NUMERACIÓN DE COLIFORMES, DETERMINACIÓN DEL

NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP)

I.FUNDAMENTO TEÓRICO:

COLIFORMES: La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies

bacterianas que tienen ciertas características bioquímicas en común e importancia relevante
como indicadores de contaminación del agua y los alimentos.

Coliformes significa con forma de Coli, refiriéndose a la bacteria principal del grupo, la
Escherichia Coli, descubierta por el bacteriólogo alemán THEODOR VON ESCHERICH en 1860.

Caracteres bioquímicos:

El grupo agrupa a todas las bacterias entéricas que se caracterizan por tener las siguientes
propiedades bioquímicas:

> ser aerobias o anaerobias facultativas

> ser bacilos Gram negativos;

>no ser esporógenas

> fermentar la lactosa a 35 'C en 48 horas, produciendo ácido láctico y gas.

Las bacterias de este género se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de

los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero también ampliamente
distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales.

Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por las heces de humanos y
animales. Por tal motivo suele deducirse que la mayoría de los coliformes que se encuentran
en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, existen muchos coliformes de vida libre.

II. OBJETIVOS

Determinar el NMP de coliformes totales en muestras de alimentos.

Determinar la numeración de coliformes mediante el método de recuento en placa.

• Determinar en NMP de coliformes fecales en muestras de alimentos.

III. EQUIPOS Y MATERIALES:

1. Los requisitos necesarios para la preparación y dilución de la muestra de alimentos.

2. Incubadora de 35`C - 37°C

3. Pipetas bacteriológicas de 1m1

4. Aguja de incubación con alambre de nicrón o platino iridio.

5. Caldo verde brillante bilis lactosa (CALDO BRILA) volúmenes de 1m1 en tubos de 150x15mm
conteniendo tubos de fermentación

invertidos (75x1mm).
6. agar violeta cristal-rojo neutro- bilis (VRBA) o agar ENDO o agar Mc CONKEY

IV. PROCEDIMIENTO

NUMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES

1. Preparar las muestras de alimento de acuerdo al procedimiento recomendado.

2. Pipetear 1m1 de c/u de las diluciones del homogenizado de alimento en tubos de caldo
verde brillante bilis lactosa (caldo BRILA) utilizando tres tubos por dilución.

3. Incubar los tubos a 35°C - 37°C por 24- 48 horas

4. Anotar los tubos que muestren producción de gas (prueba presuntiva)

5. De cada tubo que contiene gas, aislar sobre placas con agar-violeta cristal-rojo neutro-bilis
(VRBA) o agar ENDO.

6. Incubar los tubos a 35°C - 37°C por 24- 48 horas

7. Confirmar la presencia de bacterias coliformes por:

a. la formación de colonias, rojo oscuro con diámetro mayor de 5mm en agar VRBA.

b. La formación de colonias rojas rodeadas halo en agar ENDO.

8. Anotar el número de tubos confirmados. Referirse a la tabla del NMP para expresar el
resultado.

NUMERACIÓN DE COLIFORMES DE ORÍGEN FECAL

I. EQUIPOS Y MATERIALES

1) Asa de inoculación.

2) Baño de agua, regulado a 44 (+/- 0.1°C)

3) Pipetas bacteriológicas de 5m1

4) Caldo verde brillante bilis lactosa (caldo BRILA), volúmenes de 10m1 en tubos de
150x15mm. Conteniendo tubos de fermentación invertidos (75x1Omm).

5) Caldo triptosa, volúmenes de 1m1 en tubos de 150x15mm.

6) Reactivo de KOVACS.

II. PROCEDIMIENTO:

1. Seleccionar los tubos de caldo verde brillante bilis lactosa (caldo BRILA) que muestren
formación de gas en prueba presuntiva.

2. Inocular una azada de cada tubo gas positivo a un tubo de caldo BRILA y un tubo de caldo
triptosado.

3. Incubar los tubos a 44 (+/- 0.1 °C)

4. Después de 24 horas de incubación, efectuar la prueba de indol en los tubos con caldo
triptosa.
5. Controlar la formación de gas en los tubos con caldo BRILA después de 24 y 48 horas de
incubación.

6. Los cultivos que muestran producción de gas en caldo BRILA y formación del indol en caldo
triptosa son positivos para coliformes fecales.

7. Referirse a la tabla de NMP para expresar el resultado.