LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

INFORME No. 6

TEMA: IDENTIFICACIÓN DE LAS FASES DE LA MITOSIS EN

RAÍCES DE CEBOLLAS (HORTALIZA) MEDIANTE OBSERVACIÓN
MICROSCÓPICA.

FECHA: 2014-01-04

INTRODUCCIÓN

La mitosis es una forma de división de las células la cual es la etapa final del ciclo
de las mismas. La mitosis es un proceso en el que el material genético de la célula
madre se divide en partes iguales lo que da como resultado dos células hijas
genéticamente idénticas a su progenitora. (Panigua. Biología Celular. 2007)
La interfase es un proceso previo a la mitosis y muy necesario para la misma. Este
se divide en 3 etapas G1, S y G2. En G1 es una etapa en la que la célula se nutre
y crece además se sintetizan el ADN y ARN, los cromosomas y cromatina no
están duplicados.
En S, es esta etapa se produce la síntesis y duplicación del ADN. En G2 se
incrementa la síntesis de proteínas, además la célula se prepara para la división
celular es decir se dividen los centríolos necesarios para formar el huso mitótico
posteriormente. (Curtis Shnek, Barnes Massarini. Biología. 7ma edición. 2007)

La mitosis está comprendida por las siguientes fases: profase, prometafase,

metafase, anafase y telofase; después de esta última de dividirá el citoplasma lo
que se conoce como citocinesis.

Profase

En esta etapa se produce una desorganización del citoesqueleto por lo que la

célula pierde su forma habitual, los microtúbulos se fragmentan y se reorganizan
para formar el huso acromático a partir del par de centríolos formados en la
interfase. La cromatina se condensa y se forman los cromosomas los cuales
constan de dos cromátidas unidas por un centrómero, estas cromátidas se van
engrosando y acortando y los cromosomas que inicialmente se encuentran
distribuidos en el núcleo se van acercando al borde de éste conforme progresa la
profase, el nucléolo empieza a desintegrarse y al final de esta etapa también lo
hace la envoltura nuclear.

Prometafase

Esta etapa comienza con la desaparición del nucléolo y la envoltura nuclear,

mientras que los centríolos se desplazan hacia los polos, en esta fase los
cromosomas tienen dos cinetocoros uno de cada lado del centrómero. Los
cromosomas se empiezan a desplazar hacia la zona ecuatorial de la célula y al
final de esta fase en encontrarán ordenados allí.

Metafase

Esta fase comienza cuando los cromosomas se encuentran en la zona ecuatorial,

los cromosomas tienen dos cinetocoros cada uno unido al polo más próximo. En
esta etapa los microtúbulos alcanzan su cinetocoro libre, de esta manera el
cromosoma se encuentra conectado a ambos polos, es decir cada cromátida se
encuentra unida a un polo diferente.

Anafase
Esta etapa comienza con la separación de las cromátidas, es decir la formación
de los cromosomas hijos . La anafase se ha dividido en dos etapas Anafase A y
Anafase B. En la anafase A las cromátidas hermanas se separan y empiezan a
migrar hacia los polos, mientras se trasladan el centrómero se encuentra más
cercano al polo que la cromátida tomando una forma de v. Este desplazamiento es
causado por el acortamiento de los microtúbulos cromosómicos. En la anafase B
se alarga el huso acromático debido a que los microtúbulos se unen al áster o a la
membrana celular, lo que contribuye al desplazamiento de los centríolos y además
provoca un alargamiento de la célula y se produce un estrangulamiento en el lugar
en donde la célula se dividirá. (Panigua. Biología Celular. 2007)

Telofase

Comienza cuando los cromosomas hijos se encuentran en los polos, éstos

empiezan a descondensarse para formar nuevamente la cromatina, mientras
tanto se vuelve a formar la envoltura nuclear. El citoesqueleto también se
reorganiza y el estrangulamiento es mucho más profundo que en la anafase.
(Biblioteca virtual universal. División celular. 2000. Recuperado de:
http://www.biblioteca.org.ar/libros/hipertextos%20de%20biologia/mitosis.htm)

CITOCINESIS

Es la división del citoplasma, siempre prosigue a una división celular. En este

proceso se reparten los orgánulos celulares a las células hijas, cada una recibe
aproximadamente la misma cantidad de ellos. Estos orgánulos se unen a
microtúbulos del huso y de esta manera se desplazan a cada célula hija. (Panigua.
Biología Celular. 2007)

HIPÓTESIS

Para observar el proceso de mitosis se necesita un material que se encuentre en

constante crecimiento, o dicho de otra manera que sus células se encuentren en
continua división. Por lo cual se ha utilizado un bulbo de cebolla que previamente
haya estado en contacto con el agua durante 4 o 5 días, ya que las raíces
cumplen dicha condición. De esta manera se podrá observar las diferentes etapas
de la mitosis en la raíz de la cebolla. (Gonzales M. Prácticas de Laboratorio y de
aula. 2003. Pág. 135)

OBJETIVOS

 Evaluar con criterio y en forma grupal, la información investigada acerca de

mitosis.
 Seleccionar y definir los pasos necesarios, para realizar la técnica de
laboratorio adecuadamente en forma individual y grupal.
 Realizar correctamente el montaje de la muestra seleccionada.
 Emplear reactivos y materiales de laboratorio para el montaje y observación de
las muestras, respetando normas de bioseguridad y el medio ambiente.
 Identificar y diferenciar mediante observación microscópica las fases de la
mitosis comparándolas con una galería de imágenes desde bibliografía
confiable.
 Identificar los cambios morfológicos en cada una de las fases de la mitosis en
base a bibliografía confiable.
 Distinguir correctamente los cromosomas y su disposición dentro de cada fase
de la mitosis.
 Discutir sobre la función de cada uno de los reactivos utilizados en la
preparación de muestras con fundamento científico.

MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES

 Placas portaobjetos
 Cubre objetos
 Bisturís o tijeras
 Pinzas de metal
 Pinzas de madera
 Picetas
 Erlenmeyers 200ml
 Vidrios reloj
 Mecheros de alcohol
 Pipetas desechables o goteros
 Pinzas de madera
 Papel especial para limpieza de microscopios
 Torundas de algodón
 Papel toalla.

REACTIVOS

 Ácido clorhídrico al 10%

 Ácido acético al 45%
 Orceína acética clorhídrica (A)
 Orceína acética B
  Solución fijadora de Carnoy
 Acetocarmín
 Aceite de inmersión
 Alcohol potable para mecheros de alcohol
 Agua destilada.

PROCEDIMIENTO:

Preparación de cebolla, una o dos semanas antes

1. Se colocó una cebolla roja (paiteña) o perla en un recipiente con agua de tal
forma que solo las raíces tengan contacto con el agua.
2. Se mantuvo la cebolla en el recipiente aproximadamente una semana, hasta el
día de la práctica de laboratorio.

Preparación de muestras de raíces

1.-Se cortó con bisturí o tijera, aproximadamente 0.5 a 1 cm de los ápices de las
raíces de la cebolla.

Tinción de muestras

Procedimiento 1 (Ácido clorhídrico, Orceína B):

1. Se colocó 2 gotas de una solución de ácido clorhídrico al 10% en un vidrio reloj

y calentar a la llama del mechero hasta 40ºC aproximadamente, tomando el vidrio
reloj con una pinza de madera.
2. Se depositó los ápices de raíces en el vidrio reloj conteniendo las dos gotas de
ácido clorhídrico al 10% (caliente), durante 7 minutos.
3. Con una pinza se retiró los ápices del vidrio reloj que los contiene y se trasladó
a otro vidrio reloj conteniendo una gota del colorante aceto-orceína (Orceína B),
durante 3 minutos.
4. Se depositó los ápices en una placa portaobjetos, agregar 1 gota de ácido
acético al 45% y cubrir con una placa cubreobjetos.
5. Se hizo una ligera pero firme presión sobre la placa cubre objetos, para obtener
una extensión de la muestra, quedando prácticamente transparente.
6. Se observó en el microscopio a 4, 10, 40 y 100x e identificar las fases de la
mitosis.

Procedimiento 2 (Orceína A y B):

1. Se depositó los ápices de las raíces en un vidrio reloj conteniendo 2 a 3 gotas
de Orceína acética clorhídrica (Orceína A), durante 7 minutos.
2. Se calentó suavemente el vidrio reloj a la llama del mechero de alcohol, con la
ayuda de una pinza de madera, evitando la ebullición, hasta que emita vapores
tenues. Dejar enfriar y repetir el proceso.
3. Se depositó con la ayuda de una pinza los ápices en una placa portaobjetos,
verter 1 gota de Orceína acética (Orceína B) y cubrir con cubreobjetos.
4. Se procedió de la misma forma que en los pasos 5 y 6 del procedimiento 1.

Procedimiento 3 (Carnoy y Acetocarmín):

1. Se depositó los ápices de raíces en un vidrio reloj conteniendo dos gotas de

solución fijadora de Carnoy (3 metanol: 1 ácido acético), durante 10 minutos.
2. Se trasladó con la ayuda de una pinza, los ápices a otro vidrio reloj que
contenga ácido clorhídrico al 10%, durante 7 minutos.
3. Se colocó los ápices en un vidrio reloj que contenga agua para lavar, por 3
minutos.
4. Se depositó los ápices en un vidrio reloj conteniendo Acetocarmín, durante 15
minutos.
5. Con la ayuda de una pinza, se depositó los ápices en una placa portaobjetos y
se cubrió con una placa cubreobjetos.
6. Se procedió de la misma forma que en los pasos 5 y 6 del procedimiento 1.
(Procedimiento tomado de la hoja guía)

RESULTADOS
Metafase y Profase
40x

Anafase
40x
 Metafase Telofase y Profase
40x

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En esta práctica de laboratorio se logró observar las fases de la mitosis, se siguió

el procedimiento dos, es decir se utilizó la orceína A y B para la tinción de la
muestra.

En el desarrollo de la práctica se pudo diferenciar las características de cada

etapa de la mitosis y las distintas estructuras que intervienen en ella como
cromosomas y huso mitótico. En la muestra se pudo observar gran cantidad de
células en anafase y metafase mientras que las células en telofase y profase
fueron escasas.

La observación fue complicada debido a que la muestra tomó un color rojo muy
fuerte lo que dificultó la visibilidad, esto sucedió ya que en el proceso de
preparación de la placa, específicamente en la tinción se utilizó demasiada orceína
A.

CONCLUSIONES
Se pudo observar la profase, metafase, anafase y telofase en el lente objetivo 40x.

En la profase se pudo observar que en esta etapa la membrana nuclear

desaparece al igual que el nucléolo, los cromosomas se hacen visibles.

En la metafase se logró observar muy fácilmente, se pudo observar que los

cromosomas eran más visibles y se encontraban ordenados en la zona ecuatorial,
además se pudo observar claramente el huso acromático.

En la anafase se logró observar que los cromosomas se encontraban divididos y

que cada cromátida hermana se encontraba desplazándose hacia el polo opuesto
adherida al huso acromático.

En la telofase se pudo observar que los cromosomas se encontraban menos

condensados, volviendo a su forma inicial de cromatina, además la envoltura
nuclear estaba reorganizándose. La característica más notoria era el
estrangulamiento profundo de la membrana plasmática.

BIBLIOGRAFÍA

Panigua, R.,Nistal, M.,Sesma, P., Álvarez- Uria, M., Fraile, B., Anadón, R., Sáes, F
2007. Biología celular McGraw- Hill. Cuarta edición. España. Pp: 359-366

González, M., Caballero, M., Olivares, E., Santisteban, A., Serrano, Ma. P. 2003.
Prácticas de laboratorio y de aula: biología, ecología, genética, geología. Narcea
ediciones. España. Recuperado de: http://books.google.com.ec/books

Curtis Shnek, Bernes Massarini. Biología. Editorial médica panamericana. 7ma

edición. 2007. Recuperado de: http://www.curtisbiologia.com/

Karp, G. Biología celular y molecular. 2006. Editorial interamericana. McGraw Hill.

Quinta edición. México. Recuperado de:
http://www.slideshare.net/GuarinaMolina/biologia-celular-y-molecular-5ta-ed

Biblioteca virtual universal. Dra. Ana María Gonzalez, Dr. Jorge S. Raisman.
División celular. 2000. Recuperado de:
http://www.biblioteca.org.ar/libros/hipertextos%20de%biología/mitosis.htm.