REPORTE DE BIOQUIMICA

TEMA: ENZIMAS

AMILASA, DETERMINACION DE VELOCIDAD CINETICA, INHIBICION, Ph y temperatura

Objetivo: determinar la velocidad de la enzima amilasa y obtener las concentraciones del

sustrato (almidón)

Proceso experimental

1) Se le añadió el sustrato de almidón 500 mg/l en buffer fosfato 0.1 M Y NaCl 0.15 M
PH 7
2) Se le agregó iodo 0.01 eq /l en hcl 0.02 m
3) Se llevó al espectrofotómetro

Curva estándar del almidón

Tabla n ᴼ 1

Reactivo Blanco 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 tubo 5 tubo 6 tubo

Almidón 0.00 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5

ml

Agua ml 0.5 0.45 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0

Reactivo
de IODO
2 2 2 2 2 2 2
1/200 ml

Datos y cálculos de la curva estándar de almidón

Tabla n ᴼ 2

TUBO blanco 1 2 3 4 5 6
CONCENTRACION 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
mg/ml
absorvancia 0 0.025 0.050 0.111 0.163 0.207 0.258
GRAFICA N ᴼ1

CURVA ESTÁNDAR DE ALMIDON

0.3

0.25
ABSORVANCIA

0.2

0.15

0.1

0.05 y = 0.5204x + 0.0011

R² = 0.9983
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
CONCENTRACIONES

Series1 Linear (Series1)

Determinamos la curva de calibración De la gráfica nᴼ1

Factor de calibración: ab= tang α

0.0011 (0.5204) = 0.00057244

A) Hallamos las concentraciones del sustrato (almidón) de cada tubo empleado en la curva
estándar
𝑨
C = 𝑭𝑨𝑪𝑻𝑶𝑹 𝑫𝑬 𝑪𝑨𝑳𝑰𝑩𝑹𝑨𝑪𝑰𝑶𝑵

Concentración del tubo 1

0.025
C 1= 0.00057244 = 43.6726

Concentración del tubo 2

0.050
C2 = 0.00057244
= 87.3453

Concentración del tubo 3

0.111
C3 = 0.00057244
= 193.906
Concentración del tubo 4
0.163
C4 = 0.00057244
= 284.745

Concentración del tubo 5

0.207
C5= 0.00057244
= 361.609

Concentración del tubo 6

0.258
C6= 0.00057244
= 361.609

B) graficas en papel milimetrado

PROCESO EXPERIMENTAL

1) Se añadió 0.5 ml del sustrato (almidón) a los 6 tubos de ensayo.

2) Se llevó a incubar por un intervalo de 5 minutos cada uno de los tubos
3) Se le agrego la enzima amilasa con un micropipeta 50 μ

Cálculos y resultados EXPERIMENTO PARA DETERMIANAR LA VELOCIDAD

Tabla n ᴼ 3

Reactivo Blanco 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 tubo 5 tubo 6 tubo

Agua 50
destilada
micro
litros
Sustrato 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
ml
Incubar 37 C
ͦ POR 5 MINUTOS
Enzima μ 50 50 50 50 50 50
litros
Incubación 0 min 2 min 4 min 6 min 8 min 10 min
Datos experimentales

Tabla nᴼ 4

Absorbancia blanco 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 tubo 5 tubo 6 tubo

640 nm 0 0.212 0.192 0.168 0.150 0.149 0.130
1/absorbancia 0 4.7169 5.2083 5.9524 6.6666 6.7114 7.6923
Concentración de 0 0 0.4914 1.2355 1.9497 1.9945 2.0754
producto
(1/ abs n – 1/abs 1 )
Cálculos experimentales

Tabla n ᴼ5

tubo 1 2 3 4 5 6
Tiempo min 0 2 4 6 8 10
Absorbancia 0.212 0.192 0.168 0.150 0.149 0.130
Concentración 0 0.4914 1.2355 1.9497 1.9945 2.0754

Grafica n ᴼ 2

DETERMINACION DE LA VELOCIDAD
CONCENTRACION DEL PRODUCTO

3
2.5
2

1.5

1
y = 0.2229x + 0.1768
0.5
R² = 0.9023
0
0 2 4 6 8 10 12
TIEMPO

Series1 Linear (Series1)

c) Determinamos la velocidad experimental la velocidad inicial de la enzima amilasa

𝒃 𝟎.𝟐𝟐𝟐𝟗
d[P]/ dT = V0= Tg α = = = 1.2607
𝒂 𝟎.𝟏𝟕𝟔𝟖

Discusiones

 Se debe realizar una correcta medición en el espectrofotómetro, debido que si tomas

con datos errados, esta nos daría malos resultados
 Se debe tomar con tiempo, al momento de hacer el baño maria debido a que se
hallara la velocidad esta es con respecto al tiempo

Conclusiones

 Se halló las concentraciones de cada tubo

 Se logró calcular la velocidad que fue 1.2607