UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

AMBIENTAL

AISLAMIENTO Y CONTEO DE BACTERIAS Y HONGOS DE UNA

MUESTRA DE AGUA ESTANCADA

DETERMINACIÓN DE OD Y DBO

DOCENTES:

Dr. GUEVARA GONZALES JUAN JOSE

ESTUDIANTE:

RIOJAS PEREZ HAROLD MICK

TRUJILLO, PERÚ

2018
 AISLAMIENTO Y CONTEO DE BACTERIAS Y HONGOS EN UNA

MUESTRA DE AGUA ESTANCADA

INTRODUCCIÓN:

Los ambientes naturales en su totalidad son habitados por múltiples microorganismos de

diversos tipos y actividad fisiológica. Para efectuar el estudio de un organismo particular es

necesario separarlo de la población mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean técnicas

de aislamiento que conduzcan la obtención de un cultivo puro. De manera general los métodos de

aislamiento incluyen: Separación física de los microorganismos mediante diluciones seriadas y

siembra por vertido en placa y siembra por agotamiento, utilización de medios de cultivo selectivos

y diferenciales; y el aprovechamiento de características particulares de microorganismos, tales

como la formación de esporas, el metabolismo anaerobio y/o facultativo, la capacidad para utilizar

sustratos pocos comunes, etc.

La unidad de medida que se emplea para la cuantificación de estos microorganismos es la

unidad formadora de colonias (UFC), que sirve para contabilizar el número de bacterias o células

fúngicas (levaduras) viables en una muestra líquida o sólida, en funcion de su capacidad para dar

lugar a colonias en condiciones específicas de medio, temperatura y tiempo nutriente.

Una de las ventajas de este método es que las diferentes especies microbianas pueden dar lugar

a colonias claramente diferentes entre sí, tanto microscópica como macroscópicamente. La

morfología de la colonia entonces puede ser de gran utilidad en la identificación del

microorganismo presente en la muestra analizada.

El objetivo de esta práctica de laboratorio fue conocer y aprender el procedimiento para aislar

y contar bacterias y hongos en una muestra de agua estancada, y encontrar los UFC/ml de la misma.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO:

MATERIALES:

 Una muestra de agua estancada

 Agar Nutritivo

 Agar Sabouraud

 4 tubos de ensayo

 2 placas Petri

 Un mechero

 2 pipetas

 Un asa Drigalski

 Agua destilada

PROCEDIMIENTO:

- Primeramente se puso 9 ml de Agua destilada en cada uno de los tubos de ensayo,

rotulándolos pues cada uno representó una dilución (10−1 , 10−2 , 10−3 , 10−4 ).

- Luego se extrajo con una pipeta 0.1 ml de la muestra de agua estancada y se agregó al

tubo de la primera dilución, sin olvidar esterilizar el tubo con el mechero antes y taparlo

con algodón.

- Se agitó para diluir la mezcla y luego se procedió a hacer el mismo paso anterior pero

ahora sacando 0.1 ml del primer tubo y agregándole al segundo tubo.

- Estos pasos se repitieron hasta llegar a la última dilución y tener una muestra bien

diluida, sin olvidar esterilizar los tubos en cada paso.

 - Del tubo de la última dilución se sacó 0.1 ml y en placas vertidas (una con agar Nutritivo

y la otra con agar Sabouraud) se hizo la siembra en superficie con el asa Drigalski.

- Una vez hecha la siembra en ambas placas, estas se dispusieron a incubar a 30° C por 4

días en el laboratorio.

- Pasado los 4 días se procedió a hacer el conteo de bacterias y hongos que encontremos en

ambas placas y determinar los UFC/ml que tendría nuestra muestra.

RESULTADOS:

Luego de obtener el número de colonias en cada placa, se procedió a calcular las unidades

formadoras de colonia por ml con la siguiente fórmula:

𝑈𝐹𝐶 𝑛° 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠
=
𝑚𝑙 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑠𝑖𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎 ∗ 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

El factor de dilución fue:

0.1 0.1 0.1 0.1 1

∗ ∗ ∗ =
9.1 9.1 9.1 9.1 68574961

- En agar nutritivo: 53 colonias

Las UFC/ml en agar nutritivo sería:

𝑈𝐹𝐶 68574961 ∗ 53
=
𝑚𝑙 0.1

𝟑. 𝟔𝟑 ∗ 𝟏𝟎𝟏𝟎 𝑼𝑭𝑪/𝒎𝒍

- En agar Sabouraud: 37 colonias

Las UFC/ml en agar Sabouraud sería:

𝑈𝐹𝐶 68574961 ∗ 37
=
𝑚𝑙 0.1

𝟐. 𝟓𝟒 ∗ 𝟏𝟎𝟏𝟎 𝑼𝑭𝑪/𝒎𝒍
COMENTARIO

Para hacer un correcto conteo de bacterias y hongos debe aproximarse los microorganismos

que tendrá nuestra muestra a evaluar, ya que así podríamos saber cuántas diluciones deberíamos

hacer para poder encontrar una cantidad visible fácil de contar de las colonias.

Por otro lado, se evidenció que en el agar nutritivo crecen las bacterias y en el agar Sabouraud

hubo un crecimiento de hongos.

Hacer asilamiento y conteo de colonias es una de las prácticas básicas e importantes que debe

realizarse para poder estimular los microorganismos que tiene una determinada muestra a

evaluar.

CONCLUSIONES

 El aislamiento y conteo de bacterias es un análisis muy importante en la microbiología

que con un correcto y eficaz procedimiento puede estimular la cantidad de

microorganismos de una muestra que queramos evaluar.

 La muestra de agua estancada presentó un alto crecimiento de bacterias y hongos,

evidenciando una mayor presencia de microorganismos en la placa de agar nutritivo.

BIBLIOGRAFÍA

 Tortora, GJ; Funke, BR; Case, CL (2007). «Crecimiento microbiano». Introducción a

la microbiología (Novena edición). Buenos Aires: Médica Panamericana. p. 178

 Pelczar, Michael J. (1982). Microbiology (2da edición). Mc Graw Hill.

 Pommerville, Jeffrey C. (2010). Alcamo’s fundamentals of Microbiology (4ta edición).

Jones and Bartlett Publishers.

ANEXOS

Fig. 1: Muestra de agua estancada

Fig. 2: Tubos de ensayo con agua destilada para hacer las diluciones
 Fig. 3: Siembra en superficie de la muestra diluida en las placas con agar.

Fig. 4: Placas Petri con Agar Nutritivo y Sabouraud con las colonias luego del tiempo de

incubación.