BIORREMEDIACIÓN DE SUELOS

CONTAMINADOS, CON EL USO DE

BACTERIAS DEL TIPO:
SACCHAROMYCES CEREVISIAE y/ o
PSEUDOMONAS

INTEGRANTES:
Marco Antonio Gutiérrez Cansaya
Hualpa Figueroa Xiomy Estefanie
Bastidas Sano Luis Miguel
Carpio Chávez Orializ
Carlos Quinua Jackeline

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 BIORREMEDIACIÓN DE SUELOS
CONTAMINADOS, CON EL USO DE
BACTERIAS DEL TIPO: SACCHAROMYCES
CEREVISIAE y/ o PSEUDOMONAS

FUNDAMENTOS DE LA INVESTIGACIÓN

1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVOS GENERALES

 Evaluar la biodegradación, a nivel laboratorio; mediante el

crecimiento de poblaciones de microorganismos adecuados, en los
suelos que son expuestos a daños por negligencia humana o
accidental.
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Cuantificar la cantidad de contaminante degradado por la acción de

la levadura Saccharomyces, Pseudomonas spp.
 Determinar en qué condición de trabajo.
 Comprobar la factibilidad del uso de microorganismos en el
tratamiento de biorremediación.

2. ANTECEDENTES

Las actividades antropogénicas aumentan la movilización y

distribución de los metales pesados, si se rebasan los estándares
permitidos por la normativa internacional resultan un serio problema
para la salud de los seres vivos y el medio ambiente. Uno de los casos
más alarmantes es el del arsénico; su presencia en agua potable y suelos
(y por ende en alimentos) es tal que hay reportados cientos de casos de
intoxicación severa en países como China y Bangladesh. Debido a las
actividades mineras, en algunas zonas de México como el Estado de
Chihuahua, también se han encontrado altas concentraciones del
elemento. Por el peligro que representa, la necesidad de encontrar
alternativas para la remediación de sitios contaminados con arsénico es
de suma importancia. Si bien existen diversos métodos físicos y

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 químicos que se han usado desde hace décadas, la biorremediación
constituye una alternativa prometedora que ofrece ventajas económicas
y es ef iciente. Esto último se debe a que se han aislado
microorganismos que pueden resistir altas concentraciones de arsénico
e incorporarlo a procesos metabólicos específ icos gracias a
mecanismos como la enzima arsenito oxidasa (AOX).

3. JUSTIFICACIÓN

Los metales pesados son elementos como Pb, Hg, Cu, Ni, Cr, Tl, Se, Cd, Zn, Al, Br
y As, con una densidad al menos cinco veces mayor a la del agua, se distinguen por
su persistencia en el medioambiente (Tchounwou et al., 2012; Yuan et al., 2016).
Por ser elementos de la corteza terrestre, no se pueden destruir ni degradar, su
biodisponibilidad y toxicidad dependen completamente de su comportamiento
químico (Bulgariu y Bulgariu,
2012; Pretorius et al., 2001). Aunque algunos metales pesados se consideran
micronutrientes, la bioacumulación de estos contaminantes en los organismos vivos,
puede causar serios efectos tóxicos y carcinogénicos aún en pequeñas dosis, por lo
que encabezan la lista de sustancias tóxicas más peligrosas (Dippong y Mihali,
2016; Khalilova y Mammadov, 2016; Osunkiyesi et al., 2014; Zhiqiang, 2015).
Los metales pesados se encuentran de manera natural en la roca madre y se
distribuyen a partir de interacciones geológicas como erosión y sedimentación o por
medio de procesos biogeoquímicos (Acosta et al., 2010; Venkatramanan et al.,
2015).

Esta investigación hecha por estudiantes del curso de Bioprocesos de la Escuela

Profesional de Ingeniería Química, busca disminuir en la medida posible la
contaminación de los suelos de una manera natural y efectiva sin producir más
contaminación, por ello utilizamos microorganismos biodegradadores los cuales están
en contacto con los contaminantes, en el cual nosotros controlamos el crecimiento
microbiano, parámetros importantes como nutrientes y oxígeno,.

4. PLANEAMIENTO DEL PROBLEMA

Las actividades del hombre dan origen con frecuencia a consecuencias

ambientales especialmente observables en el suelo, por ser éste el primer punto de
contacto de una fuga accidental de sustancias líquidas o sólidas que pueden ser
tóxicas. Si bien el suelo no es un medio importante en la dispersión de
contaminantes, en combinación con el agua y en menor medida con el aire se

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transforma en un agente dispersante de la contaminación presente. La
contaminación accidental más frecuente de suelos en nuestro país se verifica con
hidrocarburos provenientes de instalaciones fijas como destilerías de petróleo,
tanques subterráneos de estaciones de servicio, etc. o producidos por siniestros en
rutas con derrame de derivados del petróleo.

El tratamiento y recuperación de suelos contaminados se puede definir como

el conjunto de operaciones realizadas con el objetivo de controlar, disminuir
o eliminar los contaminantes presentes.
Por ello se debe Identificar las diferentes y principales tecnologías para el
tratamiento de suelos contaminados, así como los datos que deben tomarse en
cuenta para la selección de la tecnología más adecuada de acuerdo con las
características del suelo y medio ambiente peruano y el tipo de contaminante,
Remediar los suelos contaminados. Minimizar los daños ambientales por la
contaminación del metal . Estudiar las técnicas biológicas que se pueden
aplicar.

5. HIPÓTESIS

La biorremediación es una solución saludable, frente al deterioro progresivo de la

calidad del medio ambiente, ya que esta problemática genera una amenaza real a
la salud pública, así como la extinción de gran cantidad de especies vegetales y
animales.
Las levaduras del genero Saccharomyces Cerevisiae y/o Pseudomonas
podrían ser en gran potencial Oxidante de Aresenico +3 a Arsenico +5 por lo
que es factible la utilización de las mismas.

Se presentaran y definirán las principales tecnologías de remediación de suelos

utilizadas en otros países. Para los propósitos de exposición, las tecnologías de
remediación para suelos fueron divididas con base en su principio de acción.

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6. VARIABLES

6.1. VARIABLES INDEDEPENDIENTES

6.1.1 TIEMPO
Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del número de
microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al crecimiento
de un único microorganismo (ciclo celular) sino al demográfico de una población.

Por el cual el crecimiento celular de microorganismos está en función al tiempo

dado como se muestra en la siguiente figura.

Figura 1.1 Crecimiento celular respecto al tiempo

6.1.2 TEMPERATURA
Cada especie o bacteriana tiene temperaturas distintas de reproducción, de modo
que una bacteria puede presentar una temperatura óptima superior a la temperatura
máxima de otra, o inferior a la temperatura mínima de una tercera.

Según el rango de temperaturas adecuada será óptima para su reproducción.

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 6.2 VARIABLES DEPENDIENTES

6.2.1 CONCENTRACIÓN DE BACTERIAS

A medida que la concentración celular aumenta, la torta se hace más compacta.

MARCO TEORICO

1. BIORREMEDIACIÓN

La biorremediación es una tecnología que utiliza el potencial metabólico de

los microorganismos (fundamentalmente bacterias, pero también hongos y
levaduras) para transformar contaminantes en compuestos más simples
poco o nada contaminantes, y, por tanto, se puede utilizar para limpiar
terrenos o aguas contaminadas

Las bacterias poseen una gran diversidad metabólica, debido a su capacidad de obtener
energía empleando diferentes reacciones de óxido-reducción; por lo tanto, un número
importante de microorganismos son capaces de utilizar arsénico, ya sea en su forma
oxidada de arseniato o en la forma reducida de arsenito, para su metabolismo

1.1.FACTORES QUE CONDICIONAN LA BIORREMEDIACIÓN

DE UN SUELO

Humedad. Los microorganismos requieren unas condiciones mínimas de humedad

para su crecimiento. El agua forma parte del protoplasma bacteriano y sirve como
medio de transporte a través del cual los compuestos orgánicos y nutrientes son
movilizados hasta el interior de las células. Un exceso de humedad inhibirá el
crecimiento bacteriano al reducir la concentración de oxígeno en el suelo (el rango
varía en función de la técnica).

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 - Factores microbiológicos

El factor microbiológico más importante en la biorremediación es la

transformación biológica de compuestos, catalizada por acción de las enzimas.

1.2. MICROORGANISMOS EN LA BIORREMEDIACIÒN

Existen varias clases de microorganismos: mohos, levaduras, bacterias,

actinomicetos, protozoos, algas, virus.

Figura 2.1: Tamaño comparativo de algunos microorganismos

MATERIALES Y MÉTODOS
1. MATERIALES

 6 Placas Petri
 6 Tubos de ensayo
 4 recipientes de vidrio de 200ml
 1 Matraz de 250ml
 6 Jeringas
 1 balanza analítica
 1 autoclave
 1 incubadora
 1 vela

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  1 cinta masking
 1 bagueta
 1 papel craft, algodón, pabilo

2. INSUMOS

 100gr aprox de tierra contaminada con hidrocarburos.

 Inoculo ( cultivo de levadura)
 Harina disuelta
 Agar nutritivo
 Agua destilada
 Suero fisiológico

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Para la determinación de la biodegradación de hidrocarburos por las bacterias de cultivo de

levaduras, procedemos de la siguiente manera:

 Se toma una muestra de 2 kilos de tierra contaminada con metales y se forma una
torta de la cual se toma 400gr.
 Se procede a la activación de la bacteria.
 Se realiza el conteo celular utilizando el método de conteo en placa para determinar
las unidades formadoras de colonias.
 Se procede a la inoculación de la biomasa bacteriana en la muestra de tierra
contaminada siguiendo el siguiente orden.

MUESTRA INOCULO 1 AGUA 1 INOCULO 2

1 15 ml 60 ml 7.5 ml
2 35 ml 40 ml 17.5 ml
3 15 ml 60 ml 7.5ml
4 35 ml 40 ml 17.5ml

 Pasado los dos días se vuelve a agregar los volúmenes indicados de las bacterias y
las dejamos actuar dos días más.
 Se toma 50 gramos de la tierra final y llevar a analizar.

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 3.2.ACTIVACIÓN DE LA BACTERIA

 Calentar en baño maría el cultivo hasta una temperatura óptima para el

microorganismo, que es de 35°C a 40°C.

 Pasteurizar un la harina disuelta (70°C), trasvasar a un recipiente con tapa y dejar

enfriar hasta 40°C, agregar el cultivo, tapar el recipiente y llevar a la incubadora o
abrigar durante 2 horas aproximadamente. Sembrar

3.3.AGREGADO DE LAS BACTERIAS

 Tomar 100 g de tierra preparada y ponerla en un frasco de 200ml de volumen.

 Agregar el volumen necesario para cada una de las pruebas al recipiente de vidrio con
la tierra, formando una pequeña torta.
 Tapar herméticamente los medios que serán anaerobios, insertando previamente una
vela encendida.
 Pasado los dos días, se vuelve a agregar los volúmenes indicados de las bacterias y
las dejamos actuar dos días más.
 Tomar 50 gramos de la tierra final y llevar a analizar.

3.4.CONTEO DE CELULAS VIABLES

 De la solución de microorganismos tomar 1 ml y hacer las diluciones

correspondientes para el conteo de Unidades formadoras de colonia. (UFC)

 De cada dilución realizada, sembrar en placas Petri, las cuales contienen agar
Nutritivo.

 Dejar 24 horas en la incubadora, posteriormente realizar el conteo en placa de las

colonias que se formaron.

RESULTADOS
1. CONTEO DE CÉLULAS VIABLES:

Para saber el número de bacterias que se sembró en las muestras se determinó el número de
UFC al momento de sembrar, obteniéndose:
Dilución 3 (10-3) = 410
Dilución 4 (10-4) = 298  298 x 1/10-4 = 2.98 x 10+6 cel/ml
Dilución 5 (10-5) = se esparció
El número de cel/ml que se sembró en el inoculo es de 2,98 x 10+6

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