Bioingeniería

Laboratorio de Química Orgánica

Práctica de Laboratorio N°2

TLC de Vegetales

Integrantes:

● Alvarado Tolentino, Alejandro Felipe

● Benites Mozo, Yarilenka Geraldine
● Cachay Tumi, Roberto
● Cardó Echegaray, Joaquín

Profesora:​ Bertholdo Vargas, Lucia Rosane

Sección:​ Lab 1.02 (Semana B)

Fecha de realización:​ 23 de Abril

Fecha de entrega:​ 30 de Abril

1
 Bioingeniería

1. Introducción

La cromatografía de capa fina es una técnica analítica cualitativa que se usa

frecuentemente en el laboratorio de química orgánica debido a su sencillez y rapidez.
Permite determinar la efectividad de una etapa de purificación gracias a la
determinación de la pureza de una muestra y la corrida de sus trazas; también, permite
comparar dos muestras cuyas identidades de corrida sean iguales y además, permite
la separación de los componentes de una mezcla debido a la retención de los mismos
por la fase estacionaria.

Principalmente, el soporte de la fase estacionaria está compuesto de gel de sílice o de

alúmina anhidra, sin embargo, pese a que ambos son polares, el primero retiene
sustancias polares y el segundo, sustancias relativamente apolares. La retención
dependerá, por lo tanto, del grupo funcional del compuesto, su ordenamiento en el
espacio y su peso molecular.

Finalmente, este procedimiento permite el cálculo de una propiedad llamada índice de

retención, que mide la proporción de la distancia recorrida por una sustancia sobre la
recorrida por el soluto. Debe tenerse en cuenta que una vez obtenida la corrida, se
debe cubrir la placa para evitar la desaparición de los colores.

2. Objetivos

Identificar los componentes de espinaca mediante cromatografía de capa fina.

Determinar el índice de retención para cada uno de los componentes de la espinaca.

Estimar el error obtenido en tres cromatografías con diferente sembrado mediante el

cálculo de sus índices de retención.

2
 Bioingeniería

3. Materiales y Reactivos

Tabla 2.1: Materiales y Equipos de laboratorio

Cantidad Material/ Equipo Imagen

01 Mortero

Vaso de precipitado 150

mL

01 Luna de Reloj

01 Probeta

01 Balanza digital

3
 Bioingeniería

Tubo de Ensayo

01 Bagueta

01 Pipeta Pasteur

01 Tubo capilar

01 Parafilm

Placa TLC

4
 Bioingeniería

01 Espátula

01 Cámara con luz UV

01 Cinta de embalar
transparente

Tabla 2.2: Reactivos de laboratorio

Reactivo Imagen

Éter de petróleo

5
 Bioingeniería

Acetona

Metanol

Ciclohexano

MgSO4 anhidro

Arena

4. Procedimiento
a. Preparación del solvente de corrida:

6
 Bioingeniería

b. Preparación de la muestra:

7
 Bioingeniería

c. TLC de la muestra:

8
 Bioingeniería

5. Resultados

Durante la experimentación se realizaron dos siembras diferenciadas, cuyos TLC

se muestran a continuación:
Figura 1: Sembrado continuo lineal

9
 Bioingeniería

Figura 3: Sembrado discontinuo (3 puntos)

Las similitud entre las tres muestras es la cantidad de componentes sintetizados, que
alcanza el valor de cinco.
Por otro lado, las diferencias se presentan en la incertidumbre de medida propagada
en las esquinas de la corrida.

- El primer resultado esperado consiste en identificar los componentes aislados

de la espinaca mediante la TLC. Para ello, se tomará como referencia la
imagen siguiente:

Figura 4: Compuestos aislados de la espinaca mediante TLC

10
 Bioingeniería

Recuperado de https://www.pinterest.es/pin/438678819933094184/
Los compuestos identificados al contrastar las gráficas obtenidas con la gráfica de
referencia son desde la base hacia la altura: neoxantina, violaxantina, clorofila b,
clorofila a y carotenos.
● Neoxantina

Color: Amarillo claro

Grupos funcionales: Oxigenados - oxi - ol
● Violaxantina

Color: Amarillo claro

Grupos funcionales: Oxigenados - oxi - ol

11
 Bioingeniería

● Clorofila b

Color: Verde claro

Grupos funcionales: Oxigenados - éter - aldehído

● Clorofila a

Color: Verde oscuro

Grupos funcionales: Oxigenados - éter - ona
● Carotenos

Color: Naranja
Grupos funcionales: Hidrocarburo

De acuerdo con la siguiente tabla:

12
 Bioingeniería

Se puede observar que los compuestos cumplen la relación de polaridad y retención.

Mientras mayor es la polaridad de la sustancia, esta se adherirá con más fuerza a la
fase estacionaria mediante interacciones dipolo-dipolo o enlaces de hidrógeno.
Mientras que los compuestos apolares se dirigirán hasta el tope del solvente. También,
se puede mejorar la elución si es que se aumentase la polaridad del solvente; de este
modo, se lograría separar más componentes. Esto concuerda con la experiencia,
debido a que los compuestos con grupos funcionales oxigenados se encuentran en la
base de la placa, retenidos, mientras que los carotenos, al ser un hidrocarburo, llega
hasta el final de la corrida.
- El segundo resultado esperado es determinar el índice de retención de cada
componente.

Soluto (cm) Solvente (cm) I. Retención

Neoxantina 0.3 0.097

Violaxantina 0.9 0.333

Clorofila b 1.3 3.1 0.429

Clorofila a 1.6 0,516

Carotenos 3.1 1

Soluto (cm) Solvente (cm) I. Retención

Neoxantina 0.2 0.571

13
 Bioingeniería

Violaxantina 0.5 0.143

Clorofila b 0.8 3.5 0.229

Clorofila a 1.3 0.371

Carotenos 3.5 1

En todas las tablas se puede observar que la corrida de los carotenos es la más larga,
mientras que el máximo de los demás componentes de la espinaca, han alcanzado a
lo sumo, la mitad del recorrido. Esto se debe a los grupos funcionales mencionados
antes y su interacción con la fase estacionaria.
- El tercer resultado es hallar el error o incertidumbre generado en los bordes de la
placa.

Para el cálculo del error en cada una de las placas, se procederá a usar como
referencia la medida del valor real y del valor difuso en la línea de la clorofila a, debido
a que es más oscura y delgada que las demás líneas de corrida. Asimismo, se
empleará la fórmula:

Siendo Valor real igual al promedio de las medidas.

- Se puede observar del cálculo, que el error en las esquinas de las placas es
significante. Esto se debe a varias causas, las más importante es la cantidad
de soluto que se siembra. Este debe ser, en lo posible, homogéneo. De esta
forma, se evitarán las curvas y esquinas para realizar medidas más cómodas y
exactas. Es por esa razón, que la placa que consta solo con tres puntos de
siembra, posee el menor error, mientras que la de línea discontinua, presenta
un patrón poco amigable para la aproximación de índice de retención.
Conclusiones.
· La cromatografía de capa fina permite identificar de manera cualitativa y muy
precisa, los componentes de una mezcla, en este caso, homogénea.

14
 Bioingeniería

· La retención depende del grupo funcional y de la polaridad del solvente y solutos;

siendo los compuestos oxigenados más proclives a quedar en la base, debido a
que son polares.
· La concentración de la siembra debe ser homogénea en cada una de las partes
de la misma, para evitar la aparición de líneas que interfieran con la medida.
Limitaciones.
· La primera corrida se paralizó abruptamente, debido al desconocimiento de del
tiempo estimado para la experiencia.
· La desviación en las esquinas de la placa se producen por secciones muy
concentradas de siembra y alteran la medición.
· El error porcentual es alto debido a la escala en la que se encuentra.
· El uso insuficiente de solvente no permite que la corrida se realice con
normalidad.

6. Cuestionario

a. ¿A qué se deben las diferencias entre los distintos compuestos

visualizados en la placa de TLC?
La diferencia se debe a la diferencia en la estructura química de los compuestos.
Estos compuestos encontrados son los carotenos, xantofilas y las clorofilas tipo
a y b.
- Los carotenos se caracterizan por brindar un color anaranjado; es un
antioxidante con el cual se puede obtener la vitamina A.
- Las xantofilas se caracteriza por brindar el color amarillento; además,
pertenece al grupo de los carótenos debido a su estructura similar. Presentan
átomos de oxígeno.
- Las clorofilas tipo A y B poseen un color verde se diferencian en que la de tipo
A presenta un color más azulado. La clorofila de tipo a presenta un grupo
metilo en su estructura en de un formilo en la tercera posición

15
 Bioingeniería

b. ¿De qué otra forma se podrían obtener estos pigmentos? ¿Cómo

procedería a mayor escala?extracción de pigmentos por superfluidos
● Mediante un proceso conocido como extracción con fluidos en estado
supercríticos. Esta hace uso de la habilidad de algunos fluidos expuestos a un
temperatura y presión sobre su punto crítico. El más usado es el CO2 debido a
su precio reutilizabilidad. Existen dos tipos de extracción a presión controlada y
a temperatura controlada.

c. La cromatografía es un método muy utilizado en el laboratorio de química

y biología: ¿qué tipos de cromatografías existen? ¿Cuál/es son las más
utilizadas en los laboratorios de biología molecular?
● Existen varios tipos de cromatografía, estos están clasificados según la
disposición de la fase estacionaria, la naturaleza de la fase estacionaria, el
método de separación que emplea y tipos de cromatografía especiales. El
método más utilizado yace en el último grupo mencionado de la clasificación:
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC por sus siglas en inglés). La
HPLC es la más común, pues contiene varias ventajas a comparación de las
otras y sirve para múltiples procesos como separar compuestos semivolátiles,
toxicología, separación de aminoácidos y bromatología.
●
Fuentes
● https://www.franrzmn.com/tecnicas-de-cromatografia/
● https://www.pinterest.es/pin/438678819933094184/
● https://www.pinterest.es/pin/438678819930334550/
● Yurkanis Bruice, P. (2007), Fundamentos de Química Orgánica, México,
Pearson.
● McMurry, J. (2012), Química Orgánica, 8va Edición, México, Cengage
Learning.
● Morrison & Boyd, (1996), Química Orgánica, 5ta Edición, Prentice Hall
● Wade, LG Jr, (2017), Química Orgánica, 9na Edición, EEUU, Prentice Hall.
●

16
 Bioingeniería

QUÍMICA ORGÁNICA

Rúbrica – Práctica 2

Los estudiantes extraen pigmentos (clorofila A y B) de una muestra de espinaca y lo comprueban a

Resultado:
través de la cromatografía de capa delgada (TLC)
Criterio de
Informe de laboratorio
desempeño :

Actividad: Práctica 2: TLC de vegetales Semana:

Apellidos de los
Periodo: 2018-I
alumnos:
Sección: Fecha: Docente:
Documentos de Evaluación
Hoja de Trabajo: Informe: X Proyecto: Otros:

Requiere No
CRITERIOS DE EVALUACIÓN Excelente Bueno
Mejora aceptable

Indica claramente el objetivo u objetivos del laboratorio, los cuales no

1,0 0,25 0 0
deben ser exactamente iguales a los indicados en la guía.

Incluye una breve introducción alusiva al tema, la cual es ​original y no

excede las 25 líneas de texto. De ser posible, incluye algún gráfico o 1,0 0,5 0 0
foto.
Representa adecuadamente el procedimiento realizado con un
esquema, el cual no debe ser superior a una página. Para ello
1,0 0,5 0,25 0
menciona claramente las cantidades medidas o pesadas, así como
tiempos de reacción y materiales relevantes usados.
Menciona las observaciones entre las extracción de la grasa del maní
con los dos sistemas. Calcula y discute las diferencias entre el
rendimiento de cada extracción.
Menciona las observaciones de la extracción de la cafeína. Explica 4,0 1,5 0,5
0
como ocurre la migración de la cafeína del medio acuoso al medio
orgánico. Explica los valores observados y las razones de los
rendimientos calculados. Adjunta, de ser posible, fotos o imágenes.

17
 Bioingeniería

Responde adecuadamente a los cuestionarios posteriores, no

limitándose a dar la respuesta, sino también a discutir y explicar. Las 1,0 0,5 0,25
0
explicaciones son breves pero concisas.
Establece claramente las conclusiones del experimento. 1,0 0,5 0,25 0
Utiliza adecuadamente la bibliografía a lo largo del informe y la
referencia de acuerdo al formato propuesto. La bibliografía es mayor 1,0 0,5 0 0
que dos fuentes y se trata de materiales actuales.
Puntaje Total /10

Comentarios:

DESCRIPCIÓN DE LA EVALUACIÓN
Excelente Completo entendimiento y realización de la actividad, cumpliendo todos los requerimientos
Bueno Entiende y realiza la actividad cumpliendo la mayoría de los requerimientos
Requiere mejora Bajo entendimiento de la actividad cumpliendo pocos de los requerimientos
No Aceptable No demuestra entendimiento de la actividad

18