UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS

-ESPE-
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR

INTEGRANTES:
Flores Gabriela
Molina Mateo
Quishpe Damián
Saeteros Soledad
TUTOR:
Ing. Karina Ponce
NRC:
1546
Fecha de entrega:
03/12/2016
N° PRÁCTICA: 1
TITULO DE LA PRÁCTICA:
Diferenciación microscópica de la morfología de células procariotas (bacterias) y
eucariotas (epiteliales), utilizando tinción simple con azul de metileno y fijación al
calor, desde muestras de mucosa obtenidas de la cavidad bucal.

1. INTRODUCCIÓN
Las bacterias (con excepción de los microplasmas grupo de organismos al que
pertenecen patógenos de los géneros Mycoplasma y Ureaplasma), presentan una pared
celular formada por un polímero complejo denominado peptidoglicano, la mayoría de
microorganismo procarióticos limita su observación microoscopica a determinar la
forma, modo de agrupamiento, movimiento y presencia de algunos elementos
extracelulares tales como las cápsulas, mientras que las células epiteliales en su
observación microscópica la diversidad morfológica y anatómica es mucho mayor.
(Acevedo, Sereviche, & Catillo, 2013)

1. HIPOTESIS
 Las células epiteliales difieren en tamaño con respecto a las bacterias (cocos y
bacilos) presentes en la mucosa bucal al aplicar tinción simple con azul de
metileno.

2. OBJETIVOS
 Realizar adecuadamente un frotis con la muestra seleccionada.
 Aplicar fijación de muestras con el método físico (llama del mechero),
utilizando fundamento científico.
 Identificar y diferenciar mediante observación microscópica forma, tamaño y
estructuras (membrana celular, núcleo, citoplasma) de las células epiteliales
 (eucariotas) y bacterias (procariotas) comparándolas con una galería de
imágenes desde bibliografía confiable.
 Discutir sobre la función de la tinción simple con azul de metileno utilizando
bibliografía confiable.
 Emplear adecuadamente colorantes, reactivos y materiales para fijación y
tinción de células epiteliales y bacterias.

3. METODOLOGIA
Muestra: Raspado de la cavidad interna de las mejillas (mucosa bucal).
Organismos: Bacterias y células epiteliales de la cavidad bucal de los estudiantes
presentes.
Insumos: Placas portaobjetos, pipetas desechables, goteros, mecheros de alcohol,
palillos de madera estériles, hisopos estériles, vasos de precipitación 500mL y 100mL,
picetas, bandeja para depositar colorantes, papel especial para limpieza de
microscopios, torundas de algodón, papel toalla.
Materiales de protección personal: Mandil, guantes.
Equipos: Microscopios ópticos de campo claro (lentes objetivos 4, 10, 40 y 100x)
Reactivos: ninguno
Equipo de observación(Microscopios
ópticos de campo claro (lentes
objetivos 4, 10, 40 y 100x))

Obtención de muestras(hisopo de
madera estéril)
 Obtención de muestras (palillos de
madera estéril,)

Equipo de observación(placa porta

objetos)

4. PROCEDIMIENTO
5. Limpiar una placa porta objetos con papel toalla y alcohol antiséptico.
6. Sacar un palillo o hisopo de madera estéril, abriendo el recipiente que los
contiene y cerrarlo nuevamente.
7. Con la ayuda de un palillo o hisopo estéril frotar suavemente la parte interna de
8. su mejilla,laobteniendo
Extender
portaobjetos muestra,
y una muestra.
frotando con el palillo o hisopo de madera sobre la placa
9. Fijar la muestra al calor con la llama de un mechero de alcohol, pasando la placa
varias veces en la llama y procurando no sobrecalentar. Si sobrecalienta la
placa, esperar que se enfríe para volver a pasarla por la llama.
10. Se coloca la placa sobre la bandeja para depósito de colorantes y en seguida
proceder a teñir la muestra, cubriéndola con 1 o 2 gotas de azul de metileno,
durante 1 minuto.
11. Enjuagar con agua (piceta), depositando el exceso de colorante dentro de la
bandeja para este fin.
12. Secar la placa para eliminar el agua: al aire libre o pasándola en la llama del
mechero o si fuese necesario absorber delicadamente el agua con papel toalla.
13. Colocar la placa en el microscopio óptico de campo claro y en primera enfocar
con el lente objetivo 4x.
14. Cambiar a los lentes objetivos 10 y 40x, manipulando macrométrico o
micrométrico lentamente.
15. Después de enfocar en 40x, girar el revólver dejando en posición media los
lentes objetivos 40 y 100x para permitir colocar una gota de aceite de inmersión
en la placa, colocar el lente 100x y ajustar la observación con el tornillo
micrométrico.
16. Se observó e identificó las estructuras y formas de las células eucariotes
(epiteliales) y procariotes (bacterias).
17. Al terminar de trabajar con el microscopio, no olvidar: bajar la luz al mínimo,
bajar la platina y centrarla, colocar el lente objetivo de menor aumento (4x),
apagar, desconectar.
18. Limpiar con papel especial los lentes objetivos del microscopio empezando
desde el 4x hasta el 40x y por último, el lente con aceite de inmersión (100x). Si
este último tiene exceso de aceite (generalmente aceite de otros días) proceder a
limpiarlo con algodón y solución de alcohol (algodón exprimido).
19. Limpiar los lentes de oculares y condensador con el mismo papel especial,
siempre y cuando no esté sucio de aceite, de lo contrario use más papel.
20. Las demás partes del microscopio limpiar con algodón y solución de alcohol,
dejándolo libre de aceite, colorantes u otros.
21. Anotar los datos requeridos en la respectiva bitácora y devolverla en orden a las
repisas destinadas para ellas, siempre y cuando sean cursos de la tarde.
6. RESULTADOS OBTENIDOS
Células epiteliales, 4x, azul de metileno

Células epiteliales, 10x, azul de

metileno

Células epiteliales, 40x, azul de

metileno
 Células epiteliales (eucariotas) y
bacterias (procariotas), 100x, azul de
metileno

Bacterias (procariotas) dispuestas como

estreptococos, 100x, azul de metileno

7. DISCUSIÓN
La forma de las células eucariotas es irregular y la forma de las células procariotas o
bacterias es esférica o en forma de cocos, de los cuales distinguimos dos tipos:
diplococos y estreptococos. Los diplococos son agrupaciones en parejas de los cocos y
los estreptococos que adoptan formaciones en cadena. (Michael T. Madigan , Jhon M.
Martinko, Jack Parker, 2004). Las células eucariotas existen en mayor parte, ya que
estas son las que se encuentran presentes en todos los seres vivos.

La mucosa bucal es una capa formada por epitelio y el tejido conjuntivo subyacente,
que reviste las paredes internas de aquéllos órganos que están en comunicación con el
exterior del cuerpo. Suele estar asociada a numerosas glándulas secretoras de moco y
presenta funciones de protección, secreción y absorción. (Biología Aplicada, 2015).

La boca se halla tapizada por la mucosa bucal. Se extiende desde el borde rojo de los
labios hasta el itsmo de las fauces. (Biología Aplicada, 2015).

El azul de metileno permite teñir el interior celular. Tiñe microorganismos procarióticos

(vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras,
como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que
el resto de la célula. (Laboratorio de Microbiología, 2014).
El azul de metileno es una forma de tinción sencilla, que como lo dice su nombre tiñe de
azul las bacterias; de esta manera es mas fácil la visualización de la morfología y
disposición de las células en un porta-objetos.

8. CONCLUSIONES:
1. Se identificó y diferenció la estructura morfológica de procariotas (bacterias)
y células eucariotas (epiteliales), de las cuales se pudo observar la
membrana celular, núcleo, citoplasma, empleando el aumento respectivo.
2. Se pudo evidenciar que la tinción con azul de metileno permite la
observación de la célula, es este caso eucariota, con claridad y precisión.
3. En la boca del ser humano, por ser organismo vivo, existen varias bacterias
eucariotas dispuestas juntas o aisladas.
4. El aceite de inmersión fue fundamental para lograr una buena observación de
las células con el elnte objetivo 100x.

9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

CENIAC. (2014). Tinción basica en el laboratorio de microbiologia. Investigacion en

Discapacidad , 18.
Michael T. Madigan , Jhon M. Martinko, Jack Parker. (2004). Brok, Biologia de los
microorganismos . Prentice Hall .
Acevedo, Sereviche, & Catillo. (2013). Biologia y Microbiologia Ambiental. Cartagena
de Indias.
Biología Aplicada. (27 de Enero de 2015). Blogger. Recuperado el 03 de Diciembre de
2016, de Biología Aplicada 4ºA-1-2014 :
http://practibiofuentezuelas20144esoa1.blogspot.com/2015/01/celulas-animales-
mucosa-bucal.html
Laboratorio de Microbiología. (2014). Blogger. Recuperado el 03 de Diciembre de
2016, de Observación de Bacterias:
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.com/p/observacion-de-bacterias.html