UNIVERSIDAD VERACRUZANA

BIOQUÍMICA CLÍNICA
DR. FERNANDO MORAN HUERDO

ALUMNA
PAULINA RODRÍGUEZ MONTELONGO
Bioquímica Clínica

CICLO DE KREBS

Historia:

Si los libros científicos fueran crónicas que narraran el tortuoso camino de la ciencia
para viajar de una hipótesis a la siguiente, desechando la primera y fortaleciendo la
segunda, serian más cercanos a las realidades del progreso científico que a la ordenada
narrativa que a menudo presentan. Estas realidades son perfectamente ilustradas por la
historia y descubrimiento del ciclo del ácido cítrico.

La historia comienza a principios de la década de los 30´s con el descubrimiento de

que al agregar succinato, fumarato y malato a músculos machacados incrementa la
velocidad del consumo de Oxígeno. El oxaloacetato se incorporó a la lista de
ácidos dicarboxílicoscuando se descubrió que se podía formar en condiciones aeróbicas a
partir del piruvato. En 1935 A. Szent-Györgyi propuso que ciertos pares de
ácidos dicarboxilicos eran interconvertidos por la acción de deshidrogenasas y que este
proceso estaba relacionado con la respiración.

Aunque el ácido cítrico fue descubierto en 1784 por Carl Wilhelm Scheele en el jugo
de limón, y no fue hasta 1937 que los científicos entendieron su participación en el
metabolismo. Carl Martius y Franz Knoop mostraron que el ácido cítrico es convertido en
alfa-cetoglutaratopor medio del isocitrato. Se supo también que el alfa-
cetoglutarato puede ser oxidado a succinato.

La formación del citrato era la pieza faltante para poder armar completamente el
rompecabezas metabólico. El descubrimiento que resolvió este rompecabezas y unificó el
metabolismo fue hecho en 1937 por Sir Hans Krebs y W.A. Johnson: ellos mostraron que el
citrato es derivado del piruvato y del oxaloacetato completando lo que se conoce como el
ciclo del ácido cítrico. En 1953 Krebs ganó el premio Nobel por estas importantes
aportaciones.

Se necesito de una década para demostrar que el Ac-CoA, derivado del piruvato, es
la fuente intermediaria de los fragmentos de dos Carbonos que se combinan con el
oxaloacetato para formar citrato.

En 1948 E.P. Kennedy y A. Lenhinger descubrieron que en mitocondrias aisladas

de homogenados de hígado de rata, se llevaban a cabo la oxidación del piruvato y de
todos los intermediarios del ciclo de Krebs a expensas de O2, por tanto contienen todas las
enzimas necesarias para catalizar las reacciones del ciclo y del transporte energético.
Algunas de las enzimas que participan en este proceso, están en la matriz mitocondrial,
otras unidas a la membrana interna. En algunos tejidos, en el citosol, se encuentran
la aconitasa (hidrolasa), la isocitratodeshidrogenasa (NADP+ dependiente), la fumarasa y
la malato deshidrogenasa.

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

La respiración es el proceso por medio del cual las células aeróbicas obtienen
energía a partir de la oxidación de las moléculas combustibles por el oxígeno.

El ciclo de Krebs, es la ruta central común para la degradación de los restos acetilo
(de 2 átomos de C) que derivan de los glúcidos, ácidos grasos y aminoácidos. Es una ruta
universal, catalizada por un sistema multienzimático que acepta los grupos acetilo
del acetil-CoAcomo combustible, degradándolo hasta CO2 y átomos de Hidrógeno, que
son conducidos hasta el O2 que se reduce para formar H2O (en la cadena de transporte de
electrones).

Figura: las reacciones del ciclo de Krebs.

La oxidación del piruvato a Ac-CoA es catalizada por el

complejo multienzimático de la piruvato deshidrogenasa (PDH), el proceso que es muy
complicado, se resume en:

Piruvato + NAD+ + CoA → Ac-CoA + NADH + H+ + CO2 DG°´= - 8.0kcal/mol

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

Esta reacción irreversible en tejidos animales, no forma parte del ciclo de Krebs,
pero constituye un paso obligatorio para la incorporación de los glúcidos al ciclo.

El trabajo acoplado del ciclo del ácido cítrico y la cadena de transporte de electrones
es la mayor fuente de energía metabólica.

El metabolismo aerobio del piruvato por el ciclo del ácido cítrico y la cadena de
transporte de electrones produce mucha mas energía que la simple conversión aerobia
del piruvato a lactato o etanol. En condiciones aerobicas, el piruvato sufre
una descarboxilacion oxidativa con la formación de AcCoA. El grupo acetilo del AcCoA es
transferido al oxaloacetato para dar citrato

En reacciones subsecuentes, dos de los átomos de Carbono del citrato se oxidan a

CO2 y el oxaloacetato es regenerado. La reacción neta de ciclo del ácido cítrico también
produce tres moléculas de NADH, una de FADH2 y una molécula del
compuesto trifosfato de guanosina(GTP) altamente energético (en algunos organismos es
directamente ATP) por cada molécula de AcCoA oxidada

AcCoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi + H2O → CoASH + 3NADH + FADH2 + GTP + 2CO2 + 3H+

Las moléculas de NADH y FADH2 son oxidadas en la cadena de transporte de

electrones con la formación de ATP en la fosforilación oxidativa. El ATP puede ser
producido a partir del GTP vía una fosforilación a nivel de sustrato, que es la transferencia
de un grupo fosforilo de un compuesto rico en energía como el GTP, al ADP.

La conversión anaeróbica de glucosa a lactato por la glucólisis ocurre con un cambio

en la energía libre estándar de – 30 kcal mol-1

D-glucosa + 2Pi + 2ADP

2lactato + 2ATP + 2H2O

La oxidación completa de la glucosa a bióxido de Carbono y agua por la glucólisis, el

ciclo del ácido cítrico y la cadena de transporte de electrones ocurre con un cambio en la
energía libre estándar de – 686 kcal mol-1, un cambio de más de 20 veces:

C6H12O6 + 6O2 → 6CO2 + 6H2O DG°´= - 686 kcalmol.

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

Alrededor del 40 % de la energía liberada por la oxidación de los alimentos es

conservada en forma de ATP. Aproximadamente tres moléculas de ATP son producidas
por cada molécula de NADH oxidada a NAD+ y aproximadamente dos moléculas de ATP
son producidas por cada molécula de FADH2 oxidada a FAD por la cadena de transporte de
electrones. Un máximo de 38 moléculas de ATP pueden ser producidas por la oxidación
completa de la glucosa.

Sir Hans Adolf Krebs (Hildesheim, Alemania, 25 de agosto de 1900 - Oxford, Inglaterra, 22
de noviembre de 1981)

Campo Medicina interna y Bioquímica

Instituciones Instituto para la Biología Kaiser

Wilhelm
Universidad de Hamburgo
Universidad de Cambridge
Universidad de Sheffield
Universidad de Oxford

Alma máter Universidad de Göttingen

Universidad de Friburgo
Universidad de Berlín
Universidad de Hamburgo

Conocido por El Ciclo de la urea y el Ciclo del ácido

cítrico

Premios Nobel de Fisiología o Medicina(1953)

destacados

Cónyuge Margaret Cicely Fieldhouse

En el origen de la bioquímica se distinguen dos fases: la constitución de la química

orgánica, por un lado, y a su aplicación al estudio de las funciones de los seres vivos -
química fisiológica-, por otro. El término "bioquímica", acuñado por Hope-Seyler, tomó su
actual sentido en las primeras décadas del siglo XX, como un área centrada en la
investigación de las reacciones químicas que tienen lugar en los seres vivos y de las
enzimas que las regulan.

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

Un concepto fundamental en la bioquímica es el de "metabolismo", que fue elaborado a

lo largo del siglo XIX, con los supuestos y métodos de la química fisiológica, como un
conjunto de las reacciones químicas que se producen en el organismo, construyendo
moléculas mayores a partir de otras menores (que denominamos, anabolismo) y
descomponiéndolas en otras más pequeñas (o catabolismo).

En este contexto podemos situar la labor de Hans Adolf Krebs. Nació en 1900 en la ciudad
alemana de Hildesheim y realizó sus estudios de medicina en diversas universidades:
Göttingen, Friburgo, Munich y Berlín. Entre 1926 y 1930 trabajó en el Kaiser Wilhelm
Institut junto a Otto Warburg. Allí ya se sintió interesado en el problema que planteaba
desconocer las distintas etapas por las que discurría el proceso de oxidación de los
hidratos de carbono en el interior de las células. En 1932 en la Universidad de Friburgo
descubrió junto con el también bioquímico Kurt Henseleit, una serie de reacciones
químicas que hoy conocemos con el nombre de "ciclo de la urea". El amoníaco obtenido
de la degradación de los aminoácidos es muy tóxico para el sistema nervioso, y los
animales lo excretan de formas diferentes. La mayoría de los vertebrados excretan urea
(ureotélicos). En el hombre este proceso se realiza en el hígado, consume energía y se
produce en parte en el citosol y parte en la mitocondria de los hepatocitos.

Siendo hijo de médico judio, Krebs fue obligado a abandonar la Alemania nazi en 1933.
Fue entonces cuando emigró a Inglaterra con una ayuda de la Fundación Rockefeller para
trabajar en Cambridge con Frederick Gowland Hopkins. El año 1935 se trasladó a Sheffield
donde continuó su trabajo científico con Edward Mellamby. Allí fue nombrado profesor y
director del Departamento de Bioquímica, y comenzó sus trabajos sobre el metabolismo
celular.

Fue ese año cuando el equipo del laboratorio de Szent-Gyorgyi dieron a conocer el
hallazgo sobre las cualidades del músculo de la pechuga de paloma para el estudio de las
reacciones oxidativas. El grupo de Krebs, dos años más tarde, descubrió la acción
catalizadora del citrato. De forma inmediata siguieron otros acontecimientos -entre ellos
los de Martius y Knoop-, que condujeron al conocimiento definitivo del llamado "ciclo del
ácido cítrico" o de Krebs. Fue Fritz Albert Lipmann quien, con su estudio sobre la coenzima
A, completó el conocimiento del mencionado ciclo. Ambos, Krebs y Lipmann, recibieron
por su labor el premio Nobel de fisiología y medicina en 1953.

En el metabolismo de los hidratos de carbono, para la obtención de energía a partir de la

glucosa, una de las etapas es la descarboxilación oxidativa del piruvato para formar acetil
Coenzima A (acetil-CoA). A continuación, el grupo acetilo del acetil CoA se oxida
completamente a antídrido carbónico, a través del este ciclo (ciclo de Krebs). Es éste la

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

ruta oxidativa final de la glucosa y de la mayoría de combustibles metabólicos. Consta de

ocho reacciones catalizadas enzimáticamente y se lleva a cabo en la matriz mitocondrial.

Hay varios trabajos del propio Krebs dedicados al tema, entre los que destacan el que
lleva por título The tri-carboxylic acid cicle, que fue publicado en las Harvey Lectures (Serie
XLIV, 165-99; 1948); y el que firmó con Hans L. Kornberg: "A survey of the energy
transformations in living matter" (Ergebnisse der Physiologie, 49, 212-298, 1957).

Este último trabajo lo publicó estando ya en la Universidad de Oxford, donde permaneció

entre los años 1954 y 1967. En esta etapa trabajó también en el estudio de los estados
vitamínicos deficitarios .La Royal Society le concedió la Copley Medal en 1961. Murió en
esta ciudad en 1981, año de publicación de su Reminiscences and Reflections, que escribió
con Anne Martin.

José L. Fresquet. Instituto de Historia de la Ciencia y Documentación (Universidad de

Valencia-CSIC) Marzo, 2001.

Obras de Krebs

Krebs, H.A.; Johnson, W.A. Citric acid in intermediate metabolism in animal tissues.
Enzymologia, 1937; 4: 148-56.

Krebs, H.A. The tri-carboxylic acid cicle. Harvey Lectures, Serie XLIV, 1948: 165-99.

Krebs, H.A.; Kornberg, H.L. A survey of the energy transformations in living matter.
Ergebnisse der Physiologie, 1957; 49,: 212-298.

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

Etapas del Ciclo de Krebs

Reacción 1: Citrato sintasa (De oxalacetato a citrato)

El sitio activo de la enzima, activa el acetil-CoA para hacerlo

afín a un centro carbonoso del oxalacetato. Como
consecuencia de la unión entre las dos moléculas, el grupo
tioéster (CoA) se hidroliza, formando así la molécula de
citrato.

La reacción es sumamente exoergónica (ΔG'°=-31.4 kJ/mol), motivo por el cual este paso
es irreversible. El citrato producido por la enzima, además, es capaz de inhibir
competitivamente la actividad de la enzima. Incluso estando la reacción muy favorecida
(porque es exoergónica), la citrato sintasa puede ser perfectamente regulada. Este
aspecto tiene una notable importancia biológica, puesto que permite una completa
regulación del ciclo de Krebs completo, convirtiendo a la enzima en una especie de
marcapasos del ciclo.

Reacción 2: Aconitasa (De citrato a isocitrato)

La aconitasa cataliza la isomerización del citrato a isocitrato,

por la formación de cis-aconitato. La enzima cataliza también
la reacción inversa, pero en el ciclo de Krebs tal reacción es
unidireccional a causa de la ley de acción de masa: las concentraciones (en condiciones
estándar) de citrato (91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de isocitrato (6%),
empujan decididamente la reacción hacia la producción de isocitrato.

En el sitio activo de la enzima está presente un clúster hierro-azufre que, junto a algunos
residuos de aminoácidos polares, liga el sustrato. En concreto, la unión al sustrato se
asegura por la presencia de un resto de serina, de arginina, de histidina y de aspartato,
que permiten sólo la unión estereospecifica del citrato 1R,2S, rechazando la forma
opuesta.

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

Reacción 3: Isocitrato deshidrogenasa (De isocitrato a oxoglutarato)

La isocitrato deshidrogenasa mitocondrial es una enzima

dependiente de la presencia de NAD+ y de Mn2+ o Mg2+.
Inicialmente, la enzima cataliza la oxidación del isocitrato a
oxalsuccinato, lo que genera una molécula de NADH a partir
de NAD+. Sucesivamente, la presencia de un ión bivalente, que forma un complejo con los
oxígenos del grupo carboxilo en posición alfa, aumenta la electronegatividad de esa región
molecular. Esto genera una reorganización de los electrones en la molécula, con la
consiguiente rotura de la unión entre el carbono en posición gamma y el grupo carboxilo
adyacente. De este modo se tiene una descarboxilación, es decir, la salida de una
molécula de CO2, que conduce a la formación de α-cetoglutarato, caracterizado por dos
carboxilos en las extremidades y una cetona en posición alfa con respecto de uno de los
dos grupos carboxilo.

Reacción 4: α-cetoglutarato deshidrogenasa (De oxoglutarato a Succinil-CoA)

Después de la conversión del isocitrato en α-cetoglutarato se

produce una segunda reacción de descarboxilación oxidativa,
que lleva a la formación de succinil CoA. La descarboxilación
oxidativa del α-chetoglutarato es muy parecida a la del
piruvato, otro α-cetoácido.

Ambas reacciones incluyen la descarboxilación de un α-cetoácido y la consiguiente

producción de una unión tioéster a alta energía con la coenzima A. Los complejos que
catalizan tales reacciones son parecidos entre ellos.

La α-cetoglutarato deshidrogenasa (o, más correctamente, oxoglutarato deshidrogenasa),

está compuesta de tres enzimas diferentes:
* Subunidad E1: las dos cetoglutarato deshidrogenasas.
* Subunidad E2: la transuccinilasa.
(La subunidad E1 y E2 presentan una gran homología con las de la piruvato
deshidrogenasa.)

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

* Subunidad E3: la dihidrolipoamida deshidrogenasa, que es el mismo polipéptido

presente en el otro complejo enzimático.

Reacción 5: Succinil-CoA sintetasa (De Succinil-CoA a succinato)

El succinil-CoA es un tioéster a alta energía (su ΔG°′ de

hidrólisis está en unos -33.5 kJ mol-1, parecido al del ATP que
es de -30.5 kJ mol-1). La citrato sintasa se sirve de un
intermediario con tal unión a alta energía para llevar a cabo la
fusión entre una molécula con dos átomos de carbono (acetil-
CoA) y una con cuatro (oxalacetato). La enzima succinil-CoA
sintetasa se sirve de tal energía para fosforilar un nucleósido difosfato purinico como el
GDP.

La energía procedente del tioéster viene convertida en energía ligada a una unión fosfato.
El primer paso de la reacción genera un nuevo intermediario a alta energía, conocido
como succinil fosfato. Sucesivamente, una histidina presente en el sitio catalítico remueve
el fosfato de la molécula glucídica, generando el producto succinato y una molécula de
fosfohistidina, que dona velozmente el fosfato a un nucleósido difosfato, recargándolo a
trifosfato. Se trata del único paso del ciclo de Krebs en el que se produce una fosforilación
a nivel de sustrato.

El GTP está implicado principalmente en las rutas de transducción de señales, pero su

papel en un proceso energético como el ciclo de Krebs es, en cambio, esencialmente
trasladar grupos fosfato hacia el ATP, en una reacción catalizada por la enzima nucleósido
difosfoquinasa.

Reacción 6: Succinato deshidrogenasa (De succinato a fumarato)

La parte final del ciclo consiste en la reorganización de

moléculas a cuatro átomos de carbono hasta la regeneración
del oxalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo
presente en el succinato tiene que convertirse en un
carbonilo. Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la beta
oxidación de los ácidos grasos, tal conversión ocurre mediante
tres pasos: una primera oxidación, una hidratación y una

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

segunda oxidación. Estos tres pasos, además de regenerar oxalacetato, permiten la

extracción ulterior de energía mediante la formación de FADH2 y NADH.

La primera reacción de oxidación es catalizada por el complejo enzimático de la succinato

deshidrogenasa, la única enzima del ciclo que tiene como aceptor de hidrógeno al FAD en
vez de al NAD+. El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un residuo de
histidina. La enzima se vale del FAD ya que la energía asociada a la reacción no es
suficiente para reducir el NAD+.

El complejo enzimático también es el único del ciclo que pasa dentro de la membrana
mitocondrial. Tal posición se debe a la implicación de la enzima en la cadena de transporte
de los electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se introducen directamente en la
cadena gracias a la unión estable entre la enzima y el cofactor mismo.

Reacción 7: Fumarasa (De fumarato a L-malato)

La fumarasa cataliza la adición en trans de un protón y un

grupo OH-procedentes de una molécula de agua. La
hidratación del fumarato produce L-malato.

Reacción 8: Malato deshidrogenasa (De L-malato a oxalacetato)

La última reacción del ciclo de Krebs consiste en la oxidación

del malato a oxalacetato. La reacción, catalizada por la malato
deshidrogenasa, utiliza otra molécula de NAD+ como aceptor
de hidrógeno, produciendo NADH.

La energía libre de Gibbs asociada con esta última reacción es decididamente positiva, a
diferencia de las otras del ciclo. La actividad de la enzima es remolcada por el consumo de
oxalacetato por parte de la citrato sintasa, y de NADH por parte de la cadena de
transporte de electrones.

Paulina Rodríguez Montelongo

Bioquímica Clínica

Bibliografía

—Holmes, F.L. (1991), Hans Krebs: The Formation of a Scientific Life 1900-1933,
(Monographs in the History and Philosophy of Biology).

—Holmes, F. L.(1993), Hans Krebs: Architect of Intermediary Metabolism ,1933-1937.

http://www.historiadelamedicina.org/krebs.html

http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/generalidades%20krebs.html

http://www.ciclodekrebs.com/etapas_del_ciclo_de_krebs

Paulina Rodríguez Montelongo