UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y METALURGIA

ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE INGENIERÍA

QUÍMICA

ANÁLISIS INSTRUMENTAL QU-342

PRÁCTICA 11

ABSORBANCIA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA POR LOS AMINOÁCIDOS

AROMÁTICOS

PROFESOR : M.Sc. GARCIA BLÁSQUEZ, Jorge S.

ALUMNO : HUALLPA VARGAS, Herlis S.

SEMESTRE : 2015-II

MESA : N° 02

DIA : Miércoles (8 – 11) am.

FECHA DE EJECUCIÓN : 08/12/15

FECHA DE ENTREGA : 16/12/15

AYACUCHO – PERÚ

2015
ABSORBANCIA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA POR LOS AMINOÁCIDOS
AROMÁTICOS

ESPECTRO ULTRA-VIOLETA (UV) DE TRIPTÓFANO, TIROSINA Y

FENILALANINA
I. OBJETIVOS
 Determinación del espectro UV de tres aminoácidos: triptófano, tirosina,
y fenilalanina.

II. REVISION BIBLIOGRAFICA

2.1. AMINOACIDOS
Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un
grupo carboxilo (-COOH).1 Los aminoácidos más frecuentes y de mayor
interés son aquellos que forman parte de las proteínas. Dos aminoácidos se
combinan en una reacción de condensación entre el grupo amino de uno y el
carboxilo del otro, liberándose una molécula de agua y formando un enlace
amida que se denomina enlace peptídico; estos dos "residuos" de aminoácido
forman un dipéptido. Si se une un tercer aminoácido se forma un tripéptido
y así, sucesivamente, hasta formar un polipéptido. Esta reacción tiene lugar
de manera natural dentro de las células, en los ribosomas.
Todos los aminoácidos componentes de las proteínas son L-alfa-aminoácidos.
Esto significa que el grupo amino está unido al carbono contiguo al grupo
carboxilo (carbono alfa) o, dicho de otro modo, que tanto el carboxilo como
el amino están unidos al mismo carbono; además, a este carbono alfa se unen
un hidrógeno y una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o
radical R) de estructura variable, que determina la identidad y las
propiedades de cada uno de los diferentes aminoácidos. Existen cientos de
radicales por lo que se conocen cientos de aminoácidos diferentes, pero sólo
22 (los dos últimos fueron descubiertos en los años 1986 -selenocisteína- y
2002 -pirrolisina-)2 forman parte de las proteínas y tienen codones
específicos en el código genético.
La unión de varios aminoácidos da lugar a cadenas llamadas péptidos o
polipéptidos, que se denominan proteínas cuando la cadena polipeptídica
supera una cierta longitud (entre 50 y 100 residuos aminoácidos,
dependiendo de los autores) o la masa molecular total supera las 5000 uma
y, especialmente, cuando tienen una estructura tridimensional estable
definida.
ESTRUCTURA GENERAL DE UN AMINOACIDO:
La estructura general de un alfa-aminoácido se establece por la presencia
de un carbono central (alfa) unido a un grupo carboxilo (rojo en la figura),
un grupo amino (verde), un hidrógeno (en negro) y la cadena lateral (azul):

"R" representa la cadena lateral', específica para cada aminoácido. Tanto el

carboxilo como el amino son grupos funcionales susceptibles de ionización
dependiendo de los cambios de pH, por eso ningún aminoácido en disolución
se encuentra realmente en la forma representada en la figura, sino que se
encuentra ionizado.

A pH bajo (ácido), los aminoácidos se encuentran mayoritariamente en su

forma catiónica (con carga positiva), mientras que a pH alto (básico) se
encuentran en su forma aniónica (con carga negativa). Para valores de pH
intermedios, como los propios de los medios biológicos, los aminoácidos se
encuentran habitualmente en una forma de ion dipolar o zwitterión (con un
grupo catiónico y otro aniónico).

ESPECTROMETRÍA ULTRAVIOLETA-VISIBLE

La espectrometría ultravioleta-visible o espectrofotometría UV-Vis implica

la espectroscopia de fotones en la región de radiación ultravioleta-visible.
Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano
y el infrarrojo (IR) cercano.
En esta región del espectro electromagnético, las moléculas se someten a
transiciones electrónicas.
Esta técnica es complementaria de la espectrometría de fluorescencia, que
trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras
que la espectrometría de absorción mide transiciones desde el estado basal
al estado excitado.

APLICACIONES:

La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación

cuantitativa de soluciones de iones metálicos de transición y compuestos
orgánicos muy conjugados.

III. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIALES Y EQUIPOS:

 Fiolas de 50 mL  Espectrofotómetro UV
 Luna de reloj  Celdas de sílice
 Espátula  Balanza analítica
 Varilla de vidrio  pH metro
 Vaso de precipitado  Estufa
REACTVOS Y SOLUCIONES:

 Solución de tirosina, 0.001M

 Solución de tirosina, 0.001M
 Solución de tirosina, 0.001M
 Agua destilada

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Encendimos el espectrofotómetro UV. Ajustar la lámpara (si el

caso lo requiere)
2. Leímos la absorbancia de la solución de tirosina en el rango de 230
a 310 nm. Ajustando la absorbancia a cero utilizando agua destilada
para cada longitud de onda utilizada. La solución de tirosina y de
los otros aminoácidos y el agua deben estar colocados en las
respectivas celdas de sílice o cuarzo

EVALUACION
Hacer una gráfica del espectro-UV , ploteando los valores de absorbancia
contra los valores de longitud de onda, y observe la longitud de onda máxima
de absorción. La grafica para cada aminoácido.

V. DATOS Y RESULTADOS EXPERIMENTALES

5.1. PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES DE AMINOACIDOS:

 Solución de tirosina 0.001M, 50 mL

PM=181.19g/mol

%m=99
𝑚
𝑀=
𝑃𝑀 ∗ 𝑉

𝑚 = 𝑃𝑀 ∗ 𝑉 ∗ 𝑀
 181.19𝑔 0.001𝑚𝑜𝑙
𝑚= 𝑥 0.05𝐿𝑥
𝑚𝑜𝑙 𝐿

𝑚 = 9.0595𝑥10−3 𝑔

Llevando al 100%:

99………………….9.0595x10-3 g

100…………………x

X= 9.1510x10-3 g = 0.00915 g de tirosina.

 Solución de L- triptófano 0.001M, 50 mL

PM=204.2343 g/mol

%m=99
𝑚
𝑀=
𝑃𝑀 ∗ 𝑉

𝑚 = 𝑃𝑀 ∗ 𝑉 ∗ 𝑀

204.2343𝑔 0.001𝑚𝑜𝑙
𝑚= ∗ 0.05𝐿 ∗
𝑚𝑜𝑙 𝐿
𝑚 = 0.0102𝑔

Llevando al 100%:

99………………….0.0102 g

100…………………x

X= 0.0103 g de L- triptófano.
  Solución de fenilalanina 0.001M, 50 mL
PM=165.19g/mol

%m=99
𝑚
𝑀=
𝑃𝑀 ∗ 𝑉

𝑚 = 𝑃𝑀 ∗ 𝑉 ∗ 𝑀
165.19𝑔 0.001𝑚𝑜𝑙
𝑚= ∗ 0.05𝐿 ∗
𝑚𝑜𝑙 𝐿
𝑚 = 8.2595 ∗ 10−3 𝑔

Llevando al 100%:

99………………….8.2595*10-3 g

100…………………x

X= 8.3429x10-3 g = 0.00834g de fenilalanina.

5.2. DATOS DE pH MEDIDO:

 pH tirosina = 6.54
 pH L-triptófano= 6.69
 pH fenilalanina= 6.20

5.3. RESULTADOS DEL ESPECTRO DE LOS 3 AMINOÁCIDOS:

Absorbancia de los aminoácidos por cada longitud de onda:

ƛ ATIROSINA ATRIPTOFANO AFENILALANINA

230 0.36 0.075 0.003
231 0.334 -0.097 0.005
232 0.228 -0.452 0.003
233 -0.043 -0.817 0.003
234 -0.32 -0.818 0.007
235 -0.604 -0.787 0.007
236 -0.791 -0.818 0.004
237 -0.801 -0.806 0.002
238 -0.844 -0.815 0.002
239 -0.828 -0.819 0.005
240 -0.794 -0.789 0.004
241 -0.723 -0.723 0.004
242 -0.602 -0.595 0.004
243 -0.57 -0.566 0.006
244 -0.606 -0.612 0.004
245 -0.68 -0.675 0.004
246 -0.673 -0.659 0.001
247 -0.539 -0.526 0.004
248 -0.471 -0.485 0.006
249 -0.544 -0.542 0.004
250 -0.659 -0.685 0.004
251 -0.603 -0.737 0.006
252 -0.497 -0.746 0.008
253 -0.376 -0.705 0.003
254 -0.271 -0.766 0.005
255 -0.163 -0.837 0.006
256 -0.037 -0.832 0.005
257 0.026 -0.823 -0.001
258 0.092 -0.781 0.002
259 0.163 -0.679 0.009
260 0.208 -0.599 0.006
261 0.228 -0.547 0.002
262 0.252 -0.638 0.006
263 0.271 -0.734 0.009
264 0.278 -0.773 0.002
265 0.296 -0.776 0.007
266 0.324 -0.757 0.012
267 0.357 -0.674 0.01
268 0.436 -0.615 0.003
269 0.54 -0.523 -0.003
270 0.689 -0.356 -0.008
271 0.923 -0.265 -0.015
272 1.081 -0.297 -0.017
273 1.229 -0.273 -0.019
274 1.395 -0.222 -0.018
275 1.522 -0.198 -0.016
276 1.677 -0.056 -0.014
277 1.835 0.049 -0.013
278 1.941 0.109 -0.01
279 2.041 0.177 -0.007
280 2.14 0.251 -0.007
281 2.209 0.307 -0.004
282 2.325 0.341 -0.001
283 2.385 0.318 -0.001
284 2.418 0.261 0.001
285 2.469 0.157 0.002
286 2.516 0.055 0.003
287 2.555 -0.013 0.003
288 2.58 -0.081 0.004
289 2.586 -0.125 0.005
290 2.572 -0.143 0.006
291 2.461 -0.151 0.006
292 2.257 -0.148 0.007
293 1.943 -0.141 0.007
294 1.523 -0.126 0.007
295 1.289 -0.115 0.007
296 1.089 -0.105 0.008
297 0.845 -0.09 0.008
298 0.703 -0.079 0.009
299 0.587 -0.071 0.009
300 0.447 -0.059 0.009
301 0.357 -0.051 0.009
302 0.288 -0.043 0.009
303 0.221 -0.036 0.009
304 0.18 -0.03 0.009
305 0.141 -0.024 0.009
306 0.109 -0.018 0.01
307 0.091 -0.014 0.01
308 0.075 -0.01 0.01
309 0.063 -0.006 0.01
310 0.057 -0.003 0.01
Gráfico de absorbancia vs longitud de onda:

2.5

1.5

1 Series1
A

Series2
0.5
Series3

0
0 50 100 150 200 250 300 350
-0.5

-1

-1.5
ƛ (nm)

Absorbancias máximas:

Triptófano= 2.586

Tirosina= 0.341

Usando el programa especifico de analisis (VISIONlite scan), se tiene los

resultados como se muestra en la siguiente imagen:
VI. CONCLUSIONES

 Llegamos a observar y aprender el funcionamiento del

espectrofotómetro-UV
 Logramos ver el espectro de los tres aminoácidos

VII. RECOMENDACION
 Al preparar las soluciones de aminoácidos, disolver bien
 Tomar apunte las indicaciones dadas por el ingeniero.

VIII. BIBLIOGRAFIA

 http://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible
 Epectroscopia Ultravioleta-Visible
 UV-Vis Absorción Spectroscopy