PRÁCTICA DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA

GESTIÓN PRODUCTIVA 1.2
INGENIERÍA QUÍMICA

EFECTO DEL pH SOBRE LA AMILASA

OBJETIVOS
 Identificar la influencia de los cambios de pH sobre la actividad enzimática.

CONSIDERACIONES TEORICAS

Para cada enzima existe un óptimo del pH a que crean las condiciones más favorables para
el mantenimiento de la conformación funcionalmente activa de la molécula. Los grupos amino
y carboxilo de los restos de aminoácidos ionizados a una magnitud de pH determinada,
participan en el mantenimiento de la conformación de la molécula proteínica necesaria para
la formación de los centros catalíticos de enzima y favorecen también a su ligación con el
sustrato. A una magnitud de pH distinta se altera la ionización de los grupos
correspondientes, y como resultado se rompen los enlaces que aseguran la formación de los
centros catalíticos, y la enzima se inactiva. A los valores de pH muy altos o muy bajos las
enzimas se desnaturalizan.

MATERIALES Y REACTIVOS

Cant MATERIALES SUSTANCIAS EQUIPOS

3 Tubos de ensayo Cloruro de sodio al 0.3% pH metro
2 Vasos de precipitación 50ml Solución de lugol
2 Balones de 100ml Amilasa Baño maría
1 Probeta de 100ml Balanzas
1 Gradilla Solución de almidón 1%
1 Pera disuelto en una solución de
1 Termómetro ClNa 0,3%
1 Pizeta
1 Pipeta de 5 ml PBS (buffer de fosfatos)
1 Varilla de vidrio Ácido cítrico 0,1M
1 Pinza para tubos Hidróxido de Sodio 0.1M
1 Espátula Agua destilada (comprar
1 Vaso de precipitación de porque es para realizar un
250 ml enjuague bucal)
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PROCEDIMIENTO
1. Preparar las soluciones amortiguadoras: pH 5, 6,8 y 8, se toma 50 ml de PBS, y se
ajusta el pH correspondiente con Ácido cítrico al 0,1 M para el buffer de pH inferior
a 7 y el de pH alcalino con Hidróxido de Sodio.
2. Enjuagar la boca con aproximadamente 20 ml de agua destilada.
3. Colocar 3 ml de esta solución en cada tubo de ensayo, y rotular: 4, 5 y 6.
4. En los tres tubos colocar 3ml de la solución amortiguadora:

# Tubo Solución amortiguadora (pH)

4 5
5 6.8
6 8
5. En cada tubo colocar 5 ml de la solución de almidón.
6. Colocar los tubos en el baño maría por 10 minutos a 37 °C.
7. Transcurrido este tiempo, en los 3 tubos colocar 1 gota de lugol, y observar los
resultados observados e interpretarlos.

PREGUNTAS FINALES
Estas preguntas deben responderlas antes de realizar la práctica

a) ¿Qué es el pH?
b) ¿Qué es una sustancia amortiguadora o buffer y la importancia que tiene en la
estabilización del pH?
c) ¿Cómo está formado el Buffer PBS?
d) ¿Qué es la actividad enzimática de las enzimas y qué factores influyen para
que no se produzca?

BIBLIOGRAFÍA

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S.A.1993.

 BIOQUIMICA. J. DAVID RAWN. AD. INTERAMERICANA Mc. GRAW –

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 PRÁCTICA DE LABORATORIO

 BIOQUIMICA DE HARPER. ROBERT K MURRAY. AD. MANUAL MODERNO,

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 BIOQUIMICA: LAS BASES MOLECULARES DE LA ESTRUCTURA Y

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 PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY. ALBERT LEHNINGER. AD. WORTH

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