DISEÑO E IMPLEMETACIÓN DE LA METODOLOGÍA DE

ANÁLISIS DE PROTECTORES SOLARES EN MATRICES DE

LABIALES Y BRILLOS POR HPLC
ESTUDIO 01/2017

OBJETIVOS:

 Establecer una metodología para determinar Benzofenona 3 y Etilhexil metoxicinamato

(EHMC) en matrices de labiales y brillos en el laboratorio de control calidad, por medio
de una técnica para HPLC.

 Calcular los valores estadísticos de Coeficiente de variación instrumental.

 Calcular los parámetros estadísticos que permitan corroborar la precisión del método
diseñado.

 Realizar internamente la determinación de concentración de Benzofenona y EHMC en

los graneles producidos en Colorlink, para mejorar tiempos de liberación de productos
terminados.

PRINCIPIO DEL MÉTODO:

Metodología referencia: APAM 9.975-4

En el diseño experimental por familias de productos se toman los colores más críticos
siendo estos los más claros y oscuros de cada línea.

La muestra a ser analizada es diluida en tetrahidrofurano (THF) y calentada suavemente en

un baño maría, se agita hasta la formación de una solución homogénea, luego se diluye con
metanol y se adiciona el estándar interno, la muestra es filtrada y dispuesta en un vial, se
lleva al HPLC y analiza con una solución 75% metanol 25% H2O ácido acético, usando un
detector de deuterio a una longitud de onda de 290nm.

REACTIVOS Y ESTÁNDARES:

Reactivos y materias primas utilizadas por corrida.

No Material Lote Pureza
1 Tetrahidrofurano 0001100829 99,9
2 Metanol 0001030612 99,9
3 Diciclohexilptalato 08122TDV 99
4 AA Glacial 0000846763 99,8
5 Agua 7AD705081 HPLC
6 EHMC 36596447G0 99,8
7 Benzofenona BP3-20170262 99,8

Bodega 160 - Zona Franca Rionegro / (57) 4 561 78 42 / Vereda Chachafruto – Rionegro, Antioquia.
REFERENCIAS UTILIZADAS DE GRANELES:

Tabla 1

FAMILIA DE
CÓDIGO REFERENCIA OP
PRODUCTOS
1192
1-54745 Rojo clasico
1225
COLOR TREND 1133
1-54746 Piel mate
LIPSTICK -194 1193
1135
1-54747
Café Clasico 1133
1085
COLOR TREND 1-54570
Palo Rosa 1240
HIDRATANTE
LIPSTICK -180 1088
1-54577
Rojo intenso 1213
1015
COLOR TREND 1-56044 Rosa pálido
1214
GLOSSY
LIPSTICK -195 1104
1-56038 Ciruela
1143
1200
LABIALES 1-52939 Pinking About You
1146
LIQUIDOS
LIP COLOR-115 1185
1-52937 Passion it
1160
975
Ultraglazewear 1-45588 Pink watermelon
1171
Brillos
LIP GLOSS-152 1051
1-45610 Fiery Red
1070

PREPARACIÓN DEL ESTÁNDAR, SOLUCIONES Y MUESTRAS:

1. Benzofenona 3:
Pesar entre 0.0500 y 0.0750g (±0.0002) de Benzofenona 3 en un balón volumétrico de 25
mL y aforar con metanol grado HPLC.

2. Etilhexilmetoxicinamato:
Pesar entre 0.1000 y 0.1250g (±0.0002) de Etilhexilmetoxicinamato en un balón
volumétrico de 25 mL y aforar con metanol grado HPLC.

3. Estándar interno:
Pesar 1g de Diciclohexil Ftalato en un balón volumétrico de 100 mL y aforar con metanol.
Sonicar por 5 minutos o utiliza agitador magnético. Almacenar en un envase de vidrio
ámbar bien cerrado y rotular con estándar DCHP.
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4. Preparación de la mezcla:
Adicionar en un balón volumétrico de 50 mL, 5mL Etilhexilmetoxicinamato, 2 mL de
Benzofenona 3 y 5mL de estándar DCHP. Aforar con metanol.

5. Fase móvil B.
Diluir 20 mL de ácido acético en 480 mL de agua grado HPLC.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:

Pesar entre [0.0880 y 0.1280]g (±0.0002) de muestra en un beaker de 100 mL, adicional 2
mL de tetrahidrofurano, calentar en un baño de vapor de (1-2 min) con el fin de disolver la
muestra, adicionar 16 mL de metanol y 2mL de estándar interno por 5 minutos.
Nota: Filtrar todas las soluciones antes de ponerlas en los viales del HPLC.

EQUIPOS:

Se encuentra
No NOMBRE CÓDIGO
calibrado

1 Balanza Analítica BA6 SI

2 Agitador magnético AM2 N/A
3 HPLC HPLC1 Calificado

CAMBIO REALIZADO:

Después de realizar diferentes análisis utilizando la técnica del APAM 9.975 y evidenciar
que el gasto de reactivos es muy alto se procede a reducir proporcionalmente las cantidades
iniciales para conservar la concentración.

Se evidenció que con la columna de 50 mm es posible obtener buena resolución de los

picos, por lo tanto se decide utilizarla para reducir los tiempos de análisis y el gasto de la
fase móvil.

Los resultados obtenidos con los respectivos cambios se encuentran registrados en el

Anexo No 1.

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CONDICIONES CROMATOGRAFÍCAS:

Tamaño de
Tipo Largo Diámetro
partícula
Columna C18 50mm 4,6 mm 3 µm

Detector Lámpara de Deuterio

Flujo 0.8 mL/min

Temperatura Columna 40°C
Volumen de Inyección 1 µL
Tiempo de Corrida 12 min
Longitud de onda 290 nm
75% Metanol + 25 %
Fase Móvil
Agua - Ácido acético

CÁLCULO DE CONCENTRACIÓN DEL ANALITO:

Area Mtra Area StdIntStd W Std (mg) Vol Mtra 20 mL

∗ ∗ ∗ ∗ %𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 𝑆𝑡𝑑 ∗ ∗ 100
Area Std Area StdIntMtra 25 mL 50 mL W Mtra (mg)

ANÁLISIS DE RESULTADOS:

Para el análisis estadístico de los resultados se calculó la desviación estándar (S2) y el

Coeficiente de variación (CV); para el nivel de concentración de los analitos estudiados (en
todos los casos menor del 10%) se estableció que el Coeficiente de variación debe ser
menor de 2.8% de acuerdo a la ecuación de Hortwitz que se resume en la siguiente tabla

Se realizaron tres lecturas de la solución estándar con todos los analitos, obteniendo un
tiempo de retención de:
1.45 minutos para Benzofenona, 5.33 minutos para Diciclohexilftalato y 7.20 minutos para
Etilhexylmetoxicinamato, con la lectura de estos estándares se estableció el parámetro de
identificación para los analitos dentro del método.
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Para el patronaje de los estándares se procedió a realizar por triplicado el análisis de la
mezcla de estándares (Benzofenona 3, diciclohexilftalato y etilhexylmetocinamato)
obteniéndose para el caso de Benzofenona 3 una desviación estándar de 57.35 y un
coeficiente de variación de 1.61% y para el caso de Etilhexylmetoxicinamato una
desviación estándar de 58.05 y un coeficiente de variación 0.59% y se comparó con la
tabla de Coeficientes de variación de Hortwitz , obteniéndose resultados por debajo de los
parámetros estadísticos establecidos.

Se calculó la precisión del método en términos de repetibilidad instrumental, repetibilidad

del método, reproducibilidad y reproducibilidad intermedia. (Ver archivo adjunto Anexo 1).

En cuanto a la repetibilidad instrumental, el coeficiente de variación instrumental es menor

a 0.6% valor menor al especificado en la ecuación de Hortwitz, demostrando la precisión
del equipo en términos de repetibilidad.

Se realizó la prueba de repetibilidad del método para dos analistas; para el análisis de
Benzofenona 3 el Analista 1 obtuvo una desviacion estándar de 0.02 y coeficiente de
variación de 1.12%, el analista 2 obtuvo una desviación estándar de 0.04 y coeficiente de
variación de 1.33%. Para el análisis de EHMC el analista 1 obtuvo una desviación estándar
de 0.03 y coeficiente de variación de 0.51%, el analista dos obtuvo una desviación estándar
de 0.09 y coeficiente de variación de 1.25%. Para ambos casos el coeficiente de variación
fue menor al establecido en la ecuación de Hortwitz para el nivel de concentración
estudiado (2.8%).

El cálculo de reproducibilidad se realizó comparando las mediciones de los dos analistas.

Para el caso de la benzofenona 3 se obtuvo una desviación estándar de 0.03 y un coeficiente
de variación de 1.12%; para el caso del EHMC se obtuvo una desviación estándar de 0.07 y
un coeficiente de variación de 0.97%, estos valores obtenidos de coeficiente de variación
son menores de 2.8% de acuerdo a la ecuación de Hortwitz.

Se realizó la prueba de reproducibilidad intermedia comparando los resultados obtenidos

internamente con los resultados reportados por Tecnimicro; para el caso de Benzofenona 3
se obtuvo una desviación estándar de 0.09 y un coeficiente de variación de 2.88% y para el
caso de EHMC una desviación estándar de 0.19 y un coeficiente de variación de 2.79%. Se
observa que la desviación estándar y el coeficiente de variación presentan valores similares
o menores a los especificados en la ecuación de Hortwitz.

DECISION FINAL:

Se concluye que el método analítico es apto para la determinación de Benzofenona 3 y

EHMC en matrices de labiales y brillos, ya que el coeficiente de variación en todos los
resultados es menor que 2.8% (valor especificado en la ecuación de Horwitz para nivel de
concentración del analito menor o igual al 10% en la muestra).

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ANEXOS:

Anexo 1.
Resultados estudio 01 HPLC

Anexo 2.
Referencias de las familias que fueron incluidas en este estudio

ANEXO 2:

REFERENCIA DE FAMILIAS OBJETOS DEL ESTUDIO

Código FSC FI Color

1188084 1-56044 Rosa pálido - Colortrend Glossy Lipstick
1188085 1-56039 Rosa oscuro - Colortrend Glossy Lipstick
1188086 1-56045 Coral - Colortrend Glossy Lipstick
1188087 1-56046 Nude - Colortrend Glossy Lipstick
1188088 1-56040 Rojo - Colortrend Glossy Lipstick
1188089 1-56038 Ciruela - Colortrend Glossy Lipstick
1186654 1-54570 Palo de rosa - Colortrend Lápiz Labial
1186669 1-54575 Beso rosa - Colortrend Lápiz Labial
1186670 1-22537 Rosado muñeca - Colortrend Lápiz Labial
1186671 1-54576 Uva - Colortrend Lápiz Labial
1186672 1-22477 Violeta - Colortrend Lápiz Labial
1186673 1-54707 Vino tinto - Colortrend Lápiz Labial
1186674 1-22474 Rojo pop - Colortrend Lápiz Labial
1186675 1-54577 Rojo intenso - Colortrend Lápiz Labial
1186676 1-26090 Bom bom - Colortrend Lápiz Labial
1186677 1-54578 Carmin - Colortrend Lápiz Labial
1186659 1-54739 Coral - CT Mate Lipsctick
1186660 1-54738 Sandía - CT Mate Lipsctick
1186661 1-54745 Rojo Clásico - CT Mate Lipsctick
1186662 1-54756 Vino - CT Mate Lipsctick
1186663 1-54758 Rosado - CT Mate Lipsctick
1186664 1-54755 Rosa - CT Mate Lipsctick
1186665 1-54746 Piel - CT Mate Lipsctick
1186666 1-54757 Morado - CT Mate Lipsctick
1186667 1-54749 Ciruela - CT Mate Lipsctick
1186668 1-54747 Café clásico - CT Mate Lipsctick

Bodega 160 - Zona Franca Rionegro / (57) 4 561 78 42 / Vereda Chachafruto – Rionegro, Antioquia.
 1151563 1-52939 Pinking About You – Labial líquido mate
1151569 1-52940 Dare to Be Bare - Labial líquido mate
1151570 1-52928 Head Turner - Labial líquido mate
1151571 1-52944 Flushed - Labial líquido mate
1151572 1-52945 Fabulosity - Labial líquido mate
1151573 1-52929 Irresistible - Labial líquido mate
1151574 1-55319 Plump Up The Jam - Labial líquido mate
1151575 1-52934 Man Eater - Labial líquido mate
1151576 1-52936 Orange You Happy - Labial líquido mate
1151577 1-52937 Passion It - Labial líquido mate
1151578 1-52938 TKO - Labial líquido mate
1181813 1-54965 Kissy face - Labial líquido mate
1181814 1-54964 Mystique - Labial líquido mate
1181815 1-54960 Rock star - Labial líquido mate
1097450 1-45588 Pink Watermelon - True Color Ultraglazewear
1097454 1-45596 Mauve Movement - True Color Ultraglazewear
1097459 1-45605 Apple Cinnamon - True Color Ultraglazewear
1097461 1-45610 Fiery Red - True Color Ultraglazewear
1120501 1-45589 Palm Beach Pink - True Color Ultraglazewear
1123132 1-45624 Strawberry Shine - True Color Ultraglazewear
1163671 1-44686 Naturally Bare - True Color Ultraglazewear

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

25/11/2017 28/11/2017 29/11/2017
Juan Carlos Sánchez Yuly Miranda Silvio Romero
Ruby Restrepo
Marta Isaza

Bodega 160 - Zona Franca Rionegro / (57) 4 561 78 42 / Vereda Chachafruto – Rionegro, Antioquia.