numero por campo en 10 camposcon lente de 40x), moco,
bacterias, cristales, parásitos, hongos (se reporta por cruces en 10
campos con lente de 40 x) y cilindros se reporta número por placa (con
lente de 10x).
c. Practicar previo aseo genital, con agua y jabón, sin dejar residuos. Esto
es especialmente importante en la mujer que debe lavarse el área entre
los labios de la vagina y evitar la contaminación de la muestra con
crema, antisépticos y secreciones vaginales. Los hombres y niños deben
limpiarse la cabeza del pene
d. Deje escapar la porción inicial de la micción al inodoro, a continuación
recolecte en el frasco la porción media (10 ml) y descarte la porción final
de la micción nuevamente en el inodoro.
e. Tape bien el frasco y entréguelo rápidamente al Laboratorio (máximo
dos horas luego de tomar la muestra).
f. NO recoger la muestra durante el Periodo Menstrual
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2. Método para el análisis de orina macroscópico y químico:
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l. Mantener la tira reactiva junto a la carta de colores y leer bajo una buena
iluminación
m. Tener en cuenta las fuentes de error, la sensibilidad y la especificidad de
cada prueba con la tira reactiva
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diazonio con bilirrubina para formar un colorante azoico. Incluso los
más leves matices rosa ya deben ser considerados como positivos.
Hemoglobina: Es un indicio de hemólisis. La mioglobina cataliza la
oxidación del indicador por el hidroperóxido orgánico contenido en el
papel reactivo. Puntos verdes aislados hasta acumulados en la zona
reactiva amarilla indican la presencia de eritrocitos intactos. La
hemoglobina así como los eritrocitos hemolizados o la mioglobina son
indicados por una coloración verde homogénea de la zona reactiva.
Grasa
Moco
Glóbulos rojos (un indicio de daño en los túbulos)
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Células tubulares renales
Células epiteliales
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las
instrucciones recomendadas, realizar el análisis clínico durante la práctica,
realizar el portafolio de la práctica y subirlo a la plataforma Moodle.
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PRACTICA No. 5
COPROLOGICO Y COPROPARASITARIO
Objetivos
1. Observación macroscópica y microscópica de las heces para aprender a
reconocer diferentes patologías gastrointestinales
2. Aprender a realizar la técnica para la preparación de un coproparasitario
Materiales y rectivos:
A. Materiales
-Placa portaobjetos
-Placa cubreobjetos
-Microscopio
-Guantes
-Palillos de dientes
B. Reactivos
-Solución fisiológica al 0.85%
-Solución de lugol (dilución 1:5 de lugol)
-Muestra de heces
Procedimiento:
Recolección de la muestra:
Debe recogerse en un recipiente limpio, debe tenerse cuidado de no mezclarse
con orina, descartar los provenientes de pacientes tratados con bismuto y
bario. Las muestras obtenidas deben enviarse rápidamente al laboratorio
especialmente si son líquidas o semilíquidas ya que las formas trofozoicas de
los protozoos pierden movilidad y mueren poco después de enfriarse.
Procesar la muestra antes de dos (2) horas. Si esto no es posible, mantener las
muestras en refrigeración o temperatura de 4º Centígrados.
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La inspección de las heces es importante, ya que puede conducir a un
diagnósrtico de infectación parasitaria, ictericia obstructiva, diarrea,
malabsorción, obstrucción rectosigmoidea, disentería o colitis ulcerosa, o
pérdida de sangre en el conducto gastrointestinal.
a. Debe anotarse la consistencia (especificando si son pastosas, blandas,
semilíquidas ó líquidas ó duras) y color del excremento (café, amarilla,
rojiza, negruzca, verdes, etc)
b. Los proglótides o gusanos adultos se pueden detectar en el examen
general, manchas de sangre o moco, y, la presencia de restos
alimenticios.
Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente intensidad, este
color se debe a la presencia de urobilina, varia de acuerdo a la ingestión de
alimentos y medicamentos.
Olor: Las sustancias aromáticas provenientes de la desaminación y
descarboxilación del triptofano por las bacterias son las que le dan a la materia
fecal el olor característico.
Consistencia: Normalmente las heces son blandas aunque moldeadas. Se
observan heces extremadamente duras en el estreñimiento y líquidas por
acción de purgantes, o por causas que originen diarrea. Esta consistencia
puede ser : Líquida, blanda o dura.
Aspecto: Hay diferentes aspectos como son : Diarreico, cremoso, mucoide,
granuloso, pastosa,caprino.
Reacción: La reacción y el pH de la materia fecal depende del régimen
alimenticio.
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Residuos alimenticios: Fibras musculares: Se presentan en forma de cilindros
con estrías longitudinales y transversales.
Grasas neutras: Aparecen como esferas refringentes de diferentes tamaños.
Acidos grasos: Se observan como agujas incoloras.
Almidones: Tienen formas irregulares y son refractiles al agregar el lugol.
2. Exámen parasitológico
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CESTODOS: Gusanos planos
-Taenia: Los huevos miden 20-30 x 30-40 mm, son ovoides con membrana
gruesa, amarillenta que se encuentra estriada en forma de empalizada y
encierra un embrión de seis ganchos poco visibles. Produce trastornos
nerviosos.
PROTOZOARIOS:
Entamoeba coli: Son quistes más grandes que los de histolítica, tiene más de
cuatro núcleos. Es considerada como no patógena.
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Giardia lamblia: es un protozoo flagelado patógeno que parasita el tracto
digestivo de humanos y otros mamíferos. Presenta un tamaño de 20 micras de
longitud y 15 de ancho. Posee 8 flagelos, 2 anteriores, dos posteriores, dos
ventrales y dos caudales, cuya función es la de motilidad. Proyectada en un
plano se parece una pera.
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Cada estudiante debe realizar el análisis físico y microscópico de sus propias
heces. Realizar el portafolio de la práctica y subirlo a la plataforma Moodle.
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PRACTICA No. 6
1. Objetivos:
2. Fundamento teórico:
Principio de la reacción:
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2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa) quinoneimina (rojo) +
4H2O
Punto final de una reacción: Las reacciones catalizadas por enzimas son
únicas en el sentido de que presentan aumentos muy grandes de la velocidad
en relación a las reacciones no catalizadas y muestran una cinética de
saturación, es decir la velocidad de la reacción alcanza un valor máximo a una
concentración determinada de sustrato, no dan por resultado aumento de la
velocidad de la reacción. La medida se realiza siempre en las condiciones
óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc. En estas
condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax).
La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los productos o
la desaparición de los reactivos.
Espectofotómetro:
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La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolución se miden con
un aparato denominado espectrofotómetro, el cual consta básicamente de los
siguientes componentes:
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disolvente.
3. Parte experimental:
3.1. Procedimiento:
Ensayo:
Esquema de pipeteo:
Microdeterminación
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD ó muestra
STD ó muestra 5 ul
Reactivo para glucosa 500 ul 500 ul
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25ºC ó 5 minutos a 37ºC. Medir la
absorbancia del STD y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60
minutos.
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Materiales y reactivos:
Materiales Reactivos
Espectrofotómetro Reactivo para glucosa
Tubos de ensayo Estándar de glucosa (100 mg/dl)
Gradilla Muestras de suero sanguíneo (ó
plasma)
Pipetas automática
Puntas de plástico para pipetas
automát..
Reloj
Cubetas de plástico para espectrofot.
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Cada grupo debe realizar el análisis de glucosa en sueros sanguíneos.
Realizar el portafolio de la práctica y subirlo a la plataforma Moodle.
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PRÁCTICA No 7
1. Objetivos
2. Fundamento teórico:
Los principales lípidos del plasma humano son el colesterol, los ésteres del
colesterol, los triglicéridos, los fosfolípidos y los ácidos grasos no esterificados.
El colesterol es un importante componente estructural de las membranas
celulares y un precursor para la biosíntesis de los ácidos biliares y las
hormonas esteroideas.
Principio de la reacción:
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Colesterol + O2 CHO (colesterol oxidasa) colesterol- 3-ona +
H2O2
2. Parte experimental:
2.1. Procedimiento:
Ensayo:
Esquema de pipeteo:
Microdeterminación
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD ó muestra
STD ó muestra 5 ul
Reactivo para colesterol 500 ul 500 ul
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25ºC ó 5 minutos a 37ºC. Medir la
absorbancia del STD y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60
minutos.
Materiales y reactivos:
Materiales Reactivos
Espectrofotómetro Reactivo para colesterol
Tubos de ensayo Estándar de colesterol (200 mg/dl)
Gradilla Muestras de suero sanguíneo (o
plasma)
Pipetas automática
Puntas de plástico para pipetas
automát..
Reloj
Cubetas de plástico para espectrofot.
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4. Cálculo de la concentración de colesterol
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
De manera grupal realizar el análisis de colesterol en un suero sanguíneo y
realizar los respectivos cálculos y análisis de los resultados. Subir a la
plataforma junto con el informe de la glucosa.
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PRÁCTICA No. 8
ELECTROFORESIS
Objetivo:
Aplicar la técnica de electroforesis para separar las diversas fracciones
proteícas del suero humano
Fundamento teórico:
La electroforesis es una técnica basada en los movimientos de moléculas
cargadas en un campo eléctrico, cada molécula se mueve hacia el electrodo de
carga opuesta (cátodo y ánodo), este movimiento denominado “electroforesis”
da nombre a la técnica. En el transporte electroforético, a la fuerza del campo
eléctrico se opone la resistencia viscosa del medio, produciéndose, cuando se
igualan una velocidad constante de desplazamiento de las partículas.
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isoeléctrico (pI o pHI), la proteína tiene carga neta cero. Por debajo de pI las
proteínas estarán cargadas positivamente y por encima del pI negativamente.
ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
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BIBLIOGRAFIA:
Ángel M., G. y M. Ángel R., Interpretación Clínica del Laboratorio, 6ª.
edición, Editorial Médica Panamericana, Bogotá, 2.001
Henry, J. B., Diagnóstico y Tratamiento Clínicos por el Laboratorio, 9ª.
Edición, Editorial Salvat Médica, México, 1.993
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
Métodos Básicos de Laboratorio en Parasitología Médica, O. M. S.,
Ginebra, 1.992
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