Universidad de Santiago de Chile

Facultad de Química y Biología

Técnico Universitario en Análisis Químico y Físico

Laboratorio: Técnicas de siembra de

microorganismos.

Profesor: Mario Tello

Integrantes: Ignacio Mateluna
Diego Silva G.
Entrega: Martes 24 de Julio, 2018
I.- Introducción

Como se ha aprendido, las bacterias deben de ser cultivadas en medios de cultivo para
así caracterizar y controlar su crecimiento, hacer su identificación, etc. Para comprender
esto, “un medio de cultivo es una solución acuosa o sustrato de diferentes compuestos
que contiene todos los elementos indispensables que requieren los microorganismos para
crecer” .
[1]

El proceso de colocar las bacterias u otros microorganismos cultivables en medios de

cultivo, recibe el nombre de siembra la cual consiste “introducir artificialmente una porción
de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para
su desarrollo y multiplicación” ; esta operación la podemos realizar a partir de muestras
[2]

biológicas o de un cultivo microbiano a otro, esto se hace con el fin de reconocer la

morfología microscópica y macroscópica de estos microorganismos incluyendo su
comportamiento. Existen técnicas adecuadas para realizar estos cultivos, mediante el uso
de algunos elementos importantes para realizar siembras como: el mechero, el asa
bacteriológica (asa triangular y asa en punta), los espacios adecuados, las condiciones
asépticas y los medios de cultivos ya preparados y atemperados a 37°C.

Estas técnicas de desinfección y esterilización permiten aislar a los microorganismos para

poder estudiarlos de forma más eficiente, y así poder ver cómo se comporta una o más
colonias sin otros factores presentes.

A continuación, se da a conocer las experiencias de laboratorio y los objetivos propuestos.

 Objetivo General
Adquirir habilidades sobre la manipulación y observación de cultivos bacterianos, y
conocer distintas técnicas de siembra.

 Objetivos específicos
Aplicar diferentes técnicas de siembra y aislamiento de cultivos bacterianos en y desde
medios sólidos y líquidos.
 II.- Metodología

Inicio

Método Encender el Líquido a Sólido a

por estrías mechero Bunsen líquido líquido

Homogeneizar el Con un asa, traspasar

Con un asa estéril, tubo con bacterias una colonia a un
traspasar una asada del Siembra por
extensión tubo con caldo LB
cultivo a la placa petri
Esterilizar asa, dejar
enfriar en tubo
Tapar el tubo e
Extender incubar a 37°C
Tomar 0,1 mL del
formando estrías por 24 horas
tubo con bacterias Tomar inóculo del tubo
con bacterias y sembrar
Incubar a 37°C en tubo con caldo LB
Depositar en l
por 24 horas
centro de placa
Petri con agar Tapar el tubo e
incubar a 37°C
por 24 horas.
Extender
Siembra de
uniformemen
profundidad
te con rastrillo
de vidrio

Fundir tubos con LB Incubar a 37°C

agar y enfriar a 45°C por 24 horas

Mezclar 20 mL de
LB agar con 1 mL
de cultivo líquido

Verter al centro de Enfriar/solidificar

Mezclar con suaves Incubar a 37°C
placa Petri vacía y agar a temperatura
movimientos circulares por 24 horas
esterilizada, luego tapar ambiente
III.- Resultados

Figura n°1: Siembra por Estrías en un medio sólido a partir de un cultivo sólido.

En la figura n°1 se observa que se logró aislar varias colonias las cuales se logran
desprender del asa al frotarla en la superficie de agar, estas se identifican como pequeñas
manchas en la placa de Petri.

Figura n°2: Siembra en un medio líquido a partir de un cultivo Líquido (izquierda) y uno
Sólido (derecha).

En la figura n°2 se logra observar el crecimiento bacteriano debido a la coloración turbia del
medio líquido, el cual previamente a la siembra tenía un color transparente.
Figura n°3: Siembra por Extensión en un medio sólido a partir de un cultivo líquido.

En la figura n°3 es difícil observar el crecimiento bacteriano debido a que en este tipo de
siembra se extiende el inóculo uniformemente con un rastrillo por la superficie del medio de
cultivo. Las células diseminadas por la superficie forman así colonias aisladas.

Figura n°4: Siembra en Profundidad, en medio sólido a partir de un cultivo líquido.

En la figura n°4 es posible observar el crecimiento bacteriano por las manchas circulares
en la placa de petri.
Figura n°5: Siembra por Estrías en un medio sólido a partir de un cultivo líquido.

En la figura n°5 se logran observar las colonias aisladas en forma de pequeñas manchas
en la placa de Petri.

IV.- Discusión

El objetivo en sí del aislamiento es obtener colonias bien separadas las cuales se forman a
partir de una sola bacteria que se extrajo de un medio de cultivo sólido cargado con
microorganismos, luego mediante el crecimiento se multiplica hasta formar una población
que se torna visible consiguiendo así un cultivo puro como se puede evidenciar en la imagen
n°1. Cabe destacar que el método de siembra por estrías es uno de los más utilizados ya
que con ella, se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado
número de bacterias. Los trazados que se realizan son mediante depósito y quemado lo
que permite así obtener colonias más “diluidas” o con menos carga inicial de
microorganismos después de flamear y enfriar la asa para sucesivos trazados. La
incubación se hace en condiciones específicas para el crecimiento bacteriano (37°C e
invertidas ya que “la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación
durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento
confluente” , es decir que se formaría un crecimiento bacteriano en el centro lo que
[3]

significaría una contaminación. Esta técnica de siembra, además de permitir el aislamiento

de colonias, permitiría el estudio y cuantificación de bacterias presentes en la muestra, si
es que conocemos exactamente el volumen de muestra sembrado.

El propósito del trazado mediante depósito y flameado, en un principio es el de obtener una

menor carga inicial de microorganismos a medida que se realiza cada trazado, esto se
evidencia en que cada uno de ellos las colonias van siendo más pequeñas debido a la carga
inicial por lo que se vería a simple vista más uniforme el cual no se logra en este caso ya
que no se flameo el asa al realizar el tercer y último trazado por ende no se logra evidenciar
como debería las colonias aisladas y con menos carga. (ver anexo fig. 6)

En la figura n°2 se observan los resultados de las técnicas de siembra de medio líquido a
medio líquido y de medio sólido a medio líquido. Como bien se menciona en la guía de
laboratorio, “cabe destacar que el crecimiento de las bacterias en medios líquidos no da
origen a la formación de colonias; en este medio el crecimiento se evidencia mediante la
turbidez del caldo o medio de cultivo”. Por ende, no sirven como técnica de aislamiento, tan
solo permiten la obtención de de una gran población microbiana, con elevado número de
microorganismos. Para ambos métodos de siembra liq-liq y sólido-liq el asa debe ser
flameado antes y después de cualquier operación de sembrado y enfriada en la pared
interna del tubo, en ello para la siembra liq-liq se toma una asada desde el tubo que contiene
microorganismos y anteriormente revuelto suavemente para que estos entren en la
suspensión del líquido y sea más fácil su extracción. Para el caso de sol-liq se toma una
muestra de una colonia aislada del medio sólido que contiene MO y se deposita en el tubo
con el medio de cultivo líquido, todo esto siempre manteniendo las condiciones de
esterilidad.

Para la figura n°3 se realiza la siembra por extensión, en ella la muestra se siembra
directamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndose con ayuda de un rastrillo
de cristal estéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas
sobre la superficie. Como en el método de siembra por estría, no existe la seguridad de que
las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión sean cultivos axénicos,
es decir que consisten en una sola especie microbiana, proveniente de una sola célula.
“Esta técnica permite obtener un mayor número de colonias aisladas que el método de
siembra por estría, por tanto, se elige cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una
mezcla con varios tipos de microorganismos” . Esto se puede ver a simple vista al observar
[4]

la imagen, en la cual toda la superficie del medio de cultivo adquiere un tono más “opaco”
debido a que los MO cubren toda esa extensión.

En la figura n°4 puede ver el resultado de la siembra por profundidad (mezcla). Consiste en
mezclar agar fundido a 45°C con un determinado volumen de cultivo que contiene
microorganismos. Cuando el agar solidifica se incuban las placas, por lo que las colonias
se desarrollan tanto dentro del agar como en la superficie. “Es un método generalmente
utilizado para el recuento de microorganismos anaerobios facultativos o microaerófilos” . [5]

“Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. Las

colonias superficiales se extenderán y serán más grandes” . Esto se puede evidenciar con
[6]

las manchas circulares que aparecen, que serían las colonias que quedaron en la superficie
del agar, por lo que al ser más grandes se pueden ver a simple vista.

En la figura n°5 se realiza otra siembra por estrías, pero esta vez desde un medio de cultivo
líquido con MO a un medio de cultivo sólido, esta se lleva a cabo de la misma forma que en
la primera siembra solo que esta vez cambia la extracción desde un medio líquido y para
ello se hace el aislamiento de una gota del cultivo a un medio sólido para obtener colonias
aisladas y puras. Esta vez se puede observar la distribución de la carga inicial de
microorganismos de manera uniforme y acorde a los trazados por depósito y flameado.

V.- Conclusión
Para el desarrollo de este práctico se debió de trabajar siempre en condiciones de
esterilidad, tanto del mismo laboratorio específicamente el mesón en la cual se utiliza etanol
como desinfectante, como también el material los que se flamean utilizando el mechero, la
boca del tubo y la asa, antes y después de cualquier operación de sembrado, para lo cual
deben ser calentados hasta su incandescencia (esterilización mediante calor seco). En el
caso de las placas Petri estas debían abrirse próximas al mechero, para evitar la
contaminación con gérmenes del aire.

A partir de los resultados se puede observar que el crecimiento y desarrollo de las colonias
de microorganismos formadas con los métodos utilizados (por estrías, por extensión, etc.)
difieren en la forma de crecimiento en la superficie de las placas, lo cual evidencia la utilidad
de los distintos métodos de siembra, estos resultan ser de vital importancia no solo para la
determinación sino que también para el estudio y comprensión visual de los
microorganismos, el cómo se prepara la solución de agar y los medios de cultivo, como se
extienden estos MO por los medios de cultivo a fin de llegar a comprender el agrupamiento
de la colonia de bacterias como lo es específicamente en el caso de la siembra por
profundidad.

Con estas diferentes técnicas se puede determinar mejor, la forma en que se desarrollan
los MO por lo que se logró sembrar microorganismos por varios métodos diferentes
obteniendo resultados satisfactorios.

VI.- Referencias

1) Aquiahuatl, M.A, & Pérez, M.L (2004). Manual de prácticas del laboratorio de
microbiología general. Universidad Autónoma Metropolitana- Iztapalapa. Obtenido en:
http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_
MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf (pg 37).

2) Santambrosio, E., Ortega, M., Garibaldi, A. (2009). Catedra de Biotecnologia. Trabajo

práctico n°3: Siembra y recuento de microorganismos. Universidad Tecnológica Nacional.
Facultad regional de Rosario. Obtenido en:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pd
f
3) N.d (2018). Microbiologia General. Trabajo práctico n°2: Siembra, aislamiento e
identificación de microorganismos. Obtenido en:
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/152380/mod_resource/content/1/2018%
20TP2%20BIOQ%20Y%20LCTA.pdf

4 y 6) N.d. Documentos Microbiologia General. Obtenido en:

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap
309.htm

5) Mendez, D. n.d. Recuento en placa por siembra en profundidad. Obtenido en:

https://es.scribd.com/doc/169767704/Recuento-en-Placa-Por-Siembra-en-Profundidad

VII.- Anexo

Figura n°6: “Ejemplo siembra por estrías, trazado mediante depósito y flameado”