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Determinación de las lactonas
sesquiterpénicas de extracto
diclorometánico en hojas de
Ambrosia arborescens Mill.
“Altamisa o Marco”
TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN
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Determinación de las lactonas sesquiterpenicas en extracto diclorometanico de hojas deAmbrosia
arborescens Mill. “altamisa o marco” TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN
UNIVERSIDAD NACIONAL
MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
TÍTULO:
Determinación de las lactonas sesquiterpénicas de

extracto diclorometánico en hojas de Ambrosia
arborescens Mill. “Altamisa o Marco”
INTEGRANTES:
 BEJAR CAMAPAZA ESTEFANIA

 INGA LEVIZACA GINA SMIT
 MONTOYA OBREGON DIEGO
 PINTO AQUINO ANGELA MAYRIN
 VERGARA ORTEGA, ESTEFANNY IVONNE.
ASESOR:
 Dr. Fritz Choquesillo Peña.
2017
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA/ UNMSM 2016 - II
INVESTIGACIÓN
INDICE
INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................................... 1
ANTECEDENTES ........................................................................................................................................ 2
JUSTIFICACIÓN .......................................................................................................................................... 3
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................................................................. 4
2. HIPÓTESIS .......................................................................................................................................... 4
3. OBJETIVOS ......................................................................................................................................... 4
3.1 OBJETIVO GENERAL ....................................................................................................................... 4
3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS ............................................................................................................. 4
4. MARCO TEÓRICO .............................................................................................................................. 5
4.1 ASPECTO BOTÁNICOS .............................................................................................................. 5
4.2 CARACTERISTICAS TAXONOMICAS ........................................................................................ 7
4.2.1 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA ......................................................................................... 8
4.3 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA PLANTA ................................................................................. 8
4.3.1 SESQUITERPENOS .......................................................................................................... 11
4.3.2 SESQUITERPENLACTONAS ................................................................................................... 14
............................................................................................................................................................... 14
............................................................................................................................................................... 16
4.4 RELACIÓN ESTRUCTURA ACTIVIDAD DE LACTONAS SESQUITERPÉNICAS ............................ 18
4.4.1 ACTIVIDAD TERAPEUTICA ........................................................................................................ 18
4.4.2 ACTIVIDAD FARMACOLOGICA................................................................................................... 18
4.1.3 ACTIVIDAD CITOSTÁTICA .......................................................................................................... 19
4.1.4 ACTIVIDAD ANTITUMORA (ANTICANCERÍGENA, ANTINEOPLÁSTICA).................................. 19
4.1.5 ACTIVIDAD BACTERICIDA Y FUNGICIDA ................................................................................. 19
4.1.6 ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA .............................................................................................. 20
4.1.7 ACTIVIDAD FITOTÓXICA ............................................................................................................ 20
4.5 PROPIEDADES MEDICINALES AMBROSIA ARBORESCENS ........................................................ 21
5 METODOLOGÍA ................................................................................................................................ 21
5.1 MATERIALES .................................................................................................................................. 21
5.2 MATERIAL VEGETAL ...................................................................................................................... 22
5.3 REACTIVOS .................................................................................................................................... 22
5.4 EQUIPOS ......................................................................................................................................... 23
5.5 MÉTODOS ...................................................................................................................................... 23
5.5.1 LOCALIZACIÓN DEL DESARROLLO DEL PROYECTO ........................................................ 23

INVESTIGACIÓN
5.5.2 RECOLECCIÓN DE LA ESPECIE VEGETAL .......................................................................... 23

5.5.3 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA .............................................................................................. 24
5.5.4 ANALISIS FITOQUÍMICO ......................................................................................................... 25
5.5.5 AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE LACTONAS ............................................................... 26
5.5.6 ESQUEMA METODOLOGICO EXTRACCION DE LACTONAS .............................................. 27
6. PARTE EXPERIMENTAL ...................................................................................................................... 28
6.1 PRIMER PROCESO PARA RECONOCIMIENTO DE LACTONAS, MARCHA FITOQUIMICA Y
EXTRACCION DE LACTONAS. ............................................................................................................ 28
A) RECOLECCIÓN ............................................................................................................................ 28
B) DESINFECCIÓN DE LA PLANTA ................................................................................................. 28
C) SECADO ....................................................................................................................................... 29
D) CORTE CUCHILLAS ..................................................................................................................... 29
6.2 PROCEDIMIENTO RECONOCIMIENTO DE LACTONAS SESQUITERPENICA............................ 30
A) MACERACION ....................................................................................................................... 30
C) SECADO ................................................................................................................................ 31
D) ELIMINACIÓN DE LA CLOROFILA Y CONCENTRADO ....................................................... 31
E) PREPARACION DE BALJET ................................................................................................. 32
6.4 PROCEDIMIENTO EXTRACCION DE LACTONAS .................................................................. 33
A) METODO SOXHLET .............................................................................................................. 33
B) EXTRACCIÓN DE LA CLOROFILA ....................................................................................... 34
C) EXTRACCIÓN POR DECANTACIÓN .................................................................................... 35
D) SELECCIÓN DE ENSAYOS .................................................................................................. 35
E) CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA ...................................................................................... 36
F) CROMATOGRAFIA EN CAPA PREPARATIVA ..................................................................... 37
G) PRUEBA DE CROMATOPLACAS.......................................................................................... 38
H) PROCESO DE FRACCIONAMIENTO ................................................................................... 39
I) PROCESO DE ADSORCION ..................................................................................................... 39
J) PROCESO DE FILTRADO ......................................................................................................... 40
K) PROCESO DE CRISTALIZACION ......................................................................................... 40
L) REVELADO UV .......................................................................................................................... 41
7. RESULTADOS: .................................................................................................................................. 42
7.1 REVELADO DE LAS CROMATOPLACA (métodos instrumentales) ................................................ 42
8 .DISCUSIÓN ............................................................................................................................................... 44
9 .CONCLUSIONES ...................................................................................................................................... 46
10 . REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................................................ 47
ANEXOS ........................................................................................................................................................ 52

INTRODUCCIÓN
Mediante este proyecto de investigación realizado en el curso de Química

Orgánica III de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional Mayor de San Marcos, nosotros los universitarios, buscamos lograr
identificar lactonas sesquiterpenicas en las hojas de Ambrosia arborescens Mill.
“Altamisa” o “Marco”, para luego observar su estructura y con eso consolidar
nuestros conocimientos teóricos, la “Altamisa” o “Marco”, es un miembro de las
Asteraceae, una planta silvestre ampliamente distribuida en la sierra y también
en la costa. Prefiere vivir cerca de las acequias o en la ribera de los ríos, en
suelos arenosos, es muy común en la región Altiplánica. Se encuentran
lactonas en las hojas; en las semillas la damsina que es un sesquiterpeno. (1)
Como sabemos la Ambrosia arborescens Mill. “Altamisa” o “Marco, se usan con

amplio potencial antibacteriano por lo que la presente investigación está
centrada en aprovechar esta característica para una aplicación farmacéutica,
implican métodos que inician con una serie de ensayos fitoquimicos que
permitan determinar la calidad del material vegetal que será utilizado en la
extracción de sus componentes y de lactonas sesquiterpenicas. Los principios
activos de la Ambrosia arborescens Mill. “Altamisa” o “Marco son las lactonas
Sesquiterpénicas, responsables los principios amargos y astringentes de la
droga y el aceite esencial. (2)
Por lo que nosotros luego de haber recopilado información necesaria acerca la

Ambrosia arborescens Mill. “Altamisa” o “Marco, realizamos la recolección
comprando dicha planta en el Mercado hierba santa en “La parada”, EL
Agustino, Lima; donde una señora procedente del departamento de Ancash
nos proporcionó la planta en estudio los cuales también son usados para los
dolores causados por el frio y contra la sinusitis. (3)
La planta fue identificada con la ayuda de especialistas botánicos en el Museo

de Historia. Para luego ser llevada al laboratorio de Química Orgánica para
seguir con el proceso de identificación. Luego de recolectar la Ambrosia
arborescens Mill. “Altamisa” o “Marco, se procedió a lavar para luego dejar las
hojas secar a temperatura ambiente y posteriormente llevarlos a la estufa,
continuamos con el proceso de corte en cuchillas para luego dejarlo macerar
por una semana, realizamos dos filtraciones usando tocuyo, papel filtro y
filtración al vacío, secamos el extracto en platos y lo colocamos en la estufa,
procedimos a eliminar la clorofila para luego proceder a realizar los diferentes
análisis de identificación de lactonas sesquiterpenicas. (4)
1
INVESTIGACIÓN
Para la extracción de lactonas, nuestra muestra ya cortada en cuchillas la

colocamos en una bolsa de tocuyo, lo colocamos en el equipo soxhlet entre
100°c y 120°c con solvente diclorometanico; para así luego de 10 ciclos
proceder a eliminar la clorofila, se usó la técnica de extracción en la pera de
bromo con diclorometano para así realizar la cromatografía en capa fina
usando como solventes acetona y diclorometano, para luego ser observados
usando espectroscopia UV y espectroscopia IR. (5)
También realizamos la prueba de Baljet, Legal y de Hidroxamato férrico, donde

se observó cambio de coloración de la muestra y con ello constatar la
existencia de lactonas sesquiterpénicas en el extracto de “Altamisa”. (6)
Con la finalidad de poder comparar resultados procedimos a realizar también el

método de extracción alcohólica en baño María usando los mismos pasos
comenzando por la extracción de clorofila. (7)
De esta manera logramos identificar las lactonas sesquiterpénicas en Ambrosia

arborescens Mill y observar sus estructuras.
ANTECEDENTES
Los cronistas españoles hacen referencia a este recurso señalando que los
aborígenes siempre la llevaban consigo dándole muchas aplicaciones para la
cura de sus males. La utilizaban para embalsamar cadáveres. (8)
Usaban las hojas soasadas en cocimiento o ungüento graso como

antiinflamatorio y antirreumático, en el tratamiento de calambres y aire, el jugo
de las ramas para el tratamiento de las hemorroides, para dolores de
estómago, para desinflamar los pies para el arrebato y como antiséptico. En los
pueblos y caseríos aledaños a la sierra del Perú toda la planta es utilizada
(hojas, tallos, raíces, semillas y flores), para el alivio de numerosas
enfermedades. Se le utiliza como antitusígeno, antidiarreico y carminativo, para
curar la tos bronquitis y asma; además, para preparar insecticidas,
fumigaciones o sahumerios. Sus hojas secas y molidas se dejan macerar en
agua para usarlas como insecticida. (8)
En la región Arequipa y en otras regiones del Perú se ha encontrado otras

especies del género Ambrosia, cuyos estudios etnobotánicos las reportan como
medicinales: Ambrosia fruticosa Philippi, Ambrosia sp., Ambrosia peruviana
Willd. (8)

2
INVESTIGACIÓN
En esta la región Arequipa, encontramos una gran diversidad de especies

vegetales nativas silvestres, ricas en metabolitos secundarios de gran potencial
económico dado que dichos recursos podrían aplicarse en la industria
alimentaria y farmacéutica. (8)
La mayoría de estas especies son plantas aromáticas y medicinales poco

estudiadas en nuestro medio, son consideradas como hierbas malas y por lo
tanto, el cultivo de la mayoría de ellas, no se ha sistematizado (9)
JUSTIFICACIÓN
En la actualidad una de las principales causas de muerte en el Perú y en el

mundo es el cáncer que se registra en un incremento a nivel mundial de las
tasas de incidencia, mortalidad y morbilidad, siendo de mayor incidencia en
países con ingresos medios y bajos, debido a este incremento buscamos
disminuirla significativamente, por lo cual se tiene la gran necesidad de buscar
e incorporar nueva moléculas anticancerígenas, siendo una de ellas las
lactonas sesquiterpénicas, las cuales mediante un mecanismo podrían llegar a
destruir células tumorales y proteger a las otras células, ya que otros
tratamientos resultan fallidos por la resistencia que presentan las células
cancerígenas, los casos de mayor incidencia son: cáncer de estómago,
pulmón, próstata y de cuello uterino.
Existe una gran variedad de plantas en el mundo y algunas de estas especies

pueden presentar lactonas sesquiterpénicas, por lo que resulta muy importante
su extracción, reconocimiento y aislamiento.
Un tratamiento quimioterapéutico que es el más usado en la actualidad causa

efectos colaterales por el desgaste del paciente y además por su alto costo
justificamos este trabajo con el fin de aumentar el conocimiento de las
personas y quizá más adelante esta información pueda servir de base para los
siguientes estudios acerca de esta actividad y así poder generar fármacos
anticancerígenos.

3
INVESTIGACIÓN
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
¿Existirán lactonas sesquiterpenicas en las hojas de Ambrosia arborescens

Mill?
2. HIPÓTESIS
Altamisa (Ambrosia arborescens.) presenta lactonas sesquiterpenicas.
3. OBJETIVOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
 Determinación de lactonas sesquiterpenicas en las hojas de altamisa

(Ambrosia arborescens Mill).
3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Identificar la presencia de lactonas sesquiterpenicas en hojas de Ambrosia

arborescens Mill realizando análisis fotoquímico.
 Extraer lactonas sesquiterpenicas mediante el método de soxhlet.
 Aislar lactonas sesquiterpenicas de la altamisa (Ambrosia arborescens Mill.) por

técnica cromatografía en capa fina.
 Reconocer el tipo de lactonas presente en la hoja de Ambrosia arborescens Mill.

“altamisa”

4
INVESTIGACIÓN
4. MARCO TEÓRICO
4.1 ASPECTO BOTÁNICOS
a) Es un arbusto de 1.5 - 2.5 m de altura, perenne, tallo cilíndrico erguido,

ramoso, color verde cenizo, poco lignificado y glabro (sin pelos).
b) Hojas: Simples, alternas, irregularmente divididas y pubescentes (vellosos) en

ambas caras; color verde cenizo; ovaladas a redondo-ovales en su contorno
total; profundamente bipinnatisectas, provistas de estípulas foliáceo -
sectadas de hasta 4 cm de longitud y de 2 - 4 mm de diámetro; pubescentes.
c) Flores: Capítulos en racimos terminales numerosos, homógamos; los

capítulos de flores masculinas dispuestas en las zonas apicales del racimo y
con involucro de brácteas soldadas de unos 2 - 3 mm de longitud y las
anteras levemente vigorosas, los capítulos de las flores femeninas en la parte
basal de 0.5 cm de longitud, con brácteas irregulares libres de 2-3 mm de
longitud.
d) Frutos: Son aquenios, glabros, de 0.5- 1 cm de longitud, con estilos

persistentes de color pardo. (10)
e) Hábitat: Esta especie vegetal se encuentra distribuida en Colombia,

Ecuador, Perú y Bolivia. En Perú se encuentra ampliamente distribuida en la
sierra y también en la costa, desde los 1 500 a 3 500 m.s.n.m. es una especie
que vive cerca de acequias o en la ribera de ríos, en suelos arenosos . (10)
Ambrosia aparece a lo largo de las regiones templadas del hemisferio norte y

en el norte de Sudamérica. Prefieren los suelos arenosos, poco fértiles,
ligeramente alcalinos, y son fuertemente fotófilas. Se dan espontáneamente a
la vera de los caminos, en rurales y a la orilla de ríos de llanura. (11)

5
INVESTIGACIÓN
Fig. 1 A la derecha se observa la inflorescencia y a la izquierda la hoja de

Ambrosia arborescens Miller
f) Distribución (11)
Fig. 2 Bolivia, Ecuador, Perú

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INVESTIGACIÓN
4.2 CARACTERISTICAS TAXONOMICAS
Ambrosia arborescens Miller. es una planta aromática medicinal que se

encuentra en América del Sur mayormente en los Andes del Perú; se le conoce
con los nombres de “marco”, “marko”, “markhu”, “marcju”, “marcu” “marcco”,
“maleo”, “ajenjo”, “altamisa”, “artemisia”, “amargo”, “qantin”, “jatin”.
A) Familia
Las asteráceas (Asteraceae), también denominadas compuestas, reúnen más

de 23.000 especies por lo que son la familia de Angiospermas con mayor
riqueza y diversidad biológica. La familia está caracterizada por presentar las
flores dispuestas en una inflorescencia compuesta denominada capítulo, la cual
se halla rodeada de una o más filas de brácteas. El nombre de “Asteraceae”
deriva del género tipo de la familia Aster, término que a su vez proviene del
griego que significa “estrella” y hace alusión a la forma de la inflorescencia. Por
otro lado, el nombre “compuestas, más antiguo pero válido, hace referencia al
tipo particular de inflorescencia compuesta que caracteriza a la familia y que
solo se halla en muy pocas familias de Angiospermas.
Las compuestas presentan una considerable importancia ecológica y

económica. Los miembros de esta familia se distribuyen desde las regiones
polares hasta los trópicos, conquistando todos los hábitats disponibles, desde
los desiertos secos hasta los pantanos, y desde las selvas hasta los picos
montañosos. En muchas regiones del mundo las compuestas llegan a integrar
hasta el 10% de la flora vernácula. La familia contiene algunos géneros con
una gran cantidad de especies. (12)
B) Género
Las Ambrosías son un género de plantas herbáceas o arbustivas pertenecientes

a la familia de las asteráceas nativas de Norte y Sudamérica, desde donde se
han difundido por Europa. Comprende una treintena de especies de plantas
anuales o perennes, que crecen en especial en regiones llanas, poco húmedas y
arenosas. Varias de las especies de Ambrosia producen grandes cantidades de
polen, que por su difusión anemocórica es uno de los principales causantes de
fiebre del heno.
Las especies de Ambrosia son hierbas o arbustos poco altos, aunque en alguna
especie alcanzan los 4 m. Tienen tallos erectos e híspidos, que se presentan en
matas densas de hasta medio metro de diámetro con ramificaciones basales. La

7
INVESTIGACIÓN
raíz tiende a ser cónica y profunda dificultando la erradicación; algunas son

rizomáticas, las hojas son bipinnatífidas, lobuladas, con peciolos alados verde
grisáceo a plateadas por haz y envez, opuestas en la base y alternas en las
ramas altas. (12)
4.2.1 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
Phylum: Spermatophyta
Subdivisión: Angiospermae
Clase: Magnoliopsida(Dicotiledoneas)
Subclase: Asteridae
Superorden: Asteranae
Orden: Asterales
Familia: Asteraceae
Subfamilia: Asteroideae
Tribu: Heliantheae
Género: Ambrosia
Especie: A. arborescens
Nombre botánico: Ambrosia arborescens Mill.
Nombre común: Altamisa, Marco
4.3 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA PLANTA
Investigaciones anteriores han demostrado la presencia de cuatro lactonas

sesquiterpénicas en las hojas: La damsina, la coronofilina, la psilostaquina, y la
psilostaquina C. El aceite esencial es rico en monoterpenos y sesquiterpenos
oxigenados y algunos hidrocarburos sesquiterpenicos. Los componentes más
abundantes son el isoborneol, el curcumeno, el cadimeno, el corotol y
fameseno. (12)
En el 2007, en el Laboratorio del Departamento de Química Bioorgánica y

Biofarmacia de la Universidad de Pisa se realizó un estudio para determinar la
composición del aceite esencial de Ambrosia arborescens y sus propiedades
(12)

8
INVESTIGACIÓN
El aceite fue obtenido a partir de un proceso de hidrodestilación y se encontró

una composición rica en monoterpenos en pequeñas concentraciones,
destacándose una concentración muy importante de la crisantenona, y en
porcentajes representativos de sesquiterpenos como: γ-curcumeno y
germacreno D. (11)
La presencia de sesquiterpenos como componentes fundamentales de la

especie de Ambrosia arborescens demuestra que su ruta biosintética debe
favorecer a la producción de otros sesquiterpenos de interés, lo cual en parte
incentivó a realizar el estudio fitoquímico de esta planta. (11)

9
INVESTIGACIÓN
Tabla 1 Constituyentes del aceite esencial de las partes aéreas de Ambrosia

arborescens (10)

10
INVESTIGACIÓN
4.3.1 SESQUITERPENOS
Los sesquiterpenos o terpenoides son compuestos constituido por quince

carbonos representado por un anillo lactónico, sus diferentes estructuras
encontrados en plantas vasculares que pertenece a la familia Asteráceae. Que
en la actualidad se han registrado 155 especies agrupadas en 66 géneros en el
(13)
distrito de Laraos (Yauyos, Lima, Perú) demostrando una mayor diversidad.
Como consecuencia de esta gran variedad se puede apreciar los tipos de
sesquiterpenos en aceites esenciales presentes frecuentemente en hojas y
tallos de plantas pertenecientes a la familia Asteráceae.
Según la disposición estructural de sus átomos de carbonos les confiere ciertas
características las cuales han sido estudiadas hasta el punto de conocer que
son compuestos bioactivos, es decir que tiene ciertas funciones en el
organismo del ser humano que pueden promover una buena salud.
Biosíntesis de sesquiterpenoides
La pérdida de un grupo difosfato (OPP) de la estructura farnesil difosfato (FDP)

resulta un catión E, E-farnesilo. Este catión sufre una adición electrofílica
para convertirse en catión germacrilo o catión germacradienilo que es a partir
de este catión que se genera estructuras de base como eudesmano, guayano y
germacrano. Cuando el germacrilo pierde un protón se convierte en
germacrano A, luego se hidroliza solo el C-13 , después con la acción de NAD+
( dinucleotido de adenina nicotinamidasa ) resultará el ácido germacránico,
que pasará por una hidroxilación regioselectiva al reaccionar con NADPH
(dinucleotido de adenina nicotinamida reductasa) influenciado por el O 2 y
como ultima reacción es la esterificación intramolecular para la obtención de (+)
custunólido o germacranolidas que dará estructuras distintas de lactonas
sesquiterpénicas. (14) (15)
Mediante reacciones química realizadas a FDP con lleva a obtener diversos
sesquiterpenos.

11
INVESTIGACIÓN
Fig 3. Reacciones química realizadas a OPP con lleva a obtener diversos

sesquiterpenos

12
INVESTIGACIÓN
Tabla 2. Relación de lactonas sesquiterpenos y su actividad
Lactonas sesquiterpenos especies actividad

Inhibe el NF-KB (factor
nuclear potenciador de las
cadenas ligeras Kappa de las
Tanacetum parthenum Anticancerígeno
células B activadas. Limita la
proliferación de las células
cancerosas
germacranolidas inhibe la producción de NO y
Carpesium triste var.
la expresión de la óxido nítrico
manshuricum
sintasa
actividad citotóxica contra
Elephantopus scaber
celulares de cáncer de mama
Citotóxica
actividad citotóxica contra a
desoxigoyazensolida
células de cáncer de colon
actividad antibacteriana
primaria contra las especies
Vernonia colorata antibacteriana Staphylococcu aureus y
Bacillus subtilis (Gram-
positiva)
eudesmanolidas
una selectividad citotóxica
Jatropha curcas citotóxica contra diferentes líneas
celulares
mayor capacidad para inhibir
Inula hupehensis
la producción de NO
actividad citotóxica contra el
Laserterpium citotóxica
cáncer de mama
Enzima que participa en la
biosíntesis estrógenos,
inhibe la enzima
Ludartina hormona que está involucrada
aromatasa.
en la patogenia de cáncer de
guayanolida
mama
Tanacetum parthenium antimicrobiano actividad antiprotozooárica
un potente estimulador de
estimulador del liberación de histamina con
Thapsia garganica
sistema inmune respuestas alérgicas y
procesos inflamatorios
usada para el tratamiento de
la fiebre y la malaria
La artemisinina es potenciales
antiplasmódica y
anticancerígeno porque
cadinanolidas Artemesia annua antitumoral
controlar la poca entrada de
hierro en células cancerosas
de esta forma eliminándola.
actividad antiinflamatoria para

Inula hupehensis antiinflamatorios estos compuestos en
macrófagos
pseudoguayanolidas Actividad contra el parásito
Athroisma proteiforme antiplasmódica
Plasmodium falciparum
actividad citotóxica contra
Inula hookeri citotóxica
células tumorales de próstata

13
INVESTIGACIÓN
4.3.2 SESQUITERPENLACTONAS
Son metabolitos secundarios que se encuentran en numerosas especies o

familias de plantas. Estas moléculas han llamado la atención de los científicos
por el amplio espectro de actividades biológicas que presentan como
antiinflamatoria, antitumoral, citotóxica, antibacterial, antimalaria y actividad
neurotóxica y alérgica. Actualmente se realizan ensayos clínicos contra el
cáncer con tres lactonas sesquiterpénicas: la artemisina, el partenolido y la
tapsigargina. Los estudios de relación estructura-actividad realizados a estas
moléculas muestran características específicas en su estructura, que son las
responsables de sus efectos antitumorales y citotóxicos. Teniendo en cuenta
estos antecedentes, este trabajo tiene tuvo objetivo analizar las diferentes
actividades biológicas de germacranolidas, eudesmanolidas, guayanolidas,
cadinanolidas y pseudoguayanolidas, así como la relación estructura-actividad
de las lactonas sesquiterpénicas. (16)
Las sesquiterpenlactonas, derivadas biogenéticamente de los sesquiterpenos,

son una clase de productos naturales distribuidos menos ampliamente que
estos últimos y de ocurrencia predominante en la familia Asteraceae
(notablemente en géneros Artemisia Y Ambrosia), de allí que su distribución
permite ser aplicada a problemas taxonómicos especialmente en los géneros
nombrados y en otras taxas . (17)
Las lactonas sesquiterpénicas presentan estructuras que parecen tener un

origen común, habiéndose formado en procesos biogenéticos estrechamente
relacionados y que permiten proporcionar caracteres químicos útiles dentro de
la tribu. Así podemos clasificarlas en tres grandes grupos: lactonas tipo
germacranolida, lactonas tipo eudesmanolida y lactonas tipo guayanolida. (18)
Fig. 4 Clasificación de las lactonas sesquiterpenicas

14
INVESTIGACIÓN
En 1968 se reportó, a partir de dos colecciones de especies del Perú de

Ambrosia arborescens, el aislamiento de damsin (VIII), coronopilin (I),
psilostachyin (VI), psilostachyin C (IX), y una pequeña cantidad de lo que
parecía ser 11- epidihydropsilostachyina. (11)
Fig. 5 lactonas sesquiterpenicas encontradas en ambrosia arborescens

15
INVESTIGACIÓN
Fig. 6 Algunas lactonas sesquiterpenicas encontradas en genero ambrosia

16
INVESTIGACIÓN
Fig. 7 Algunas lactonas sesquiterpenicas encontradas en genero ambrosia

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INVESTIGACIÓN
4.4 RELACIÓN ESTRUCTURA ACTIVIDAD DE LACTONAS

SESQUITERPÉNICAS
4.4.1 ACTIVIDAD TERAPEUTICA
Estudios de la relación estructura-actividad (SAR) dirigidos a evaluar el efecto

de varias lactonas sesquiterpénicas (SL) como estimulantes de la germinación
de tres especies de Orobanche spp. (O. cumana, O. crenata y O. ramosa) se
han logrado. Se ha observado una alta especificidad en la actividad de
germinación de SL en el parásito de girasol O. cumana, y se postula una
relación entre dicha actividad y el alto contenido de girasol SL. Las propiedades
moleculares de los estimulantes de germinación natural y sintética (GR-24, GR-
7 y Nijmegen-1) y SL se han estudiado utilizando cálculos MMX y PM3. En
consecuencia, se han realizado estudios comparativos entre todos ellos y sus
actividades. SL probó similitudes presentes en propiedades moleculares tales
como el volumen de la molécula y la disposición espacial de la cadena principal
de carbono al estimulante de la germinación natural orobanchol. Estas
propiedades podrían estar relacionadas con su actividad biológica. (19)
Lactonas Sesquiterpénicas (STL) son productos naturales que tienen potente

actividad antitrypanosomal in vitro y, en el caso de cynaropicrin, también
reduce la parasitemia en el modelo murino de tripanosomiasis. Para explorar su
estructura-antitrypanosomal relaciones de actividad, un conjunto de 34 STLs y
amino-STLs naturales y semisintéticos probado in vitro contra T. b. rhodesiense
(que causa la enfermedad del sueño del este de África) y células de cáncer de
mamífero (células L6 de mioblastos de hueso de rata). Se encontró que el α-
metileno-γ- La fracción de lactona es necesaria para los efectos
antitrypanosomal y la citotoxicidad. Antitrypanosomal (20)
4.4.2 ACTIVIDAD FARMACOLOGICA
La altamisa presenta acción bactericida frente a Staphylococus aureus ATCC

25923 y sobre Candida albicans a 1000 g/ml
De los componentes de altamisa, el shiramool y la coronopilina exhiben una

potente actividad antialimentaria contra plagas que infestan cereales. Por otro
lado, la psylostachina es activa frente a afidos y ácaros mientras que la
damsina muestra actividad antitumoral y moluscicida. Damsina y psylostachina
exhiben efecto estimulante sobre la germinación de semillas a 0.14 g/mm2 e
inhibidor a 0.07 g/mm2 (21)

18
INVESTIGACIÓN
4.1.3 ACTIVIDAD CITOSTÁTICA
Se ha estudiado el comportamiento citotóxico de numerosas lactonas

Sesquiterpénicas, con especial incidencia en el efecto de estos compuestos en
la síntesis de macromoléculas.
Los primeros resultados sobre su mecanismo de acción indican la necesidad
de la presencia de una agrupación -CH = C-C = 0, como parte de un éster, bien
como parte de una cetona o lactona, como principal requisito para su actividad
anti-tumoral y citostática . Se piensa que el mecanismo de la citotoxicidad es
del tipo adición de Michael, entre la parte activa de la lactona y los grupos
sulfhidrilo de las enzimas lisosomales. La inhibición de estas enzimas conduce
a su vez a la inhibición de la síntesis de ADN y, por lo tanto, a la disminución
del crecimiento anárquico de las células neoplásicas. Sin embargo, una
hipótesis alternativa para la actividad de las lactonas de los sesquiterpénicos
sugiere una alquilación directa del ADN por parte de aquellos compuestos. (22)
4.1.4 ACTIVIDAD ANTITUMORA (ANTICANCERÍGENA, ANTINEOPLÁSTICA)
Está relacionada a la capacidad de formar ductos Michael y se la mide en

función de la velocidad de reacción con cisteína. Así, por ejemplo, elefantopina,
un germacranólido, reacciona con la misma velocidad (a pesar de poseer dos
sistemas “olidos”) que eupatundina , un guayanólido; ello se interpreta con el
resultado de la baja capacidad de la lactona endocíclica para interactuar con el
nucleófilo. Ambos son cinco veces menos activos que el elemanolido
vernolepina, aislada de Vernonia hymenolepsis, el cual también actúa como
fitotoxina. La presencia de grupo polares como epóxidos, carboxilatos ,
hidroxilos, acetoxilos, carbonilos α,β-insaturados, aumenta la efectividad de
estas moléculas. (23)
4.1.5 ACTIVIDAD BACTERICIDA Y FUNGICIDA
Las lactonas sesquiterpénicas también se probaron como agentes bactericidas

y fungicidas. Como anti-bacteriales muestran ser particularmente activas
contra las bacterias Gram positivas, aunque también tengan alguna actividad
contra bacterias gramnegativos.
Los estudios realizados con el propósito de relacionar la estructura química con
la actividad bactericida, revelaron que esta última no puede explicarse
únicamente por la presencia o ausencia del característico grupo exometilénico.
Al igual que para las bacterias, parece que la actividad fungicida de las
lactonas no puede explicarse sobre la base de un único aspecto estructural.
Puede ser necesaria la presencia de uno o más centros activos para la

19
INVESTIGACIÓN
actividad fungicida de algunas lactonas, o pueden reforzar la actividad de otros

grupos funcionales. También la actividad contra los hongos puede
determinarse por diferencias de fisiología de las especies individuales. (22)
En este grupo se encuentran los germacranólidos: mikanólido aislado de

Mikania monagensis y tayunina (de Inula viscosa) y el pseudoguayanólido
aislado de especies de Helenium, helenalina (23)
4.1.6 ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA
La actividad antiinflamatoria de las lactonas sesquiterpénicas es conocida

desde hace mucho, ya que las plantas que contienen metabolitos secundarios
se han utilizado como medicamentos antipolíticos y antiinflamatorios. Estudios
recientes demostraron que muchas drogas anti--inflamatorias conocidas, como
la azotioprina y la D penicilamina, utilizadas en el tratamiento de la artritis
reumatismal, actúan del mismo modo que las lactonas sesquiterpénicas, es
decir a través de los grupos sulfhidrilo de las enzimas, aunque no se conoce la
exacta etiología de muchos de los procesos inflamatorios que atacan al
hombre, se piensa que existe una implicación de los grupos sulfhidrilo de las
enzimas celulares. Así, las drogas que se unen a estos los grupos,
bloqueándolos, revierte el proceso inflamatorio. (22)
4.1.7 ACTIVIDAD FITOTÓXICA
El crecimiento de ciertos vegetales es detenido por principios fitotóxicos como

por ejemplo la heliangina, un germacranólido aislado de Heliantus tuberosus
que en concentraciones del orden de 10-3 mmol/ml inhibe el crecimiento de las
plantas jóvenes de arroz. Por su parte, la alatolactona, eudesmanólido (de Inula
sp.) es un retardador potente de la germinación de las semillas y del
crecimiento de los retoños. Se supone que su actividad es consecuencia de la
inhibición que ejerce sobre la amilasa y la proteasa. Existen varios compuestos
que exhiben fitotoxicidad como los indicados y ésta se anula por acción de la
cisteína. (23)
Fig. 8 Estructura general de las lactonas

sesquiterpenicas

20
INVESTIGACIÓN
4.5 PROPIEDADES MEDICINALES AMBROSIA

ARBORESCENS
La actividad antibacteriana de diferentes extractos y partes de la planta ha sido

extensamente evaluada habiéndose obtenido resultados positivos solamente
frente al Staphylococcus aureus con los extractos etanólicos y acuoso
preparado con la planta entera. El aceite esencial de las hojas es activo contra
S. aureus, Pseudomonas aeruginosa y Klebsiellapneumoniae.
Un extracto etanólico (95%) preparado a partir de las partes aéreas de la planta
presenta una débil actividad frente a Plasmodium falciparum responsable de la
malaria. Y el extracto acuoso del fruto, presenta una actividad espasmogénica.
La planta presenta una actividad bloqueadora neuro-muscular; y un extracto
etanólico. La resina de la planta presenta una actividad antioxidante en la
materia. Presenta las actividades analgésica, anticonvulsiva, antiespasmódica,
hipoglicémica y diurética de un extracto etanólico-acuoso de la planta, al igual
que la actividad hipotensora de un extracto acuoso del fruto, y antitumoral de
un extracto etanólico. (12)
5 METODOLOGÍA
5.1 MATERIALES
 Beakers 100 mL,250 mlL

 Bagueta
 Capilares de vidrio
 Cuba cromatográfica de vidrio
 Embudos de vidrio
 Espátula de metal
 Gradilla
 Lavatorio
 Matraz 150 mL,250 mL
 Papel Craft
 Papel Filtro rápido

21
INVESTIGACIÓN
 Papel toalla
 Parrilla porta placas cromatográficas
 Pera de bromo PIREX 125 mL
 Pipeta Pasteur 3 mL
 Pipetas de 5mL, 10 mL
 Placa de vidrio para cromatografía d 20x20 cm2;5x10 cm2
 Platos de loza
 Probeta 100 mL
 Propipeta
 Soporte universal
 Tazón
 Tocuyo
 Tubos de ensayo 5mL y 10mL
 Vacuette
 Viales
5.2 MATERIAL VEGETAL
Hojas de Ambrosia arborescens Mill (Altamisa o marco)
5.3 REACTIVOS
 Diclorometano
 Alcohol 70°
 Alcohol 96°
 Reactivo de Legal
 Reactivo Baljet
 Silicagel 60G/Merck

22
INVESTIGACIÓN
5.4 EQUIPOS
 Balanza digital 0.1mg sensibilidad marca: RADWAG; modelo: AS 220.R2

 Balanza marca: OHAUS; modelo: PA214
 Cocinilla marca MERCK modelo SP13132033
 Espectrofotómetro Genesys 10S UV-Vis marca : Thermo SCIENTIFIC
 Estufa memmert Nenntemp 300°C
 Equipo filtradora al vacío Marca: DIVAC 0.6 L
 Refrigeradora LIEBHERR modelo LKexv 3600 Index 20C/001
 UVP Chromato – Vue® C-70G UV Viewing System
5.5 MÉTODOS
5.5.1 LOCALIZACIÓN DEL DESARROLLO DEL PROYECTO
Laboratorio de Química Orgánica de la facultad de Farmacia y Bioquímica de la

Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
5.5.2 RECOLECCIÓN DE LA ESPECIE VEGETAL
Las hojas en buen estado de Ambrosia arborescens “altamisa” se recolectarán

en el distrito de Huaraz, departamento de Áncash, el material vegetal será
traído a Lima por vía terrestre. Lugar la Parada- Lima. Mercado hierba santa.

23
INVESTIGACIÓN
5.5.3 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
Las hojas fueron identificadas taxonómicamente en el Museo de Historia

Nacional de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos por el Biólogo
Hamilton Beltran Santiago, quien certifica que según el sistema de Arthur
Cronquist 1981 la especie vegetal es Ambrosia arborescens Mill.
Fig. 9 Ficha taxonómica Ambrosia arborescens Mill.

24
INVESTIGACIÓN
5.5.4 ANALISIS FITOQUÍMICO
Preparación del extracto
Se realizará una doble maceración usado 30 g de hojas de altamisa seco y

molido en 5oo ml de etanol de 70% en cada maceración, que luego se filtrará
en frio por medio de filtración desechable (tocuyo) y filtración al vacío. (24) (4)
Después de la filtración los extractos se depositarán en un recipiente de vidrio o

porcelana no cerrados, los cuales serán llevados al desecador al vacío para un
secado efectivo y cuidadoso. (25)
Extracción del filtrado seco
Se retirará los platos de porcelana de la estufa, una vez que el solvente se

haya evaporado y se encuentre seco el filtrado, para realizar la técnica de
raspado que será llevado a cabo mediante una espátula. (26)
Eliminación de la clorofila
El extracto etanólico seco 1.2 g será tratado con solución de acetato de plomo
10 % y con gotas ácido acético para la precipitación de clorofila. Esta mezcla
se llevará a filtrar usando papel filtro, posteriormente se procederá a decantar
la mezcla con solución diclorometano, produciéndose dos fases reforzándolo
con cloruro de sodio. La fase acuosa se llevará a baño maría para la
evaporación del solvente que dará una solución amarillenta representada la
muestra libre de clorofila. (27) (28) (29) (30)
Identificación de lactonas sesquiterpénicas
Se usará un tubo pequeño que contenga VIII gotas del extracto libre de
clorofila, donde se añadirá 2ml de la mezcla de Baljet A Y Baljet B, que dará
como resultado una reacción positiva rojo oscuro. (31) (32)

25
INVESTIGACIÓN
5.5.5 AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE LACTONAS
Método de extracción
Se pesará 100 g de hojas seleccionadas secas y molidas previamente

estabilizadas, se procederá a una extracción secuencial continua por el método
de Soxhlet utilizando como solvente al diclorometano por 6 horas. (33)
Luego se procede a concentrar el extracto, el concentrado se redisuelve en
etanol caliente y se añadirá una solución acuosa de acetato de plomo al
5%, con lo cual se precipitan sustancias más polares para así eliminar la
clorofila, luego realizaremos el filtrado para separar las sustancias
precipitantes, el filtrado se volverá a concentrar y se someterá a
cromatografía. (5)
Aislamiento de lactonas sesquiterpénicas
Se realizará pruebas preliminares para determinar el sistema de solventes más

adecuado para la separación de las lactonas sesquiterpénicas utilizaremos
sílica gel de 0.25 mm y solventes como diclorometano, benceno, acetato de
etilo y metanol en distintas proporcione: éter etílico diclorometano (1:3);
diclorometano, acetona (6:4), tricloruro de metilo, metanol (9:1); benceno y
acetato de etilo (5:5). (34) (35) (36)
Se usará agentes reveladores para los análisis por cromatografía en capa

fina, pueden utilizarse: Ácido sulfúrico concentrado y calentamiento, vapores de
yodo, luz ultravioleta 254 nm o permanganato de potasio al 1% o el p–
dimetilamino benzaldehído. En donde el Rf para lactonas sesquiterpénicas
oscilará entre 0.65-0.45. (37)
IDENTIFICACIÓN DE LACTONAS SESQUITERPÉNICAS
Métodos de coloración:
a. Preparación de Baljet
b. Preparación de Legal
c. Preparación de hidroxamato férrico

26
INVESTIGACIÓN
5.5.6 ESQUEMA METODOLOGICO EXTRACCION DE LACTONAS
IDENTIFICACION DE LA ESPECIE VEGETAL
RECOLECCION DE ALTAMISA
SECADO CORTE
DESINFECCIÓN
CUCHILLAS
MÉTODO
SOXHLET
METODO
SECADO DEL EXTRACTO
DESTILACION
ELIMINACION DE CLOROFILA
EXTRACCIÓN POR DECANTACIÓN
DICLOROMETANO: CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO

ACETONA 8:2, 9:1
SELECCIÓN DE ENSAYOS
(SOLVENTES)
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA CROMATOFOLIO:

10X5CM
CROMATOGRAFÍA EN CAPA PREPARATIVA (CPP) CROMATOPLA

CA:20X20CM
AISLAMIENTO DE COMPUESTOS
CROMATOFOLIO:
20X10 CROMATOGRAFÍA EN CROMATOFOLIO
RECONOCIMIENTO DE LACTONAS
SESQUITERPÉNICAS
REACTIVO DE LEGAL REACTIVO DE

REACTIVO DE BALJET HIDROXAMATO FERRICO

27
INVESTIGACIÓN
6. PARTE EXPERIMENTAL
6.1 PRIMER PROCESO PARA RECONOCIMIENTO DE LACTONAS, MARCHA

FITOQUIMICA Y EXTRACCION DE LACTONAS.
A) RECOLECCIÓN
Se colectó Altamisa del mercado

mayorista ubicado en Cercado de
Lima, la planta se conoce más como
Marco en los centros de venta de
yerbas nativas. Colectándose 4 Kl de
yerba fresca.
Fig.10.Recolección de Altamisa o Marco
B) DESINFECCIÓN DE LA PLANTA
Fig. 11: Lavamos la planta con 2 gotas de lejía para su desinfección, separamos las
hojas del tallo y dejamos secar las hojas y tallos a temperatura ambiente.

28
INVESTIGACIÓN
C) SECADO
Fig 12. Secado en estufa de Altamisa a 36°C
Las hojas se colocan en bandejas hechas de papel craft, luego se colocaron en

estufa a temperatura 36°C, hasta tener un peso constante, el cual ocurrió tras 9
horas de secado
D) CORTE CUCHILLAS
Tras obtener la muestra seca de Altamisa, se procedió al triturado con cuchillas, para
tener mayor cantidad de superficie de contacto con el solvente extractor.
Fig 13: Muestra seca de Altamisa Fig 14. Muestra seca y triturada

29
INVESTIGACIÓN
6.2 PROCEDIMIENTO RECONOCIMIENTO DE LACTONAS SESQUITERPENICA
A) MACERACION
Fig 15: se colocó 50 gr de

esta muestra seca en el
bidón ámbar, donde se
agregó 250 mL de
diclorometano, dejándose
macerar durante 1 semana.
B) FILTRACION
Fig 16 La filtración del extracto, se realizó una filtración por gravedad

utilizando papel filtro y tocuyo como material de tamizaje

30
INVESTIGACIÓN
C) SECADO
Fig 17. se colocó el extracto

filtrado en platos de
porcelana, luego se llevó a la
estufa a 40 °C hasta
sequedad.
D) ELIMINACIÓN DE LA CLOROFILA Y CONCENTRADO
Una vez seco el extracto se procedió a rasparlo, para luego pesarlo en un

beacker, previamente tarado, teniendo 1,2g de extracto al cual agregamos
20mL de acetato de plomo y 10 gotas de ácido acético y procedimos a disolver
el extracto que posteriormente filtramos para colocarlo en una pera de bromo y
realizamos una extracción doble con 10 mL de diclorometano cada una,
separando la fase acuosa. Esta fase fue llevada a baño María para la
evaporación del diclorometano.
Fig 19: Disolución del extracto con

20mL de acetato de plomo y 10
Fig 18: Pesada del extracto etanólico de gotas de ácido acético para su
Ambrosia arborescens Mill. posterior filtración.

31
INVESTIGACIÓN
Fig 20: Extracción doble con 10 mL cada Fig 21: Eliminación del diclorometano por
una de diclorometano y decantación de evaporación en baño maría.
la fase acuosa.
E) PREPARACION DE BALJET
Se utilizó reactivo de Baljet para identificar las lactonas sesquiterpenicas en

donde se agregó primero 1 ml de Baljet A y 1 ml de Baljet B.
Preparamos la muestra problema + 5 gotas de reactivo Baljet preparado donde

fue positiva la reacción observándose la aparición de un color naranja-rojo.
Fig 23. amarillo es Baljet

, rojo es el resultado
Fig 22. Baljet a al 1% de etanol
como cambio de color
y baljet b hidróxido de sodio
positivo para lactonas
10% de agua.
Sesquiterpénicas

32
INVESTIGACIÓN
6.4 PROCEDIMIENTO EXTRACCION DE LACTONAS
A) METODO SOXHLET
Se pesó 25.3102g de muestra, se colocó en una bolsita de tocuyo y se cerró, para

colocarla en el cuerpo del equipo de Soxhlet. Una vez esto, se procedió a colocar
diclorometano hasta llegar a sobrepasar el tope del cartucho insertado, hasta pasar el
brazo de sifón, arrastrando de esa manera el diclorometano hasta el balón, una vez esto
se procedió a calentar hasta 90°C bajo agitación de 2.5 rpm usando una pastilla y
agitación magnética en el plato calefactor. El primer reflujo se contó transcurridos 160
minutos, realiza´ndose en total 10 reflujos. Una vez realizado esto, se procedió al limpiado
del equipo y postrior concenrtación en platos de porcelana a 40 °C en estufa.
Fig 30. Pesado de muestra seca

triturada Fig 31. Extracción por Sohxlet
Fig 34. Concentración del

extracto
Fig 33. Residuos tras

Fig 32. Limpieza de la extracción por
residuos en balón Soxhlet

33
INVESTIGACIÓN
B) EXTRACCIÓN DE LA CLOROFILA
se procedió a rasparlo los, pesamos el beacker, previamente tarado, 53.02 g de

extracto + beacker, al restarlo hallamos la cantidad de muestra que fue 3 g al
cual agregamos 50 mL de acetato de plomo y 25 gotas de ácido acético y
procedimos a disolver el extracto que posteriormente filtramos para colocarlo
en una pera de bromo y realizamos una extracción doble con 20 mL de
diclorometano cada una, separando la fase acuosa la cual usamos para
sembrar y comenzar a realizar la cromatografía.
Fig 35. Pesada de beacker + muestra 53.02 g,

beacker solo 50.08 g, dando resultado 2.94 g de
muestra
Fig 36.Agregando 50 mL de acetato de plomo y 25

gotas de ácido acético

34
INVESTIGACIÓN
C) EXTRACCIÓN POR DECANTACIÓN
Fig 37. Al filtrar con papel filtro se obtuvo dos porciones una más oscura y
otra más clara, por lo cual estas dos fases las colocamos por separado
en peras de decantación a la cual añadimos 20 mL de diclorometano cada
una, decantamos en colocándolos en matraces y realizamos la
cromatografía con estas dos fases acuosas para confirmar si se extrajo la
clorofila y sobre todo cual de ambos extractos es más visible las lactonas.
D) SELECCIÓN DE ENSAYOS
Antes de decidir cuál tipo de extracto usar y cuál método de extracción de
clorofila utilizar, se procedió a hacer ensayos previos en TLC. El primer sistema
de solventes fue 1:9 (acetona:diclorometano), en donde se revelan la línea azul
brillante característica de lactonas sesquiterpénicas. En las dos primeras
Fig. 38. Sistema de solventes 2:8

(acetona:diclorometano)

35
INVESTIGACIÓN
Fig. 39 placas de la izquierda fue con 5 Figura 40. Revelado de placas en el

siembras y el tercero con 15 siembras. sistemas acetona: diclorometano(1:9)
E) CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Realizamos el sembrado de las fases acuosa y orgánica, notamos que el primer extracto
la clorofila aún está presente, pero se está dirigiendo hacia la parte superior y se logra
notar con más claridad una mancha azul lo cual es la lactonas
Fig 41. Se preparan las placas Fig 42.Realizamos la siembra de

para cromatografía usando 4 puntos correspondientes a las
silicagel y alcohol 2 fases acuosas y 2 fases
orgánicas, dimos 10 pasadas en
cada punto.
36
INVESTIGACIÓN
365 nm 254 nm
Parte
Parte orgánica 1
acuosa 2
Parte Parte acuosa

orgánica 2 1
Fig 43.Llevamos la placa a la

cámara UV, notamos que la luz de
365 nm es mejor y se ve la mancha
azul representando a la lactona
F) CROMATOGRAFIA EN CAPA PREPARATIVA
Se prepararon placas con sílica y se le realizó el sembrado de 20 puntos a cada una,

con 20 siembras(fig 45.). En la siguiente figura 46 se muestra el sistema solvente de
1:1 aetona: diclorometno el cual dio mejo resultado en los otros ensayos, se utilizó la
muestra de extracto de diclorometano por Soxhlet y sin quitar la clorofila. Luego se
secó por unos minutos en la estuf y se procedió a revelar en la cámara UV-VIS, con la
luz UV.
Fig 45. Sistema solvente 1:1

Fig 44. Sembrado en placa
acetona:diclorometano(20 mL)

37
INVESTIGACIÓN
Fig 46. Secado en estufa
Fig47. Corrida de muestra

con clorofila
G) PRUEBA DE CROMATOPLACAS
A B
FRACCION
1
FRACCION
2
C D
Fig. 48. Revelado de 4 cromatoplacas (A, B,C,D)

a 365 nm., Se visualizan 2 fracciones, las cuales
marcamos para posteriormente rasparlas con una
espátula

38
INVESTIGACIÓN
H) PROCESO DE FRACCIONAMIENTO
Raspado Raspado línea 2

línea 1
1
2
Fig 50. Las fracciones se

Fig 49.Raspamos las placas, colocaron en 3 Vacuette bien
obteniendo más muestra en la secos y los guardamos rotulándolo
para después ser separadas de la
segunda línea
silicagel con diclorometano,
filtramos y de esta manera obtener
los metabolitos.
I) PROCESO DE ADSORCION
Fig 51. Trasladamos lo raspado en

2 matraces adicionamos
diclorometano y agitamos

39
INVESTIGACIÓN
J) PROCESO DE FILTRADO
Fig 52.se adiciona diclorometano hasta dejar el matraz sin silicagel

aproximadamente se usó 40 ml x muestras, Filtramos en tubo de
desprendimiento, separamos 2 tubos para las 2 muestras.
K) PROCESO DE CRISTALIZACION
Fig 54. Realizamos baño Maria

Fig 53. El silicagel lo guardamos en para que se evapore el
sobres, el filtrado lo dejamos beacker y diclorometano, se ven los cristales
de cada muestra, luego se diluye
dejamos que se evapore para obtener con metanol.
los cristales.

40
INVESTIGACIÓN
L) REVELADO UV
Una vez obtenido los cristales se procede a disolverlos en 3 mL de metanol para su

posterior lectura en el espectrofotómetro. Se utilizó dos celdas de cuarzo, en la primera se
colocará el disolvente (metanol) y se colocó en el espacio del blanco, mientras que en el
segundo la muestra en el espacio 1. Se procedió a calibrar el equipo midiendo la línea
base y se hace una lectura de barrido de longitud de onda desde 200 nm hasta 400nm,
observándose las curvas espectrales y los datos mostrados por el equipo.
FRACCION 1
Fig 55. Gráfica del espectro de cristales disueltos de

Altamisa
FRACCION 2
Fig 56. Barrido de fracción dos

41
INVESTIGACIÓN
7. RESULTADOS:
7.1 REVELADO DE LAS CROMATOPLACA (métodos instrumentales)
ESPECTROSCOPIA UV
MUESTRA CRISTALES REDISUELTOS EN METANOL
Se realizaró un análisis de espectroscopia UV utilizando un espectrofotómetro UV-Visible

de 200 a 400 nm usando como solvente metanol y se obtendrá datos como la longitud de
onda optima y su máxima absorbancia. (38) (39) (40)
En la figura 56 se muestra la absorbancia obtenida para la primera fracción de revelado

en el espectrofotómetro, donde se observó que a una longitud de onda de de 220nm se
formó el pico más elevado y perfilado, sin embargo se tienena 280 nm otro pico pero
menos visible que el anterior.A una absorbancia de 2650.
En la figura 57 , la fracción dos muestra un pico ligeramente distorcionado a una longitud

de onda entre 220 y 230 nm. Lo cual nos puede indicar que nuestro mayor contenido de
muestra lo podemos encontrar entre este rango de 220 a 230 nm de longitud de onda.
ESPECTROSCOPÍA IR y RMN
El producto purificado obtenido será sometido a un análisis espectroscópicos

de Resonancia magnética nuclear protónica (RMN-1H), del carbono-13 (RMN-
13C) y espectroscopía infrarroja (IR). Para la determinación de la estructura
molecular de las lactonas presente en la Ambrosia arborescens. (29) (40)
La espectroscopia vibracional fue una de las primeras técnicas

espectroscópicas que encontró un uso extendido, en particular la
espectroscopia de absorción infrarroja (IR) que recibe su nombre de la región
del espectro electromagnético implicada. (41)
La espectrometría infrarroja se basa en el hecho de que los enlaces químicos

de las sustancias tienen frecuencias de vibración específicas, que
corresponden a los niveles de energía de la molécula. Estas frecuencias
dependen de la forma de la superficie de energía potencial de la molécula, la
geometría molecular, las masas atómicas y, posiblemente, el acoplamiento
vibracional. (41)

42
INVESTIGACIÓN
Es utilizado para el análisis de compuestos orgánicos, inorgánicos u

organometálicos que contengan átomos pesados (masa atómica superior a 19)
y proporciona información útil en estudios estructurales. Una de las grandes
ventajas de la espectroscopia IR es su versatilidad, ya que permite estudiar
prácticamente cualquier muestra con independencia del estado en que se
encuentre: líquidos, disoluciones, pastas, polvos, fibras, films, gases o
superficies son algunos ejemplos. (42)
La interacción de la radiación infrarroja con la materia provoca en ésta alguna

alteración. En el caso que nos ocupa, esta alteración guarda relación con
cambios en el estado vibracional de las moléculas. El espectro vibracional de
una molécula se considera una propiedad física única y por tanto característica
de ésta molécula. Así, entre otras aplicaciones, el espectro IR se puede usar
como “huella dactilar” en la identificación de muestras desconocidas mediante
la comparación con espectros de referencia. (42)
Como referencia podemos tomar el estudio de Terrones donde en el espectro

infrarrojo (figura ) se observa claramente la presencia de 2 grupos carbonilo de
la γ-lactona α-metilénica a 1773 cm-1y a 1718 cm-1, el carbonilo de la
espirolactona. (5)
Fig. 57 espectro infrarrojo, Teresa Cano de Terrones

43
INVESTIGACIÓN
8 .DISCUSIÓN
Los SL son un grupo importante de productos naturales obtenidos de muchas especies de

plantas medicinales. Su diversidad estructural y diversas actividades biológicas
potenciales, tales como anticancerígenas, antiinflamatorias, antitumorales, antipalúdicas,
antivirales, antibacterianas, antimicóticas, etc., han despertado un mayor interés entre los
químicos por la investigación de descubrimiento de fármacos. Aunque el mecanismo
exacto de acción de SL no es bien conocido, se ha documentado a través de varios
informes publicados que la actividad biológica mostrada por la mayoría de SL se debe a la
presencia de α-metileno-γ-lactonas y ciclopentenona α, β-insaturada anillo. (19)
En general, se cree que la bioactividad de SL está mediada por la alquilación de

nucleófilos a través de sus estructuras de carbonilo α-, β- o α, β, γ-insaturadas, tales como
α-metileno-γ-lactonas o ciclopentenonas α, β-insaturadas . Estos elementos de estructura
reaccionan con nucleófilos, especialmente los grupos sulfhidrilo de cisteína por adición de
tipo Michael. (20) (43)Por lo tanto, es ampliamente aceptado que los grupos tiol tales
como los residuos de cisteína en las proteínas, así como el GSH intracelular libre, sirven
como los objetivos principales de SL. En esencia, la interacción entre los SL y los grupos
proteína tiol o GSH conduce a la reducción de la actividad enzimática o causa la
alteración del metabolismo de GSH y el equilibrio redox de células intracelulares de vital
importancia. (19)
Las lactonas sesquiterpénicas (LS) están usualmente dentro de los tricomas glandulares
(44) , así para extraer de mejor manera LS se procedió a secar la muestra y triturar para
ener una mayor superficie de contacto con el solvente a elección, se suele usar
cloroformo (45), acetona (46), así también diclorometano (44), utilizamos el diclorometano
por tener buenos resultados en otras inestigaciones.
En general, estos metabolitos , se obtienen a partir de mezclas de complejos de extractos

concentrados de plantas, como en nuestro caso, concentrado por Soxhlet y macerado en
etanol al 96% y el contenido tanto cualitativo como cuantitativo de los compuestos puede
ser muy variable. El número de compuestos obtenidos, sus cantidades y su cantidad
relativa depende de cómo se trata el material biológico, qué técnica se usó para evaluar la
variabilidad química de la muestra. Ya que hubieron muchas pruebas previas hasta
encontrar el extracto y método adecuado de extracción y purificación de lactonas
sesquiterpénicas. (45) (47) (48) (49)
Tras el ensayo de Baljet se determinó la presencia de LS, con una coloración amarilla
naranja, tal y como se puede evidenciar en otros trabajos (32,6,31). Los cuales hacen
referencia también a lactonas sesquiterpénicas reveladas tras tornarse color amarillo con
el reactivo mencionado.

44
INVESTIGACIÓN
La extracción de las LS realizada en el equipo de Soxhlet empleando como solvente

diclorometano (DCM) por 40 horas y cumpliendo 10 ciclos, su producto fue analizado tras
desecarse en la estufa a 40°C. Así también hay antecedentes de ser uno de los mejores
métodos de extracción usando DCM y equipo de Soxhlet (47) (49), con los cuales
continúan tras la extracción, pruebas de identificación por HPLC, IR, UV entre otras.
Tras haber realizado extracciones con diclorometano en la muestra de Ambrosia

arborescens, se lograron determinar bandas de color azul características de lactonas
sesquiterpénicas, las cuales según bibliografía indican que pueden ser observadas en el
espectrofotómetro UV luego de ser concentradas tras un raspado de la placa de
cromatografía en capa fina; sin embargo los procesos empleados para aislar e identificar
metabolitos secundarios determinan fuertemente el resultado final del análisis. Así
también hay trabajos que señalan que se observa una mayor absorbancia de lactonas LS
a 210 nm (50)
El fraccionamiento de las LS se realizó mediante cromatografía de capa fina preparativa

(CCF) empleando como fase estacionaria sílicagel HF, y como fase móvil DCM-
acetona(8:2) y revelador lámpara UV a 254 y 365 nm.
Se obtuvieron 4 fracciones (f) eligiéndose las mayoritarias f1 y f2, las cuáles fueron
eluídas con DCM. Se determinaron los respectivos espectros UV de las fracciones f1 y f2.
Por antecedentes bibliográficos se puede concluir que existen LS α, β insaturadas ya que

éstas son visibles en un rango entre 205 a 225 nm. Se encontró que los eudesmanólidos
se encuentran entre 214-230 nm y así también la LS Damsina se visualiza a 214 nm; para
la f1 en el espectro UV fue a 215nm, lo cual puede sugerir que se trata de una damsina.
En tanto, para la f2 se encontró el máximo pico a 230 nm, lo cual puede sugerir que se
trata de una isofotoartemisina la cual tiene una λ 238 nm.

45
INVESTIGACIÓN
9 .CONCLUSIONES
 Se determinó la presencia de lactonas sesquiterpénicas en hojas de Ambrosia

arborescens Mill.
 Se logró Identificar la presencia de lactonas sesquiterpenicas en hojas de Ambrosia

arborescens Mill realizando análisis fotoquímico por medio de la aprueba de Baljet
dando una reacción positiva al dar un color anaranjado o rojo oscuro de la reacción.
 Se logró extraer lactonas sesquiterpenicas mediante el método de Soxhlet, usando

como solvente diclorometano.
 Se aislaron dos lactonas sesquiterpénicas de la altamisa (Ambrosia arborescens Mill.)

por cromatografía en capa fina.
 Se reconoció el posible tipo de lactonas sesquiterpénicas que son α, β insaturadas

presente en las hojas secas de Ambrosia arborescens Mill. “altamisa”, una posible
Damsina visualizada a 214 nm; para la f1 en el espectrofotómetro UV y otra posible
isofotoartemisina visualizada a una λ 238 nm en el espectrofotómetro UV.

46
INVESTIGACIÓN
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51
INVESTIGACIÓN
ANEXOS
Ensayo de Baljet
Es útil para reconocer la presencia de compuestos con agrupamiento

lactonico, en particular cumarinas, aunque otros compuestos lactonicos
pueden dar resultado positivo.
Si la alícuota de la muestra a probar no está en alcohol, debe evaporarse

el solvente en baño en agua y redisolverse en 1ml de alcohol.
Seguidamente, se añade 1ml del reactivo. La prueba positiva, cuando
aparece una coloración o precipitado de color rojo
Se utiliza dos soluciones que se mezclan en iguales volúmenes antes de

usarse. Solución a: se coloca 1g de ácido pícrico en 100 ml de etanol.
Solución b: se agregan 10 g de NaOH EN 100 ml muestra y 3 a 4 gotas
del reactivo, siendo la prueba positiva si adquiere una coloración naranja
o rojo oscuro.
Prueba de Legal
Una pequeña cantidad 2mgde muestra se disuelven en 2 a 3 gotas de

piridina; enseguida se añade 1 gota de solución reciente de nitroprusiato
de sodio al 0.5% y después se añaden gota a gota 4 gotas de hidróxido
de potasio 2N, observándose coloraciones rojo azul, rosa y violeta.22
Siempre que se hace el ensayo del hidroxamato se debe hacer el ensayo

de blanco para poder comparar la coloración, ya que ésta no es siempre
roja-azulosa, o la sustancia puede formar coloración con el cloruro férrico,
caso en el cual se tendría una interferencia y el ensayo no sería
Confiable. Es posible que los hidroxiácidos den prueba positiva como si

fueran ésteres, ya que los pueden formar consigo mismos.
Hidroxamato férrico
Se tomó el extracto disuelto en éter de petróleo y se le adicionaron 2

gotas de solución metanólica de clorhidrato de hidroxilamina y 2 gotas de
Solución metanólica de hidróxido de potasio. Posteriormente se calentó

en baño maría y se le agregó una gota de cloruro férrico y ácido
clorhídrico. Esto con el fin de identificar la presencia de
sesquiterpenlactonas.

52
INVESTIGACIÓN
ESPECTRO UV FRACCION 1
ESPECTRO UV FRACCION 2

53
INVESTIGACIÓN

54

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Determinación de las lactonas

Determinación de las lactonas sesquiterpénicas de

 BEJAR CAMAPAZA ESTEFANIA

 Dr. Fritz Choquesillo Peña.

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5.5.2 RECOLECCIÓN DE LA ESPECIE VEGETAL .......................................................................... 23

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Mediante este proyecto de investigación realizado en el curso de Química

Como sabemos la Ambrosia arborescens Mill. “Altamisa” o “Marco, se usan con

Por lo que nosotros luego de haber recopilado información necesaria acerca la

La planta fue identificada con la ayuda de especialistas botánicos en el Museo

Para la extracción de lactonas, nuestra muestra ya cortada en cuchillas la

También realizamos la prueba de Baljet, Legal y de Hidroxamato férrico, donde

Con la finalidad de poder comparar resultados procedimos a realizar también el

De esta manera logramos identificar las lactonas sesquiterpénicas en Ambrosia

Usaban las hojas soasadas en cocimiento o ungüento graso como

En la región Arequipa y en otras regiones del Perú se ha encontrado otras

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA/ UNMSM 2016 - II

En esta la región Arequipa, encontramos una gran diversidad de especies

La mayoría de estas especies son plantas aromáticas y medicinales poco

En la actualidad una de las principales causas de muerte en el Perú y en el

Existe una gran variedad de plantas en el mundo y algunas de estas especies

Un tratamiento quimioterapéutico que es el más usado en la actualidad causa

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1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

¿Existirán lactonas sesquiterpenicas en las hojas de Ambrosia arborescens

Altamisa (Ambrosia arborescens.) presenta lactonas sesquiterpenicas.

3.1 OBJETIVO GENERAL

 Determinación de lactonas sesquiterpenicas en las hojas de altamisa

3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Identificar la presencia de lactonas sesquiterpenicas en hojas de Ambrosia

 Extraer lactonas sesquiterpenicas mediante el método de soxhlet.

 Aislar lactonas sesquiterpenicas de la altamisa (Ambrosia arborescens Mill.) por

 Reconocer el tipo de lactonas presente en la hoja de Ambrosia arborescens Mill.

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4.1 ASPECTO BOTÁNICOS

a) Es un arbusto de 1.5 - 2.5 m de altura, perenne, tallo cilíndrico erguido,

b) Hojas: Simples, alternas, irregularmente divididas y pubescentes (vellosos) en

c) Flores: Capítulos en racimos terminales numerosos, homógamos; los

d) Frutos: Son aquenios, glabros, de 0.5- 1 cm de longitud, con estilos

e) Hábitat: Esta especie vegetal se encuentra distribuida en Colombia,

Ambrosia aparece a lo largo de las regiones templadas del hemisferio norte y

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Fig. 1 A la derecha se observa la inflorescencia y a la izquierda la hoja de

Fig. 2 Bolivia, Ecuador, Perú

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4.2 CARACTERISTICAS TAXONOMICAS

Ambrosia arborescens Miller. es una planta aromática medicinal que se

Las asteráceas (Asteraceae), también denominadas compuestas, reúnen más

Las compuestas presentan una considerable importancia ecológica y

Las Ambrosías son un género de plantas herbáceas o arbustivas pertenecientes

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raíz tiende a ser cónica y profunda dificultando la erradicación; algunas son

4.2.1 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA

4.3 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA PLANTA

Investigaciones anteriores han demostrado la presencia de cuatro lactonas

En el 2007, en el Laboratorio del Departamento de Química Bioorgánica y

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El aceite fue obtenido a partir de un proceso de hidrodestilación y se encontró

La presencia de sesquiterpenos como componentes fundamentales de la

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Tabla 1 Constituyentes del aceite esencial de las partes aéreas de Ambrosia

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